Laboratorijska studija opće analize urina. Analiza urina: vrste i metode prikupljanja. B.3 Određivanje glukoze hemijskim metodama

Zavod za veterinu B.V. Usha, T.S. Elizarova, S.E. Žavnis, G.M. Kryukovskaya

LABORATORIJSKO ISTRAŽIVANJE URINA

Klinička studija životinje ne daje uvijek potpunu sliku prirode njene bolesti. U mnogim slučajevima neophodna je opsežna klinička i laboratorijska studija sekreta bolesne životinje, posebno urina. Daje se studija urina veliki značaj, jer se u nekim slučajevima brže nego u krvi utvrđuju patološke promjene kod bolesti koje se razvijaju ne samo u bubrezima i mokraćnim putevima, već i kod bolesti želuca, gušterače i jetre.

Trenutno urodijagnostika zauzima jedno od vodećih mjesta u kliničkoj veterinarskoj medicini. Pravovremeni pregledi urina doprinose ranoj dijagnostici niza bolesti, kao i povećavaju efikasnost tekućih terapijskih i preventivnih mjera. Sve je to posebno važno kada su u pitanju priplodne i proizvodne životinje, kao i životinje koje se stavljaju u tov za mesnu industriju,

Preporučljivo je pregledati urin svake bolesne životinje, jer može pokazati promjene karakteristične za patološko stanje, čak i ako nema izraženih kliničkih simptoma. Međutim, nije uvijek potrebno kompletna analiza urin. U mnogim slučajevima dovoljno je utvrditi postoje li odstupanja od norme u sastavu urina, au sedimentu - krvnih stanica, epitela, cilindra. U svim slučajevima, priroda i opseg istraživanja ovise o indikacijama i tipičnim simptomima patološkog stanja tijela. Stoga bi metode urodijagnostike trebalo široko preporučiti kako za svakodnevni klinički rad tako i za kliničko ispitivanje životinja. Predloženi priručnik sistematizira metode laboratorijske analize urina koje se koriste u kliničko-dijagnostičkim laboratorijama, daje kratku interpretaciju rezultata kvalitativnih studija i daje kvantitativne kriterije za ocjenu rezultata.

NAČINI DOBIJANJA I ČUVANJA URINA

Preciznost laboratorijska istraživanja u velikoj mjeri ovisi o tome kako, kada se urin uzima i dostavlja u dijagnostičku laboratoriju. Potonje se mora sakupljati uredno, čisto, bez stranih nečistoća. Prije dobijanja mokraće potrebno je obaviti toalet vanjskih genitalnih organa životinje.

Za normalne kliničke svrhe dovoljna je jedna porcija urina u količini od 100-200 ml. Koncentrirani jutarnji urin koji bolesne životinje izlučuju na prazan želudac je bolje pregledati, jer se nakuplja noću, kada je životinja manje izložena vanjskim faktorima koji utiču na kvalitativni i kvantitativni sastav noći. Za neke bolesti potrebno je prikupljanje urina 6,12 sati, a ponekad i cijeli dan. Proučavanje dnevne količine urina omogućava vam da dobijete potpunu sliku funkcionalnog stanja bubrega, jer pojedinačni dijelovi urina tokom dana imaju nejednaku relativna gustina, kiselost i hemijski sastav. Na primjer, u dnevnom urinu, blagu proteinuriju je teže otkriti jer se crvena krvna zrnca i gipsi brzo otapaju.

Objektivna procjena promjena u urinu tokom njegove analize u velikoj mjeri ovisi o metodama dobivanja. Za istraživanje, urin od životinja dobiva se na sljedeće načine:

tokom prirodnog čina mokrenja, urin se skuplja u čistu posudu sa širokim otvorom;

masiranjem mokraćnog mjehura (spolja kod malih životinja, rektalno kod velikih životinja),

Proteinurija je ozbiljan proces, bez obzira na patologiju koju potvrđuje. Izuzetno je važno da hitna dijagnostika mokraćnog mjehura provedeno na način da se može propisati odgovarajući tretman i da je kompletan bubrežna funkcija nije izgubljeno.

Budući da proteinurija najčešće ne pokazuje patologije koje zahtijevaju hitnu medicinsku pomoć, uzroke koji ne predstavljaju prijetnju životu pacijenta i lako su reverzibilni farmakološkom intervencijom. To uključuje upalu urinarnog trakta, toksične učinke razne supstance, hipertenzija ili produžena groznica.

direktno iz bešike kateterizacijom. Kontraindikacija za uzimanje urina kateterom je gnojna upala uretru i praznu bešiku. Kod bikova, ovnova i nerastova, zbog sigmoidne zakrivljenosti penisa, kateterizacija je otežana.

urin dnevno od velikih životinja prikuplja se pisoarima, od malih životinja - u posebnim ćelijama.

Ako se doktor mora suočiti s proteinurijom, on ili ona mora utvrditi uzrok što je prije moguće. Proteini u urinu mogu ukazivati ​​na patologije u urinarnom traktu, kao i na bolesti koje pogađaju cijeli organizam. Prvi se spominju karcinomi bubrega i hematopoetskog sistema. Proteinurija s vrlo karakterističnom analizom urina može ukazivati ​​na multipli mijelom, hiperplaziju koja napada hematopoetski sistem a u nedostatku adekvatnih terapijski tretman neminovno vodi u smrt.

U kojim situacijama moramo biti zabrinuti zbog postojeće proteinurije?

Druge bolesti povezane s proteinurijom mogu biti enzimski nedostaci i sistemska stanja koja, ako se ne liječe, mogu vrlo otežati život pacijenta. Stres, pospanost, stres Kada je tijelo umorno ili izloženo dugotrajnom dejstvu faktora koji izazivaju hronični osjećaj nesigurnosti, nervoze i stresa, bubrezi mogu reagirati povećanim gubitkom proteina. Slično, u slučaju intenzivnog fizički uticaj izvan mogućnosti pacijenta ili dugog boravka u uspravnom položaju, javlja se takozvana ortostatska proteinurija. Neočekivani troškovi Vrlo često se u uzorku urina, koji se daje na istraživanje, nalaze i drugi sekreti iz organizma, koji se nalaze u uretri. Budući da laboratorijski analizator urina gleda svoj sediment pod mikroskopom, može utvrditi je li pronađeni protein fiziološka nečistoća ili dokaz razvoj patologije urinarnog sistema ili druge bolesti povezane sa prisustvom proteina u urinu. Kod žena vrlo često proteinurija može ukazivati ​​na prisustvo vaginalne sluzi ili dijareju, dok je kod muškaraca proteinurija posledica prisustva sperme u urinu. Ove situacije se ne mogu uvijek izbjeći, ali održavanje adekvatnih higijenskih mjera tokom prikupljanja urina minimizira rizik od nepotrebnog miješanja drugih tjelesnih tekućina u urinu. Belomikoza, koja nije patologija, može nastati i zbog izlaganja ekstremnim temperaturama na bubrezima i njihovoj okolini. To su, na primjer, vrlo popularni nesteroidni protuupalni lijekovi, lijekovi za smanjenje krvni pritisak ili neki antibiotici.

• To su normalne i normalna stanja koji ne zahtijevaju nikakav tretman.
• Termalni efekti na bubrege.
• To se događa u slučaju pregrijavanja ili pretjeranog hlađenja.
• Lijekovi i proteinurija.
• Neki lijekovi također mogu predisponirati proteine ​​u urinu.

Takva proteinurija takođe nije razlog za zabrinutost, ali bi trebalo da bude znak upozorenja da prekomjerna upotreba ovi lijekovi mogu oštetiti bubrege.

Osim toga, kod krava i kobila, čin mokrenja može se izazvati iritacijom ušća uretre i masiranjem genitalnih usana, međice, kod ovaca i koza - stezanjem nosnih otvora na 20-30 sekundi. Kod bikova, prolaz mokraće se može ubrzati nanošenjem i držanjem prepucijuma na otvoru. 30-40 With pamučni štapić navlažene toplom vodom. Kod konja se čin mokrenja može izazvati stvaranjem blage buke (sipanje zobi).

Treba imati na umu da što je kraći vremenski interval između uzimanja i pregleda urina, to je analiza preciznija. Urin je najbolje pregledati najkasnije 1,5 sat od trenutka uzimanja uzorka. Njegovo dugotrajno stajanje dovodi do promjene fizičkih (potamni zbog oksidacije fenola) i kemijskih svojstava: pomak pH urina na alkalnu stranu (kao bakterijska razgradnja ureje do amonijaka); oksidacija bilirubina i urobilinogena; reprodukcija bakterija, gljivica i njihova potrošnja glukoze; uništavanje elemenata sedimenta urina (leukociti, cilindri, precipitacija kristala).

Uz nisku relativnu gustoću urina (manje od 1,010), preporučuje se mikroskopija odmah nakon njegovog prikupljanja, jer se leukociti i hijalinski cilindri brzo otapaju kada stoje. Ako brzo ispitivanje urina nije moguće, onda se može čuvati u zatvorenoj posudi u frižideru (+4°C), zamrznuti ili konzervirati. Zamrzavanje pospješuje proces ćelijskog propadanja, ali zadržava većinu kemijskih spojeva (osim dušika, uree, antidiuretičkog hormona i adrenalina). Urin se može konzervirati timolom (1-2 kristala na 200-250 ml urina), vodeni rastvor hloroform (1-2 kapi, u količini od 5,0-7,5 ml hloroforma na 1 litar vode), formaldehid (1-2 kapi 40% rastvora na 25 ml urina), 1% borna kiselina (5-8 kapi na 200-250 ml urina). Kada se konzervira antibiotikom, razrjeđuje se i dodaje u urinu brzinom od 50-100 hiljada jedinica. na 100 ml urina. Najčešći konzervans je toluen (površinu mokraće prekrijte trkaćim slojem). Međutim, treba imati na umu da toluen utiče na kvantitativno određivanje ketona (acetona) zbog smanjene rastvorljivosti acetona u toluenu. Kloroform otapa masti, krvne elemente i cilindre, što otežava određivanje šećera. Timol otežava određivanje proteina (sa dušičnom i sulfasalicilnom kiselinom, Extonovim reagensom). Formaldehid onemogućava većinu hemijskih istraživanja, ali dobro zadržava organski sediment. Urin namijenjen bakteriološkom pregledu ne podliježe konzervaciji. Urin se dostavlja u laboratoriju zajedno sa uputom, gdje je potrebno naznačiti: šta ispitati i koji je konzervans korišten.

Radi lakšeg rada, prvo se utvrđuju fizička svojstva urina, zatim se vrši njegovo hemijsko ispitivanje, a nakon toga se vrši mikroskopski pregled sedimenta. Dobijeni rezultati se evidentiraju u posebnom obrascu (prilog).

ODREĐIVANJE FIZIČKIH SVOJSTVA

Prilikom istraživanja fizička svojstva urin se određuje prema njegovoj dnevnoj količini, boji, prozirnosti, konzistenciji, mirisu i relativnoj gustini. Treba istaći jednostavnost i dostupnost ovih studija i veliku informativnu vrijednost rezultata za procjenu stanja životinja. Pokazatelji fizičkih svojstava urina kod klinički zdravih životinja prikazani su u tabeli 1. Sva ova svojstva direktno zavise od količine i sastava hrane, spoljašnje temperature, unosa vode, fizičke aktivnosti, funkcije. znojne žlezde, stanje srca, crijeva, sekretorna aktivnost bubrega.

Količina urina koju dnevno izluče životinje određuje se mjerenjem svake pojedinačne porcije graduiranom čašom ili cilindrom. Zbog činjenice da je teško prikupiti sav urin od životinja, u kliničko okruženje možete koristiti jednostavniju metodu koja zahtijeva manje vremena. Metoda se sastoji u tome da se broj mokrenja dnevno izračunava i množi sa prosječnom količinom izlučenog urina u jednom činu mokrenja.

U različitim fiziološkim i patološkim stanjima mogu nastati različite promjene u odvajanju urina. Poliurija je povećanje dnevne količine urina. Povezano je sa povećanjem bubrežnog krvotoka (prilikom hranjenja velike količine sočne hrane, koja sadrži malu količinu proteina, soli u prehrani, davanja diuretika, glukokortikoida, tokom perioda oporavka nakon febrilnih stanja, nervoznog uzbuđenja, resorpcije edem, eksudati, transudati, dijabetes, oštećenje parenhima bubrega, piometra). Kod poliurije konji mogu izlučivati ​​30-60 litara urina dnevno nekoliko dana. Oligurija- smanjenje dnevne količine urina (uz nedostatak vode za piće, jako znojenje, dijareju, povraćanje, stvaranje edema, transudata i eksudata, bolesti bubrega i srca, opstrukciju mokraćovoda, gubitak krvi, trovanje solima teški metali, sulfonamidi, aminoglikozidi). Pollakiuria(polakisurija) - učestalo mokrenje, pri čemu se ukupna količina urina ne povećava (cistitis, prostatitis, vaginitis, urolitijaza). Oligakiurija(oligokizurija) - izlučivanje urina nakon dužeg vremenskog perioda. Anurija- potpuni prestanak lučenja mokraće (u slučaju poremećenog bubrežnog krvotoka zbog dehidracije organizma, začepljenja mokraćnih puteva, peritonitisa, trovanja solima teških metala). Ishuria - zadržavanje urina kada bolesna životinja ne može isprazniti mjehur. enureza - nevoljno mokrenje (kronični cistitis, urolitijaza, lezije sakralne kralježnice, malog mozga, anomalije predvorja vagine, kongenitalna hipoplazija mjehura i uretre, pretilost kastriranih životinja). nokturija- prevladavanje noćne diureze nad dnevnom (kod starih bolesnih životinja s oštećenom bubrežnom i srčanom funkcijom). Kod zdravih životinja odnos dnevne i noćne diureze je 3:1. Dizurija- učestalo otežano bolno mokrenje (cistitis, uretritis, prostatitis, vaginitis, urolitijaza). stranguria - bolno mokrenje. tenesmus- bolne nagone.

boja urina zavisi od njegove relativne gustine, stepena zasićenosti, prisustva pigmenata (urohrom A i B, urohromagen, urobilinogen, koprofirin, uroeritrin, hematoporfirin, urorozein i dr.), prirode hrane. Kod zdravih životinja, urin je svijetložute do svijetlosmeđe boje, s različitim nijansama (tabela 1). Promjena boje može biti posljedica prisustva krvi, hemoglobina, žučnih pigmenata, masti i supstanci unesenih u organizam u dijagnostičke ili terapeutske svrhe u urinu. Boju je najbolje odrediti u cilindru (debljina stuba ne veća od 5 cm) na dnevnom svjetlu na bijeloj pozadini. Boju urina treba razlikovati:

žuta sa nijansama: blijedožuta, svijetložuta, tamnožuta;

crvena sa nijansama: crveno-žuta, tamnocrvena;

smeđa sa nijansama: smeđe-crvena, tamno smeđa, crno-smeđa.

