PCR metoda u dijagnostici upalnih bolesti genitourinarnog trakta kod muškaraca i žena. Šta je PCR test krvi i zašto je potreban?

PCR dijagnostika je tehnika zasnovana na upotrebi lančane reakcije polimeraze, koja se može koristiti za pregled osobe na infektivne i nasljedne bolesti. PCR analize za 12 infekcija pokazuju rezultat, bez obzira da li je bolest akutna ili kronična. Neki stručnjaci smatraju PCR 12 obavezna analiza i ne postavljajte konačnu dijagnozu bez toga. Rezultati mogu biti pozitivni i mnogo prije pojave simptoma bolesti.

U 20. stoljeću Cary Mullis iz SAD-a otkrio je fenomen lančane reakcije polimeraze. Trenutno je PCR metoda zlatni standard u nekim područjima medicine. Metoda je najefikasnija za otkrivanje bolesti u aktivnoj fazi, jer postoje slučajevi kada konvencionalne metode ne daju takav rezultat u aktivnoj fazi. tačan rezultat.

Prednosti PCR dijagnostike

Dijagnoza infektivnih procesa pomoću PCR-a prilično je relevantna u savremeni svet. Prednosti ove vrste pregleda su sljedeće:

Novosti ✆

Detekcija infektivni agens u analizama. Analiza uključuje identifikaciju DNK ili RNK infektivnog agensa.
Lažne i pogrešne reakcije su praktično isključene.
PCR metoda 12 je najosetljivija. Zahvaljujući ovoj metodi, mogu se otkriti čak i pojedinačne ćelije infektivnih agenasa.
Rezultat PCR za skrivene patogene je spreman u roku od 4 sata nakon zahvata.
Sposobnost otkrivanja infektivnih agenasa bez propuštanja karakteristični simptomi za bolest. Metoda je prilično efikasna u slučaju specifične bolesti.

U suvremenom svijetu PCR dijagnostika infekcija se razvija ubrzanim tempom. Tehnika se aktivno unapređuje. Pojavljuju se nove podvrste PCR pregleda. Zahvaljujući razvoju ovu metodu pregled, postaje što je moguće dostupniji širokom krugu ljudi, dok se cijena postepeno mijenja.

Osnove lančane reakcije polimeraze

PCR metoda se provodi isključivo u laboratorijskim uslovima. Za njegovu provedbu koriste se posebni enzimi koji nekoliko puta povećavaju strukturu DNK i RNK pacijenta. Trebalo bi formirati takvu količinu DNK i RNK da bi se mogla izvršiti vizuelna analiza. Tokom pregleda se kopira kopija RNA ili DNK sekcije, koja idealno odgovara traženim uslovima.

Laboratorija održava bazu podataka koja navodi tačnu strukturu različitih infektivnih agenasa. Zahvaljujući PCR metodi, ne možete samo vidjeti patogena, već i izračunati njegov kvantitativni omjer.

PCR dijagnostika također uključuje određene inovacije među kojima se mogu izdvojiti sljedeće:

uvođenje mutacija;
povezivanje pojedinačnih fragmenata DNK;
utvrđivanje očinstva itd.

Infekcije otkrivene PCR analizom

PCR dijagnostika može otkriti sljedeće infektivne procese:

hepatitis sledećih varijanti: A, B, C, G;
Epstein-Barr virus, uzročnik infektivna mononukleoza;
citomegalovirus;
mycobacterium tuberculosis;
herpes 1 i 2 tipa;
mnoge spolno prenosive infekcije: ureaplazmoza, gardnereloza, klamidija, mikoplazmoza, trihomonijaza.
HPV i njegove onkogene podvrste;
krpeljni encefalitis i borelioza;
infekcija kandidom;
listerioza;
Helicobacter pylori infekcija.

A ovo su samo neke od najčešćih infekcija koje se mogu otkriti pomoću PCR-a. PCR test krvi se aktivno koristi u ginekološkoj oblasti medicinske prakse, kao i u oblastima kao što su:

pulmološki;
phthisiatric;
gastroenterološki;
onkološki;
mnoge druge grane medicine.

Pravila za prikupljanje materijala za analizu

Strana DNK i RNK mogu se otkriti ispitivanjem raznih tjelesnih tekućina određene osobe. Za pregled osobe na prisustvo određenih polno prenosivih infekcija potrebno je uzeti uzorak iscjetka iz genitalnih organa (bris ili struganje) pacijenta i njegovog urina.

Ako je potrebno pregledati osobu za razne vrste infekcije (HIV, herpes, hepatitis i druge), zatim se uzima PCR analiza za koju se koristi krv pacijenta.

Za dijagnozu herpetična lezija, mononukleoza, potrebno je uzeti bris iz usne duplje pacijenta. Za potvrdu CMVI pacijentu se uzima urin na analizu. Postoje slučajevi kada se ispituje cerebrospinalna tekućina kako bi se utvrdili uzroci nastalih neuroloških abnormalnosti.

Istovremeno, pulmolog ispituje sputum i tekućinu iz pleure određenog pacijenta PCR metodom.

Ako novorođenče ima sumnju na intrauterinu infekciju, doktori uzimaju analizu plodove vode od trudnice i komadić tkiva posteljice.

Isporuka analize: karakteristike postupka i interpretacija rezultata

Svi pacijenti pregledani PCR metodom dobijaju najpouzdaniji rezultat. AT ovaj slučaj pojava grešaka je praktično isključena. Rezultati ove analize se pripremaju dovoljno brzo, što olakšava dijagnozu i osigurava pravovremeni pregled medicinske mjere.

Pouzdanost PCR rezultata direktno ovisi o ispravnosti isporuke materijala na ispitivanje. Materijal ne smije biti kontaminiran, inače rezultat studije neće biti objektivan. Za većinu važne preporuke Prije podnošenja PCR analize, važe sljedeći zahtjevi:

Dan prije analize zabranjena je seksualna aktivnost.
Test krvi za infekcije se mora uzeti ujutru na prazan želudac.
Urin se daje ujutro u sterilnu posudu.

Rezultat analize će biti gotov za 1,5-2 dana nakon predmetne procedure. Postoje situacije kada se rezultat može pripremiti istog dana.

Dešifrovanje rezultata

Rezultat ove vrste pregleda može biti pozitivan ili negativan. Negativan rezultat krvnog testa ukazuje da u dostavljenom materijalu nema infektivnih elemenata. Veliki broj Urađene PCR analize pokazuju negativnu analizu.

Pozitivna PCR analiza potvrđuje činjenicu da su infektivni agensi pronađeni u dostavljenom materijalu i to maksimalno kvalitetno efikasan tretman bolestan.

Rezultat može biti pozitivan, ali nema manifestacija bolesti. To ukazuje ili na početak bolesti ili na njen prijenos. Ako se otkrije nositelj bolesti, tada nisu potrebne nikakve terapijske mjere. Samo trebate posjetiti specijaliste. Primjeri takvih bolesti su:

infekcija papiloma virusom;
herpes itd.

Obično se nalaze u pljuvački, strugotima cervikalni kanal, uretra. Međutim, treba imati na umu da bolesna osoba može zaraziti apsolutno zdrave ljude, uprkos činjenici da je njegova ovu bolest uopšte ne smeta. Bolest može napredovati u hronični oblik. Treba napomenuti da u slučajevima kada je PCR test krvi pokazao pozitivan rezultat, imenovanje terapijskih mjera je jednostavno neophodno.

