PCR metoda u dijagnostici upalnih bolesti genitourinarnog trakta kod muškaraca i žena. Što je PCR test krvi i zašto je potreban?

PCR dijagnostika je tehnika koja se temelji na korištenju lančane reakcije polimerazom, kojom se osoba može ispitati na infektivne i nasljedne bolesti. PCR analize za 12 infekcija pokazuju rezultat, bez obzira je li bolest akutna ili kronična. Neki stručnjaci smatraju PCR 12 obavezna analiza i bez toga ne postavljajte konačnu dijagnozu. Rezultati mogu biti pozitivni i puno prije pojave simptoma bolesti.

U 20. stoljeću Cary Mullis iz SAD-a otkrio je fenomen lančane reakcije polimeraze. Trenutno je PCR metoda zlatni standard u nekim područjima medicine. Metoda je najučinkovitija za otkrivanje bolesti u aktivnom stadiju, budući da postoje slučajevi kada konvencionalne metode ne daju takav rezultat u aktivnom stadiju. točan rezultat.

Prednosti PCR dijagnostike

Dijagnostika zaraznih procesa pomoću PCR-a vrlo je relevantna u moderni svijet. Prednosti ove vrste pregleda su sljedeće:

Linija vijesti ✆

1. Otkrivanje infektivni agens u analizama. Analiza uključuje identifikaciju DNK ili RNK uzročnika infekcije.
2. Lažne i pogrešne reakcije praktički su isključene.
3. PCR metoda 12 je najosjetljivija. Zahvaljujući ovoj metodi mogu se otkriti čak i pojedinačne stanice uzročnika infekcije.
4. Rezultat PCR-a za skrivene patogene je spreman unutar 4 sata nakon postupka.
5. Sposobnost otkrivanja uzročnika infekcije bez propuštanja karakteristični simptomi za bolest. Metoda je vrlo učinkovita u slučaju određene bolesti.

U suvremenom svijetu PCR dijagnostika infekcija razvija se ubrzanim tempom. Tehnika se aktivno poboljšava. Pojavljuju se nove podvrste PCR pretraga. Zahvaljujući razvoju ovu metodu pregleda, postaje što dostupniji širem krugu ljudi, a cijena se postupno mijenja.

Osnova lančane reakcije polimeraze

PCR metoda provodi se isključivo u laboratorijskim uvjetima. Za njegovu provedbu koriste se posebni enzimi koji nekoliko puta povećavaju strukturu DNA i RNA pacijenta. Treba formirati toliku količinu DNA i RNA da se može napraviti vizualna analiza. Tijekom pregleda kopira se presjek RNA ili DNA koji idealno odgovara traženim uvjetima.

Laboratorij održava bazu podataka koja navodi točnu strukturu različitih uzročnika infekcije. Zahvaljujući PCR metodi, ne samo da možete vidjeti patogen, već i izračunati njegov kvantitativni omjer.

PCR dijagnostika također uključuje određene inovacije, među kojima se mogu razlikovati sljedeće:

• uvođenje mutacija;
• povezivanje pojedinih fragmenata DNA;
• utvrđivanje očinstva i sl.

Infekcije otkrivene PCR analizom

PCR dijagnostika može otkriti sljedeće infektivne procese:

• hepatitis sljedećih sorti: A, B, C, G;
• Epstein-Barr virus, uzročnik infektivna mononukleoza;
• citomegalovirus;
• Mycobacterium tuberculosis;
• herpes 1 i 2 vrste;
• mnoge spolno prenosive infekcije: ureaplazmoza, gardnereloza, klamidija, mikoplazmoza, trihomonijaza.
• HPV i njegove onkogene podvrste;
• krpeljni encefalitis i borelioza;
• infekcija kandidom;
• listerioza;
• Infekcija Helicobacter pylori.

A ovo su samo neke od najčešćih infekcija koje se mogu otkriti pomoću PCR-a. PCR test krvi se aktivno koristi u ginekološkom polju medicinske prakse, kao iu područjima kao što su:

• pulmološki;
• ftizijatrijski;
• gastroenterološki;
• onkološki;
• mnoge druge grane medicine.

Pravila za prikupljanje materijala za analizu

Strana DNA i RNA mogu se otkriti ispitivanjem različitih tjelesnih tekućina određene osobe. Da bi se ispitala osoba na prisutnost određenih spolno prenosivih infekcija, potrebno je uzeti uzorak iscjetka iz spolnih organa (bris ili struganje) pacijenta i njegov urin.

Ako postane potrebno ispitati osobu za razne vrste infekcije (HIV, herpes, hepatitis i druge), zatim se uzima PCR analiza za koju se koristi krv bolesnika.

Za dijagnosticiranje herpetička lezija, mononukleoza, potrebno je uzeti bris iz pacijentove usne šupljine. Da bi se potvrdio CMVI, pacijentov urin se uzima na analizu. Postoje slučajevi kada se ispituje cerebrospinalna tekućina kako bi se utvrdili uzroci nastalih neuroloških abnormalnosti.

Istodobno, pulmolog ispituje ispljuvak i tekućinu iz pleure određenog pacijenta metodom PCR.

Ako novorođenče ima sumnju na intrauterinu infekciju, liječnici uzimaju analizu amnionske tekućine od trudnice i komad tkiva posteljice.

Isporuka analize: značajke postupka i interpretacija rezultata

Svi pacijenti pregledani PCR metodom dobivaju najpouzdaniji rezultat. NA ovaj slučaj pojava grešaka je praktički isključena. Rezultati ove analize pripremaju se dovoljno brzo, što olakšava dijagnozu i osigurava pravodobno imenovanje medicinske mjere.

Pouzdanost rezultata PCR izravno ovisi o ispravnosti isporuke materijala za ispitivanje. Materijal ne smije biti kontaminiran, inače rezultat studije neće biti objektivan. Najviše važne preporuke Prije podnošenja PCR analize vrijede sljedeći zahtjevi:

1. Zabranjeno je imati seksualnu aktivnost dan prije analize.
2. Krvni test za infekcije mora se uzeti ujutro na prazan želudac.
3. Urin se daje ujutro u sterilnu posudu.

Rezultat analize bit će spreman za 1,5-2 dana nakon dotičnog postupka. Postoje situacije kada se rezultat može pripremiti isti dan.

Dešifriranje rezultata

Rezultat ove vrste pregleda može biti pozitivan ili negativan. Negativan rezultat analize krvi ukazuje na to da u predanom materijalu nema zaraznih elemenata. Veliki broj Napravljene PCR analize pokazuju negativan nalaz.

Pozitivna PCR analiza potvrđuje činjenicu da su u dostavljenom materijalu pronađeni uzročnici infekcije i to maksimalno kvalitetni učinkovito liječenje bolestan.

Rezultat može biti pozitivan, ali nema manifestacija bolesti. To ukazuje ili na početak bolesti, ili na njenu nosivost. Ako se otkrije nositelj bolesti, tada nisu potrebne nikakve terapijske mjere. Samo trebate vidjeti stručnjaka. Primjeri takvih bolesti su:

• infekcija papiloma virusom;
• herpes, itd.

