Laboratorijska studija opće analize urina. Analiza urina: vrste i metode prikupljanja. B.3 Određivanje glukoze kemijskim metodama

Zavod za veterinarsku medicinu B.V. Usha, T.S. Elizarova, S.E. Zhavnis, G.M. Krjukovskaja

LABORATORIJSKA STUDIJA URINA

Klinička studija na životinji ne daje uvijek potpunu sliku o prirodi njezine bolesti. U mnogim slučajevima potrebno je sveobuhvatno kliničko i laboratorijsko ispitivanje izlučevina bolesne životinje, osobito urina. Daje se studija urina veliki značaj, jer u nekim slučajevima brže nego u krvi uspostavlja patološke promjene kod bolesti koje se razvijaju ne samo u bubrezima i mokraćnim putevima, već i kod bolesti želuca, gušterače i jetre.

Trenutno urodijagnostika zauzima jedno od vodećih mjesta u kliničkoj veterinarskoj medicini. Pravovremeni pregledi urina doprinose ranoj dijagnozi niza bolesti, kao i povećavaju učinkovitost tekućih terapijskih i preventivnih mjera. Sve ovo posebno je važno kada su u pitanju rasplodne i proizvodne životinje, kao i životinje koje se stavljaju u tov za potrebe mesne industrije,

Preporuča se pregledati urin svake bolesne životinje, jer može pokazati promjene karakteristične za patološko stanje, čak i ako nema izraženih kliničkih simptoma. Međutim, nije uvijek potrebno kompletna analiza urin. U mnogim slučajevima dovoljno je utvrditi postoje li odstupanja od norme u sastavu urina, au sedimentu - krvnim stanicama, epitelu, cilindrima. U svim slučajevima priroda i opseg istraživanja ovisi o indikacijama i tipičnim simptomima patološkog stanja tijela. Stoga bi se metode urodijagnostike trebale široko preporučivati ​​kako za svakodnevni klinički rad tako i za klinička ispitivanja životinja. Predloženi priručnik sistematizira metode laboratorijske analize urina koje se koriste u kliničkim dijagnostičkim laboratorijima, daje kratku interpretaciju rezultata kvalitativnih studija i daje kvantitativne kriterije za ocjenu rezultata.

METODE DOBIVANJA I ČUVANJA URINA

Točnost laboratorijska istraživanja uvelike ovisi o tome kako, kada se urin uzima i dostavlja u dijagnostički laboratorij. Potonji se moraju skupljati uredno, čisto, bez stranih nečistoća. Prije vađenja urina potrebno je obaviti toaletu vanjskih spolnih organa životinje.

Za normalne kliničke svrhe dovoljna je jedna porcija urina u količini od 100-200 ml. Bolje je ispitati koncentriranu jutarnju mokraću koju bolesne životinje izlučuju na prazan želudac, budući da se nakuplja noću, kada je životinja manje izložena vanjskim čimbenicima koji utječu na kvalitativni i kvantitativni sastav noći. Za neke bolesti potrebno je prikupljanje urina 6,12 sati, a ponekad i cijeli dan. Proučavanje dnevne količine urina omogućuje vam da dobijete cjelovitu sliku funkcionalnog stanja bubrega, budući da pojedini dijelovi urina tijekom dana imaju nejednak relativna gustoća, kiselost i kemijski sastav. Na primjer, u dnevnoj mokraći, blagu proteinuriju je teže otkriti jer se crvene krvne stanice i odljevci brzo otapaju.

Objektivna procjena promjena u urinu tijekom njegove analize uvelike ovisi o metodama dobivanja. Za istraživanje se urin životinja dobiva na sljedeće načine:

tijekom prirodnog čina mokrenja, urin se skuplja u čistu posudu sa širokim grlom;

masažom mjehura (u malih životinja prema van, u velikih životinja rektalno),

Proteinurija je ozbiljan proces, bez obzira na patologiju koju potvrđuje. Iznimno je važno da hitna dijagnostika mokraćnog mjehura provedeno je na način da se može propisati odgovarajuće liječenje i da se završi bubrežna funkcija nije izgubljeno.