Blijedožuti (ponekad bezbojni) urin niske specifične težine karakterističan je za poliuriju (dijabetes, nefroskleroza, ketoza, hiloproteinemija). Koncentrirani urin visoke specifične težine i tamnije nijanse - uobičajena pojava sa oligurijom (jako znojenje, groznica). Bojenje urina nijansama šafran-žute, smeđe-žute ili smeđe-zelene ukazuje na prisutnost bolesti povezanih sa žuticom, kao i na povećanje procesa propadanja proteina u crijevima. U potonjem slučaju u urinu se pojavljuje povećana količina indoksil sumporne kiseline koja se može razgraditi u indigo. Žuta boja urina postaje uočljivija kada se protrese u cilindru, gdje se stvara puno svijetle pjene. žuta boja. Urin s nijansom žute opažen je kod leptospiroze, encefalomijelitisa, trovanja povezanih s oštećenjem jetre.

Nečistoće gnoja daju urinu sivo-bijelu boju, koja se javlja tijekom upalnih procesa u bilo kojem dijelu genitourinarnog sistema ili susjednih organa (cistitis, pijelonefritis, vaginitis). Mliječno bijeli urin je znak lipurije (masna degeneracija i razgradnja bubrežnog tkiva) i hilurije (limfostaza bubrega). Urin u prvom slučaju sadrži ogromnu količinu masnih kapljica i masnih cilindara.

Urin crvene boje s različitim nijansama nastaje zbog primjesa krvi (sa hematurijom), pigmenata rastvorljivih u njoj: hemoglobina i methemoglobina (sa hemoglobinurijom) ili hrane (cikla).

Hematurija je simptom mnogih bolesti organizma sa poremećenom funkcijom bubrega, bubrežne karlice, uretera, mokraćne bešike i uretra. Vizualno se primjesa krvi u mokraći može utvrditi ako je koncentracija crvenih krvnih zrnaca u njoj veća od 25.000 po 1 μl. Urin je u ovom slučaju crven, u sedimentu postoje krvni ugrušci, eritrociti, supernatant je bistren. Ovo stanje se naziva gruba hematurija. Ako primjesa krvi ne uzrokuje bojenje urina, onda govore o mikrohematuriji. Često se nalazi mikroskopijom sedimenta urina. Postoje tri oblika makroskopske hematurije: početna (početna), kada se krv oslobađa samo s prvom porcijom urina (sa krvarenjem iz uretre), a ostatak mokraće je normalno obojen; terminalni, kada se krv pojavljuje tek na kraju čina mokrenja (s krvarenjem iz mjehura); total, kada je sav urin obojen krvlju. Hemoglobinurija nastaje: kao rezultat povećane hemolize crvenih krvnih zrnaca u krvotokšto rezultira razvojem hemoglobinemije. Sa povećanjem bubrežnog praga za hemoglobin, počinje se izlučivati ​​urinom. Kod hemoglobinurije, urin je proziran, sediment se sastoji od pigmentnih cilindara i granula hematoidina, boja urina se ne mijenja tokom centrifugiranja i filtracije. Koristeći ove jednostavni testovi moguće je precizno razlikovati hematuriju od hemoglobinurije, što je svakako od velikog značaja u praksi ljekara.

Boja urina se takođe menja unošenjem različitih lekova u organizam:

crvena, crveno-smeđa boja - pri davanju antipirina, amidopirina, fenotiazina, sulfa lijekova, fenolftaleina, aloje (kod biljojeda), santonina (sa alkalna reakcija urin), karbonska kiselina, anilinske boje,

ružičasta boja - uz uvođenje acetilsalicilne kiseline, furosemida;

tamno smeđa ili crna - kada se daje salol, naftol, fenilicilat,

tamno do tamnozelene - pri davanju fenola, katrana, krezola;

zelenkasto-žuta, žuto-smeđa, smeđa - pri davanju eozina, riboflavina, santonina (sa kiselim reakcije urina), pikrinska kiselina, hlorokin, rabarbara, list aleksandrije;

plava - kada se daje metilensko plavo, tripanblau, indigo karmin.

Treba imati na umu da urin iste boje može biti s različitim bolestima.

Bistrina urina određuje se u staklenom cilindru prečnika 5 cm na dnevnom svetlu prema stepenu čitljivosti štampanog teksta. Pridržavajte se jedne od sljedećih definicija zamućenosti:

slaba, umjerena, velika;

proziran, neproziran, mutan;

potpuno, nepotpuno, nejasno, oblačno.

Svježe oslobođena mokraća zdravih životinja je čista, bistra i bez taloga, osim urina jednopapka (Tablica 1). Konjska mokraća je mutna, zbog prisustva kalcijum karbonata, nerastvorljivih fosfata, sluzi u njoj u suspendovanom stanju (sa diferencijalna dijagnoza urin se bistri dodavanjem hlorovodonične kiseline). Stoga je otkrivanje svijetle, bistre i bez sedimenta urina kod konja pokazatelj prisustva patološkog procesa (s poliurijom, gastroenteritisom, pneumonijom, paralitičkom hemoglobinurijom, antraksom). zamućen urin kod drugih životinjskih vrsta ukazuje na patologiju u mokraćnom sistemu i pri pregledu sedimenta najčešće sadrži soli (mokraćna kiselina, fosfat i ugljična kiselina), epitelne ćelije, sluz, masne kapljice, oblikovani elementi krv. Razlikovanje uzroka zamućenja je neophodno hemijski i zavisi od količine i kvaliteta hrane, funkcije bubrega, znojnih žlezda, crevne aktivnosti, srca i organa za disanje (Tabela I).

Miris urina svojstven za različite životinjske vrste i ovisi o koncentraciji hlapljivih tvari u njemu masne kiseline(Tabela 1). Što je urin koncentrisaniji, to je izraženiji njegov karakterističan miris. Vodenasti urin s poliurijom je gotovo potpuno bez mirisa. Odredite miris svježeg urina. Ako je miris neprimjetan, potrebno je protresti posudu sa urinom ili blago toplim dijelom mokraće.

Postoje sljedeći patološki mirisi urina: truli (gnojno-nekrotični procesi u bešike), amonijak (fermentacija amonijaka u bešici, dugotrajno skladištenje uzorka na vazduhu), aceton (ketoza, puerperalna pareza, dijabetes melitus), voćni (ketoza, dijabetička koma, listerioza), slatki miris hloroforma (askarijaza). Miris mokraće ovisi o lijekovima koji se uzimaju oralno, a koji se izlučuju iz organizma zajedno s urinom. Mentol urinu daje miris mente, terpentina i balzama - miris ljubičice, kamfora, fenola, eteričnih ulja, valerijane zadržavaju svoj specifičan miris.

Konzistencija urina određuje se transfuzijom kap po kap iz posude u posudu. Može biti tečna, vodenasta, sluzava (nalik sirupu). Tečni urin se smatra kada su kapi urina okrugle i brzo se otkinu. Kap koja se rasteže ili rasteže u obliku niti karakterizira konzistenciju sluzi.

Tabela 1.

Svojstva urina kod klinički zdravih životinja

(prema B.V. Usha, I.M. Belyakov, 2008., 2013.)

Kod svih vrsta domaćih životinja, osim kod jednopapka, mokraća je rijetka i vodenasta. Kod konja je urin sluzav, viskozan zbog primjesa mucina i nukleoalbumina. Gusta, sluzava, sirupasta mokraća kod drugih životinjskih vrsta je patološka pojava, koja ukazuje na upalu organa mokraćnog sistema.

Relativna gustina urina (OPM) zavisi od minerala rastvorenih u njemu. Fluktuacije TMR-a kod zdravih životinja zavise od količine i kvalitete hrane, funkcije bubrega, znojnih žlijezda, crijevne aktivnosti, srca i organa za disanje (Tablica 1). Određivanje OPM u kliničkoj i laboratorijskoj praksi vrši se pomoću urometra (hidrometra), refraktometra (Uricon-N), dijagnostičkih traka (Miles, Boehringer Manheim, Lachem) u zavisnosti od zapremine uzorka.

Urin se sipa u cilindar; spustite urometar tako da slobodno pluta u njemu. Očitavanja skale se uzimaju na nivou donjeg meniskusa (ako se stvorila pjena, uklanja se filter papirom). Nakon rada, urometri se ispiru vodom, dezinfikuju i osuše i čuvaju u kartonskim kutijama. Postoje dva tipa urometara - jednodnevni urin sa nižom specifičnom težinom (1.000-1.025); drugi je za urin veće specifične težine (1,025-1,050). Trenutno postoje univerzalni urometri sa podjelom skale od 1.000 do 1.050. Očitavanje urometra se izračunava za temperaturu od 15-20 C. Ako je temperatura urina viša od temperature naznačene na urometru, tada se za svaka dodatna 3 o C dodaje jedna četvrta znamenka očitavanja urometra, ako je manji, oduzima se. Kod proteinurije i glukozurije OPM se povećava, stoga se vrši korekcija: za svakih 0,1 g/l (1%) šećera, OPM indeks se smanjuje za 0,004, a za svakih 0,3 g/l (3%) proteina - za 0,001.

Sa malom količinom urina, razrijedi se destilovanom vodom 2-3 puta, odredi se OPM i posljednje dvije cifre se pomnože sa stepenom razblaženja. U prisustvu nekoliko kapi urina, OPM se određuje metodom Tol, Sanford i Wells. U cilindar se ulije mješavina jednakih dijelova hloroforma i benzena, te se spusti kap ispitnog urina. Uranjanje kapi na dno ukazuje da je OPM veći od relativne gustine mešavine reagensa. Ako kap ostane na površini - spustite. Dodavanjem hloroforma (ako kap ide na dno) ili benzena (ako je kap na površini), relativna gustina smeše se podešava tako da se kap zaustavi u sredini tečnosti. U ovom slučaju, OPM je jednak relativnoj gustoći smjese, koja se određuje pomoću urometra.

OPM se može odrediti refraktometrijom, koja je prilično precizna, ali skupa. Njegova prednost je što je potrebno samo 1-2 kapi urina. Da biste dobili tačne vrijednosti, preporučuje se ispitivanje uzorka urina na sobnoj temperaturi i centrifugirajte da biste uklonili talog difrakcije svjetlosti suspendiran u njemu iz urina. OPM filtriranog uzorka ne razlikuje se za više od 1-2 jedinice u zadnjoj cifri četverocifrenog broja.

OPM indikator se može koristiti za određivanje funkcionalne sposobnosti bubrega. Prema Schleyeru, ako OPM fluktuira u širokom rasponu tokom dvosatnog posmatranja, onda to ukazuje na dobro funkcionalno stanje bubrega. Naprotiv, uporno nizak (izostenurija) ili visok PMR u svim mjerenjima unutar 2 sata ukazuje na ozbiljnu patologiju bubrega.

Da biste odredili količinu rastvorenih čvrstih materija u urinu, pomnožite poslednje dve cifre indikatora OPM sa Long koeficijentom (2,66) ili Hascerom (2,33), Primer: dnevna količina urina -6 l, relativna gustina - 1,025; 25x2,33=58,25 g čvrste materije u 1 litru, a u dnevnoj količini - 58,25x6 = 349,5 g.

Smanjenje OPM ukazuje na nedovoljnu sposobnost bubrega da koncentrišu urin i bilježi se kod poliurije (acetonemija, nefritis, nefroskleroza, dijabetes insipidus). Povećanje OPM je karakteristično za dijabetes melitus, nefrozu, infektivne i febrilne bolesti, praćene oligurijom, proljevom, povraćanjem i znojenjem.

HEMIJSKA ISTRAŽIVANJA URINA

U hemijskom istraživanju urina najčešće se ograničava na određivanje pH, proteina, glukoze, ketonskih tijela, krvnih pigmenata, indikana, žučnih kiselina i pigmenata. Vrijednost hemijske analize je u tome što se njome mogu otkriti spojevi koji ulaze u urin tokom određenih patoloških procesa. Sve ove hemijske studije treba uvek procenjivati ​​samo u kombinaciji sa drugim studijama iu odnosu na kliničke simptome bolesti. Treba imati na umu da se trenutno, s ciljem provođenja brze kemijske studije urina, izdaju posebni dijagnostički papirni testovi koji vam omogućavaju da odmah izvršite polukvantitativnu analizu. Unatoč jednostavnosti analize, moguće su određene pogreške, stoga je u slučaju pozitivne ili sumnjive reakcije potrebno kvantificirati ovaj pokazatelj u urinu pomoću reagensa.