PCR analiza takođe ima kvantitativnu karakteristiku. Kvantitativni rezultat procjenjuje samo stručnjak, za njega je individualno razne infekcije. Na osnovu kvantitativna karakteristika, doktor je u stanju da shvati koliko je aktivan ovaj patološki proces, da postavi tačnu fazu razvoja određene bolesti. Analizirajući dobijene rezultate, stručnjak može izabrati potreban lek i eventualno preispitati dozu lijeka.

Preciznost PCR dijagnostike

Specijalistima se daje PCR 3 najvažnije karakteristike, među kojima su:

Preciznost.
Specifičnost.
Osjetljivost.

Dijagnoza infekcija PCR ima vjerovatnije otkrivanje infektivnih agenasa. PCR analiza krvi i drugih tekućina je vrlo specifična. Uz njegovu pomoć možete lako identificirati određeni zarazni proces. PCR dijagnostika je vrlo osjetljiva. Ako ispitni materijal sadrži minimalni iznos infektivnih agenasa, PCR metoda će uvijek biti pozitivna.

Najrjeđi je lažno pozitivan rezultat. Ako nema infekcije, rezultat je negativan.

PCR za latentni infektivni proces

Ako se sumnja da ima SPI, nalaže se krvni test skrivene infekcije. Seksualne bolesti mogu se otkriti samo pregledom pacijenta. Bolesti kao što su:

klamidija;
ureaplazmoza;
gonoreja;
herpes;
gardnereloza;
mikoplazma.

Gore navedene seksualne infekcije su prilično česte i u isto vrijeme podmukle. Na početna faza razvoj bolesti, ne daju svijetle simptome, a pacijenti ne traže pomoć. PCR test krvi, struganje sa sluzokože uretre i cervikalnog kanala potrebni su ako se sumnja na ove infekcije.

SPI imaju veoma negativan uticaj na reproduktivni sistem. Mogu uzrokovati neplodnost ili malformacije fetusa. S tim u vezi, prije planiranja trudnoće potrebno je napraviti PCR test.

PCR za 12 infekcija je popularan. Dijagnoza pomoću PCR-a 12 se vrši putem uzimanja brisa sa genitalija. Materijal se uzima 2 sata nakon čina mokrenja. 2 dana prije studije, supozitorije se ne smiju ubacivati u vaginu i ne treba vršiti ispiranje. Rezultat analize bit će gotov za 2 dana.

Cijena PCR-a varira ovisno o infekciji koja se proučava. Cijena se kreće od 200 do 500 rubalja za svaku infekciju. Možete samostalno ući i pregledati se u privatnoj laboratoriji, bez uputnice ljekara.

PCR (polimeraza lančana reakcija) - dostignuće molekularne biologije, jedne od glavnih kliničkih metoda laboratorijska dijagnostika krajem 20. i početkom 21. vijeka, donoseći velika korist in raznim oblastima medicinska nauka.

Dakle, čak i među milionima ćelija ljudsko tijelo nije izgubljen sam živi virus, već samo dio njegove DNK, tada će se PCR, ako ga ništa ne ometa, vjerojatno nositi sa zadatkom i prijaviti pozitivan rezultat o ostanku "vanzemaljca". Ovo je suština PCR-a i njegova glavna prednost.

Prednosti i nedostaci

Laboratorija koja obavlja PCR dijagnostiku podliježe najvišim zahtjevima u pogledu opreme, test sistema i kvalifikacija medicinskog osoblja. Ovo je visokotehnološki laboratorij koji ima arsenal vrlo osjetljivih i visoko specifičnih reagensa, tako da nema posebnih nedostataka. Osim ako ne daje pozitivan rezultat u odsustvu kliničke manifestacije i time stavlja kliničara pred dilemu: isplati li se započeti liječenje ili ne?

Liječnik koji promatra pacijenta počinje sumnjati u pouzdanost rezultata testa, jer ne vidi nikakve znakove bolesti. Ali ipak, s obzirom na visoku osjetljivost PCR sustava, treba imati na umu da on otkriva patogen čak iu pretkliničkoj fazi, a pozitivan rezultat u ovom slučaju je više prednost nego nedostatak. Na osnovu toga, ljekar koji prisustvuje mora sam odlučiti o preporučljivosti terapije, uzimajući u obzir druge argumente "za" i "protiv".

Prednosti dijagnostike pomoću lančane reakcije polimeraze su očigledne:

Visoka specifičnost, dostižući 100%, zbog prisustva u odabranom uzorku čestica nukleinske kiseline svojstvenih određenom organizmu, ali stranog ljudima;
Visoke performanse, jer je PCR visokotehnološka automatizovana tehnika koja pruža mogućnost da se na dan uzorkovanja materijala sprovede testiranje i tako se pacijent oslobodi nepotrebnih briga;
PCR, koji radi na jednom uzorku, može provesti nekoliko studija i o otkriti više patogena, ako će to biti takav zadatak. Na primjer, prilikom dijagnosticiranja klamidijske infekcije, gdje je PCR jedna od glavnih metoda, uz klamidiju, može se otkriti i Neisseria (gonokok) - patogen. Štaviše, to ne utiče negativno na pouzdanost rezultata;
PCR te testira je opasan mikroorganizam period inkubacije kada još nisu imali vremena da nanesu opipljivu štetu organizmu, tj. rana dijagnoza upozorava na nadolazeći razvoj događaja patološki proces, što omogućava da se za njega pripremite i preuzmete u punom naoružanju.

Osim toga, kako bi se izbjegli nesporazumi koji ponekad nastaju prilikom dijagnostike, PCR se štiti i činjenicom da se njegovi rezultati mogu snimiti (fotografija, kompjuter) kako bi se po potrebi koristili u stručne svrhe.

Norma u PCR odgovorima se smatra negativnim rezultatom., što ukazuje na odsustvo fragmenata stranih nukleinskih kiselina, pozitivan odgovor će ukazati na prisutnost infekcije u tijelu, digitalne vrijednosti označuju stanje virusa i njegovu koncentraciju u trenutku testiranja. Međutim, kompletno dekodiranje analize provodi liječnik koji je prošao posebnu obuku na temu "PCR". Pokušaj da sami interpretirate rezultate nema smisla, jer je moguće, što će se vjerovatno dogoditi, pogrešno shvatiti i početi brinuti unaprijed.

Čega se PCR „plaši“, šta može učiniti i kako se pripremiti za njega?

Kao i kod svake druge studije, ponekad su rezultati testa lažno pozitivni ili lažno negativni pri čemu PCR nije izuzetak. To se može dogoditi u sljedećim slučajevima:

Kršenja tehnološki proces u jednoj od faza reakcije;
Nepoštivanje pravila za prikupljanje materijala, njegovo skladištenje ili transport;
Prisutnost stranih nečistoća u materijalu.

To sugerira da se PCR - dijagnozi infekcija mora pristupiti pažljivo, pažljivo i precizno, inače uzorci materijala mogu promijeniti strukturnu strukturu ili čak propasti.