Obično se nalaze u slini, strugotinama iz cervikalni kanal, uretra. Međutim, treba imati na umu da bolesna osoba može zaraziti apsolutno zdrave ljude, unatoč činjenici da je njegova ovu bolest uopće se ne brine. Bolest može napredovati do kronični oblik. Treba napomenuti da u slučajevima kada je PCR test krvi pokazao pozitivan rezultat, imenovanje terapijskih mjera jednostavno je potrebno.

PCR analiza također ima kvantitativnu karakteristiku. Kvantitativni rezultat procjenjuje samo stručnjak, to je individualno za razne infekcije. Na temelju kvantitativna karakteristika, liječnik je u stanju razumjeti koliko je aktivan ovaj patološki proces, staviti točnu fazu razvoja određene bolesti. Analizom dobivenih rezultata stručnjak može odabrati potreban lijek i eventualno preispitati dozu lijeka.

Točnost PCR dijagnostike

Stručnjacima se daje PCR 3 najvažnije karakteristike, među kojima su:

1. Točnost.
2. Specifičnost.
3. Osjetljivost.

Dijagnostika infekcija PCR-om ima vjerojatnije otkrivanje uzročnika infekcije. PCR analiza krvi i drugih tekućina je vrlo specifična. Uz njegovu pomoć možete lako identificirati određeni zarazni proces. PCR dijagnostika je vrlo osjetljiva. Ako ispitivani materijal sadrži minimalni iznos infektivne agense, PCR metoda će uvijek biti pozitivna.

Najrjeđi je lažno pozitivan rezultat. Ako nema infekcije, nalaz je negativan.

PCR za latentni infektivni proces

Ako se sumnja da osoba ima SPI, naručuje se analiza krvi skrivene infekcije. Seksualne bolesti mogu se otkriti samo pregledom bolesnika. Bolesti kao što su:

• klamidija;
• ureaplazmoza;
• gonoreja;
• herpes;
• gardnereloza;
• mikoplazma.

Gore navedene spolne infekcije prilično su česte, au isto vrijeme i podmukle. Na početno stanje razvoja bolesti, ne daju jasne simptome, a pacijenti ne traže pomoć. PCR test krvi, strugotine sa sluznice uretre i cervikalnog kanala su potrebni ako se sumnja na ove infekcije.

SPI imaju vrlo negativan utjecaj na reproduktivni sustav. Mogu uzrokovati neplodnost ili malformacije fetusa. U tom smislu, prije planiranja trudnoće, morate uzeti PCR test.

PCR za 12 infekcija je popularan. Dijagnostika PCR 12 provodi se uzimanjem briseva genitalija. Materijal se uzima 2 sata nakon čina mokrenja. 2 dana prije studije, čepići se ne smiju stavljati u vaginu i ne smiju se izvoditi ispiranje. Rezultat analize bit će spreman za 2 dana.

Cijena PCR-a varira ovisno o infekciji koja se proučava. Cijena se kreće od 200 do 500 rubalja za svaku infekciju. Ući i pregledati se u privatnom laboratoriju možete sami, bez liječničke uputnice.

PCR (polimeraza lančana reakcija) - dostignuće molekularne biologije, jedna od glavnih metoda kliničke laboratorijska dijagnostika krajem 20. i početkom 21. stoljeća, donoseći velika korist u razna područja medicinska znanost.

Dakle, čak i ako među milijunima stanica ljudsko tijelo nije izgubljen sam živi virus, već samo čestica njegove DNK, tada će se PCR, ako ništa ne ometa, vjerojatno nositi sa zadatkom i izvijestiti o pozitivnom rezultatu o boravku "vanzemaljca". To je bit PCR-a i njegova glavna prednost.

Prednosti i nedostatci

Laboratorij koji provodi PCR dijagnostiku podliježe najvišim zahtjevima u pogledu opreme, test sustava i osposobljenosti medicinskog osoblja. Ovo je visokotehnološki laboratorij koji ima arsenal visokoosjetljivih i visoko specifičnih reagensa, tako da nema posebnih nedostataka. Osim ako ne daje pozitivan rezultat u odsutnosti kliničke manifestacije i time stavlja kliničara pred dilemu: isplati li se započeti liječenje ili ne?

Liječnik koji promatra pacijenta počinje sumnjati u pouzdanost rezultata testa, jer ne vidi nikakve znakove bolesti. Ali ipak, s obzirom na visoku osjetljivost PCR sustava, treba imati na umu da detektira patogen čak iu pretkliničkoj fazi, a pozitivan rezultat u ovom slučaju više je prednost nego nedostatak. Na temelju toga, liječnik mora sam odlučiti o prikladnosti terapije, uzimajući u obzir druge argumente za i protiv.

Prednosti dijagnostike pomoću lančane reakcije polimeraze su očite:

• Visoka specifičnost, dosežući 100%, zbog prisutnosti u odabranom uzorku čestica nukleinske kiseline svojstvenih određenom organizmu, ali stranih ljudima;
• Visoke performanse, jer je PCR automatizirana tehnika visoke tehnologije koja pruža mogućnost provođenja testiranja na dan uzorkovanja materijala i na taj način oslobađa pacijenta nepotrebnih briga;
• PCR, radeći na jednom uzorku, može provesti nekoliko studija i oko otkriti više patogena ako ona ima takav zadatak. Primjerice, kod dijagnosticiranja klamidijske infekcije, gdje je PCR jedna od glavnih metoda, uz klamidiju se može otkriti i Neisseria (gonokok) - uzročnik. Štoviše, to ne utječe negativno na pouzdanost rezultata;
• PCR testiranje je opasan mikroorganizam trajanje inkubacije kada još nisu imali vremena uzrokovati opipljivu štetu tijelu, tj. rana dijagnoza upozorava na nadolazeći razvoj događaja patološki proces, što omogućuje pripremu za to i preuzimanje potpuno naoružanog.

Osim toga, kako bi se izbjegli nesporazumi koji ponekad nastaju tijekom dijagnostike, PCR se štiti i time što se njegovi rezultati mogu snimiti (fotografija, računalo) kako bi se po potrebi mogli koristiti u stručne svrhe.

Norma u PCR odgovorima smatra se negativnim rezultatom., što ukazuje na odsutnost fragmenata stranih nukleinskih kiselina, pozitivan odgovor će ukazivati ​​na prisutnost infekcije u tijelu, digitalne vrijednosti pokazuju stanje virusa i njegovu koncentraciju u vrijeme testiranja. Međutim, potpuni prijepis analize provodi liječnik koji je prošao posebnu obuku na temu "PCR". Pokušati sami protumačiti rezultate nema smisla, jer je moguće, što će se vjerojatno dogoditi, krivo shvatiti i početi brinuti unaprijed.

Čega se PCR “boji”, što može učiniti i kako se za njega pripremiti?

Kao i kod svake druge studije, ponekad su rezultati testa lažno pozitivni ili lažno negativni gdje PCR nije iznimka. To se može dogoditi u sljedećim slučajevima:

1. Kršenja tehnološki proces u jednoj od faza reakcije;
2. Nepoštivanje pravila prikupljanja materijala, njegovog skladištenja ili prijevoza;
3. Prisutnost stranih nečistoća u materijalu.

To sugerira da se PCR-u – dijagnostici infekcija mora pristupiti oprezno, oprezno i ​​precizno, jer u suprotnom uzorci materijala mogu promijeniti svoju strukturnu strukturu ili čak propasti.