Reakcija urina kod životinja zavisi od njihove vrste, hrane i funkcionalnog stanja organizma (tabela 1). Urin biljojeda je alkalan, što je posljedica biljne hrane. Soli organskih kiselina ili baza, gore u procesu izmjene na ugljen-dioksid, glavni su izvor stvaranja alkalno-reaktivnih produkata. Urin mesoždera je kisel, zavisi od nakupljanja kiselih jedinjenja kao rezultat oksidacije sumpora, fosfora, proteina hrane. Po prirodi kiselosti urina se dijeli na potencijalnu (titrirajuću) i pravu (aktivnu). Potencijalna kiselost zavisi od ukupnog sadržaja kiselina u urinu, bez obzira na stepen njihove disocijacije, odnosno sposobnosti davanja vodonikovih jona u rastvor. Prava kiselost urina zavisi od koncentracije vodikovih jona i posledica je stepena disocijacije kiselina u urinu.

Koncentracija vodikovih jona je označena pH vrijednošću. Ovaj indikator se određuje u svježem urinu, jer se ugljični dioksid oslobađa kada stoji, a pH se pomiče na alkalnu stranu. Proučavanje reakcije urina provodi se pomoću tekućih indikatora prema Andreevu (indikator bromtimol plava, pH raspon = 6,0-7,6) i prema Magarshaku (indikatorska mješavina otopina neutralnog crvenog i metilen plavog, pH raspon = 6,2-7,8 ) , indikatorski papir ("Rifan" (Rusija), univerzalni "RKS" (Rusija), "Nonofan" (Češka), "Multistics" (Austrija), "Combur-test" (Njemačka), "Biofan-Z" ( Njemačka), pH raspon = 1,0-10,0). Više ako je potrebno tacna definicija PH urina se pribjegava metodama: elektrometrijski (na pH metru), titracija, kolorimetrija (koristeći set indikatora i Michaelisov komparator).

Kiseli urin se opaža tokom gladovanja, ketoze, kolitisa, upale pluća i drugih bolesti koje se javljaju uz povišenu temperaturu. Alkalna reakcija svježe izlučenog urina mesoždera i svaštojeda ukazuje na propadanje tkiva mokraćnih organa zbog neoplazmi i upale mokraćnog mjehura kao rezultat fermentacije mokraće (cistitis, pijelitis). Kod acidoze u mokraći može doći do povećanja količine klorida, smanjenja natrijuma i kalija, i obrnuto kod alkaloze. Stoga se informativni sadržaj određivanja pH urina povećava zajedno s rezultatima drugih laboratorijskih i kliničkih pokazatelja, kao i pri upoređivanju pH urina i krvi (tablica 2).

Standardizirana tehnologija kliničke laboratorijske analize urina. Analiza urin general.

Pravo standardizovano analitička tehnologija utvrđuje jedinstvene uslove za implementaciju opšta analiza urina u kliničko-dijagnostičkim laboratorijama (CDL) medicinskih ustanova

1. Svrha studije

Tehnologija "Opšta analiza urina" radi se za dijagnostiku bolesti, tokom preventivnih pregleda, za praćenje toka bolesti i efikasnost lečenja.

Proučavanje urina ima veliku dijagnostičku vrijednost ne samo kod bolesti bubrega, već i mnogih drugih organa i sistema u tijelu.

Kompleks metoda za opću analizu urina uključuje:

Makroskopska procjena koja opisuje opća fizička svojstva;

Fizička mjerenja (volumen, relativna gustina);

Hemijske studije koje se provode pomoću dijagnostičkih test traka (kvalitativne i semi-kvantitativne analize): određivanje pH, relativne gustine, proteina, glukoze, ketonska tijela, bilirubin, urobilinogen, krv, leukociti, nitriti, askorbinska kiselina; ili hemijske metode za potvrdu rezultata određivanja proteina, glukoze i drugih indikatora dobivenih test trakama.

Mikroskopski pregled sedimenta urina.

2. Zahtjevi za osiguranje implementacije tehnologije

2.1 Zahtjevi za specijaliste i pomoćno osoblje

Spisak stručnjaka sa višom i srednjom stručnom spremom uključenih u implementaciju ove tehnologije:

glukoza,

ketonska tijela,

bilirubin,

urobilinogen,

eritrociti/hemoglobin,

Nitriti

Leukociti (neutrofili).

vitamin C

NAPOMENA 1 Ispitna zona askorbinske kiseline koristi se kao kontrolni parametar da se uzme u obzir rizik od dobijanja netačnih rezultata kao što je važni pokazatelji kao što su hemoglobin, glukoza, bilirubin, urobilinogen, relativna gustina. U nedostatku zone za procjenu sadržaja askorbinske kiseline, potrebno je obratiti pažnju na listu lijekova koje pacijent uzima.

Za studiju se koristi svježe prikupljen urin, koji se prije analize čuvao najviše četiri sata. Ako testiranje kasni, urin treba čuvati u frižideru. Upotreba konzervansa je nepoželjna jer oni mogu inhibirati neke testove.

Prije studije, urin se temeljito (bez pjene) promiješa.

Metodologija istraživanja: uklonite broj traka potrebnih za analizu iz kućišta bez dodirivanja testnih područja rukama. Kontejner treba brzo zatvoriti poklopcem kako bi se spriječio ulazak vlage iz zraka.

NAPOMENA 2 U poklopcu ili unutar kanistera postoji sredstvo za sušenje koje apsorbuje vlagu kada se kanister otvori. Ovo osigurava dug vijek trajanja traka čak i nakon otvaranja kutije.

Nakon uklanjanja viška urina, traku treba držati vodoravno kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija reagensima iz susjednih područja. Prilikom utvrđivanja rezultata testa urina na reflektivnom fotometru, dijagnostička traka se nakon uklanjanja viška urina postavlja u poseban držač, transporter ili na mjesto očitavanja rezultata (ovisno o izvedbi uređaja). Analizator urina (reflektivni fotometar) vrši polukvantitativno mjerenje parametara u standardnom režimu.

NAPOMENA 3 – Kada radite na nekim analizatorima, to nije neophodno prethodno uklanjanje višak urina, jer se uklanja tokom kretanja trake na transporteru do fotometra, u kojem se detektuje rezultat. Ponekad analizator ima posebnu funkciju uklanjanja viška urina.

Nakon što se traka stavi u analizator, vrši se mjerenje i rezultat se ispisuje. Zabilježeni su patološki nalazi posebne napomene(zastave). U test trakama za proučavanje urina na reflektivnim fotometrima sa polukvantitativnim određivanjem predviđene su takozvane kompenzacijske zone. Ove zone su obično bijele boje, nije impregniran reagensima. Oni su svojevrsni "prazni uzorci", čije je postavljanje neophodno za instrumentalnu kompenzaciju bojenja reakcionih zona prirodnim urinom pri određivanju hemijskih komponenti.

U nekim slučajevima (hitna analiza urina u nedostatku fotometra, mjerenje parametara na pregledu kod ljekara opšta praksa, u prisustvu intenzivne boje urina koja mijenja boju pozadine), rezultati se mogu vizualno procijeniti nakon određenog vremenskog perioda, koji je naznačen u uputama. Vrijeme izlaganja mora se precizno pratiti kako bi se dobili pouzdani rezultati. Nakon potapanja trake u urin, boja testnih zona se uspoređuje sa bojom odgovarajućih zona skale boja na pernici i rezultat se bilježi.

Vremenski interval između nanošenja urina na traku i trenutka očitavanja rezultata je kritičan za točnost određivanja: prekratak interval može uzrokovati podcjenjivanje rezultata zbog nepotpunosti reakcije boje, a predugačak interval zbog nestabilnosti obojenog proizvoda.

Vizuelna procjena rezultata prema skalama boja otisnutim na posudama za skladištenje traka može se izraziti u jedinicama koncentracije i u obliku polukvantitativne (redne) procjene rezultata: „negativno“ (-), „ sumnjivo” (+-), “pozitivno” (+, ++, +++ ili ++++).

Da bi se potvrdili rezultati studija dobivenih korištenjem dijagnostičkih test traka, koriste se kemijske metode (Dodatak B).

3.6 Mikroskopski pregled urina

3.6.1. Zahtjevi za uzorak sedimenta urina za mikroskopsko ispitivanje.

Istraživanje se provodi u prvom jutarnjem dijelu urina, koji je najkoncentriraniji, što doprinosi povećanju broja elemenata sedimenta, ili u nasumičnom (randomiziranom) dijelu. Prije sprovođenja studije, liječnik mora imati informacije o vremenu prikupljanja urina i rezultatima fizičko-hemijsko istraživanje. Uslovi skladištenja uzorka urina moraju se strogo poštovati. Ispitivanje sedimenta treba obaviti u roku od 4 sata nakon uzimanja urina, a kod kasnijeg pregleda uzorak urina čuvati u frižideru bez zamrzavanja. Većina konzervansa ometa rezultate test traka i stoga su nepoželjni, ali timol se može koristiti ako je potrebno (nekoliko kristala po uzorku urina). Vakumske cijevi koje sadrže stabilizator za ćelijskih elemenata, što ne utiče na rezultate test traka.

3.6.2. Vrste mikroskopskih studija.

Mikroskopski pregled u opštoj analizi urina vrši se u nativnom preparatu na stakalcima u zatamnjenom polju mikroskopa ili sa spuštenim kondenzatorom. U prisustvu ćelija koje je teško razlikovati, mogu se koristiti supravitalne boje (Sternheimerova boja, vidi odeljak 4.5.1.).

Pored vizuelnog mikroskopskog pregleda, koristi se studija uz pomoć automatskih i poluautomatskih analizatora.

3.6.3. Priprema sedimenta urina i priprema preparata za mikroskopski pregled:

Laboratorija mora odobriti postupak pripreme sedimenta urina i pripreme preparata za mikroskopsko ispitivanje i sam postupak provođenja mikroskopskog pregleda u skladu sa standardom. Svaki zaposleni mora izvršiti sve korake analize na isti način i procijeniti mikroskopske elemente sedimenta koristeći iste kriterije za identifikaciju. Volumen urina koji se centrifugira treba odabrati u svakoj laboratoriji i koristiti dosljedno, npr. 10 ml; ako će se u bilo kojem slučaju koristiti manje količine (na primjer, u pedijatriji, neonatologiji), to se navodi u zaključku.

Oko 10 ml jutarnje porcije urina stavlja se u epruvetu za centrifugiranje nakon temeljitog miješanja. Ugaona brzina centrifugiranja ovisi o radijusu centrifuge. Kada se koristi centrifuga radijusa 17 - 18 cm (na primjer, OPN 1 i sl.), centrifugiranje se izvodi pri kutnoj brzini od 1500 o/min u trajanju od 10 minuta. Kada se koristi centrifuga različitog radijusa, urin se centrifugira na 400 G također 10 minuta. Ugaona brzina rotacije rotora u rpm se ili izračunava iz formule ili određuje iz Dole i Kotzias nomograma.

NAPOMENA G je relativno centrifugalno ubrzanje, koje zavisi od radijusa centrifuge. Upute za moderne centrifuge ukazuju na radijus i formulu za pretvaranje centrifugalnog ubrzanja u kutnu brzinu. Predložena je sljedeća formula za konverziju: rpm = [√(G/r x 1,118)] x 1000, gdje je: G - relativno centrifugalno ubrzanje, r - polumjer centrifuge u mm.

Neke centrifuge automatski pretvaraju centrifugalno ubrzanje u kutnu brzinu.

Zatim se brzim preklapanjem epruvete odvodi supernatant urina (supernatant), ostavljajući samo precipitat, nakon čega se 1 kap taloga (otprilike 40 μl) prenese istom Pasteurovom pipetom na stakalce i prekriva pokrovnim stakalcem. . Pokrovni stakal bi trebao potpuno pokriti sediment bez mjehurića. Sa viškom tečnosti preparat postaje višeslojan, što otežava mikroskopsko ispitivanje. Uz malu količinu urina, na primjer, u odojčadi, centrifugirajte sav preostali urin nakon analize na dijagnostičkim trakama, ocijedite supernatant i ostavite samo sediment.

Upotreba pločica za stakalce umjesto stakala i pokrovnih stakala stvara standardiziranije okruženje za mikroskopiju.

Standardizacija pripreme preparata sedimenta urina omogućava dobijanje uporedivih rezultata mikroskopskog pregleda u različitim laboratorijama.

3.6.4 Mikroskopski pregled nativnog preparata sedimenta urina.

Proučavanje preparata počinje malim povećanjem (cca. x8 ili x10, vol. x10) za opšti pregled, a detaljnije proučavanje preparata sa kvantitativnom procenom elemenata organizovanog i neorganizovanog sedimenta vrši se na veliko uvećanje (približno x8 ili x10, vol. x 40) . Ako se elementi sedimenta nalaze u svakom posmatranom vidnom polju, onda se kvantitativna procjena izražava njihovim brojem u vidnom polju, s mala količina elemenata, kada se ne nalaze u svakom vidnom polju, - po broju u preparatu (broj u preparatu je procenjen pri malom uvećanju).

Razlikovati organizirani i neorganizirani sediment.

3.6.4.1. Organizirani sediment urina.

U organizovanom sedimentu urina razlikuju se ćelije 3 vrste epitela (skvamozni, prelazni i bubrežni), eritrociti, leukociti, cilindri, gljivice i bakterije. Tumorske ćelije su također dio organiziranog sedimenta urina.

ravni epitel. Kod muškaraca pločasti epitel ulazi u urin samo iz donje trećine uretre, a u urinu zdravi muškarci on se skoro nikad ne pojavljuje. Kod žena pločasti epitel ulazi u mokraću iz uretre i vagine, pa je gotovo uvijek prisutan u ženskom urinu. Skvamozni epitel je velike poligonalne ili zaobljene ćelije sa malim jezgrom, nije obojen i ne sadrži zrna ili inkluzije. Djevojke do pubertet a kod žena u menopauzi skvamozni epitel koji je otpao sa zidova vagine je manji, jezgro mu je veće, što ponekad dovodi do grešaka u mikroskopiji. Skvamozni epitel se nalazi u obliku pojedinačnih ćelija ili slojeva.