Faze PCR dijagnostike. Lažni rezultati mogu dati povrede u bilo kojoj fazi studije

PCR dijagnostika infekcija spada među ostale u kategoriju "zlatnih standarda". laboratorijske metode, pa se može koristiti za traženje uzročnika mnogih bolesti koje na prvi pogled nemaju ništa zajedničko jedna s drugom:

Tuberkuloza različita lokalizacija, pneumonija (uključujući atipičnu, uzrokovanu klamidijom);
Dječje infekcije ( ospice rubeola, zauške, boginje);
Difterija;
salmoneloze;
zoonoza infekciona zaraza- listerioza (bolest karakteriziraju različiti simptomi sa oštećenjem limfnih čvorova, centralnog nervnog sistema, unutrašnjih organa);
Bolesti uzrokovane prodiranjem Epstein-Barr virusa (infektivna mononukleoza itd.);
Onkološka patologija izazvana infekcijom papiloma virusom (HPV i njegovi tipovi);
Borelioza (lajmska bolest, krpeljni encefalitis);
Helicobacter pylori infekcija, čiji je uzročnik mikrob koji živi u ljudskom želucu Helicobacter pylori. Dokazano je da Helicobacter izaziva razvoj raka želuca ili dvanaestopalačnog crijeva;
i praktično sve.

PCR dijagnoza polno prenosivih infekcija je od posebnog značaja, jer su bolesti koje se na ovaj način izazivaju često dugo vrijeme javljaju se bez ikakvih kliničkih manifestacija, ali tokom trudnoće počinju da se aktiviraju i na taj način ugrožavaju zdravlje, pa čak i život djeteta. I ponašajte se slično. Neki od njih („baklja“) su istovremeno povezani sa spolno prenosivim infekcijama, tako da potonje zahtijevaju detaljnije razmatranje. Čitalac će moći da se upozna sa najpopularnijim metodama u sljedećim odjeljcimačlanci.

Kako se pravilno pripremiti da biste dobili pouzdan rezultat?

Odmah napominjemo da je priprema za PCR prilično jednostavna i ne zahtijeva posebne napore od strane pacijenta. Potrebno je samo izvršiti tri jednostavna zadatka:

Nemojte imati seksualne odnose 24 sata prije uzimanja testa;
Da uzmete i analizirate krv iz vene, morate doći na prazan želudac, usput, ne možete ni piti;
Urin treba mokriti noću (ujutru - u sterilnu teglu kupljenu dan ranije u apoteci).

PCR može raditi u bilo kojem biološkom okruženju

PCR metoda nije "krvožedna", stoga prihvata bilo koju biološko okruženje koje sadrži sumnjivi infektivni agens. izbor - šta trebate uzeti za istraživanje ostaje na doktoru.

Dakle, u potrazi za patogenom, uz test krvi (iako je također prikladan i u većini slučajeva uzet paralelno s drugim materijalom), možete koristiti:

(iscjedak iz urogenitalnog trakta);
Struganje sluzokože usnoj šupljini, konjuktiva, nazofarinks, genitalni trakt (kod žena se uzimaju iz cerviksa i vagine, kod muškaraca - iz uretre);
pljuvačka;
sperma;
sok od prostate;
Tkiva posteljice i amnionska tečnost (amnionska tečnost);
Sediment urina (nakon centrifugiranja), na primjer, za otkrivanje određenih spolno prenosivih infekcija i Mycobacterium tuberculosis;
Sputum i pleuralna tekućina za istu svrhu;
eksudati;
cerebrospinalna tečnost za sumnju infekcija CNS;
Biopsijski materijal (biopsija) uzet iz jetre, duodenuma, želuca itd.

Navedenom bih dodao da će u svim slučajevima, čak i kod struganja i sekreta, biti dovoljno materijala za testiranje, budući da PCR testiranje ne zahtijeva velike količine, dovoljno je nekoliko mikrolitara za analizu, koji se obično uzimaju u Mikroepruveta tipa Eppendorf i poslata na proučavanje.

Bolesti i upotreba PCR-a

HIV i lančana reakcija polimeraze

Obično, kada se prođe anonimni pregled u slučaju pozitivnih rezultata imunoblotinga, dijagnoza se ponovo ponavlja. Ako se dijagnoza potvrdi, pacijentu se propisuju dodatne studije:

Određivanjem imunoloških reakcija apsolutnih vrijednosti broja CD 4 limfocita (imunokompetentnih stanica - T-pomagača ili pomagača) koje infekcija prije svega inficira, nakon čega gube osnovna svojstva i ne mogu razlikovati " sopstveni” i “strani”. Oni uzimaju RNK virusa koji cirkuliše u krvnoj plazmi za normalne ćelije tela i ne reaguju na njih;
Detekcija virusne RNK PCR-om i izračunavanje koncentracije virusnih čestica kako bi se utvrdio stadij, težina patološkog procesa i prognoza na osnovu ovih podataka. Naravno, riječ "norma" u tom smislu ne postoji, jer je reakcija uvijek pozitivna, a dekodiranje digitalnih vrijednosti je u nadležnosti doktora.

PCR i hepatitis

PCR metodom se mogu otkriti patogeni, najčešće se test koristi za dijagnosticiranje hepatitisa C, koji se drugim metodama slabo otkriva.

Virus hepatitisa C (koji sadrži RNK) po svom ponašanju u ljudskom tijelu podsjeća na HIV. Zaglavivši se u genom ćelija jetre (hepatocita), on ostaje tamo čekajući u krilima, što može doći najmanje 2 godine, najmanje 20 godina, pa su ga doktori prozvali "nježnim ubicom". Hepatitis C dovodi do stvaranja malignog procesa u parenhima jetre, koji se manifestuje u kasne faze. Svi ovi događaji imuni sistem ne primjećuje, zamijenivši virus za hepatocit. Istina, antitijela na virus se proizvode u određenim količinama, ali ne pružaju pristojan imunološki odgovor. Za dijagnosticiranje hepatitisa C, ELISA nije previše informativna, jer ukazuje da je virus ostavio tragove, a ne zna se da li se sam ostavio. Kod HCV-a su poznati slučajevi samoizlječenja, dok antitijela protiv virusa ostaju i nastavljaju cirkulirati doživotno (imunološka memorija). PCR je značajno ispred formiranja antitijela i može otkriti virusnu česticu već nakon 1-1,5 tjedana, dok se antitijela mogu pojaviti u rasponu od 2 mjeseca do šest mjeseci

PCR dijagnostika u slučaju sumnje na raširenost virusa hepatitisa C u ljudskom tijelu je najveća najbolja metoda istraživanja, jer samo ona može prepoznati prisustvo "nježnog neprijatelja" u pacijentovoj krvi ili biopsiji jetre.

Međutim, ponekad postoje slučajevi kada su antitijela pozitivna, a PCR rezultat negativan. Ovo se ponekad dešava kada je količina virusa vrlo mala ili kada miruje u jetri, a da se ne oslobađa u krvotok. Kako bi se ipak otkrila istina, pacijent se ponovo analizira, ili čak više od jedne.

Infekcija papiloma virusom

Ako ne dođe do samoizlječenja, može, a da se ne ispolji, dugo opstati u organizmu domaćina, koji ni ne sumnja, jer PCR nije urađen, a nije bilo ni simptoma bolesti. Međutim, prisutnost infekcije papiloma virusom, iako latentna, daleko je od toga da je indiferentna po ljudsko zdravlje, gdje određene vrste virusa uzrokuju onkološke bolesti(tipovi 16, 18).