Faze PCR dijagnostike. Lažni rezultati mogu dati kršenja u bilo kojoj fazi studije

PCR dijagnostika infekcija spada među ostale u kategoriju "zlatnog standarda". laboratorijske metode, pa se njime mogu tražiti uzročnici mnogih bolesti koje na prvi pogled nemaju ništa zajedničko:

• Tuberkuloza različita lokalizacija, upala pluća (uključujući atipične, uzrokovane klamidijom);
• Infekcije u djetinjstvu ( ospice rubeola, zaušnjaci, ospice);
• Difterija;
• salmoneloza;
• zoonoza zarazna bolest- listerioza (bolest je karakterizirana nizom simptoma s oštećenjem limfnih čvorova, središnjeg živčanog sustava, unutarnjih organa);
• Bolesti uzrokovane prodorom Epstein-Barr virusa (infektivna mononukleoza, itd.);
• Onkološka patologija izazvana infekcijom papiloma virusom (HPV i njegove vrste);
• Borrelioza (lajmska bolest, encefalitis koji prenose krpelji);
• Infekcija Helicobacter pylori, čiji je uzročnik mikrob koji živi u ljudskom želucu Helicobacter pylori. Dokazano je da Helicobacter uzrokuje razvoj raka želuca ili dvanaesnika;
• i praktički sve.

Posebno je važna PCR dijagnostika spolno prenosivih infekcija, jer su tako uzrokovane bolesti česte Dugo vrijeme odvijaju se bez ikakvih kliničkih manifestacija, ali tijekom trudnoće počinju se aktivirati i time prijete zdravlju, pa čak i životu djeteta. I ponašati se slično. Neki od njih ("baklja") su istovremeno povezani sa SPI, tako da potonje zahtijevaju detaljnije razmatranje. Čitatelj će se moći upoznati s najpopularnijim metodama u sljedeće odjeljkečlanci.

Kako se pravilno pripremiti da biste dobili pouzdan rezultat?

Odmah napominjemo da je priprema za PCR vrlo jednostavna i ne zahtijeva posebne napore od strane pacijenta. Trebate izvršiti samo tri jednostavna zadatka:

1. Nemojte imati spolni odnos 24 sata prije uzimanja testa;
2. Da biste uzeli i analizirali krv iz vene, morate doći na prazan želudac, usput, ne možete ni piti;
3. Urin treba dati noću (ujutro - u sterilnu staklenku kupljenu dan prije u ljekarni).

PCR može raditi u bilo kojem biološkom okruženju

PCR metoda nije "krvoločna", stoga prihvaća svako biološko okruženje koje sadrži sumnjivi infektivni agens. Obično izbor - što trebate poduzeti za istraživanje, ostaje liječniku.

Dakle, u potrazi za patogenom, osim testa krvi (iako je također prikladan i u većini slučajeva uzima se paralelno s drugim materijalom), možete koristiti:

• (iscjedak iz urogenitalnog trakta);
• Struganje sluznice usne šupljine, konjunktiva, nazofarinks, genitalni trakt (kod žena se uzimaju iz cerviksa i vagine, kod muškaraca - iz uretre);
• slina;
• sjeme;
• sok prostate;
• Placentalna tkiva i amnionska tekućina (amnionska tekućina);
• Sediment urina (nakon centrifugiranja), na primjer, za otkrivanje određenih SPI i Mycobacterium tuberculosis;
• Sputum i pleuralna tekućina za istu svrhu;
• eksudati;
• cerebrospinalna tekućina za sumnju infekcija CNS;
• Biopsijski materijal (biopsija) uzet iz jetre, dvanaestopalačnog crijeva, želuca itd.

Dodao bih navedenom da će u svim slučajevima, čak iu strugotinama i sekretima, biti dovoljno materijala za testiranje, jer PCR testiranje ne zahtijeva velike količine, za analizu je dovoljno nekoliko mikrolitara koji se obično uzimaju u Mikroepruveta tipa Eppendorf i poslana na proučavanje.

Bolesti i primjena PCR-a

HIV i lančana reakcija polimerazom

Obično se kod prolaska anonimnog pregleda u slučaju pozitivnih rezultata imunoblotinga dijagnoza ponovno ponavlja. Ako se dijagnoza potvrdi, pacijentu se propisuju dodatne studije:

1. Utvrđivanje imunološkim reakcijama apsolutnih vrijednosti broja CD 4 limfocita (imunokompetentnih stanica – T-helpera ili pomagača), koje infekcija najprije inficira, nakon čega gube svoja osnovna svojstva i ne mogu razlikovati “ vlastiti” i “strani”. Oni uzimaju RNK virusa koji cirkulira u krvnoj plazmi za normalne stanice tijela i ne reagiraju na njih;
2. Detekcija virusne RNA PCR-om i izračunavanje koncentracije virusnih čestica kako bi se na temelju tih podataka odredio stadij, težina patološkog procesa i prognoza. Naravno, riječ "norma" u tom pogledu ne postoji, jer je reakcija uvijek pozitivna, a dekodiranje digitalnih vrijednosti je u nadležnosti liječnika.

PCR i hepatitis

PCR metoda može otkriti patogene, najčešće se test koristi za dijagnosticiranje hepatitisa C, koji se drugim metodama slabo otkriva.

Virus hepatitisa C (koji sadrži RNA) svojim ponašanjem u ljudskom tijelu nalikuje HIV-u. Uglavivši se u genom jetrenih stanica (hepatocita), on tamo ostaje čekati svoje vrijeme, koje može doći barem za 2 godine, barem za 20 godina, pa su ga liječnici prozvali "nježnim ubojicom". Hepatitis C dovodi do stvaranja malignog procesa u jetrenom parenhimu, koji se manifestira u kasne faze. Svi ovi događaji imunološki sustav ne primjećuje, miješajući virus s hepatocitom. Istina, antitijela na virus se proizvode u određenim količinama, ali ne daju pristojan imunološki odgovor. Za dijagnosticiranje hepatitisa C, ELISA nije previše informativan, jer ukazuje na to da je virus ostavio tragove, a nije poznato je li se ostavio. Kod HCV-a poznati su slučajevi samoizlječenja, dok antitijela protiv virusa ostaju i nastavljaju cirkulirati cijeli život (imunološka memorija). PCR je osjetno ispred stvaranja antitijela i može otkriti virusnu česticu već nakon 1-1,5 tjedana, dok se antitijela mogu pojaviti u rasponu od 2 mjeseca do šest mjeseci

PCR dijagnostika u slučaju sumnje na bijesan virus hepatitisa C u ljudskom tijelu je najviše najbolja metoda istraživanja, jer je samo ona u stanju prepoznati prisutnost "nježnog neprijatelja" u krvi ili biopsiji jetre pacijenta.

Međutim, ponekad postoje slučajevi kada su AT pozitivni, a PCR rezultat negativan. To se ponekad događa kada je količina virusa vrlo niska ili kada je u stanju mirovanja u jetri bez otpuštanja u krvotok. Kako bi se ipak došlo do istine, pacijent se ponovno analizira, ili čak više njih.

Infekcija papiloma virusom

Ukoliko ne dođe do samoizlječenja, može se, a da se ne pokaže, dugo zadržati u organizmu domaćina, koji to i ne sluti, budući da PCR nije učinjen, niti je bilo simptoma bolesti. Međutim, prisutnost papilomavirusne infekcije, iako latentna, nije ravnodušna za ljudsko zdravlje, gdje određene vrste virusa koji uzrokuju onkološke bolesti(tipovi 16, 18).