Budući da proteinurija najčešće ne pokazuje patologije koje zahtijevaju hitnu medicinsku pomoć, uzroke koji ne predstavljaju prijetnju životu pacijenta i lako su reverzibilni farmakološkom intervencijom. To uključuje upalu mokraćnog sustava, toksične učinke razne tvari, hipertenzija ili dugotrajna vrućica.

izravno iz mjehura kateterizacijom. Kontraindikacija za uzimanje urina kateterom je gnojna upala uretru i prazan mokraćni mjehur. U bikova, ovnova i nerasta, zbog sigmoidne zakrivljenosti penisa, kateterizacija je otežana.

urin dnevno od velikih životinja prikuplja se pisoarima, od malih životinja - u posebnim stanicama.

Ako se liječnik mora suočiti s proteinurijom, mora što je prije moguće utvrditi uzrok. Protein u urinu može ukazivati ​​na patologije u urinarnom traktu, kao i na bolesti koje utječu na cijelo tijelo. Prvi se spominju karcinomi bubrega i hematopoetskog sustava. Proteinurija s vrlo karakterističnom analizom urina može ukazivati ​​na multipli mijelom, hiperplaziju koja napada hematopoetski sustav a u nedostatku adekvatnih terapijski tretman neizbježno vodi u smrt.

U kojim situacijama trebamo biti zabrinuti zbog postojeće proteinurije?

Druge bolesti povezane s proteinurijom mogu biti nedostaci enzima i sustavna stanja koja, ako se ne liječe, mogu jako otežati život pacijenta. Stres, pospanost, stres Kada je tijelo umorno ili izloženo dugotrajnom djelovanju čimbenika koji uzrokuju kronični osjećaj nesigurnosti, nervoze i stresa, bubrezi mogu odgovoriti povećanim gubitkom proteina. Slično, u slučaju intenzivnog fizički utjecaj izvan sposobnosti bolesnika ili dugotrajnog boravka u uspravnom položaju dolazi do tzv. ortostatske proteinurije. Neočekivani izdaci Vrlo često u uzorku urina, koji se daje na istraživanje, postoje i druge izlučevine iz tijela, koje se nalaze u mokraćnoj cijevi. Budući da laboratorijski analizator koji analizira urin gleda njegov sediment pod mikroskopom, može odrediti je li pronađeni protein fiziološka nečistoća ili dokaz razvoj patologije mokraćni sustav ili druge bolesti povezane s prisutnošću bjelančevina u mokraći. U žena, vrlo često, proteinurija može ukazivati ​​na prisutnost vaginalne sluzi ili proljeva, dok je u muškaraca proteinurija posljedica prisutnosti sperme u mokraći. Ove se situacije ne mogu uvijek izbjeći, ali održavanje odgovarajućih higijenskih mjera tijekom prikupljanja urina smanjuje rizik od nepotrebnog miješanja drugih tjelesnih tekućina u urinu. Belomikoza, koja nije patologija, također može nastati zbog izloženosti ekstremnim temperaturama na bubrege i njihovu okolinu. To su, primjerice, vrlo popularni nesteroidni protuupalni lijekovi, lijekovi za smanjenje krvni tlak ili neke antibiotike.

• To su normalni i normalna stanja koji ne zahtijevaju nikakav tretman.
• Toplinski učinci na bubrege.
• To se događa u slučaju pregrijavanja ili prekomjernog hlađenja.
• Lijekovi i proteinurija.
• Neki lijekovi također mogu izazvati predispoziciju za proteine ​​u mokraći.

Takva proteinurija također nije razlog za zabrinutost, ali bi trebala biti znak upozorenja da prekomjerna upotreba ti lijekovi mogu oštetiti bubrege.