Češće od HPV-a boluje ženska polovina populacije, jer virus više voli ženu genitalnom području, a posebno grlića materice, gdje neke vrste virusa doprinose nastanku displastičnih procesa, a potom i raka grlića materice, ako se displazija ne liječi i virus se oslobodi. Dakle, lančana reakcija polimeraze će otkriti virusnu DNK, a zatim ukazati na „loš“ ili „dobar“ (onkogeni ili neonkogeni) tip koji se nastanio u tijelu žene.

Druge SPI i TORCH infekcije

Očigledno, polimerazna lančana reakcija može pronaći bilo koju stranu strukturu koja se sastoji od nukleinskih kiselina, tako da je ovaj test pogodan za otkrivanje svih spolno prenosivih bolesti i TORCH infekcija, međutim, ne koristi se uvijek. Zašto, recimo, provoditi tako skupe studije za otkrivanje ili otkrivanje gonokoka, ako postoje pristupačniji i jeftiniji?

TORCH infekcije i spolno prenosive infekcije toliko su međusobno povezane da je ponekad teško odrediti u koju grupu bi se određeni patogen trebao svrstati. Općenito, može biti teško razumjeti ih, jer se radi o prilično raznolikim grupama mikroorganizama koji se mogu seksualno prenositi uvijek ili samo kada određenim uslovima(imunodeficijencija), a može biti od interesa samo tokom trudnoće, zbog mogućeg negativan uticaj na njenom toku i na fetusu.

PCR je glavna metoda za otkrivanje latentnih infekcija

Razvoj kliničkih manifestacija zasniva se na različitim uzročnicima, koji se mogu pronaći samo PCR-om, što je njegov glavni zadatak, ponekad zajedno sa ELISA-om, a ponekad kao jedini potvrdni test, posebno ako nema simptoma bolesti. Takve teška situacija može stvoriti polimikrobnu infekciju, koja, osim očiglednih patogena, uključuje i oportunističke patogene.

Ureaplazma se često viđa u tandemu sa mikoplazmom. I ovo nije slučajno. Ove vrste, poput klamidije, nisu ni virusi ni bakterije, žive u ćelijama i pripadaju spolno prenosivim infekcijama, iako je njihova prisutnost u zdravo telo takođe nije neuobičajeno. Dakle, da bi se razlikovao zdrav nosilac od bolesne osobe, potrebne su posebne metode, gdje se PCR smatra najpouzdanijim, jer su, zbog posebnosti strukture i ponašanja ovih mikroorganizama, druge studije neučinkovite.

Što se tiče (tip 1, 2) i, koji takođe spada u herpes viruse (tip 5), situacija je takođe dvosmislena. Stopa zaraze svjetske populacije približava se 100%, stoga je u ovom slučaju vrlo važna identifikacija virusa i njegova doza, što je posebno važno u trudnoći, jer za odraslu osobu virus koji se udomaćio u njegovom tijelo često ne izaziva nikakve probleme i ne daje znakove bolesti.

Stoga ne treba zanemariti ovakav pregled koji je propisao ljekar, jer je u nekim slučajevima obavezna polimerazna lančana reakcija i neophodna metoda laboratorijska dijagnostika koja može zaštititi od ozbiljne komplikacije ne samo žena, već i mali, još nerođeni, mali čovjek.

U zaključku, želio bih napomenuti da tako divna metoda kao što je PCR služi čovječanstvu više od 30 godina. Istovremeno, zadaci testa nisu ograničeni na potragu za uzročnicima zaraznih bolesti. Lančana reakcija polimeraze, rođena na tlu molekularne biologije, neraskidivo je povezana s genetikom, tj. uspješno se koristi u forenzici za ličnu identifikaciju, u sudskoj medicini radi utvrđivanja očinstva, u veterini, ako ambulanta za životinje ima mogućnost nabavke skupe opreme, kao i u drugim oblastima (industrija, Poljoprivreda itd.).

Video: PCR - suština i primjena

Sadržaj članka:

Vrlo informativna PCR metoda (lančana reakcija polimeraze) to omogućava rano otkrivanje razne genetske i zarazne bolesti, koje se javljaju akutno ili kronično. Štaviše, mogu se prepoznati čak iu fazi kada ne pokazuju nikakve simptome. Najčešće da PCR analiza koriste se za otkrivanje spolno prenosivih infekcija (STD, SPI).

PCR analiza se odnosi na molekularnu dijagnostičku metodu, koja se zasniva na višestrukom povećanju malih koncentracija određenih fragmenata nukleinske kiseline (DNK) patogena u bilo kojem biološkom materijalu (bris iz cerviksa, vagine, uretre, krvi, pljuvačke, sputum, itd.) i porediti njegovu DNK ili RNK sa bazom podataka poznate vrste infektivnih agenasa.

Tehniku je razvila Amerikanka Carrie Mullis 80-ih godina prošlog stoljeća. 1993. godine naučnik je postao laureat nobelova nagrada u oblasti hemije. Danas se PCR studija smatra svojevrsnim "zlatnim standardom" za dijagnosticiranje velike većine infekcija. PCR analiza se široko koristi u medicinskoj praksi za razjašnjavanje prirode bolesti i stadija tačna dijagnoza. Vrlo često postoje slučajevi kada sve poznate imunološke, virološke i bakteriološke metode ne djeluju. Tada PCR postaje jedini način, koji se može koristiti za identifikaciju aktivne faze bolesti.

Prednosti PCR dijagnostike u odnosu na druge metode

Pronađena PCR tehnika široka primena u modernoj medicini zbog niza neospornih prednosti. Razgovarajmo o njima detaljnije.

Sposobnost direktnog otkrivanja prisustva patogena

Mnogi od tradicionalnih dijagnostičke tehnike zasnivaju se na određivanju markera – proteina koji su otpadni produkti patogena. Takav dijagnostički princip može pružiti samo indirektnu potvrdu patologije. PCR metoda omogućava direktna definicija uzročnika, jer otkriva specifične dijelove DNK patogenih organizama.

Visoka specifičnost

PCR tehnika je vrlo specifična zbog činjenice da omogućava otkrivanje fragmenata DNK koji su karakteristični samo za određeni infektivni agens. Prilikom korištenja imunoloških metoda postoji mogućnost dobivanja lažnog rezultata (pogreške u dijagnozi su povezane s unakrsnom reakcijom antigena). Što se tiče PCR-a, greške su ovdje isključene, jer je specifičnost u ovom slučaju određena nukleotidnom sekvencom prajmera.

Visoka osjetljivost

Ovom metodom se utvrđuju čak i pojedinačni patogeni. Infektivni agensi se otkrivaju u ljudskom tijelu čak i kada druge dijagnostičke metode ne razjašnjavaju situaciju (riječ je o različitim imunološkim mikroskopskim i bakteriološkim metodama istraživanja).

Predstavljamo podatke radi poređenja. Osetljivost mikroskopskih i imunoloških metoda je 103-105 ćelija, a osetljivost PCR-a je 10-100 ćelija po uzorku.