Ženska polovica populacije češće pati od HPV-a, budući da virus više voli žene genitalno područje, a posebno vrata maternice, gdje neke vrste virusa pridonose razvoju displastičnih procesa, a potom i raka vrata maternice, ako se displazija ne liječi i virus se oslobađa. Dakle, lančana reakcija polimeraze otkrit će DNK virusa, a zatim pokazati "loš" ili "dobar" (onkogeni ili neonkogeni) tip koji se smjestio u tijelu žene.

Druge SPI i TORCH infekcije

Očito, lančana reakcija polimeraze može pronaći bilo koju stranu strukturu koja se sastoji od nukleinskih kiselina, tako da je ovaj test prikladan za otkrivanje svih spolno prenosivih bolesti i TORCH infekcija, međutim, ne koristi se uvijek. Zašto, recimo, provoditi tako skupa istraživanja za otkrivanje gonokoka, ako postoje pristupačniji i jeftiniji?

TORCH infekcije i spolno prenosive bolesti toliko su međusobno povezane da je ponekad teško odrediti u koju skupinu treba svrstati određeni uzročnik. Općenito, može ih biti teško razumjeti, budući da se radi o prilično raznolikim skupinama mikroorganizama koji se mogu spolno prenositi uvijek ili samo kada određenim uvjetima(imunodeficijencija), a može biti zanimljiv samo tijekom trudnoće, zbog mogućeg negativan utjecaj na njegov tok i na plod.

PCR je glavna metoda za otkrivanje latentnih infekcija

Razvoj kliničkih manifestacija temelji se na različitim patogenima, koji se mogu otkriti samo PCR-om, što je njegova glavna zadaća, ponekad zajedno s ELISA-om, a ponekad kao jedini potvrdni test, osobito ako nema simptoma bolesti. Takav teška situacija može stvoriti polimikrobnu infekciju, koja osim očitih uzročnika uključuje i oportunističke uzročnike.

Ureaplazma se često vidi u tandemu s mikoplazmom. I to nije slučajno. Ove vrste, poput klamidije, nisu ni virusi ni bakterije, žive unutar stanica i pripadaju SPI, iako njihova prisutnost u zdravo tijelo također nije neuobičajeno. Dakle, kako bi se razlikovao zdrav nositelj od bolesne osobe, potrebne su posebne metode, gdje se PCR smatra najpouzdanijim, jer su, zbog osobitosti strukture i ponašanja ovih mikroorganizama, druge studije neučinkovite.

Što se tiče (tip 1, 2) i, koji također pripada herpes virusima (tip 5), situacija je i ovdje dvosmislena. Stopa zaraženosti svjetske populacije približava se 100%, stoga je u ovom slučaju vrlo važna identifikacija virusa i njegova doza, što je posebno važno tijekom trudnoće, jer za odraslu osobu virus koji se ukorijenio u njegovu tijelo često ne uzrokuje nikakve probleme i ne daje znakove bolesti.

Stoga se takav pregled koji propisuje liječnik ne smije zanemariti, jer je u nekim slučajevima lančana reakcija polimerazom obavezna i potrebna metoda laboratorijska dijagnostika koja može zaštititi od ozbiljne komplikacije ne samo žena, nego i mali, još nerođeni, čovječuljak.

Zaključno, želio bih napomenuti da tako divna metoda kao PCR služi čovječanstvu više od 30 godina. Istodobno, zadaci testa nisu ograničeni na traženje uzročnika zaraznih bolesti. Lančana reakcija polimeraze, rođena na tlu molekularne biologije, neraskidivo je povezana s genetikom, uspješno se koristi u forenzici za osobnu identifikaciju, u sudskoj medicini za utvrđivanje očinstva, u veterini, ako klinika za životinje ima mogućnost nabave skupe opreme, kao iu drugim područjima (industrija, Poljoprivreda itd.).

Video: PCR - suština i primjena

Visoko informativna metoda PCR (lančana reakcija polimeraze) to omogućuje rano otkrivanje razne genetske i zarazne bolesti, koje se javljaju akutno ili kronično. Štoviše, mogu se identificirati čak iu fazi kada ne pokazuju nikakve simptome. Najčešće do PCR analiza koriste se za otkrivanje spolno prenosivih infekcija (STD, SPI).

PCR analiza odnosi se na molekularnu dijagnostičku metodu koja se temelji na višestrukom povećanju malih koncentracija određenih fragmenata nukleinske kiseline (DNA) uzročnika u bilo kojem biološkom materijalu (bris iz vrata maternice, vagine, uretre, krvi, sline, ispljuvak, itd.) i usporedbu njegove DNA ili RNA s bazom podataka poznate vrste infektivni agensi.

Tehniku ​​je razvila Amerikanka Carrie Mullis 80-ih godina prošlog stoljeća. Godine 1993. znanstvenik je postao laureat Nobelova nagrada u području kemije. Danas se PCR studija smatra svojevrsnim "zlatnim standardom" za dijagnosticiranje velike većine infekcija. PCR analiza naširoko se koristi u medicinskoj praksi za razjašnjavanje prirode bolesti i stadija točna dijagnoza. Vrlo često postoje slučajevi kada sve poznate imunološke, virološke i bakteriološke metode ne djeluju. Tada postaje PCR jedini način, koji se može koristiti za prepoznavanje aktivnog stadija bolesti.

Prednosti PCR dijagnostike u odnosu na druge metode

Pronađena PCR tehnika široka primjena u modernoj medicini zbog niza neospornih prednosti. Razgovarajmo o njima detaljnije.

Sposobnost izravnog otkrivanja prisutnosti patogena

Mnogi od tradicionalnih dijagnostičke metode temelje se na određivanju markera – proteina koji su otpadni produkti patogena. Takav dijagnostički princip može pružiti samo neizravnu potvrdu patologije. PCR metoda osigurava izravna definicija uzročnika, budući da identificira specifične dijelove DNA patogenih organizama.

Visoka specifičnost

Tehnika PCR je vrlo specifična jer omogućuje otkrivanje fragmenata DNA koji su karakteristični samo za određeni uzročnik infekcije. Pri korištenju imunoloških metoda postoji mogućnost dobivanja lažnog rezultata (pogreške u dijagnozi povezane su s unakrsnom reakcijom antigena). Što se tiče PCR-a, pogreške su ovdje isključene, budući da je specifičnost u ovom slučaju određena nukleotidnom sekvencom početnica.

Visoka osjetljivost

Ovom se metodom utvrđuju čak i pojedinačni uzročnici bolesti. Infektivni agensi se otkrivaju u ljudskom tijelu čak i kada druge dijagnostičke metode ne razjašnjavaju situaciju (govorimo o različitim imunološkim mikroskopskim i bakteriološkim metodama istraživanja).

Donosimo podatke radi usporedbe. Osjetljivost mikroskopske i imunološke metode je 103-105 stanica, a osjetljivost PCR-a je 10-100 stanica po uzorku.