Osim toga, kod krava i kobila mokrenje se može izazvati draženjem ušća mokraćne cijevi i masiranjem spolnih usana, perineuma, kod ovaca i koza - stezanjem nosnih otvora 20-30 sekundi. U bikova se mokrenje može ubrzati prilaganjem i držanjem prepucija na otvoru. 30-40 S štapić s vatom navlaženu toplom vodom. Kod konja se čin mokrenja može izazvati stvaranjem laganog šuma (sipanje zobi).

Treba imati na umu da što je kraći vremenski interval između uzimanja i pregleda urina, analiza je točnija. Najbolje je pregledati urin najkasnije 1,5 sat od trenutka uzimanja uzorka. Duljim stajanjem dolazi do promjene fizikalnih (potamni zbog oksidacije fenola) i kemijskih svojstava: pomaka pH mokraće na alkalnu stranu (kao bakterijska razgradnja uree do amonijaka); oksidacija bilirubina i urobilinogena; razmnožavanje bakterija, gljivica i njihova potrošnja glukoze; uništavanje elemenata sedimenta urina (leukociti, cilindri, taloženje kristala).

S niskom relativnom gustoćom urina (manje od 1,010), preporuča se provesti mikroskopiju odmah nakon sakupljanja, jer se leukociti i hijalinski cilindri brzo otapaju kada stoje. Ako brzi pregled urina nije moguć, može se pohraniti u zatvorenoj posudi u hladnjaku (+4°C), zamrznuti ili konzervirati. Zamrzavanje pospješuje proces propadanja stanica, ali zadržava većinu kemijskih spojeva (osim dušika, uree, antidiuretskog hormona i adrenalina). Urin se može konzervirati timolom (1-2 kristala na 200-250 ml urina), Vodena otopina kloroform (1-2 kapi, brzinom od 5,0-7,5 ml kloroforma na 1 litru vode), formaldehid (1-2 kapi 40% otopine na 25 ml urina), 1% borna kiselina (5-8 kapi na 200-250 ml urina). Kada se konzervira s antibiotikom, razrjeđuje se i dodaje urinu u količini od 50-100 tisuća jedinica. na 100 ml urina. Najčešće korišteni konzervans je toluen (pokrijte površinu urina racing slojem). Međutim, treba imati na umu da toluen utječe na kvantitativno određivanje ketona (acetona) zbog smanjene topljivosti acetona u toluenu. Kloroform otapa masti, krvne elemente i cilindre, što otežava određivanje šećera. Timol otežava određivanje proteina (s dušičnom i sulfasalicilnom kiselinom, Extonovim reagensom). Formaldehid onemogućuje većinu kemijskih istraživanja, ali dobro zadržava organski sediment. Urin namijenjen bakteriološkoj pretrazi ne podliježe konzerviranju. Urin se dostavlja u laboratorij zajedno s uputom, gdje je potrebno navesti: što ispitati i koji je konzervans korišten.

Radi lakšeg rada, najprije se određuju fizikalna svojstva urina, zatim se provodi njegovo kemijsko ispitivanje, a nakon toga mikroskopski pregled sedimenta. Dobiveni rezultati upisuju se u poseban obrazac (prilog).

ODREĐIVANJE FIZIČKIH SVOJSTAVA

Prilikom istraživanja fizička svojstva urin se određuje dnevnom količinom, bojom, prozirnošću, konzistencijom, mirisom i relativnom gustoćom. Treba istaknuti jednostavnost i dostupnost ovih istraživanja te veliku informativnu vrijednost rezultata za procjenu stanja životinja. Pokazatelji fizikalnih svojstava urina klinički zdravih životinja prikazani su u tablici 1. Sva ta svojstva izravno ovise o količini i sastavu hrane, vanjskoj temperaturi, unosu vode, tjelesnoj aktivnosti, funkciji znojnica, stanje srca, crijeva, sekretorna aktivnost bubrega.

Količina urina koju životinje dnevno izluče određuje se mjerenjem svakog pojedinog obroka graduiranom čašom ili cilindrom. Zbog činjenice da je teško prikupiti sav urin od životinja, u kliničko okruženje možete koristiti jednostavniju metodu koja zahtijeva manje vremena. Metoda se sastoji u tome da se broj mokrenja po danu izračuna i pomnoži s prosječnom količinom izlučenog urina pri jednom mokrenju.