Univerzalnost metode

PCR tehnika se zasniva na proučavanju DNK patogenih organizama. Tokom studije određuju se fragmenti RNK ili DNK koji su specifični za specifične infektivne agense. Pošto sve nukleinske kiseline imaju sličnu hemijski sastav, at laboratorijske analize mogu se primijeniti objedinjene metode. To znači da proučavanje jednog uzorka omogućava identifikaciju nekoliko patogena odjednom.

Brzi rezultati

Ova tehnika ne zahtijeva uzgoj kultura patogena, za što je potrebno dosta vremena. Zahvaljujući korištenju objedinjene tehnologije za obradu materijala i identifikacije produkta reakcije, kao i automatiziranog procesa amplifikacije, cijeli postupak istraživanja traje samo nekoliko sati.

Sposobnost otkrivanja latentnih infekcija

PCR tehnika omogućava efikasno obavljanje pretkliničke dijagnostike (otkrivanje patogena prije pojave simptoma) i retrospektivne dijagnostike (detekcija patogena nakon pojave simptoma). prošla bolest). Dakle, pretklinička dijagnoza ima veliki značaj prilikom pregleda pacijenta u periodu inkubacije moguća bolest- nakon navodne infekcije prije pojave prvih znakova.

Jedna od važnih prednosti PCR-a je mogućnost korištenja bioloških ostataka ili arhivskog materijala za analizu. Ovo omogućava identifikaciju očinstva i ličnosti.

Do danas se PCR dijagnostičke metode nastavljaju razvijati. Sama tehnologija analize se unapređuje, ali i nova vrste PCR. AT medicinska praksa uvode se inovativni test sistemi za ovu reakciju. Zahvaljujući ovome brz razvoj nauke, cijena procedure se smanjuje, a sada PCR pregled može se primijeniti na mnoge kategorije pacijenata.

Ova dijagnostička metoda zasniva se na višestrukom udvostručavanju datog dijela RNK ili DNK. Ovaj proces se provodi u laboratoriji pomoću posebnih enzima. Kao rezultat, formira se onoliko dijelova DNK (RNA) koliko je potrebno za vizualni pregled. U toku postupka kopira se samo površina koja odgovara navedenim uslovima (ako je prisutna u uzorku koji se proučava).

Biološki materijal koji treba ispitati na prisustvo DNK ili RNK patogena stavlja se u pojačalo. (U zavisnosti od konkretne situacije, na analizu se uzimaju krv, urin, pljuvačka, iscjedak iz genitalija). Uzorcima se zatim dodaju posebni enzimi. Vežu se za RNK ili DNK patogeni mikrobi, i počinje sinteza kopije. Kopiranje je višefazni proces koji se odvija kao lančana reakcija. Kao rezultat toga, mogu se pojaviti stotine ili čak hiljade kopija.

U sljedećoj fazi dijagnostike, rezultati se analiziraju i upoređuju sa bazom podataka infektivnih agenasa.

PCR tehnika ne samo da omogućava određivanje vrste patogeni organizam, ali nam također omogućava da izvučemo zaključke o broju infektivnih agenasa u ljudskom tijelu.
Danas se otvara upotreba ovakvih tehnologija široke mogućnosti u proučavanju mutacija, spajanje DNK sekcija. U modernoj medicini metoda se počela koristiti za utvrđivanje očinstva, identifikaciju novih gena i još mnogo toga.

Zbog svoje svestranosti, PCR metoda je našla široku primjenu u urologiji, ginekologiji, pulmologiji, onkologiji, hematologiji, ftiziologiji, infektologiji i drugim oblastima medicine.

Materijal za PCR analizu

Za PCR dijagnostiku koriste se različiti biološki mediji i tečnosti koje se uzimaju iz ljudskog organizma: sputum, sluz, pljuvačka, urin, krv, struganje epitelnih ćelija, tkiva placente, pleuralna tečnost, plodova voda, sok prostate itd.

Prilikom dijagnosticiranja spolno prenosivih bolesti (SPI) analiziraju se iscjedak iz muških i ženskih genitalnih organa. Da biste to učinili, napravite bris ili struganje iz uretre ili cerviksa. Urin se također koristi za istraživanje.

Za otkrivanje infekcija (herpes, mononukleoza, CMVI, toksoplazmoza, HIV, hepatitis B i C), uzima se krv na analizu. Ako se sumnja na oštećenje nervni sistem napraviti ogradu cerebrospinalnu tečnost.

Za pulmološke studije koriste se pleuralna tečnost i sputum.

Identificirati intrauterine infekcije Analiziraju se tkivo posteljice i amnionska tečnost.

PCR za SPI i druge infekcije

Koje infekcije se mogu otkriti PCR analizom

HIV infekcija (može se otkriti virus humane imunodeficijencije HIV-1).

Virusni hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNK-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV).

SPI (seksualno prenosive infekcije) - ureaplazmoza, gardnereloza, klamidija, mikoplazmoza, trihomonijaza.

Infektivna mononukleoza (DNK Epstein-Barr virusa - EBV).

Infekcija citomegalovirusom (DNK-CMV).

Herpes infekcija (DNK virus) herpes simplex HSV tipovi 1 i 2).

Tuberkuloza (mycobacterium tuberculosis).

Onkogeni virusi - infekcija papiloma virusom (humani papiloma virus (uključujući njegove onkogene vrste 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 i 59).

Borelioza, krpeljni encefalitis.

Listerioza.

Kandidijaza (gljivice iz roda Candida).

Helicobacter pylori infekcija
i drugi.

Priprema i predaja PCR analize

Pacijenti koji su predali materijal za PCR dijagnostiku očekuju brz i tačan rezultat. Pri tome se mora voditi računa važna tačka- pouzdanost dijagnostike ne zavisi samo od profesionalnosti specijalista i sposobnosti medicinskog laboratorija. Da bi studija bila informativna, mora se potruditi i sam pacijent. Dakle, potrebno je striktno pridržavati se svih preporuka liječnika i pažljivo slijediti pravila za pripremu za prikupljanje materijala. Vrlo je važno spriječiti kontaminaciju bioloških uzoraka, inače će rezultati ispitivanja biti iskrivljeni.

Priprema za PCR analizu

Priprema za postupak nije povezana s posebnim poteškoćama. Zapamtite samo nekoliko pravila:

Krv za PCR analizu se uzima na prazan želudac. Krv se obično uzima ujutro iz vene sterilnom iglom u posebnu posudu.

U toku dana prije uzorkovanja materijala pokazuje se seksualna apstinencija prilikom uzimanja PCR brisa na SPI.

Za analizu urina za PCR uzima se prva porcija, posuda mora biti sterilna.

Kako uzeti PCR analizu kod muškaraca i žena

PCR analiza se uzima od muškaraca i žena u soba za vakcinaciju, to je krv iz vene, pljuvačka, brisevi iz ždrijela, krajnika, brisevi iz nazofarinksa itd. Metoda prikupljanja se ne razlikuje.

PCR za SPI se predaje prenatalna ambulanta at ginekološki pregled kod žena su to brisevi iz vagine, grlića materice, uretre. Kod muškaraca, prilikom posjete andrologu ili venerologu, ovo je bris iz uretre.