Univerzalnost metode

Tehnika PCR temelji se na proučavanju DNK patogenih organizama. Tijekom studije određuju se fragmenti RNA ili DNA koji su specifični za specifične infektivne agense. Budući da sve nukleinske kiseline imaju sličan kemijski sastav, na laboratorijske analize mogu se primijeniti unificirane metode. To znači da proučavanje jednog uzorka omogućuje identifikaciju nekoliko patogena odjednom.

Brzi rezultati

Ova tehnika ne zahtijeva uzgoj kultura patogena, što oduzima dosta vremena. Zahvaljujući korištenju jedinstvene tehnologije obrade materijala i identificiranja produkata reakcije, kao i automatiziranog procesa amplifikacije, cjelokupni postupak istraživanja traje samo nekoliko sati.

Sposobnost otkrivanja latentnih infekcija

PCR tehnika omogućuje učinkovito provođenje pretkliničke dijagnostike (otkrivanje uzročnika prije pojave simptoma) i retrospektivne dijagnostike (otkrivanje uzročnika nakon prošle bolesti). Dakle, pretklinička dijagnoza ima veliki značaj prilikom pregleda bolesnika u razdoblju inkubacije moguća bolest- nakon navodne infekcije prije pojave prvih znakova.

Jedna od važnih prednosti PCR-a je mogućnost korištenja bioloških rezidua ili arhivskog materijala za analizu. To omogućuje utvrđivanje očinstva i identiteta.

Do danas se PCR dijagnostičke metode nastavljaju razvijati. Sama tehnologija analize se usavršava, ali i nova vrste PCR-a. NA medicinska praksa uvode se inovativni testni sustavi za ovu reakciju. Zahvaljujući ovome brz razvoj znanosti, cijena postupka se smanjuje, a sada PCR pregled može se primijeniti na mnoge kategorije pacijenata.

Ova dijagnostička metoda temelji se na višestrukom udvostručavanju određenog dijela RNA ili DNA. Ovaj proces se provodi u laboratoriju pomoću posebnih enzima. Kao rezultat toga, formira se onoliko dijelova DNA (RNA) koliko je potrebno za vizualni pregled. Tijekom postupka kopira se samo područje koje odgovara navedenim uvjetima (ako ga ima u ispitivanom uzorku).

Biološki materijal koji je potrebno ispitati na prisutnost DNA ili RNA patogena stavlja se u pojačivač. (Ovisno o konkretnoj situaciji, na analizu se uzima krv, urin, slina, iscjedak iz genitalija). Zatim se u uzorke dodaju posebni enzimi. Vežu se za RNA ili DNA patogeni mikrobi, i počinje sinteza kopiranja. Kopiranje je višefazni proces koji se odvija poput lančane reakcije. Kao rezultat toga, mogu se pojaviti stotine ili čak tisuće kopija.

U sljedećoj fazi dijagnostike rezultati se analiziraju i uspoređuju s bazom podataka o uzročnicima infekcije.

PCR tehnika ne samo da omogućuje određivanje tipa patogeni organizam, ali također nam omogućuje izvlačenje zaključaka o broju infektivnih agenasa u ljudskom tijelu.
Danas se otvara uporaba takvih tehnologija široke mogućnosti u proučavanju mutacija, spajanje dijelova DNA. U modernoj medicini metoda se počela koristiti za utvrđivanje očinstva, identifikaciju novih gena i još mnogo toga.

Zbog svoje svestranosti PCR metoda je našla široku primjenu u urologiji, ginekologiji, pulmologiji, onkologiji, hematologiji, ftiziologiji, infektivnoj praksi i drugim područjima medicine.

Materijal za PCR analizu

Za PCR dijagnostiku koriste se različiti biološki mediji i tekućine uzete iz ljudskog tijela: ispljuvak, sluz, slina, urin, krv, struganje epitelnih stanica, tkiva posteljice, pleuralna tekućina, amnionska tekućina, sok prostate itd.

Prilikom dijagnosticiranja spolno prenosivih bolesti (SPI) analizira se iscjedak iz muških i ženskih spolnih organa. Da biste to učinili, izvedite bris ili struganje iz uretre ili cerviksa. Urin se također koristi za istraživanje.

Za otkrivanje infekcija (herpes, mononukleoza, CMVI, toksoplazmoza, HIV, hepatitis B i C) uzima se krv za analizu. U slučaju sumnje na ozljedu živčani sustav napraviti ogradu cerebrospinalna tekućina.

Za pulmološke studije koriste se pleuralna tekućina i sputum.

Prepoznati intrauterine infekcije Analiziraju se tkiva posteljice i amnionska tekućina.

PCR za SPI i druge infekcije

Koje se infekcije mogu otkriti PCR analizom

HIV infekcija (može se otkriti virus humane imunodeficijencije HIV-1).

Virusni hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV).

SPI (spolno prenosive infekcije) - ureaplazmoza, gardnereloza, klamidija, mikoplazmoza, trihomonijaza.

Infektivna mononukleoza (DNA Epstein-Barr virusa - EBV).

Infekcija citomegalovirusom (DNA-CMV).

Herpes infekcija (DNA virus) herpes simplex HSV tipovi 1 i 2).

Tuberkuloza (mycobacterium tuberculosis).

Onkogeni virusi - infekcija papiloma virusom (humani papiloma virus (uključujući njegove onkogene vrste 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 i 59).

Borelioza, encefalitis koji prenose krpelji.

Listerioza.

Kandidijaza (gljivice roda Candida).

Infekcija Helicobacter pylori
i drugi.

Izrada i predaja PCR analize

Pacijenti koji su predali materijal za PCR dijagnostiku očekuju brz i točan rezultat. Pri tome se mora voditi računa važna točka- pouzdanost dijagnostike ne ovisi samo o profesionalnosti stručnjaka i mogućnostima medicinskog laboratorija. Da bi studija bila informativna, sam pacijent se mora potruditi. Dakle, potrebno je strogo pridržavati se svih preporuka liječnika i pažljivo slijediti pravila za pripremu za prikupljanje materijala. Vrlo je važno spriječiti kontaminaciju bioloških uzoraka, inače će rezultati pretrage biti iskrivljeni.

Priprema za PCR analizu

Priprema za postupak nije povezana s posebnim poteškoćama. Zapamtite samo nekoliko pravila:

Krv za PCR analizu uzima se natašte. Krv se obično uzima ujutro iz vene sterilnom iglom u posebnu posudicu.

Tijekom dana prije uzorkovanja materijala, seksualna apstinencija je prikazana prilikom uzimanja PCR razmaza za SPI.

Za analizu urina za PCR uzima se prvi dio, spremnik mora biti sterilan.

Kako uzeti PCR analizu kod muškaraca i žena

PCR analiza se uzima od muškaraca i žena u soba za cijepljenje, to je krv iz vene, slina, brisevi iz ždrijela, krajnika, brisevi iz nazofarinksa itd. Metoda prikupljanja se ne razlikuje.

PCR za SPI se predaje antenatalnu kliniku na ginekološki pregled kod žena to su razmazi iz vagine, cerviksa, uretre. Kod muškaraca, tijekom posjeta andrologu ili venereologu, ovo je razmaz iz uretre.