Napomena 1 - B urinarni sedimentćelije se skoro uvek nalaze skvamoznog epitela od pojedinačnih u pripremi do pojedinačnih u vidnom polju. dijagnostička vrijednostćelije skvamoznog epitela nemaju.

prelazni epitel. Prijelazne epitelne stanice ulaze u urin iz bubrežne zdjelice, uretera, mjehura, uretre. Epitelne ćelije su 3-6 puta veće od leukocita i karakteriziraju ih izraženi polimorfizam. AT različitim odjelima prelazni epitel urinarnog trakta razlikuje se po veličini, obliku ćelije, broju jezgara. Dakle, stanice prijelaznog epitela mokraćnog mjehura su velike zaobljene ćelije koje sadrže od 1 do 3 ili više jezgara. Zajedničke karakteristike je bojenje citoplazme u žućkastu boju kao rezultat kontakta s pigmentima urina i prisutnosti fine granularnosti. Moguća je pojava vakuola i kapi masti u citoplazmi.

NAPOMENA 2. Kod zdrave osobe u preparatu se nalaze pojedinačne ćelije. Primjećuje se povećanje sadržaja prijelaznog epitela inflamatorne bolesti urinarni trakt, prostate, sa intoksikacijom različite etiologije. Nakon detekcije veliki broj prijelaznog epitela, koji nije potvrđen dijagnozom, preporučuje se citološki pregled.

bubrežni epitel. Bubrežni epitel ulazi u urin iz tubula nefrona. Morfološki, predstavlja male ćelije 1,5-2 puta veće od leukocita u promjeru, nepravilno zaobljenog, četverokutnog ili ovalnog oblika s prilično velikim jezgrom. Budući da je epitel u dugom kontaktu s pigmentima urina, obojen je u različite nijanse žute. U ćelijama bubrežnog epitela izraženi su elementi degeneracije, koji se manifestuju grubom granularnošću (proteinska degeneracija), često prekrivajući jezgro, prisustvom vakuola ili masnih kapi. Ćelije bubrežnog epitela raspoređene su u grupe, lance ili komplekse. U urinu koji sadrži bilirubin, ćelije epitela bubrega bubre i izgledaju veće, okruglije i obojene bilirubinom.

Najčešće laboratorijske greške vezane su za identifikaciju bubrežnog epitela. Ako je teško razlikovati ćelije sedimenta urina, preporučuje se supravitalno bojenje koje omogućava diferencijaciju ćelija sedimenta urina.

NAPOMENA 3 Bubrežni epitel nastaje kao posledica oštećenja tubula kod bolesti bubrega, sa razne vrste intoksikacija, uključujući lijekove i toksine, kao i nakon anestezije. Masna degeneracija bubrežnog epitela ukazuje na ozbiljnost lezije.

Leukociti. U urinu zdravih ljudi gotovo uvijek se nalaze leukociti. To su male, okrugle, bezbojne ili sivkaste ćelije, 1,5-2 puta veće od eritrocita. U pravilu, leukocite u urinu predstavljaju segmentirani nuklearni neutrofili (95%), rjeđe limfociti ili eozinofili. Otkrivanje visokog sadržaja leukocita na pozadini bakteriurije ukazuje na piuriju (gnoj u urinu). U preparatu leukociti mogu biti locirani odvojeno ili u obliku klastera. Prisustvo klastera se mora navesti na obrascu studije.

Napomena 4 - Broj leukocita zavisi od pola i starosti: kod dečaka pre puberteta se možda neće pojaviti, kod odraslih se u vidnom polju nađe 0-3 leukocita.

Napomena 5 - Sadržaj leukocita u urinu se povećava sa bolestima bubrega i urinarnog trakta infektivne i upalne prirode.

NAPOMENA 6 U urinu niske relativne gustine leukociti mogu nabubriti, au visoko alkalnom urinu mogu biti uništeni.

Eritrociti. Eritrociti su po obliku slični diskovima žućkasto-zelenkaste boje, sadrže hemoglobin (nepromijenjena crvena krvna zrnca). Crvena krvna zrnca koja su izgubila hemoglobin imaju oblik prstenova (promijenjena crvena krvna zrnca). Eritrociti ulaze u urin iz bubrega, urinarnog trakta i genitalnih organa. Bubrežno porijeklo eritrocita potvrđuje prisustvo eritrocitnih odljevaka.

Napomena 7 – U urinu zdravih osoba dozvoljeno je prisustvo pojedinačnih eritrocita u preparatu. Izmijenjena crvena krvna zrnca nalaze se u kiselom urinu. Podjela eritrocita na izmijenjene i nepromijenjene nije od presudne važnosti za rješavanje pitanja izvora hematurije. U oštro alkalnom urinu uništavaju se eritrociti. S velikim brojem izmijenjenih crvenih krvnih zrnaca u urinu može se otkriti slobodni hemoglobin.

NAPOMENA 8 Oblik eritrocita zavisi od osmolalnosti urina. U urinu niske relativne gustoće eritrociti se povećavaju u promjeru, u nekim slučajevima može doći do hemolize. u urinu sa velika gustoća eritrociti se smanjuju u veličini, dobivaju zvjezdasti oblik.

Napomena 9 — eritrocite u urinu treba razlikovati od spora kvasca i okruglih i ovalnih kristala oksalata. Spore gljiva, za razliku od eritrocita, češće su ovalnog oblika, oštrije lome svjetlost, plavkaste su boje i pupoljaka. Ovoidni oksalati su obično, iako ne uvijek, promjenljive veličine i oštro lome svjetlost. Dodavanje u pripremu taloga od kapi od 30% sirćetna kiselina dovodi do hemolize eritrocita, ostavljajući gljivice i kristale kalcijum oksalata nepromijenjenim.

NAPOMENA 10 - Hematurija se može otkriti kod lezija parenhima bubrega, kod teškog fizičkog napora, kod lezija urinarnog trakta, kod kamena bolest u bubregu, s neoplastičnim procesima, s dismetaboličkom nefropatijom i s predoziranjem antikoagulansa indirektnog djelovanja.

Cilindri. Cilindri su proteinski i ćelijski odljevci bubrežnih tubula. U srcu svakog cilindra je protein koji djeluje kao ljepljivi materijal. Protein u cilindrima je predstavljen masom nalik hijalinu, a tokom stagnacije je voštana.

Postoje sljedeće vrste cilindara: hijalinski, granularni, voštani, epitelni, eritrocitni, pigmentni, leukocitni.

Napomena 11. Za formiranje cilindara potrebno je obratiti pažnju sledećim uslovima: prisutnost proteina u primarnom urinu, kisela reakcija primarnog urina, poremećaj odljeva ili stagnacija mokraće, poremećaj opskrbe tubulima krvlju. Cilindri se nalaze u kiselom urinu. Gipsi se rastvaraju u alkalnom urinu.

Hijalinski cilindri imaju delikatne konture, prozirni su i jedva vidljivi pri jakom svetlu. Može postojati mala zrnastost na površini zbog amorfne soli ili ćelijskih ostataka. Nastaje od presavijenog proteina.

Napomena 12 - Pojava hijalinskih gipsa ukazuje na razvoj proteinurije, povećanu permeabilnost glomerularnih kapilara. U urinu zdrave osobe u preparatu se mogu naći pojedinačni hijalinski cilindri.

Zrnasti cilindri imaju oštrije konture i sastoje se od guste zrnaste mase. žućkaste boje, nastaju prilikom razgradnje bubrežnih epitelnih ćelija u stanju granularno-proteinske degeneracije.

Voštani cilindri imaju oštro izražene konture, gustu krupnozrnastu strukturu, karakteristične pukotine i lomove, žute ili blago žućkaste boje. Nastaju od zbijenih hijalinskih i granularnih cilindara tokom njihovog zadržavanja u tubulima. Prisustvo voštanih cilindara ukazuje na ozbiljno dugotrajno oštećenje bubrega.

Epitelni odljevci su čisti neravne konture i sastoje se od ćelija bubrežnog epitela, gusto raspoređenih na hijalinskoj osnovi.

Pigmentirani odljevci mogu se naći kod hemoglobinurije i mioglobinurije; Smeđa boja, slični su zrnatim.

Eritrociti cilindri žućkaste boje sastoje se od mase eritrocita, formiraju se s bubrežnom hematurijom.

Leukocitni odljevci sive boje nastaju iz mase leukocita, nalaze se u gnojnim procesima u bubrezima.

Napomena 13 - Pored pravih cilindara formiranih od proteina i ćelija, u sedimentu mokraće ponekad se nalaze lažni cilindri - cilindrične formacije od amorfnih soli koje nemaju praktičnu važnost. Ove formacije se otapaju kada se lijek zagrije ili se u kiseli urin doda kap od 10% alkalije ili 30% octene kiseline u lužnatu.

Napomena 14 – Cilindrurija je simptom oštećenja parenhima bubrega: hijalinski gips potvrđuju renalnu proteinuriju, a leukocitni i eritrocitni gips potvrđuju bubrežno porijeklo leukociturije i hematurije.

3.6.4.2. Gljivične blastospore mogu se naći u sedimentu urina. rod Candida razlikovati od eritrocita. Za razliku od eritrocita, spore pupoljaka gljive imaju plavkastu nijansu i oštrije lome svjetlost. Dodavanje kapi 30% octene kiseline lizira eritrocite, ostavljajući spore gljivice nepromijenjene.

3.6.4.3. Neorganizirani sediment urina.

Neorganizirani sediment urina su jedinjenja koja su se istaložila u obliku kristala ili amorfnih masa. Priroda sedimenta zavisi od koloidnog stanja urina, pH vrednosti i nekih drugih faktora.

U kiselom urinu nalaze se: mokraćna kiselina, urati, kiseli urati natrijum kalcijum sulfat, hipurinska kiselina.

U kiselom, neutralnom i alkalnom urinu nalaze se: kiseli amonijum urat, kalcijum oksalat,

Amorfni fosfati se nalaze u neutralnom i alkalnom urinu.

Alkalni urin sadrži: kalcijum karbonat, magnezijum fosfat,

U blago kiselom, neutralnom i alkalnom urinu nalaze se: magnezijum amonijum fosfat, kalcijum fosfat.

Kristali aminokiselina i drugih spojeva koji se nalaze u patologiji:

Tirozin

holesterol,

bilirubin,

hemosiderin,

hematoidin,

Medicinski kristali.

3.6.5. Mikroskopski pregled sedimenta urina obojenog supravitalnom.

Supravitalno bojenje se koristi kada je teško razlikovati ćelijske elemente i cilindre.

Sternheimerova boja se koristi za supravitalno bojenje.

Dostupan je gotov set reagensa za bojenje sedimenta urina po Sternheimeru, koji se sastoji od dvije boje. Radni rastvor se priprema mešanjem dva jednaka dela.

Napredak definicije. Centrifugirajte svježi jutarnji urin. Dodajte 1 kap reagensa u 0,5 ml taloga, promiješajte i inkubirajte 5 minuta. Zatim se kap obojenog taloga stavlja na predmetno staklo, prekriva se pokrovnim stakalcem (ili se puni u komoru stakalne ploče) i ispituje se pod mikroskopom. Ćelijska jezgra su obojena Plava boja, citoplazma - u ružičastoj, hijalinski cilindri - u plavoj, voštani - u jarko crvenoj, granularni - u smeđoj.

3.7. Automatska analiza urina

Automatska analiza urina vrši se na uređajima dizajniranim za hemijsku analizu i mikroskopski pregled urina. Ovi uređaji mogu kvantitativno analizirati sediment urina.

Princip rada uređaja baziran je na tankoslojnoj protočnoj mikroskopiji, pregled obojenog urina vrši se video sistemom i brzim sistemom za obradu slike. Sistem automatski klasifikuje pronađene elemente i obezbeđuje visoku ponovljivost.

Druga vrsta instrumenata centrifugira uzorak u epruvete posebno prilagođene za gledanje pod mikroskopom. Postoje sistemi koji pojednostavljuju pripremu uzorka ili smanjuju potrebnu zapreminu. Svi ovi uređaji koriste različite metodologije, ali svi sortiraju uzorke i pomažu u smanjenju ručnog rukovanja uzorcima urina.

Poluautomatski i potpuno automatski čitači traka reagensa opisani su u 4.4.3.

4. Snimanje rezultata testa urina

Svaki zaposleni u laboratoriji treba da koristi iste formulare (obrasce rezultata ispitivanja) za evidentiranje rezultata. Obrazac mora sadržavati naziv laboratorije i medicinske organizacije; informacije o pacijentu dovoljne za njegovu identifikaciju; naslov biološki materijal i svi proučavani indikatori; datum prijema uzorka i, ako je primjenjivo, vrijeme prijema; rezultati istraživanja; referentni intervali; ime i potpis uposlenika koji je izvršio studiju. Postupak izdavanja rezultata utvrđuje se uputstvom koje odobrava rukovodilac medicinska organizacija. Sva odbijanja da se uradi analiza urina također se moraju evidentirati (sa razlogom odbijanja).