Šeme za uzorkovanje materijala za PCR

Koliko dugo traje PCR

Pacijenti ne moraju dugo čekati na rezultate PCR pregleda. Cijela procedura analize obično traje od nekoliko sati (PCR u realnom vremenu) do 2-10 dana. Po pravilu, pacijent dobija rezultate analize za 2-5 dana, do maksimalno 10 dana, zavisi od vrste analize. Najduže je PCR dijagnostika krvi na HIV i hepatitis, a najkraće bris i struganje - 2-3 dana.

Negativan rezultat ukazuje na to ovog trenutka tragovi infektivnih agenasa nisu otkriveni u biološkom materijalu. Odnosno, infekcija za koju je obavljen pregled je odsutna.

Pozitivan rezultat ukazuje na otkrivanje tragova patogena u biološkim uzorcima. To znači da u dato vrijeme postoji infekcija u ljudskom tijelu.
Postoje slučajevi kada PCR daje pozitivan rezultat, ali aktivan infektivnog procesa nije vidljivo. Radi se o o fenomenu koji se zove "zdrava kočija". Liječenje takvih pacijenata nije potrebno, ali moraju biti pod stalnim dinamičkim nadzorom. Takve situacije su tipične za virusne infekcije: Epstein-Barr virus(EBV), genitalni herpes, infekcija citomegalovirusom (CMVI), humani papiloma virus (HPV), kod kojih se uzimaju uzorci za istraživanje iz lokalnih žarišta (struganje uretre, cervikalnog kanala, pljuvačke). Istovremeno, ne smijemo zaboraviti da zdrav nosilac može prenijeti infekciju na druge ljude. Osim toga, nije isključena aktivacija zaraznog procesa. U slučajevima kada PCR daje pozitivan rezultat na testu krvi, ovo se više ne može smatrati nosiocem. Takvi pacijenti trebaju specifičan tretman bolest uzrokovana otkrivenim patogenom.

Kvantitativni pokazatelji nemaju opšte gradacije. Ljekar ih procjenjuje pojedinačno za svaku specifičnu infekciju. Kvantitativni rezultat omogućava da se utvrdi koliko je infekcija aktivna i da se identificira faza procesa.

Pouzdanost PCR metode

Za procjenu efikasnosti metodologije postoje tri kriterija:

- Preciznost- otkrivanje infekcije (ili njenog odsustva) sa visokim stepenom verovatnoće.

- Specifičnost– tačnost određivanja specifičnog patogena.

- Osetljivost– mogućnost identifikacije patogena čak i sa malom količinom genetskog materijala u biološkim uzorcima.

Kada se koristi PCR metoda, dobivanje lažno pozitivnih rezultata je gotovo nemoguće (odnosno, ako je patogen odsutan, tada pozitivan test neću).

Lažno negativan rezultat je moguć, ali to se događa prilično rijetko. Slične situacije nastaju ako je infekcija neaktivna u vrijeme ispitivanja. Na primjer, hronična infekcija neaktivna ili latentna infekcija.

PCR analiza: video

Po prvi put se o PCR analizi raspravljalo 1983. godine. Ovu tehniku su razvili Cary Mullis i njegovo laboratorijsko osoblje. Od tada je popularnost studije stalno rasla, jer. Ima značajan broj prednosti u odnosu na druge metode.

Danas je PCR dijagnostika mjerilo ili standard za otkrivanje infekcija i patogena, posebno onih koji su asimptomatski. Prije svega, to je pretklinička dijagnostika.

Izvođenje analize u PCR mašini

Suština PCR analize leži u činjenici da se u epruveti kloniraju (višestruko uvećane) sekvence nukleinskih kiselina (DNK ili RNA) karakteristične za određene vrste patogeni.

Skraćenica PCR označava lančanu reakciju polimeraze.

Dom razlikovna karakteristika ove metode je amplifikacija, tj. stvaranje ogromnog broja kopija željenog gena ili fragmenta. Sve se to proizvodi izvan tijela, tj. in vitro.

Dakle, ako se provede 20 PCR ciklusa, onda se dobije približno 1 milion kopija ili više. To omogućava otkrivanje infekcije čak i sa njenom malom količinom u izvornom materijalu, kada su druge metode analize nemoćne. To određuje visoku osjetljivost ove metode.

Jednostavnim riječima, možete povući takvu analogiju - nećete primijetiti jedno malo zrno pijeska na podu, ali nakon povećanja broja zrna pijeska milion puta (PCR), gomila pijeska će već biti jasno vidljiva.

Glavne prednosti analize na infekcije PCR metodom su:

najveća osetljivost i specifičnost u poređenju sa drugim metodama koje se koriste za otkrivanje infektivnih agenasa;
sposobnost otkrivanja mikroorganizama u raznim biološkim materijalima (krv, urin, vaginalni sekret, pljuvačka, itd.);
sposobnost istovremenog identificiranja nekoliko uzročnika mikroorganizama, ako ih ima. Poređenja radi, upotreba bakterioloških metoda ne pruža takvu mogućnost, jer. potrebno je koristiti različite podloge za uzgoj različitih patogenih mikroba;
mogućnost transporta biološkog materijala, jer za identifikaciju patogena nije potrebno održavati ga živim;
brzina analize;
tačnost etiološke dijagnoze;
mogućnost kvantitativnog određivanja patogena – posebno relevantno za uslovno patogeni mikrobi, koji tek nakon postizanja određene koncentracije može izazvati bolest;
sposobnost kontrole toka infektivnog procesa tokom liječenja.

PCR analiza za infekcije

Trenutno, metoda lančane reakcije polimeraze određuje većinu seksualnih (i drugih) zaraznih bolesti. Dijagnostika je postala široko rasprostranjena zbog svoje visoka osjetljivost i specifičnost.

Posebno je popularna PCR analiza na klamidiju.

To je zbog činjenice da ovi mikroorganizmi žive intracelularno, što stvara određene poteškoće u njihovom otkrivanju.

PCR dijagnostika omogućava otkrivanje čak i minimalne količine klamidije, koje u pravilu još ne dovode do pojave kliničkih simptoma. Čak i prisustvo samo 2 molekula nukleinske kiseline u test materijalu omogućava identifikaciju uzročnika infekcije.

A ovo je zalog uspješno liječenje, koji počinje u pretkliničkoj fazi.

Infekcije su takođe identifikovane:

virusni hepatitis;
tuberkuloza;
krpeljni encefalitis;
razne venerične bolesti itd.

PCR dijagnostika omogućava rješavanje niza drugih važnih zadataka:

praćenje terapije i evaluacija njene efikasnosti;
određivanje "opterećenja virusima", na osnovu čega se vrši individualni odabir doze lijeka;
identifikacija sojeva mikroorganizama koji su farmakološki otporni (neosjetljivost na lijekove).

Priprema za dostavu analize

Nije potrebna namjerna priprema za isporuku analize, koju će obaviti PCR. Međutim, vrlo je važno da stručnjak uzme materijal u skladu sa svim neophodni uslovi sterilitet.

Tako, na primjer, treba koristiti posebne vakuum sisteme za vađenje krvi, posebne epruvete za uzimanje tajne genitalnih organa itd.

U nekim slučajevima, materijal se mora transportovati u laboratoriju. Da biste to učinili ispravno, potrebno je hermetički zatvoriti posudu biološki materijal. To će spriječiti prodor drugih mikroorganizama koji žive u vanjskom okruženju.

Rezultati PCR analize mogu biti na dvije opcije:

pozitivno - otkriven je patogen;
negativan - uzročnik nije otkriven.