Sheme za uzorkovanje materijala za PCR

Koliko dugo traje PCR

Pacijenti ne moraju dugo čekati na rezultate PCR pretrage. Cijeli postupak analize obično traje od nekoliko sati (PCR u realnom vremenu) do 2-10 dana. Rezultate analize pacijent dobiva u pravilu za 2-5 dana, a najviše za 10 dana, ovisno o vrsti analize. Najdulje vrijeme je PCR dijagnostika krvi za HIV i hepatitis, a najkraće su brisevi i strugotine - 2-3 dana.

Negativan rezultat ukazuje na to ovaj trenutak u biološkom materijalu nisu otkriveni tragovi uzročnika infekcije. Odnosno, infekcija za koju je obavljen pregled je odsutna.

Pozitivan rezultat ukazuje na otkrivanje tragova uzročnika u biološkim uzorcima. To znači da u dano vrijeme postoji infekcija u ljudskom tijelu.
Postoje slučajevi kada PCR daje pozitivan rezultat, ali aktivan infektivni proces nije vidljiv. Riječ je o o fenomenu koji se naziva "zdrava kočija". Liječenje takvog bolesnika nije potrebno, ali mora biti pod stalnim dinamičkim nadzorom. Takve situacije su tipične za virusne infekcije: Epstein-Barrov virus(EBV), genitalni herpes, infekcija citomegalovirusom (CMVI), humani papiloma virus (HPV), u kojem se uzorci uzimaju za istraživanje iz lokalnih žarišta (struganje uretre, cervikalnog kanala, sline). Istodobno, ne smijemo zaboraviti da zdravi nositelj može prenijeti infekciju drugim ljudima. Osim toga, nije isključena aktivacija zaraznog procesa. U slučajevima kada PCR daje pozitivan rezultat u testu krvi, to se više ne može smatrati kliconošom. Takvi pacijenti trebaju specifično liječenje bolest uzrokovana otkrivenim uzročnikom.

Kvantitativni pokazatelji nemaju opće gradacije. Procjenjuje ih liječnik pojedinačno za svaku specifičnu infekciju. Kvantitativni rezultat omogućuje određivanje koliko je infekcija aktivna i identificirati stupanj procesa.

Pouzdanost PCR metode

Za procjenu učinkovitosti metodologije postoje tri kriterija:

- Točnost- otkrivanje infekcije (ili njene odsutnosti) s visokim stupnjem vjerojatnosti.

- Specifičnost– točnost određivanja specifičnog patogena.

- Osjetljivost– mogućnost identifikacije uzročnika čak i s malom količinom genetskog materijala u biološkim uzorcima.

Kada se koristi PCR metoda, dobivanje lažno pozitivnih rezultata je gotovo nemoguće (to jest, ako je patogen odsutan, tada pozitivan test neće).

Moguć je lažno negativan rezultat, ali to se događa vrlo rijetko. Slične situacije pojaviti ako je infekcija neaktivna u vrijeme ispitivanja. Na primjer, kronična infekcija neaktivna ili latentna infekcija.

PCR analiza: video

Prvi put se o PCR analizi govorilo 1983. godine. Ovu tehniku ​​razvili su Cary Mullis i njegovo laboratorijsko osoblje. Od tada je popularnost studije stalno rasla, jer. Ima značajan broj prednosti u odnosu na druge metode.

Danas je PCR dijagnostika mjerilo ili standard za otkrivanje infekcija i patogena, posebice onih koji su asimptomatski. Prije svega, to je pretklinička dijagnostika.

Izvođenje analiza u PCR aparatu

Suština PCR analize je u tome da se u epruveti kloniraju (višestruko povećavaju) sekvence nukleinskih kiselina (DNA ili RNA) svojstvene određena vrsta uzročnici bolesti.

Skraćenica PCR označava lančanu reakciju polimerazom.

Dom Posebnost ove metode je amplifikacija, tj. stvaranje ogromnog broja kopija željenog gena ili fragmenta. Sve se to proizvodi izvan tijela, tj. in vitro.

Dakle, ako se provede 20 PCR ciklusa, tada se dobije približno 1 milijun kopija ili više. To omogućuje otkrivanje infekcije čak i s malom količinom u izvornom materijalu, kada su druge metode analize nemoćne. To određuje visoku osjetljivost ove metode.

Jednostavnim riječima, možete povući takvu analogiju - nećete primijetiti jedno malo zrnce pijeska na podu, ali nakon povećanja broja zrna pijeska za milijun puta (PCR), hrpa pijeska već će biti jasno vidljiva .

Glavne prednosti analize za infekcije metodom PCR su:

• najveća osjetljivost i specifičnost u usporedbi s drugim metodama koje se koriste za otkrivanje uzročnika infekcije;
• sposobnost otkrivanja mikroorganizama u različitim biološkim materijalima (krv, urin, vaginalni sekret, slina itd.);
• sposobnost istodobne identifikacije nekoliko uzročnih mikroorganizama, ako ih ima. Za usporedbu, uporaba bakterioloških metoda ne pruža takvu priliku, jer. potrebno je koristiti različite medije za uzgoj različitih patogenih mikroba;
• mogućnost prijevoza biološkog materijala, jer da bi se identificirao patogen, nije ga potrebno održavati na životu;
• brzina analize;
• točnost etiološke dijagnoze;
• mogućnost kvantitativnog određivanja uzročnika - osobito relevantno za uvjetno patogeni mikrobi, koji tek nakon postizanja određene koncentracije može izazvati bolest;
• sposobnost kontrole tijeka infektivnog procesa tijekom liječenja.

PCR analiza za infekcije

Trenutno, metoda lančane reakcije polimeraze određuje većinu spolnih (i drugih) zaraznih bolesti. Dijagnostika je postala široko rasprostranjena zbog svoje visoka osjetljivost i specifičnost.

Posebno je popularna PCR analiza za klamidiju.

To je zbog činjenice da ti mikroorganizmi žive intracelularno, što stvara određene poteškoće u njihovom otkrivanju.

PCR dijagnostika omogućuje otkrivanje čak i minimalne količine klamidije, koja u pravilu još ne dovodi do pojave klinički simptomi. Čak i prisutnost samo 2 molekule nukleinske kiseline u ispitivanom materijalu omogućuje prepoznavanje uzročne infekcije.

A ovo je zalog uspješno liječenje, koji počinje u pretkliničkoj fazi.

Također se identificiraju infekcije:

• virusni hepatitis;
• tuberkuloza;
• encefalitis koji prenose krpelji;
• razne spolne bolesti itd.

PCR dijagnostika omogućuje rješavanje niza drugih važnih zadataka:

• praćenje terapije i procjena njezine učinkovitosti;
• određivanje "opterećenja virusima", na temelju čega se vrši individualni odabir doze lijeka;
• identifikacija sojeva mikroorganizama koji su farmakološki rezistentni (neosjetljivost na lijekove).

Priprema za predaju analize

Nije potrebna namjerna priprema za dostavu analize koja će se provesti PCR-om. Međutim, vrlo je važno da stručnjak uzme materijal u skladu sa svime potrebne uvjete sterilnost.

Tako npr. treba koristiti posebne vakuumske sustave za vađenje krvi, posebne epruvete za uzimanje sekreta spolnih organa itd.

U nekim slučajevima materijal se mora transportirati u laboratorij. Da biste to učinili ispravno, potrebno je hermetički zatvoriti posudu sa biološki materijal. To će spriječiti prodor drugih mikroorganizama koji žive u vanjskom okruženju.