5 Osiguranje kvaliteta performansi tehnologije analize urina

5.1 Programi osiguranja kvaliteta

Programi osiguranja kvaliteta uključuju dosljedno praćenje svakog aspekta postupka kako bi se osiguralo dovoljno visoke mogućnosti dijagnostiku i praćenje stanja pacijenta. Programi osiguranja kvaliteta trebaju uključiti sve faze rada i uspostaviti veze između svih komponenti procesa (pacijent, laboratorij, kliničar). Sprovođenje kontrole kvaliteta laboratorijskih istraživanja, koja se sastoji u ispitivanju kontrolnih materijala (interna laboratorijska kontrola kvaliteta i učešće u eksternoj evaluaciji) samo je jedan aspekt osiguranja kvaliteta. Kontrola je neophodna i u fazama prikupljanja uzoraka, skladištenja, isporuke, ručne obrade, registracije i izdavanja dokumenata. Takođe treba kontrolisati tehničku osposobljenost osoblja, kontinuirano nastavljanje edukacije. Za uspješnu provedbu svih kontrolnih aktivnosti potrebno je pridržavati se pravila propisanih u standardu GOST R ISO 15189-2006 „Medicinske laboratorije – posebni zahtjevi za kvalitet i kompetentnost“. U skladu sa zahtjevima ovog standarda, laboratorija sastavlja “Priručnik kvaliteta”, koji treba da odražava sve aktivnosti osiguranja kvaliteta.

5.2 Vođenje evidencije o kontrolnim aktivnostima

Registracija kontrole treba da se vrši na svim nivoima: predanalitičkom, analitičkom i postanalitičkom, za svaku fazu treba izraditi i dokumentovati pravila za sprovođenje svih postupaka.

Za klinička odjeljenja treba izraditi obrazac zahtjeva za studiju, uključujući datum zakazivanja i uzimanja uzorka, podatke o identifikaciji pacijenta, dijagnozu, informacije o lijekovima ili dijagnostičke procedure ako mogu uticati na rezultate studije.

Za medicinsko osoblje koje uzima materijal treba izraditi uputstvo koje sadrži uslove za pripremu pacijenta i postupak uzimanja biomaterijala. Uputstvo treba da sadrži pravila za dostavu uzoraka, uključujući uslove i uslove skladištenja uzoraka i pravila za bezbedan transport. Za pacijente koji sami prikupljaju materijal, sastavljaju se dopisi.

Za laboratorijsko osoblje treba definisati kriterijume za prihvatanje i odbijanje prihvatanja uzoraka (tačka 5.3.), Zahteve za registraciju uzoraka, obradu, obeležavanje i skladištenje uzoraka pre analize. Analitička faza se provodi u skladu sa istraživačkim metodama (vidi tačku 8.3.). U postanalitičkoj fazi potrebno je razviti pravila za procjenu prihvatljivosti rezultata analize, koja bi trebala uključivati ​​analitičku pouzdanost prema podacima unutarlaboratorijske kontrole kvaliteta, procjenu moguće interferencije lijekova, poređenje rezultata sa referentnim intervalom, verifikaciju tačnosti registracije. Obrazac za izdavanje rezultata mora biti odobren od strane ustanove i usaglašen sa odjeljenjima za liječenje.

Registracija također mora obuhvatiti kontrolne materijale i evaluaciju performansi instrumenta. Neophodno je u svakoj laboratoriji imati razvijena i štampana uputstva za otkrivanje i ispravljanje grešaka, rezultata koji su van granica kontrole.

Zapisivanje traka reagensa u dnevnik ili kompjuter mora biti dostupno na radnom mjestu i mora uključivati:

Broj kompleta trake reagensa i datum isteka;

Datum otvaranja kontejnera sa trakama (ove podatke treba zabeležiti i na kontejneru);

Svi rezultati pacijenata i kontrole kvaliteta:

Datum i vrijeme uzimanja uzoraka i prijema u laboratoriju:

Identifikacioni podaci radnika koji izvodi studiju.

5.3 Uputstva za laboratorijske procedure koje se koriste

Metodologija za obavljanje laboratorijskih ispitivanja treba da bude dokumentovana i dostupna na radnom mestu. Postupak bi trebao biti zasnovan na uputama za upotrijebljenu opremu i/ili komplete reagensa, smjernice ili druge dokumente odobrene u u dogledno vrijeme. Opis metode treba da sadrži: princip metode, korišćene reagense i instrumente, tok studije, analitičke karakteristike metode i postupke kalibracije. Osim toga, opis mora sadržavati sljedeće informacije:

Postupak prikupljanja i transporta uzoraka;

kriterijumi za prihvatanje ili odbijanje uzoraka urina (uzimajući u obzir dužinu vremena skladištenja uzorka nakon uzimanja, upotreba konzervansa, dosta urin za istraživanje itd.);

Informacije o kontrolnim materijalima; metodologija kontrole kvaliteta;

Referentni intervali;

Potvrdna studija;

Način registracije rezultata;

Mjere opreza vezane za biološku opasnost od ispitivanog materijala.

Uzroci lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata.

5.4 Kontrola kvaliteta materijala i opreme

Kontrola kvaliteta materijala i opreme uključuje:

Pravilno skladištenje reagensa i dijagnostičkih traka,

Usklađenost sa rokom trajanja reagensa i dijagnostičkih test traka, što sprečava upotrebu pokvarenih ili isteklih reagensa i važna je komponenta osiguranja kvaliteta;

Dostupnost uputstva za upotrebu uređaja na radnom mestu;

Dostupnost dnevnika registracije servisnog održavanja i popravke opreme.

5.5 Intralaboratorijska kontrola kvaliteta analize urina

Postoje dvije glavne vrste kontrole kvaliteta laboratorijskih istraživanja: unutarlaboratorijska kontrola i eksterna procjena kvaliteta.

Intralaboratorijska kontrola je sistem svakodnevnog praćenja tačnosti rezultata dobijenih u laboratoriji.

5.5.1.Kontrola kvaliteta hemijskih studija urina.

Za hemijsku analizu pomoću dijagnostičkih test traka potrebno je kontrolisati sve komponente trake na dve raznim nivoima kako bi se osigurala pouzdanost rezultata. Unutarlaboratorijska kontrola kvaliteta provodi se uzorcima urina zdravih ljudi, normalnim i patološkim uzorcima urina pacijenata. Tamo gdje su dostupni komercijalni višekomponentni kontrolni materijali, unutarlaboratorijska kontrola kvaliteta se provodi pomoću njih.

Prilikom otvaranja treba izvršiti kontrolu kvaliteta novo pakovanje sa dijagnostičkim trakama. Kada mijenjate test trake, trebali biste pažljivo proučiti upute proizvođača, jer se metode mogu razlikovati od osobe do osobe. različitih proizvođača, što može uticati na vreme razvoja reakcije boje i interpretaciju rezultata. Trake različitih proizvođača se ne smiju miješati. Preporučuje se paralelno testiranje sa starim i novim serijama traka na kontrolnim materijalima ili uzorcima urina pacijenta.

NAPOMENA - Trake različitih proizvođača koriste se samo za vizualnu procjenu rezultata. Prilikom rada na analizatorima mokraće potrebno je raditi na trakama konkretnog proizvođača ili trake prilagođene ovom analizatoru.

Ako se rezultati test traka razlikuju od očekivanih vrijednosti, potrebni su potvrdni testovi koji otkrivaju iste tvari s većom osjetljivošću ili specifičnošću, ali koriste različite reakcije, budući da ponovljene reakcije s dijagnostičkim trakama nisu potvrdni test. Na primjer, prilikom određivanja proteina koristi se potvrdni test s pirogalol crvenim ili sulfosalicilnom kiselinom (Dodatak B)

5.5.2. Kontrola kvaliteta mikroskopskih pregleda.

Kontrolu kvaliteta mikroskopskih pregleda treba vršiti svaki dan kada se pregledi provode. Za kontrolu ponovljivosti može se koristiti studija paralelnih uzoraka urina (duplikata), koja se preporučuje za identifikaciju cilindara, bubrežnog epitela i drugih uniformnih elemenata.

5.6 Eksterna procjena kvaliteta

Eksterna procjena kvaliteta je neophodna za procjenu ispravnosti laboratorijskih rezultata i uporedivosti rezultata dobijenih u različitim laboratorijama. Svaka laboratorija mora nužno učestvovati u eksternoj procjeni kvaliteta. Posebne organizacije licencirane za provođenje međulaboratorijske procjene kvaliteta laboratorijskih istraživanja, uključujući opću analizu urina, periodično (nekoliko puta godišnje) distribuiraju kontrolne uzorke između laboratorija sa utvrđenim sadržajem hemijskih komponenti radi kontrole ispravnosti ili mikrofotografija preparata nativnog sedimenta urina. Rezultati dobijeni od laboratorija se bilježe, a zaključci se šalju laboratorijama koje učestvuju na uporednu ocjenu ispravnosti studije. U slučaju nezadovoljavajuće procjene rezultata, laboratorija mora poduzeti odgovarajuće mjere da ispravi svoje greške.

5.7 Kontinuirana edukacija specijalista

Da bi se osigurao kvalitet analize, kvalifikacije osoblja treba da odgovaraju složenosti studije koja se izvodi. Svo laboratorijsko osoblje treba periodično (jednom svakih pet godina) da prolazi obuku o ciklusima poboljšanja koje sprovode medicinski obrazovne institucije sa odgovarajućom licencom. Svaki specijalista mora se baviti samoobrazovanjem. Laboratorija treba da ima ažurnu literaturu koja je dostupna za upotrebu, uključujući periodične publikacije o laboratorijskoj dijagnostici i atlasima. Specijalisti laboratorije moraju učestvovati na konferencijama i seminarima.

Kompletan mikroskopski pregled treba da obavlja samo posebno obučeno osoblje, a u nedostatku takvih stručnjaka, laboratorija može koristiti dijagnostičke test trake za dobijanje polukvantitativnih informacija o hematuriji, piuriji i bakteriuriji.

6. Zahtjevi za način rada i odmora, ishranu i ograničenja u pripremi bolesnika za prikupljanje urina za analizu urina

Na rezultate analize urina, koja uključuje određivanje većeg broja hemijskih analita, mogu uticati različiti faktori: fizička aktivnost, uzimanje lekova i sl., stoga je potrebno standardizirati i opisati uslove za pripremu pacijenta za uzimanje uzorka urina. detaljno u odgovarajućim uputama za pacijente.

Vidi Dodatak A.

7. Troškovi rada za implementaciju tehnologije kliničke laboratorijske analize urina

Tabela 1 ─ Troškovi rada u UET-u za implementaciju kompleksa medicinska usluga"Opšta analiza urina"

DODATAK A

Prikupljanje uzoraka urina, uslovi skladištenja i isporuke (preanalitička faza)

A.1 Uvod

Preanalitička faza se izvodi u medicinskom odjelu, a nakon dostave biomaterijala u laboratoriju, u samoj laboratoriji. Kliničari pripremaju prijave za istraživanje. U prijavi se mora navesti puno ime pacijenta, spol, godine ili godina rođenja, način dobijanja biomaterijala (na primjer, uzimanje urina kateterom), vrijeme uzimanja urina, dio uzorka urina (jutarnji, nasumični ), moraju biti naznačeni konzervansi (ako se koriste). klinička dijagnoza, barem na nivou dijagnostičke pretpostavke i utiče na analizu lijekovi. Izostanak u redoslijedu dijagnoze ili lijekova koje je pacijent uzimao koji utiču na rezultate može dovesti do pogrešne interpretacije rezultata i greške u dijagnozi. Sestrinsko osoblje odjeljenja je odgovorno za pripremu pacijenta, ispravna kolekcija materijal sam pacijent (po potrebi materijal se uzima kateterom), čuvanje uzorka na strogo određeno vrijeme nakon uzimanja i predaje uzorka urina u laboratoriju. Laboratorija treba da pruži pismena uputstva medicinskom osoblju kliničkih odjela o prikupljanju, skladištenju i transportu uzoraka urina.

AT ambulantne postavke pacijent sam skuplja urin kod kuće bez nadzora medicinskog osoblja, stoga u svakoj laboratoriji treba sastaviti posebne upute (dopise) za pacijente, koje se pacijent mora strogo pridržavati kako bi se osigurali jedinstveni uvjeti za prikupljanje materijala. Preporučuje se pacijentu osigurati poseban spremnik za uzimanje uzoraka.

Nastavak preanalitičke faze u laboratoriji sastoji se od prijema i registracije pristiglog biomaterijala, skladištenja po potrebi do studije, obrade i pripreme za studiju.

A.2 Priprema pacijenta

Priprema pacijenta za uzimanje urina treba biti standardizovana, za šta je potrebno voditi računa o: vremenu jela; trajanje odmora, položaj tijela, kao i fizička aktivnost prije uzimanja (prevencija ortostatskih i srodnih fizička aktivnost proteinurija); za neke indikatore - dnevni bioritmovi; uticaj lekova i toksičnih faktora. Sakupljanje urina za opću analizu obavlja se uobičajeno režim ishrane, na prazan stomak.

Lijekove koji ometaju određivanje određenih komponenti (vidjeti Dodatak B) treba ukinuti; ako to nije moguće, unos ovih lijekova bilježi se u prijavi za ispitivanje.

A.3 Vrste uzoraka urina:

Slučajni (randomizirani) uzorak;

Prvi jutarnji uzorak;

Uzorak dnevnog urina (za vrijeme jednako 24 sata);

Uzorak primljen u različito vrijeme (na primjer, 10-12 sati, 2-3 sata).
Za analizu urina obično se koristi jutarnji ili nasumični uzorak.

A.4 Sakupljanje uzoraka urina za tehnologiju analize urina

A.4.1 Skupljanje slučajnog uzorak urina

Nasumični uzorak se može prikupiti u bilo koje neodređeno vrijeme (koristi se, na primjer, za hemijsko istraživanje pomoću dijagnostičkih test traka). Nasumični uzorci se obično uzimaju za analizu urina odojčadi, jer nije moguće uzeti uzorak tokom dužeg ili strogo određenog vremenskog perioda, kao ni hitnih pacijenata.