Trebalo bi da znate - čak iu odsustvu kliničkih simptoma može se dobiti pozitivan rezultat.

U ovom slučaju, potrebno je fokusirati se na podatke polimerazna reakcija, jer omogućava identifikaciju bolesti u pretkliničkoj fazi.

Ponekad se može dobiti sumnjiv odgovor kada broj identificiranih kopija odgovara gornjoj granici norme. Da biste razjasnili uzrok bolesti, trebali biste ponoviti analizu, dajući Posebna pažnja uslovi za prikupljanje biološkog materijala.

Koliko je tačna PCR dijagnostika?

Glavne prednosti PCR dijagnostike mogu se formulirati u obliku nekoliko teza:

mogućnost dobivanja ogromnog broja kopija patogenih mikroorganizama;
veliki broj kopija je ključ uspješnog sekvenciranja (detekcije).

Ovo omogućava PCR analizu visoke preciznosti za detekciju intracelularnih patogena i spororastućih mikroorganizama.

Stoga je metoda posebno informativna za otkrivanje mikobakterije tuberkuloze i drugih sličnih infektivnih agenasa. Ima najveću tačnost i ne treba ponovo provjeravati dobijene rezultate (osim u kazuističkim slučajevima).

Da dobijete najviše pouzdani rezultati potrebno je ispuniti dva glavna uslova koji sprečavaju egzogenu (vanjsku) infekciju:

pravilan unos materijala;
ispravan transport.

Jedan od ultra preciznih modernih medicinska istraživanja Na osnovu proučavanja molekularno genetskih odnosa u krvnoj plazmi, je analiza PCR (PCR) - lančana reakcija polimeraze. PCR metoda vam omogućava da otkrijete određene bolesti u tijelu pacijenta uzrokovane infekcijama i virusima ili povezane s genetske bolesti naslijeđeno. PCR analiza pomaže u identifikaciji bolesti koje se javljaju u akutnoj i kroničnoj, asimptomatskoj fazi. Ovakva studija je vrlo važna za prevenciju razvoja bolesti: otkrivanjem bolesti na samom početku njenog razvoja, moguće je izliječiti bolest sve dok ne počne uništavati tijelo pacijenta ili minimizirati svoje posljedice.

Danas je PCR dijagnostika „zlatni standard“ u određivanju većine zaraznih bolesti. U svakoj klinici ili laboratoriju takva se studija provodi svakodnevno, njeni rezultati čine osnovu mnogih dijagnoza, a u nekim slučajevima upravo je dekodiranje podataka lančane reakcije polimeraze osnova za određivanje određene bolesti.

PCR metoda često pomaže ljekarima u slučajevima kada su druge studije i dijagnostika nemoćne, ili zbog rana faza razvoj bolesti ne može utvrditi prisutnost patogene mikroflore u tijelu pacijenta. Dijagnoza PCR metodom je više precizna analiza nego bilo koje druge metode vezane za proučavanje prisutnosti bakterija, virusa i imunoloških abnormalnosti u ljudskom tijelu.

Prednosti PCR metode uključuju visoku preciznost - u toku proučavanja dijela DNK ili RNK detektuje 100% ili ne otkriva patogenu mikrofloru koja može uzrokovati ozbiljna bolest. Ova metoda nema lažno pozitivne rezultate - ima visoku specifičnost, što omogućava identifikaciju specifičnog dijela lanca koji sadrži specifični uzročnik bolesti u strukturi DNK i RNK. Štaviše, PCR test je toliko osjetljiv da od milijardi ćelija može identificirati jednu zaraženu virusom i precizno identificirati virus i njegov patogen. U poređenju sa drugim poznatim studijama koje imaju osetljivost ne veću od 100-105 ćelija u uzorku uzetom tokom pregleda, PCR dijagnostika vam omogućava da pregledate od 10 do 1000 ćelija.

Ne ispituje se sam serum ili plazma, već deoksiribonukleinske ili ribonukleinske kiseline (DNK i RNA), odnosno genetski materijal onih bakterija i virusa koji su prisutni u tijelu pacijenta i mogu izazvati razvoj bolesti. Svaki virus ima svoj jedinstvena metoda njegovo otkrivanje, zbog čega su rezultati studije uvijek tačni.

U jednoj studiji može se otkriti jedan do nekoliko štetnih mikroorganizama.

Dijagnoza PCR-a, za razliku od drugih bakterioloških i imunoloških studija, obavlja se vrlo brzo. Ako je potrebno od jednog do deset dana da se provede manje od t, tada se PCR studija izvodi u roku od 5-7 sati.

Vrlo često se PCR bris izvodi kao pretklinička ili retrospektivna studija. Prva metoda je identifikacija potencijalno opasnih patogenih mikroorganizama koji su već započeli svoju destruktivnu aktivnost u tijelu, ali se bolesti još uvijek ne manifestiraju. Druga studija je otkrivanje virusa i infekcija nakon tretmana, kada, prema podacima standardne analize, pacijent se smatra zdravim, nema simptoma bolesti, ali neke stanice mogu još uvijek sadržavati opasne patogene. Ove jedinstvene dijagnostičke mogućnosti omogućavaju određivanje zarazne bolesti tokom perioda inkubacije, kada je tek ušao u ljudski organizam, ali nije bilo pogoršanja dobrobiti, kao ni tokom undercurrent bolest, ako se pacijent osjeća zdravim, ali je virus prisutan u tijelu, iako se ne osjeća.

PCR dijagnostika se koristi ne samo za identifikaciju virusa i bakterija, već i za identifikaciju osobe po fragmentima njene DNK, kao i za utvrđivanje krvnog srodstva (očinstvo, majčinstvo itd.).

Tokom proteklih decenija, PCR dijagnostika je, kao i druge grane medicine i nauke, daleko napredovala. Danas je poboljšana oprema koja se koristi u procesu istraživanja biomaterijala, pojavile su se nove vrste polimerazne lančane reakcije, novi testni sistemi koji smanjuju troškove analize i povećavaju njenu točnost. Zahvaljujući tome, PCR analiza je postala dostupnija široj populaciji, a broj ljudi kojima je ranom dijagnostikom bolesti PCR metodom spašen život porastao je više hiljada puta.

Šta je u osnovi ove studije

Šta dozvoljava ovu studiju biti tako tačan? To je amplifikacija, odnosno ponovljeno udvostručavanje dijela lanca deoksiribonukleinskih ili ribonukleinskih kiselina, za što se koriste posebni enzimi i oprema. Uvećanjem dijela DNK ili RNK za nekoliko stotina puta, postaje moguće vizualno ih proučavati.

Ali prije povećanja i proučavanja jednog ili drugog dijela lanca, struktura se podvrgava preliminarnoj studiji na prisutnost područja potencijalno zahvaćenih virusom. Kada se pronađu takve regije, one se podvrgavaju amplifikaciji.

Dijagnostika se provodi na sljedeći način. Prvo se od pacijenta uzima biološka tekućina prisutna u tijelu za analizu. To može biti krv, urin, pljuvačka, suze ili genitalna sluz. Sakupljeni biomaterijal se stavlja direktno u pojačalo, gde se uvode enzimski reagensi, dizajnirani da se direktno kombinuju sa DNK i RNK delovima virusa i infekcija. Čim se reagens i virus vežu, uređaj fiksira ovu oblast i počinje da pravi kopije ovog područja, povećavajući ga nekoliko puta. Takvo kopiranje se odvija kontinuirano, "duž lanca", što omogućava dobijanje nekoliko stotina, a ponekad i hiljada uzoraka za istraživanje.