Rezultati PCR analize mogu biti dvije opcije:

• pozitivan - otkriven patogen;
• negativan - uzročnik nije otkriven.

Treba znati – čak i u odsutnosti klinički simptomi može se dobiti pozitivan rezultat.

U ovom slučaju potrebno je fokusirati se na podatke reakcija polimeraze, jer omogućuje prepoznavanje bolesti u pretkliničkoj fazi.

Ponekad se može dobiti dvojben odgovor kada broj identificiranih kopija odgovara gornjoj granici norme. Da biste razjasnili uzrok bolesti, trebali biste ponoviti analizu, davanje Posebna pažnja uvjeti za prikupljanje biološkog materijala.

Koliko je točna PCR dijagnostika?

Glavne prednosti PCR dijagnostike mogu se formulirati u obliku nekoliko teza:

• mogućnost dobivanja ogromnog broja kopija patogenih mikroorganizama;
• veliki broj kopija je ključ uspješnog sekvencioniranja (detekcije).

To omogućuje PCR analizu visoke točnosti za detekciju intracelularnih patogena i mikroorganizama koji sporo rastu.

Stoga je metoda posebno informativna za otkrivanje mycobacterium tuberculosis i drugih sličnih uzročnika infekcije. Ima najveću točnost i ne treba ponovno provjeravati dobivene rezultate (osim u slučajnim slučajevima).

Da dobijete najviše pouzdane rezultate potrebno je ispuniti dva glavna uvjeta koji sprječavaju egzogenu (vanjsku) infekciju:

• ispravan unos materijala;
• ispravan prijevoz.

Jedan od ultrapreciznih modernih medicinsko istraživanje temelji se na proučavanju molekularnih genetskih odnosa u krvnoj plazmi, je analiza PCR (PCR) - lančana reakcija polimeraze. PCR metoda omogućuje otkrivanje određenih bolesti u tijelu pacijenta uzrokovanih infekcijama i virusima ili povezanih s genetske bolesti naslijeđeno. PCR analiza pomaže identificirati bolesti koje se javljaju u akutnoj iu kroničnoj, asimptomatskoj fazi. Takva je studija vrlo važna za sprječavanje razvoja bolesti: otkrivanjem bolesti na samom početku razvoja, moguće je liječiti bolest sve dok ne počne uništavati tijelo pacijenta ili umanjiti njezine posljedice.

Danas je PCR dijagnostika "zlatni standard" u određivanju većine zaraznih bolesti. U svakoj klinici ili laboratoriju takvo se istraživanje provodi svaki dan, njegovi rezultati čine temelj mnogih dijagnoza, au nekim slučajevima upravo je dekodiranje podataka lančane reakcije polimeraze temelj za određivanje određene bolesti.

PCR metoda često pomaže liječnicima u slučajevima kada su druge studije i dijagnostika nemoćne, ili zbog ranoj fazi razvoj bolesti ne može odrediti prisutnost patogene mikroflore u tijelu pacijenta. Dijagnoza PCR metodom je više precizna analiza od svih drugih metoda koje se odnose na proučavanje prisutnosti bakterija, virusa i imunoloških abnormalnosti u ljudskom tijelu.

Prednosti PCR metode uključuju visoku točnost - tijekom proučavanja dijela DNA ili RNA otkriva 100% ili ne otkriva patogenu mikrofloru koja može uzrokovati ozbiljna bolest. Ova metoda nema lažno pozitivne rezultate - ima visoku specifičnost, što omogućuje identifikaciju određenog dijela lanca u strukturi DNA i RNA koji sadrži određeni uzročnik bolesti. Štoviše, PCR studija je toliko osjetljiva da od milijardi stanica može identificirati jednu zaraženu virusom i točno identificirati i virus i njegovog patogena. U usporedbi s drugim poznatim studijama, čija osjetljivost nije veća od 100-105 stanica u uzorku uzetom tijekom pregleda, PCR dijagnostika omogućuje ispitivanje od 10 do 1000 stanica.

Ispitivanju se ne podvrgava sam serum ili plazma, već deoksiribonukleinske ili ribonukleinske kiseline (DNA i RNA), odnosno genetski materijal onih bakterija i virusa koji su prisutni u tijelu pacijenta i mogu izazvati razvoj bolesti. Svaki virus ima svoj jedinstvena metoda njegovo otkrivanje, zbog čega su rezultati studije uvijek točni.

U jednoj studiji može se otkriti jedan do nekoliko štetnih mikroorganizama.

Dijagnoza PCR-a, za razliku od drugih bakterioloških i imunoloških studija, provodi se vrlo brzo. Ako je potrebno od jednog do deset dana da se provede manje od t, tada se PCR studija izvodi unutar 5-7 sati.

Često se PCR bris izvodi kao pretklinička ili retrospektivna studija. Prva metoda je identifikacija potencijalno opasnih patogenih mikroorganizama koji su već započeli svoju destruktivnu aktivnost u tijelu, ali se bolesti još uvijek ne manifestiraju. Druga studija je otkrivanje virusa i infekcija nakon tretmana, kada je, prema podacima standardne analize, pacijent se smatra zdravim, nema simptoma bolesti, ali neke stanice još uvijek mogu sadržavati opasne patogene. Ove jedinstvene dijagnostičke mogućnosti omogućuju određivanje zarazne bolesti tijekom razdoblja inkubacije, kada je tek ušao u ljudsko tijelo, ali nije bilo pogoršanja dobrobiti, kao ni tijekom podstrujni bolest, ako se pacijent osjeća zdravim, ali je virus prisutan u tijelu, iako se ne osjeća.

PCR dijagnostika se koristi ne samo za identifikaciju virusa i bakterija, već i za identifikaciju osobe po fragmentima njegove DNK, kao i za određivanje krvnog srodstva (očinstvo, majčinstvo itd.).

Tijekom proteklih desetljeća PCR dijagnostika je, kao i druge grane medicine i znanosti, iskoračila daleko naprijed. Danas je oprema koja se koristi u procesu istraživanja biomaterijala poboljšana, pojavile su se nove vrste lančane reakcije polimeraze, postoje novi testni sustavi koji smanjuju troškove analize i povećavaju njezinu točnost. Zahvaljujući tome, PCR analiza postala je dostupnija široj populaciji, a broj ljudi kojima je rano otkrivanje bolesti PCR metodom spašeno živote povećao se više tisuća puta.

Što je u osnovi ove studije

Što dopušta ovu studiju biti tako točan? To je amplifikacija, tj. opetovano udvostručenje dijela lanca deoksiribonukleinske ili ribonukleinske kiseline, za što se koriste posebni enzimi i oprema. Povećanjem dijela DNA ili RNA nekoliko stotina puta, postaje ih moguće vizualno proučavati.

Ali prije povećanja i proučavanja jednog ili drugog dijela lanca, struktura prolazi preliminarnu studiju za prisutnost područja potencijalno zahvaćenih virusom. Kada se pronađu takve regije, podvrgavaju se pojačavanju.