A.4.2 Sakupljanje jutarnjeg uzorka urina

Za opću analizu obično se sakuplja jutarnji dio urina.

Sakupite prosječnu porciju urina na prazan želudac odmah nakon spavanja (poželjno je da prethodno mokrenje nije bilo kasnije od 2 sata ujutro) u suhu, čistu, ali ne sterilnu posudu, uz slobodno mokrenje. Prije sakupljanja urina, vrši se temeljna toaleta vanjskih genitalnih organa. Ležeći pacijenti se prethodno isperu otopinom slabog antiseptika, zatim se perineum obriše u smjeru od genitalija do analni otvor. Prilikom sakupljanja urina od ležećih pacijenata, potrebno je osigurati da se posuda nalazi iznad perineuma kako bi se izbjegla kontaminacija iz anusa.

NAPOMENA 1. Kateter ili punkcija mokraćne bešike mogu se koristiti samo u ekstremni slučajevi- kod novorođenčadi, odojčadi, pacijenata sa bolestima prostate, neuroloških pacijenata koji ne kontrolišu mokrenje, ponekad - za mikrobiološka istraživanja. Nemoguće je uzeti urin za istraživanje iz dugotrajnog katetera!

Napomena 2 ─ Prilikom prikupljanja urina za pregled kod dojenčadi i male djece koriste se posebne vrećice sa hipoalergenskim ljepilom za kožu, zbog čega vrećica za sakupljanje urina čvrsto prianja uz kožu, posuda se provjerava svakih 15 minuta, prikupljeni uzorak se sipa u posudu za sakupljanje urina, označene i transportirane.

Ako je moguće, urin treba odmah prikupiti u posudama u kojima će biti dostavljen u laboratoriju. Preporučljivo je koristiti posudu sa širokim otvorom (promjer vrata posude je najmanje 4 cm) kapaciteta 100 ml s poklopcem. Brod mora imati široka baza kako biste izbjegli slučajno prskanje. Nemoguće je uzimati urin iz posude, patke, lonca, jer čak i nakon ispiranja ovih posuda na zidovima može ostati talog fosfata koji doprinosi razgradnji svježeg urina.

Napomena 3 ─ Ako se sav prikupljeni urin ne dostavi u laboratorij (na primjer, ako je količina urina veća od 100 ml), onda se mora prikupiti u suhu, čistu posudu i sipati u posudu u kojoj će se isporučuje se u laboratoriju, temeljito miješajući prije odvajanja dijela, tako da su formirani elementi i kristali ravnomjerno raspoređeni po volumenu.

Trenutno se specijalni kontejneri za jednokratnu upotrebu za sakupljanje urina zapremine 100 ml proizvode od nelomljivog materijala (plastike) koji je inertan u odnosu na sastavni dijelovi mokraća, graduirana, sa poklopcem koji dobro priliježe. Posuda i poklopac ne smiju sadržavati tvari koje ometaju rad hemijska definicija. Takvi kontejneri mogu biti dio vakuumskog sistema za prikupljanje urina (ako je potrebno da se održi sterilnost u prikupljanju urina). Kontejner mora biti na odgovarajući način označen, a nakon preuzimanja na posudu se pričvršćuje etiketa koja mora sadržavati sve potrebne podatke o pacijentu ( puno ime, identifikacijski broj, datum i vrijeme uzimanja uzorka, primjena hlađenja ili konzervansa). Oznaka se stavlja na posudu, a ne na poklopac kako bi se izbjegle greške u identifikaciji. Prikupljeni urin se dostavlja u laboratoriju u najkraćem mogućem roku. Ukoliko je potrebno transportovati uzorke urina, treba koristiti posebne transportne posude, koje treba dobro zatvoriti, poklopac treba da se lako otvara.

Napomena 4 - nakon cistoskopije, ljekari trebaju propisati analizu urina najkasnije 5-7 dana kasnije.

A.5 Čuvanje uzorka urina

Dugotrajno skladištenje urina na sobnoj temperaturi prije pregleda dovodi do promjene fizičkih svojstava, uništavanja stanica i rasta bakterija. Urin prikupljen za opštu analizu može se čuvati na sobnoj temperaturi ne više od 4 sata, upotreba hlađenja sprečava uništavanje formiranih elemenata, ali može uticati na rezultate određivanja relativne gustine. Upotreba konzervansa je nepoželjna, ali je dozvoljena ako između mokrenja i pregleda prođe više od 4 sata (nekoliko kristala timola na 100 ml urina zadržavaju dobro formirane elemente i ne ometaju hemijske studije)

DODATAK B

(referenca)

Analiza urina pomoću dijagnostičkih test traka

Dijagnostičke test trake za određivanje jednog ili više analita u urinu namijenjene su za jednokratnu upotrebu (vidjeti tačku 5.5 "Tehnologija za izvođenje hemijskih testova urina koji su dio opće analize urina pomoću dijagnostičkih test traka"). Laboratorije treba da koriste samo test trake koje su odobrene za upotrebu na propisan način i pre isteka roka trajanja odštampanog na pakovanju.

Za opšti test urina koriste se trake koje uključuju 10 ili 11 indikatora (tačka 4.5.3.), askorbinska kiselina je 11. pomoćni indikator, jer utiče na rezultate drugih testova. Kombinovane test trake su takođe dostupne za posebne namene, kao što je praćenje terapije. dijabetes(glukoza i ketonska tijela), bolesti bubrega i urinarnog trakta (leukociti, nitriti, pH, glukoza, proteini i krv), za bolesti hepatobilijarnog sistema (urobilinogen i bilirubin). Ove trake se procjenjuju samo vizualno. Hemijske metode koje se koriste u test trakama baziraju se na reakcijama boje koje daju promjenu boje testnog područja trake. Vizuelna procjena se vrši na skali boja. Rezultati test traka namenjenih za opštu analizu urina procenjuju se kvalitativno ili polukvantitativno korišćenjem reflektivnog fotometra (videti paragraf 4.4.3.).

Princip i osjetljivost metode, utjecaj razni faktori, sastav reakcionog medija, redoslijed rasporeda analita za različite proizvođače traka mogu se razlikovati. Stoga, prije rada s trakama, morate pažljivo pročitati upute, obraćajući pažnju na svaki parametar koji se određuje. Prilikom provođenja istraživanja potrebno je pridržavati se uputa proizvođača. Prije rada sa trakama, urin treba dobro promiješati.

NAPOMENA U opisu testova navedeni su samo oni faktori uticaja koji su zajednički za većinu traka. Faktori koji utječu na razvoj boje testnog područja, dobivanje lažno pozitivnih ili lažno negativnih rezultata pri korištenju traka određenog proizvođača, detaljno su opisani u uputama.

B.1 Relativna gustina

princip testiranja. Test odražava koncentraciju jona u urinu. U prisustvu kationa kompleksni reagens oslobađa protone, što dovodi do promjene boje indikatora bromtimol plave od plave preko plavo-zelene u žutu. Test ne uzima u obzir sadržaj uree i glukoze.

Skala boja vam omogućava da dobijete rezultate relativne gustine u rasponu od 1.000-1.030 sa intervalom od 0.005. Rezultati mjerenja dobro koreliraju sa podacima o gustini urina dobijenim refraktometrom.

U alkalnom urinu (pri pH 7 ili više), indikatori gustoće su potcijenjeni. U tom slučaju, vrijednosti gustoće izmjerene trakama moraju se korigirati u skladu s preporukama navedenim u uputama (obično dodajte 0,005). Veliki broj analizatora automatski vrši korekciju gustine pri visokoj pH vrednosti urina. Askorbinska kiselina takođe potcenjuje vrednost gustine. Mogući uticaj gustina proteina, keto kiselina i glukoze navedena je u priloženoj metodi, koja se mora pažljivo proučiti prije rada.

Napomena ─ Ograničenje intervala mjerenja gustine od 1.000-1.030 ne dozvoljava uvijek korištenje ove metode.Ako je potrebno, gustina se može izmjeriti urometrom.

Princip testa: reakcija urina se određuje pomoću univerzalnog indikatora ili mješavine indikatora. U zoni merenja pH vrednosti primećuje se niz jasnih promena boje pri pH vrednostima od 5-9.

Svježe izlučeni urin zdravih ljudi ima pH 5-6.

Izvori grešaka. Ako se uzorak čuva duže vrijeme, pH vrijednost urina se povećava, reakcija urina postaje alkalnija zbog kontakta sa zrakom i povećanja broja bakterija.

B.3 Proteini

princip testiranja. Test zona za određivanje proteina na multitest traci sadrži pufer i indikator koji mijenja boju u prisustvu proteina. Kao indikator se koristi organska boja bromofenol plavo ili druge supstance, na primjer, 3,3,5,5-tetraklorofenol-3,4,5,6-tetrabromosulfoftalein. Boja test zone zavisi od indikatora.

Granice osjetljivosti. Trake različitih proizvođača imaju različitu osjetljivost na proteine. Standardna osjetljivost za proteine ​​je 0,15 g/L ili 0,3 g/L. Neki proizvođači proizvode trake visoke osjetljivosti za proteine ​​- 0,1 g / l. Unatoč činjenici da se promjena boje može dogoditi pri koncentraciji proteina u urinu od 0,06-0,08 g / l, smatra se prisustvom proteina ne manje od osjetljivosti trake. Osjetljivost ne ovisi o načinu registracije - instrumentalnoj ili vizualnoj. Sadržaj proteina manji od osjetljivosti trake ne može se odrediti, jer ne postoji skala za upoređivanje.

Specifičnost. Indikator je najosjetljiviji na albumin. Koncentracija dobijena analizatorom ili uporednom skalom boja dobro korelira sa koncentracijom albumina u urinu dobijenom hemijskim metodama. Za globuline, Bens-Jones protein mijeloma i neke druge proteine, osjetljivost trake je znatno niža, pa se ovi proteini određuju manje efikasno. Pacijenti koji testiraju proteine ​​ispod osjetljivosti trake ili proteine ​​koji nisu albumin, mogu biti negativni ili će koncentracija proteina biti izrazito niska. Stoga, kada se koriste dijagnostičke trake u analizi urina pacijenata s multiplim mijelomom, s patologija bubrega, kao i kod trudnica, preporučuje se kvalitativno određivanje proteina sa 20% sulfosalicilne kiseline, a u pozitivni uzorci- kvantitativno nekom od hemijskih metoda.

Izvori grešaka. Faktori utjecaja navedeni su u uputama za trake. U nekim uzorcima, lažno pozitivni rezultati se mogu dobiti tokom ili nakon infuzije krvne zamjene polivinilpirolidona, dok se uzimaju lijekovi koji sadrže kinine ili kinoline; ako ima ostataka dezinfekciona sredstva. Nakon tretmana fenazopiridinom može se uočiti crvenkasta obojenost testnog područja.

Procjena rezultata ovisi o osjetljivosti trake i korištenom indikatoru, tako da se može razlikovati od proizvođača do proizvođača. Prva pozitivna boja za protein odgovara osjetljivosti trake, odnosno prvom prozorčiću s pozitivnim rezultatom na skali boja ili prvoj detektibilnoj vrijednosti na analizatoru urina. Test ne hvata niže koncentracije. Rezultat čita analizator u standardnom režimu. Vrijeme ekspozicije za vizualnu procjenu naznačeno je u postupku analize, obično odgovara 60 sekundi. Boja koja ne dostiže nivo osetljivosti se ocenjuje kao „negativan rezultat” i od strane analizatora i vizuelno, čak i ako ne odgovara striktno „negativnoj” vrednosti.

Mala količina proteina može se otkriti kod zdravih ljudi kao varijanta fiziološke vrijednosti. Proteini se mogu pojaviti u malim količinama kod pacijenata na proteinskoj dijeti, nakon parnog kupatila i kod žena u predmenstrualnom periodu.

B.4 Leukociti

Princip . Ispitno područje za određivanje leukocita sadrži indoksileter, koji detektuje granulocitnu esterazu. Indoxyl započinje reakciju s diazonijum soli, a testna površina mijenja se iz bež u ljubičastu.

Specifičnost. Test otkriva aktivnost esteraze u granulocitima i makrofagima, koji se pojavljuju kada hronična upala. Ovim testom se mogu otkriti i cijela i uništena bela krvna zrnca, koja se ne mogu identificirati mikroskopskim pregledom. Posebno je relevantna procjena uništenih leukocita u alkalnom urinu, gdje se uništavaju eritrociti i leukociti i rastvaraju gipsi.

Izvori grešaka. Uticajni faktori su naznačeni u metodologiji analize. U uzorcima urina koji su jako obojeni bilirubinom ili nitrofuranima, može doći do nespecifične promjene boje u području testiranja. Konzervansi mogu ometati rezultate testova (na primjer, formalin i formaldehid daju lažno pozitivne rezultate).

Ocjena. Prvi pozitivan rezultat, dobijen na analizatoru ili skali boja, pokazuje koncentraciju od približno 10-25 leukocita po µl (10.000 - 25.000 leukocita po ml). Nadalje, rezultati se distribuiraju u skladu sa karakteristikama traka. Rezultati analizatora ili trake u boji su prosječne vrijednosti dobijene u komori za brojanje kada je metoda kalibrirana.