Sljedeći korak je poređenje rezultirajućih dijagrama sa podacima o virusima i infekcijama dostupnim u bazi podataka. Dakle, oni se nalaze direktno patogenih mikroorganizama, utvrđuje se njihov broj i vrijeme prisustva u tijelu (koliko su davno ušli u tijelo).

PCR dijagnostika danas omogućava ne samo usporedbu otkrivenih virusa s već poznatim, već i identifikaciju mutacija, kao i sugeriranje do čega te mutacije mogu dovesti.

Naučnici - genetičari naširoko koriste metodu PCR istraživanja kako bi ukrštali pojedinačne dijelove DNK i proučavali nove tipove gena i mutacija.

Virusi i infekcije određene lančanom reakcijom polimeraze

Prilikom provođenja PCR-a možete pronaći mnoge bakterije i infekcije koje uzrokuju teške, a ponekad i čak neizlječive bolesti. Prije svega, to je virus ljudske imunodeficijencije, i to u latentnom ili inkubacijskom periodu, kada se njegove posljedice još nisu manifestirale. Ovo je veoma važno u slučajevima kada drugi testovi na HIV još nisu dali rezultate: u prvih šest meseci nakon moguće infekcije ili kod novorođenčadi rođene od HIV pozitivne majke.

Takođe, PCR istraživanje otkriva hepatitis svih oblika, mononukleozu zarazne prirode, citomegalovirusne infekcije, herpes, sve spolno prenosive infekcije (ureaplazma, klamidija, mikoplazma, trichomonas, gardnerella, itd.).

Utvrđuju se i uzročnici tuberkuloze, kao i infekcije koje pripadaju onkogenoj klasi, odnosno one koje kasnije mogu uzrokovati rast malignih tumora(humani papiloma virus). Na lakši, ali ne manje opasne infekcije utvrđene PCR studijama uključuju boreliozu, krpeljni encefalitis, gljivične infekcije(Candida) i Helicobacter pylori.

Svi ovi predstavnici patogene mikroflore mogu uzrokovati opasne bolesti in razni dijelovi tijelo pacijenta, te se stoga PCR tehnika koristi u gotovo svim industrijama moderne medicine. Uz njegovu pomoć, ginekološki i urološke bolesti, termin za PCR studiju može se zakazati kod infektologa, pulmologa i ftizijatra. Nije neuobičajena upotreba lančane reakcije polimeraze u oblasti gastroenterologije, hematologije, onkologije itd.

Kako prikupiti biomaterijal za dijagnostiku

Za dijagnostiku, pacijent će morati dati biomaterijal koji može sadržavati patogeni predstavnici mikroflora. Kao materijal pogodan za istraživanje, uzimaju se tekućine prisutne u određenom organu.

Dakle, virusi i infekcije, DNK i RNK, koje se mogu otkriti analizom, žive u krvi pacijenta, njegovom urinu i pljuvački, kao i sluzokože iz nosa, genitalija. U više rijetki slučajevi kada je potrebna dubinska dijagnoza nerođenog djeteta, uzima se tečnost za analizu amnionska vrećica ili placentnog tkiva. Za dijagnosticiranje virusa izaziva tuberkulozu, bit će potreban sputum, a za otkrivanje virusa koji je uzrokovao papilome (bradavice), struganje s epitela.

Ako je analiza usmjerena na dijagnosticiranje venerične infekcije prenosi se seksualnim kontaktom ili kućni način, doktor uzima bris ili struganje vaginalni iscjedak, sluz van uretra kod muškaraca i cervikalni kanal kod žena. Također, u nekim slučajevima mogu biti potrebni ne samo sluzni sekreti genitalnih organa, već i pacijentov urin.

Prilikom dijagnosticiranja herpesa, infektivne mononukleoze, svih vrsta hepatitisa i virusa humane imunodeficijencije bit će potreban krvni serum, kao dodatni biomaterijal može biti: pacijentov urin (sa infekcija citomegalovirusom), kao i bris grla.

Ako je zadatak polimerazne lančane reakcije da dijagnostikuje infekcije koje utiču na rad centralnog i perifernog nervnog sistema, za istraživanje se uzima tečnost kičmene moždine.

Kako se pripremiti za studij

Kako bi rezultati lančane reakcije polimeraze bili što precizniji, a dijagnoza ispravna i odražavala sliku bolesti, potrebno je pažljivo pripremiti se za isporuku biomaterijala na analizu.

Rezultati pregleda u većoj mjeri ovise o profesionalnosti laboratorijskog asistenta, opremljenosti i kvalifikacijama doktora koji dešifruje dobijene podatke. Ali mnogo ovisi o pacijentu koji je dobio termin za ovu dijagnozu.

Prvo pravilo koje se mora pridržavati prilikom predaje materijala je potpuna sterilnost i čistoća dobivenog biološka tečnost. Ako ništa ne zavisi od pacijenta tokom uzimanja krvi, likvora ili amnionske tečnosti, uzimanje urina, sputuma i razmaza treba pažljivo pripremiti. Ukoliko strani mikroorganizmi dođu u ispitni materijal, značajno će utjecati na konačne podatke analize i dovesti do izbora pogrešne taktike liječenja.

I to je ispunjeno ne samo prijemom nepotrebnog lijekovi, ali i pogoršanje rada drugih organa i sistema organizma.

Da bi se izbjegle takve posljedice, pacijent bi trebao izvršiti nekoliko jednostavna pravila koji će vam pomoći da pravilno položite testove.

Uzimanje uzoraka svih unutrašnjih tečnosti vrši se striktno na prazan želudac, dozvoljeno je piti samo čistu negaziranu vodu;
Prilikom uzimanja brisa sa genitalnih organa zabranjen je svaki seksualni kontakt 24 sata prije uzimanja biomaterijala;
Urin i sputum se predaju u posebne sterilne posude koje se izdaju u laboratoriji ili se za tu svrhu kupuju u ljekarni. Prije sakupljanja urina, potrebno je dobro oprati vanjske genitalije sapun za pranje rublja, ocijedite prvi dio urina, a srednji dio sakupite u posudu.

Takve jednostavna pravila obuka će vam pomoći da dobijete najpreciznije podatke istraživanja i počnete brže pravilan tretman. Obično su rezultati studije gotovi u roku od nekoliko sati, ali najčešće u laboratorijama rezultati se izdaju sljedeći dan nakon uzorkovanja biomaterijala. Pacijent u ruke dobiva laboratorijski obrazac koji sadrži lične podatke pacijenta i viruse koji se nalaze u njegovom tijelu.

Kompletan transkript dobijenih rezultata vrši lekar koji je izdao uputnicu za studiju, on takođe postavlja konačnu dijagnozu. Ponekad se, na osnovu rezultata dijagnoze, može preporučiti provođenje dodatni testovi te pregledi i konsultacije užih specijalista. Ali najčešće su rezultati lančane reakcije polimeraze osnova za konačnu dijagnozu.