Dijagnostika se provodi na sljedeći način. Najprije se od pacijenta uzima biološka tekućina prisutna u tijelu za analizu. To može biti krv, urin, slina, suze ili genitalna sluz. Prikupljeni biomaterijal stavlja se izravno u pojačivač, gdje se uvode enzimski reagensi, dizajnirani da se izravno kombiniraju s DNK i RNK dijelovima virusa i infekcija. Čim se reagens i virus vežu, uređaj fiksira ovo područje i počinje stvarati kopije tog područja, povećavajući ga nekoliko puta. Takvo kopiranje odvija se kontinuirano, "po lancu", čime je moguće dobiti nekoliko stotina, a ponekad i tisuće uzoraka za istraživanje.

Sljedeći korak je usporedba dobivenih dijagrama s podacima o virusima i infekcijama dostupnim u bazi podataka. Dakle, nalaze se izravno patogeni mikroorganizmi, utvrđuje se njihov broj i vrijeme prisutnosti u tijelu (prije koliko vremena su ušle u tijelo).

PCR dijagnostika danas omogućuje ne samo usporedbu otkrivenih virusa s onima koji su već poznati, već i identificiranje mutacija, kao i sugeriranje do čega te mutacije mogu dovesti.

Znanstvenici - genetičari široko koriste metodu PCR istraživanja za križanje pojedinih dijelova DNK i proučavanje novih tipova gena i mutacija.

Virusi i infekcije utvrđeni lančanom reakcijom polimerazom

Prilikom provođenja PCR-a možete pronaći mnoge bakterije i infekcije koje uzrokuju ozbiljne, a ponekad čak i neizlječive bolesti. Prije svega, to je virus humane imunodeficijencije, i to u latentnom ili inkubacijskom razdoblju, kada se njegove posljedice još nisu očitovale. To je vrlo važno u slučajevima kada drugi testovi na HIV još nisu dali rezultate: u prvih šest mjeseci nakon moguće infekcije ili kod novorođenčadi HIV pozitivne majke.

Također, PCR istraživanje otkriva hepatitis svih oblika, mononukleozu zarazne prirode, citomegalovirusne infekcije, herpes, sve spolno prenosive infekcije (ureaplazma, klamidija, mikoplazma, trihomonas, gardnerela itd.).

Utvrđuju se i uzročnici tuberkuloze, kao i infekcije koje pripadaju onkogenoj klasi, odnosno one koje kasnije mogu izazvati rast. maligni tumori(humani papiloma virus). Na lakši, ali ne manje opasnih infekcija utvrđeni PCR studijama uključuju boreliozu, krpeljni encefalitis, gljivične infekcije(Candida) i Helicobacter pylori.

Svi ti predstavnici patogene mikroflore mogu izazvati opasne bolesti u razne dijelove tijelo pacijenta, te se stoga PCR tehnika koristi u gotovo svim industrijama moderna medicina. Uz njegovu pomoć, ginekološki i urološke bolesti, termin za PCR studiju može se dobiti od specijalista zaraznih bolesti, pulmologa i ftizijatra. Nije neuobičajena upotreba lančane reakcije polimerazom u području gastroenterologije, hematologije, onkologije itd.

Kako prikupiti biomaterijal za dijagnostiku

Za dijagnostiku, pacijent će morati dati biomaterijal, koji može sadržavati patogenih predstavnika mikroflora. Kao materijal pogodan za istraživanje uzimaju se tekućine prisutne u pojedinom organu.

Dakle, virusi i infekcije, DNA i RNA, koji se mogu otkriti analizom, žive u krvi bolesnika, njegovom urinu i slini, kao i sluznim sekretima nosa, genitalija. U više rijetki slučajevi kada je potrebna duboka dijagnoza nerođenog djeteta, uzima se tekućina za analizu amnionska vreća odnosno tkiva posteljice. Za dijagnosticiranje virusa izazivajući tuberkulozu, bit će potreban ispljuvak, a za otkrivanje virusa koji je uzrokovao papilome (bradavice), struganje s epitela.

Ako je analiza usmjerena na dijagnosticiranje spolne infekcije prenosi se spolnim kontaktom ili kućanski način, liječnik uzima bris ili struganje iscjedak iz rodnice, sluzi van uretra kod muškaraca i cervikalni kanal kod žena. Također, u nekim slučajevima mogu biti potrebni ne samo sluzni izlučevine spolnih organa, već i urin pacijenta.

Prilikom dijagnosticiranja herpesa, infektivne mononukleoze, svih vrsta hepatitisa i virusa humane imunodeficijencije bit će potreban krvni serum, kao dodatni biomaterijal može biti: urin pacijenta (s infekcija citomegalovirusom), kao i bris grla.

Ako je zadatak lančane reakcije polimeraze dijagnosticirati infekcije koje utječu na rad središnjeg i perifernog živčanog sustava, tekućina leđne moždine uzima se za istraživanje.

Kako se pripremiti za studij

Kako bi rezultati lančane reakcije polimeraze bili što točniji, a dijagnoza točna i odražavala sliku bolesti, potrebno je pažljivo pripremiti za isporuku biomaterijala na analizu.

U većoj mjeri rezultati pregleda ovise o profesionalnosti laboratorijskog pomoćnika, opremi i kvalifikacijama liječnika koji dešifrira dobivene podatke. Ali mnogo ovisi o pacijentu koji je dobio termin za ovu dijagnozu.

Prvo pravilo koje se mora poštovati pri predaji materijala je potpuna sterilnost i čistoća dobivenog biološka tekućina. Ako tijekom uzimanja krvi, likvora ili amnionske tekućine ništa ne ovisi o bolesniku, tada treba pažljivo pripremiti uzimanje urina, sputuma i bris. Ako strani mikroorganizmi uđu u ispitni materijal, oni će značajno utjecati na konačne podatke analize i dovesti do izbora pogrešne taktike medicinskog liječenja.

A to je prepuno ne samo primanja nepotrebnog lijekovi, ali i pogoršanje rada drugih organa i sustava tijela.

Kako bi se izbjegle takve posljedice, pacijent bi trebao izvršiti nekoliko jednostavna pravila koji će vam pomoći da ispravno položite testove.

1. Uzorkovanje svih unutarnjih tekućina provodi se strogo na prazan želudac, dopušteno je piti samo čistu negaziranu vodu;
2. Prilikom uzimanja briseva iz genitalnih organa zabranjen je svaki seksualni kontakt 24 sata prije uzimanja biomaterijala;
3. Urin i ispljuvak predaju se u posebne sterilne spremnike koji se izdaju u laboratoriju ili se za tu svrhu kupuju u ljekarni. Prije skupljanja urina potrebno je temeljito oprati vanjske spolne organe sapun za pranje rublja, ocijedite prvi dio urina, a srednji dio skupite u posudu.

Takav jednostavna pravila obuka će vam pomoći da dobijete najtočnije podatke istraživanja i počnete brže pravilno liječenje. Obično su rezultati studije spremni za nekoliko sati, ali najčešće se u laboratorijima rezultati izdaju sljedeći dan nakon uzorkovanja biomaterijala. Pacijent u ruke dobiva laboratorijski obrazac koji sadrži osobne podatke pacijenta i viruse koji se nalaze u njegovom tijelu.

Potpuni prijepis dobivenih rezultata provodi liječnik koji je izdao uputnicu za studiju, on također utvrđuje konačnu dijagnozu. Ponekad se, na temelju rezultata dijagnoze, može preporučiti provođenje dodatna ispitivanja te pregledi i konzultacije užih specijalista. Ali najčešće su rezultati lančane reakcije polimeraze osnova za konačnu dijagnozu.