Ako postoje sumnjive vrijednosti koje se ne mogu jasno klasificirati kao "negativne" ili prvi pozitivan rezultat u analizi u standardnom načinu rada, potrebno je ponovno procijeniti test zonu u više kasni datumi, koji su navedeni u metodi analize (obično 90 ili 120 sekundi). Sve naknadne promjene boje se ne uzimaju u obzir. Pri visokim koncentracijama leukocita (više od 500 leukocita po µl) broj leukocita se ne može utvrditi. Ako se pri inicijalnom pregledu u urinu pacijenta nađe 10-25 leukocita po µl, odnosno prvi pozitivan rezultat, test treba ponoviti u svježe prikupljenom uzorku urina.

NAPOMENA Esteraza, kao i druge proteinaze, razgrađuje proteine. vezivno tkivo, pa tijelo proizvodi veliki broj različitih inhibitora proteinaze. Ozbiljno izlučivanje inhibitora urinom može uzrokovati negativan rezultat testa leukocita. Inhibitori urina mogu biti ili endogenog (formirani u tijelu) ili egzogenog (npr. lijekovi) porijekla.

B.5 Nitriti.

Određivanje nitrita je skrining test za skrivenu bakteriuriju, jer većina bakterija reducira nitrate u nitrit. pozitivna reakcija dijagnostičke trake otkrivene u 90% svih slučajeva zarazne bolesti urinarnog trakta. Sposobnost smanjenja nitrata ima većina bakterija koje uzrokuju upalnih procesa u bubrezima i urinarnog trakta (coli, proteus, salmonela itd.).

Princip. Aromatični amini sulfonamida reaguju sa nitritima do kisela sredina s formiranjem diazonijeve soli, koja u interakciji s indikatorom mijenja boju ispitne zone trake.

Osetljivost testa odgovara sadržaju od oko 105 bakterija/ml, što odgovara 0,8 mg/l nitrita. Pozitivna reakcija rezultira promjenom boje testnog područja od bijele preko blijedo ružičaste do svijetlo ružičaste ili crvene.

Specifičnost. Test je specifičan za nitrite.

Izvori grešaka. Uticajni faktori su naznačeni u metodologiji analize.

Lažno pozitivni rezultati mogu se dobiti kada se urin dugo čuva na toplom mjestu zbog egzogenog rasta bakterija.

Za reakciju redukcije nitrata u nitrite potrebno je prisustvo nitrata u urinu, bakterija koje redukuju nitrate i vremenski period koji je dovoljan za reakciju da se nitrati pretvore u nitrite. Dakle, u prisustvu bakterija koje stvaraju nitrit, mogu se dobiti lažno negativni rezultati kod kratkotrajnog mokraćnog mjehura, u nedostatku ili niskom sadržaju nitrata u mokraći tokom posta, u nedostatku povrća u ishrani. , ili kada parenteralna ishrana. Lažno negativni rezultati također mogu biti povezani s prisustvom mikroorganizama koji pretvaraju nitrite u urinu. Uz lažno negativan rezultat, test leukocita može poslužiti kao potvrda bakterijske infekcije.

Za dobijanje pouzdani rezultati koristite ili jutarnju porciju urina ili urin prikupljen nakon 4-satnog odmora. Studiju treba izvesti u roku od 4 sata. Antibiotici i preparati askorbinske kiseline moraju se otkazati 3 dana prije analize.

Ocjena. Svaki stepen promjene boje u ružičastu smatra se pozitivnim.

Odsustvo promjene boje na jednom testu ne isključuje infekciju zbog fluktuirajućih nivoa nitrita u urinu. U tim slučajevima neophodna je ponovna analiza.

Napomena - Neke vrste bakterija (streptokoke, pseudomonade, neiserije itd.) nemaju sposobnost redukcije nitrata i ne stvaraju nitrite.

B.6 Krv

Princip metode. Hemoglobin i mioglobin, koji imaju svojstva peroksidaze, razgrađuju supstrat impregniran u ispitnom području stvaranjem vodikovog peroksida, koji se razlaže u vodu i atomski kiseonik. Potonji oksidira indikator (derivat benzidina ili neki drugi) sa stvaranjem obojene tvari. Intenzitet boje ovisi o količini pigmenta, a boja reakcijske zone ovisi o korištenom indikatoru.

Test vam omogućava da identifikujete crvena krvna zrnca, hemoglobin i mioglobin. Netaknuta crvena krvna zrnca se liziraju, oslobođeni hemoglobin reagira, uzrokujući tačku promjenu boje. Hemoglobin i mioglobin ujednačeno mijenjaju boju cijelog testnog područja. Reakcija je osjetljivija na hemoglobin i mioglobin nego na eritrocite.

Osetljivost test zone multitest traka na prisustvo krvi u urinu zavisi od vrste traka i kreće se od 5 do 20 eritrocita/µl. Granica osjetljivosti je 5 eritrocita po µl (5000/ml). Za visoko osjetljive testove, osjetljivost testa je blizu granice fiziološke hematurije. Više granica osjetljivosti i detekcije navedeno je u uputama.

Specifičnost. Test je specifičan za hemoglobin i mioglobin. Na rezultat ne utiču druge ćelijske komponente.

Izvori grešaka. Visok nivo askorbinske kiseline, visok sadržaj proteina i potpuno odsustvo hemolize crvenih krvnih zrnaca mogu dovesti do lažno negativnih ili niskih rezultata. U potonjem slučaju, test može biti negativan ako se u sedimentu urina nalaze eritrociti.

Kod nekih vrsta traka, područje reagensa je impregnirano mješavinom jodata, koja oksidira askorbinsku kiselinu, tako da čak i njene visoke koncentracije u urinu ne utječu na rezultat.

Ostaci oksidirajućih sredstava koji sadrže hlor mogu dovesti do lažno pozitivnih rezultata. Faktori utjecaja su detaljnije navedeni u uputama za trake.

Ocjena. Obojena skala ima odvojene zone za procjenu hemoglobina i eritrocita.

RBC: tačkasta ili kompaktna boja na test traci ukazuje na normalne eritrocite. Intervali koncentracije potrebni za tumačenje rezultata dobivenih korištenjem ove vrste traka navedeni su u uputama. At visoka koncentracija područje testiranja eritrocita može biti ujednačeno tamne boje, čija je boja izvan utvrđenih vrijednosti. U tom slučaju potrebno je razrjeđivanje uzorka 10 ili 100 puta sa 0,9% otopinom natrijum hlorida i naknadno ponavljanje testa.

Hemoglobin. Homogena boja testnog područja ukazuje na prisustvo slobodnog hemoglobina, hemoglobina iz liziranih ili izmijenjenih eritrocita i mioglobina. Ovom metodom nemoguće je razlikovati hemoglobin i mioglobin. Intervali koncentracije potrebni za tumačenje rezultata dobivenih korištenjem ove vrste traka navedeni su u uputama. Slabije bojenje od prvog pozitivnog rezultata ukazuje na potrebu ponovnog testiranja i može biti zbog odsustva hemolize eritrocita. Hemoliza eritrocita je neophodan uslov za nastanak reakcije u boji, jer hemoglobin koji se nalazi unutar eritrocita ne ulazi u hemijsku reakciju. Uz djelomičnu hemolizu eritrocita, istovremeno se pojavljuje difuzno i ​​punktatno bojenje.

Poređenje sa mikroskopski pregled nacrt.

Prilikom upoređivanja rezultata ispitivanja sa mikroskopskim pregledom sedimenta, treba napomenuti sljedeće:

1. Trakom se utvrđuju nepromijenjeni, a u pogledu hemoglobina, izmijenjeni i uništeni eritrociti. Stoga, kada se analizira alkalna mokraća, u kojoj su eritrociti uništeni i ne mogu se otkriti mikroskopski, prisustvo eritrocita može se otkriti hemoglobinom.

2. U prisustvu izmijenjenih crvenih krvnih zrnaca, test zona trake će pokazati hemoglobin.

3. Ovom metodom se otkrivaju samo eritrociti, koji se pod mikroskopom moraju razlikovati od blastospora i oksalata ovoidnog oblika.

Određeno odstupanje između rezultata dobijenih pomoću traka i mikroskopije može biti zbog neusklađenosti sa standardnim uslovima za dobijanje sedimenta urina (režim centrifugiranja, zapremina urina za sediment) i priprema preparata za mikroskopiju.

B.7 Glukoza

princip testiranja. Određivanje glukoze se zasniva na specifičnoj reakciji glukoza oksidaze. D-glukoza se, uz učešće enzima glukoza oksidaze, pretvara u glukonsku kiselinu sa stvaranjem vodikovog peroksida, koji u prisustvu peroksidaze oksidira indikator da nastane obojeno jedinjenje. Boja reakcione trake zavisi od indikatora koji se koristi.

Osetljivost metode. U pravilu, osjetljivost traka odgovara 2-3 mmol/l i prelazi granice fiziološke koncentracije, koje se kreću od 0,12 do 1,8 mmol/l. Visoka osjetljivost trake, s jedne strane, omogućava vam da odredite čak i blagu glukozuriju s u velikoj mjeri pouzdanost, s druge strane, pri fiziološkoj koncentraciji glukoze će se dobiti negativan rezultat. Polukvantitativno mjerenje koncentracije je u rasponu od 2-3 do 55-60 mmol/l, ovisno o korištenim trakama. Stoga se koncentracija glukoze može mjeriti u širokom rasponu. Tačne vrijednosti osjetljivost traka i granice mjerenja su naznačene u uputama.

Izvori grešaka. Registrovanje smanjenih ili negativnih rezultata može se uočiti kada visokog sadržaja askorbinska kiselina. Lažno pozitivni rezultati mogu biti uzrokovani rezidualnim vodikovim peroksidom ili oksidacijskim agensima koji sadrže hlor u posudi za prikupljanje urina.

Ocjena. Koncentracija koja odgovara prvom pozitivnom rezultatu i intervali za utvrđene koncentracije ovise o vrsti traka i navedeni su u uputama.

B.8 Ketonska tijela

Princip. Definicija ketonskih tijela zasniva se na pravnoj reakciji. Acetosirćetna kiselina i aceton reaguju sa natrijum nitroprusidom do alkalnom okruženju da se formira ljubičasti kompleks.

b-hidroksibutirna kiselina ne reaguje sa natrijum nitroprusidom.

Osjetljivost. Test je 10 puta osjetljiviji na acetosirćetnu kiselinu nego na aceton. Granice osjetljivosti na acetosirćetnu kiselinu su obično 0,5 mmol/l (5 mg/100 ml).

Izvori grešaka. Kaptopril (natrijum 2-merkaptoetansulfonat) i druge supstance koje sadrže slobodne sulfhidrilne grupe mogu dati lažno pozitivne rezultate. Lista faktora utjecaja navedena je u uputama za trake.

Neki spojevi, kao što su fenilketoni i ftaleini, uzrokuju razvoj crvene boje koja se razlikuje od ljubičasta karakterističan za aceton i acetosirćetnu kiselinu.

Ocjena. Kod zdravih ljudi, koncentracija ketonskih tijela otkrivena pravnom reakcijom ne prelazi 0,5 mmol / l. Povećanje nivoa ketonskih tijela dovodi do pojave ljubičaste boje. Intenzitet boje se povećava sa povećanjem koncentracije. Granice mjerenja i tumačenje rezultata u skladu sa skalom boja date su u uputama za trake.

B.9 Bilirubin

Princip. Test se zasniva na diazo reakciji. Kada bilirubin stupi u interakciju s diazonijevom soli u kiseloj sredini, formira se obojeni kompleks čiji se intenzitet boje povećava s povećanjem koncentracije bilirubina. Boja obojene smjese ovisi o korištenom indikatoru.

Osjetljivost. U praksi, osjetljivost je oko 9 µmol/l (0,5 mg/100 ml) bilirubina. Više niska koncentracija bilirubin se može otkriti s relativno malom vjerovatnoćom.

Izvori grešaka. Test može biti lažno negativan ako je prisutan u urinu. velike količine askorbinska kiselina, nitrit ili mokraćne kiseline, uz produženo skladištenje urina na svjetlu, pa svjetlost uzrokuje uništavanje bilirubina. Lažno pozitivni rezultati mogu biti uzrokovani lijekovima koji boje urin u crveno ili crveno u kiseloj sredini (fenazopiridin) i visokim nivoima urobilinogena.

Ocjena. Granice mjerenja i tumačenje rezultata u skladu sa skalom boja date su u uputama za trake. Čak i mala mrlja je pozitivan rezultat. Komponente urina koje uzrokuju intenzivnu žutu boju mogu promijeniti nijansu mrlje.

B.10 Urobilinogen

Princip. Određivanje urobilinogena u multitest trakama zasniva se na dijazoreakciji sa stabilnom diazonijevom soli u kiseloj sredini. Boja obojene smjese ovisi o korištenom indikatoru. Intenzitet boje odgovara koncentraciji urobilinogena.

NAPOMENA Dva derivata bilirubina (urobilinoida) mogu biti prisutna u ljudskom urinu: sterkobilinogen i urobilinogen. Zdrava osoba sadrži sterkobilinogen. Kod bolesti jetre poremećena je konverzija urobilinogena u pirole i pojavljuje se u urinu. By hemijska struktura oba spoja su vrlo bliska, ne mogu se razlikovati konvencionalnim kemijskim metodama, tako da reakcija u boji otkriva oba spoja, ali se tradicionalno u dijagnostičkim trakama nazivaju urobilinogen.

Osetljivost zavisi od traka koje se koriste i navedena je u uputstvu, kao i granice merenja. Fiziološka granica koncentracija je od 5 do 17 µmol/l (1 mg/100 ml). Usporedba boja omogućava vam da razlikujete normu i patologiju. Specifičnost. Test se zasniva na reakciji specifičnoj za urobilinogen. Na njega ne utiču druge supstance koje reaguju sa diazo jedinjenjima, kao ni faktori koji ometaju Ehrlichovu reakciju.

Test omogućava razlikovanje fiziološke i patološke urobilinogenurije, ali se ne može koristiti za dokazivanje totalno odsustvo urobilinogen.

Izvori grešaka. Lažno negativni rezultati mogu se dobiti uz produženo skladištenje urina, posebno kada su izloženi sunčeva svetlost. Reakcija se usporava u prisustvu velikih količina formaldehida.

Lažno pozitivni rezultati mogu se dobiti s određenim lijekovima, kao što je fenazopiridin. Faktori utjecaja su detaljnije navedeni u uputama za trake. Velika količina bilirubina može uzrokovati plavo-zelenu boju zbog stvaranja biliverdina.

Ocjena. Granice mjerenja i tumačenje rezultata u skladu sa skalom boja date su u uputama za trake.

Više visoki nivoi Nivo urobilinogena se opaža nakon uzimanja obroka bogatog ugljikohidratima.

DODATAK B

Potvrda rezultata dobijenih test trakama drugim metodama: određivanje relativne gustine urometrom, proteina, glukoze, bilirubina i urobilinogena - hemijskim metodama

B.1 Mjerenje relativne gustine urina pomoću urometra.

Mjerenje relativne gustine urometrom smatra se referentnom metodom i koristi se pri dobijanju niske ili visoke vrijednosti gustina kada se odredi test trakama.

Relativna gustina je omjer mase uzorka urina i mase jednake zapremine destilovane vode na istoj temperaturi. Odnos je izražen numeričke vrijednosti; normalne vrednosti: 1.003 - 1.035. Relativna gustoća urina ovisi o koncentraciji tvari otopljenih u njemu (urea, natrijeve soli, protein, glukoza itd.).

Napomena ─ Prilikom merenja test trakama, nejonizovane supstance (glukoza, radionepropusni agensi) ne utiču na rezultate, jer se princip merenja zasniva na zavisnosti relativne gustine od jonske koncentracije.

Za određivanje relativne gustoće koriste se urometri (kombinovani hidrometri) sa opsegom skale od 0,001 do 1,050. Kada koristite urometar, potrebno je da pluta u posudi (cilindru) i da ne dodiruje zidove, za što je potrebna prilično široka posuda i relativno velika količina urina. Na određivanje relativne gustine pomoću urometra utiče temperatura na kojoj se vrši merenje. Urometri su strogo kalibrirani za mjerenje određene temperature(15°, 20°, 22°C) naznačeno na uređaju. Svako odstupanje od ove temperature dovodi do promjene volumena, a time i koncentracije otopljene tvari i relativne gustoće. Na temperaturi iznad ove, volumen urina se povećava, koncentracija i relativna gustina se smanjuju, pad temperature dovodi do povratni efekat. Kada se temperatura promeni za tri stepena, relativna gustina se menja za 0,001. Prisustvo proteina i glukoze povećava relativnu gustinu: svaka 3 g/l proteina daje povećanje od 0,001, svakih 10 g/l glukoze - za 0,004.

B.2 Merenje koncentracije proteina u urinu hemijskim metodama.

Merenje koncentracije proteina u urinu hemijskim metodama vrši se u supernatantu (supernatantu) nakon centrifugiranja urina u standardnom režimu (1500 o/min 10 min).

B.2.1 Referentna metoda za mjerenje koncentracije proteina u urinu je biuret metoda, koja detektuje polipeptidne veze i nezavisna je od aminokiselinskog sastava proteina. On je sa ista efikasnost određuje albumine, globuline i druge proteine. Zbog niske osjetljivosti metode, određivanje proteina u urinu zahtijeva precipitaciju i koncentraciju proteina, pa se zbog visokog intenziteta rada metoda praktički ne koristi u laboratoriji. Kao hemijske metode preporučuje se ispitivanje proteina u urinu sa sulfosalicilnom kiselinom (SSA) i pirogalol crvenim (PGK).

B.2.2. Mjerenje koncentracije proteina u urinu sulfosalicilnom kiselinom.

Princip metode: kada protein urina stupi u interakciju sa CSC, dolazi do denaturacije proteina i stvaranja precipitata, što dovodi do zamućenja otopine. Stepen zamućenosti je uslovno proporcionalan sadržaju proteina u rastvoru.

Detekcija proteina sa CCK (kvalitativni uzorak).

Reagensi: 20% rastvor sulfosalicilne kiseline.

Tok određivanja: oko 3 ml supernatanta urina se sipa u 2 epruvete (eksperimentalni i slijepi uzorci). U uzorak se dodaje 6-8 kapi reagensa. Na tamna pozadina uporediti eksperimentalne i prazne uzorke. Zamućenost eksperimentalnog uzorka ukazuje na prisustvo proteina, uzorak se smatra pozitivnim.

NAPOMENA 1. U slučaju alkalne reakcije, dio urina za ispitivanje se zakiseli sa 2-3 kapi slabe sirćetne kiseline.

Kvantitativno određivanje proteina sa CCK.

Reagensi: 3% rastvor SSC, 0,9% rastvor natrijum hlorida (fiziološki rastvor), 1% rastvor za kalibraciju proteina.

Oprema: fotometar, automatske pipete, epruvete.

Tok određivanja: dodati 3 ml 3% SSC u 1 ml urina, promiješati i inkubirati 10 minuta. Vrijeme inkubacije je zabilježeno na prvom uzorku. Uzorak urina se koristi kao slijepa proba. fiziološki rastvor. Slijepi uzorak se stavlja zasebno za svakog pacijenta. Na kraju perioda inkubacije, mjeri se apsorbancija uzorka za ispitivanje u odnosu na slijepu probu na talasnoj dužini od 590-650 nm. Određivanje koncentracije vrši se prema rasporedu kalibracije ili prema tabeli sačinjenoj u skladu sa rasporedom.

Tabela kalibracije. Da biste napravili grafikon, pripremite razrjeđenja 1% otopine za kalibraciju proteina sa fiziološkom otopinom do konačne koncentracije od 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 i 1 g/l.

Svako od razblaženja se analizira na isti način kao i uzorak urina. Na osnovu rezultata analize gradi se kalibracioni grafikon u koordinatama: apsorpcija (os ordinate), koncentracija (os apscisa). Linearnost metode se održava do 1 g/l. Pri koncentracijama proteina iznad granice linearnosti, uzorak urina se razrijedi fiziološkom otopinom 5-10 puta i rezultat mjerenja se množi s razrjeđenjem.

Referentne granice: 0,01-0,140 g/l, 0,05-0,08 g/dan. (do, 1997).

NAPOMENA 2 Albumin i protein koji se sastoje od mješavine albumina i globulina mogu se koristiti kao kalibracijski uzorak. Upotreba miješanog proteina kao standarda povećava pouzdanost rezultata. Gotovi setovi uzoraka za kalibraciju proteina dostupni su za pravljenje kalibracionog grafikona.

Napomena 3 - U Rusiji se proizvode gotovi kompleti reagensa za određivanje koncentracije proteina sa CCK.

Izvori grešaka. Lažno pozitivni rezultati mogu se dobiti u prisustvu jodnih kontrastnih sredstava u urinu, velike količine penicilina i sulfonamida, te visoke koncentracije mokraćne kiseline. Nedostaci metode su niska stabilnost taloga, složena nelinearna zavisnost apsorpcije od koncentracije proteina, značajne razlike u sastavu proteina kalibratora i uzorka urina, nepotpuna precipitacija većeg broja proteina u analiziranom uzorku, što dovodi do potcijenjeni rezultati. SSC test je privlačan samo zbog svoje jednostavnosti i niske cijene.

B.2.3 Kvantifikacija proteina sa pirogalol crvenim

Princip metode: kada se protein veže sa organskom bojom, pirogalol crvenom, u kiseloj sredini, formira se obojeni kompleks čiji je intenzitet boje proporcionalan sadržaju proteina u uzorku. Kompleks je otporan na mnoge spojeve, uključujući lijekove, soli, baze, kiseline.

Reagensi. Za određivanje proteina koriste se gotovi kompleti reagensa koje proizvode različiti proizvođači. rastvor za kalibraciju proteina je uključen u komplet.

Oprema: fotometar, automatske pipete.

Napredak određivanja je naznačen u postupku analize. Mjerenje apsorbancije se vrši na talasnoj dužini od 600 nm. Upijanje ostaje stabilno na temperaturi mjerenja od 25 do 370C najmanje 30 minuta nakon završetka hemijska reakcija. Linearnost metode dostiže 4 g/l proteina, a osjetljivost je 0,03-0,04 g/l. Metoda se odlikuje dobrom ponovljivošću rezultata, jednostavnošću i lakoćom izvođenja.

NAPOMENA 4 PGA boja se ne sorbira na zidovima kiveta do koncentracije proteina od 5 g/l, pa se metoda koristi za mjerenje koncentracije proteina na automatskim biohemijskim analizatorima.

Specifičnost. Metoda je najosjetljivija na albumin, ali je njena osjetljivost na globulin i protein mijeloma unutar 70% u odnosu na albumin. Upotreba miješanog proteina kao kalibracionog uzorka smanjuje moguću grešku u određivanju.

Izvori grešaka. Mogući izvori grešaka i uticajni faktori su naznačeni u postupku analize. Supstance prisutne u urinu daju ukupnu grešku od oko 2%.

B.3 Određivanje glukoze hemijskim metodama

Za određivanje glukoze koriste se metode glukozooksidaze ili heksokinaze.

Princip metode glukoza oksidaze: metoda se zasniva na oksidaciji glukoze glukoza oksidazom sa stvaranjem vodikovog peroksida, koji pod dejstvom peroksidaze oksidira ortotolidin ili neku drugu supstancu, kao što je fenolftalein, da formira boju, čiji se intenzitet meri fotometrijski.

Postoje gotovi setovi reagensa za izvođenje metode glukoza oksidaze, morate pažljivo proučiti upute i točno ih slijediti.

Koncentracija glukoze u urinu može se odrediti i heksokinaznom metodom pomoću gotovih kompleta reagensa i na analizatoru glukoze pogodnom za određivanje koncentracije glukoze u urinu.

Referentne granice:< 0,5 г/сутки (< 2,78 ммоль/сутки); 1-15 мг/100 мл (0,1 -0,8 ммоль/л), (по, 1997).

B.4 Detekcija bilirubina u urinu (Fuchet kvalitativni test)

Princip metode: test se zasniva na oksidaciji bilirubina u biliverdin pod dejstvom željeznog hlorida, koji je uključen u Foucheov reagens, sa stvaranjem plavo-zelene boje.

Reagensi: 15% rastvor barijum hlorida, Foucheov reagens (25 g trihlorsirćetne kiseline rastvori se u 100 ml destilovane vode i doda se 10 ml 10% rastvora gvožđe hlorida).

Tok određivanja: dodati 5 ml 15% rastvora barijum hlorida u 10 ml urina, promešati, filtrirati. Na filter se kapaju 1-2 kapi Foucheovog reagensa. U prisustvu bilirubina na filteru se pojavljuje zelenkasta ili plavo-zelena mrlja. Alkalni urin prije studije zakiseli se s nekoliko kapi koncentrirane octene kiseline.

B.5 Detekcija urobilinogena u urinu (Neubauer kvalitativni test). Princip metode: test se zasniva na interakciji urobilinogena sa para-dimetilaminobenzaldehidom da nastane crveno jedinjenje.

Reagensi: Ehrlich-ov reagens: 2 g paradimetilaminobenzaldehida rastvoreno je u 100 ml 20% rastvora hlorovodonične kiseline.

Tok određivanja: 1 kap Erlichovog reagensa se dodaje u 1 ml urina, vrijeme se bilježi. Crvena boja urina u prvih 30 sekundi znači pozitivan rezultat (povećanje urobilinogena). Odsustvo boje ili njen razvoj nakon 60 sekundi ukazuje na normalan sadržaj urobilinogena.

Ometaju određivanje urobilinogena: bilirubina, porfobilinogena, nekih lijekova (para-aminosalicilna kiselina, sulfonamidi itd.). Ako se otkrije bilirubin, uklanja se taloženjem barijevim hloridom i naknadnom filtracijom, u filtratu se provodi test na urobilinogen. Za razlikovanje boje zbog urobilinogena ili porfobilinogena dodaje se jednaka količina hloroforma u mješavinu urina i Ehrlichovog reagensa, u prisustvu urobilinogena boji se hloroformski sloj (donji sloj), u prisustvu porfobilinogena, gornji vodeni sloj. Sulfonamidi i paraaminosalicilna kiselina daju zamućenje i narandžastu boju sa Ehrlichovim reagensom, urobilinogen se ekstrahuje petrolejom ili dietil eter i test se ponavlja sa etarskim ekstraktom.

Bibliografija

1. GOST R 52905 -2007 (ISO 15190:2003) Sigurnosni zahtjevi.

2. "Uputstvo o mjerama za sprječavanje širenja zaraznih bolesti pri radu u kliničko-dijagnostičkim laboratorijama zdravstvenih ustanova." Moskva, 1991.

3. "Pravila za sakupljanje, skladištenje i odlaganje otpada iz zdravstvenih ustanova." SanPiN 2.1.1.728-99., Moskva, 1999

4. GOST R 53079.4-2008 Medicinske laboratorijske tehnologije. Osiguravanje kvaliteta kliničkih laboratorijskih istraživanja. Dio 4 Pravila za izvođenje preanalitičke faze.

5. GOST R ISO 15189 -2006 Medicinske laboratorije. Posebni zahtjevi za kvalitetu i kompetentnost.

Nacrt standarda pripremili su:

, (MMA im.); (RSMU), (RMAPO); (RONTS nazvan po RAMS-u).

Naziv „Opšta analiza urina“, tradicionalno ustaljen kod nas, u inostranstvu se označava terminom „Urinaliz“.