U različitim fiziološkim i patološkim stanjima mogu se pojaviti različite promjene u separaciji urina. Poliurija je povećanje dnevne količine urina. Povezan je s povećanjem bubrežnog protoka krvi (prilikom hranjenja velikom količinom sočne hrane koja sadrži malu količinu bjelančevina, soli u hrani, davanjem diuretika, glukokortikoida, tijekom razdoblja oporavka nakon febrilnih stanja, živčanog uzbuđenja, resorpcije edem, eksudati, transudati, dijabetes, oštećenje parenhima bubrega, piometra). Kod poliurije konji mogu izlučiti 30-60 litara urina dnevno tijekom nekoliko dana. Oligurija- smanjenje dnevne količine urina (uz nedostatak vode za piće, jako znojenje, proljev, povraćanje, stvaranje edema, transudata i eksudata, bolesti bubrega i srca, začepljenje uretera, gubitak krvi, trovanje solima teški metali, sulfonamidi, aminoglikozidi). polakiurija(pollakisuria) - učestalo mokrenje, pri čemu se ukupna količina urina ne povećava (cistitis, prostatitis, vaginitis, urolitijaza). Oligakiurija(oligokisuria) - izlučivanje mokraće nakon duljeg vremenskog razdoblja. Anurija- potpuni prestanak izlučivanja urina (u slučaju poremećenog bubrežnog protoka krvi zbog dehidracije tijela, začepljenja urinarnog trakta, peritonitisa, trovanja solima teških metala). Išurija - zadržavanje mokraće kada bolesna životinja ne može isprazniti mjehur. enureza - nevoljno mokrenje (kronični cistitis, urolitijaza, lezije sakralne kralježnice, cerebeluma, anomalije predvorja vagine, kongenitalna hipoplazija mjehura i uretre, pretilost kastriranih životinja). nokturija- prevladavanje noćne diureze nad dnevnom (u starih bolesnih životinja s oštećenom funkcijom bubrega i srca). U zdravih životinja omjer dnevne i noćne diureze je 3:1. Dizurija- učestalo otežano bolno mokrenje (cistitis, uretritis, prostatitis, vaginitis, urolitijaza). stranguria - bolno mokrenje. Tenezmi- bolni nagoni.

boja urina ovisi o njegovoj relativnoj gustoći, stupnju zasićenosti, prisutnosti pigmenata (urokroma A i B, urokromagena, urobilinogena, koprofirina, uroeritrina, hematoporfirina, urorozeina i drugih), prirodi hrane. U zdravih životinja urin je svijetložut do svijetlosmeđe boje, s različitim nijansama (Tablica 1). Promjena boje može biti posljedica prisutnosti u mokraći krvi, hemoglobina, žučnih pigmenata, masti i tvari unesenih u tijelo u dijagnostičke ili terapeutske svrhe. Najbolje je odrediti boju u cilindru (debljina stupa ne više od 5 cm) na dnevnom svjetlu na bijeloj pozadini. Treba razlikovati boju urina:

žuta s nijansama: blijedo žuta, svijetlo žuta, tamno žuta;

crvena s nijansama: crveno-žuta, tamno crvena;

smeđa s nijansama: smeđe-crvena, tamno smeđa, crno-smeđa.

Blijedo žuta (ponekad bezbojna) mokraća niske specifične težine karakteristična je za poliuriju (dijabetes, nefroskleroza, ketoza, hiloproteinemija). Koncentrirani urin visoke specifične težine i tamnije nijanse - uobičajena pojava s oligurijom (jako znojenje, groznica). Bojanje urina s nijansama šafransko-žute, smeđe-žute ili smeđe-zelene ukazuje na prisutnost bolesti povezanih sa žuticom, kao i na povećanje procesa raspadanja proteina u crijevima. U potonjem slučaju, u mokraći se pojavljuje povećana količina indoksil sumporne kiseline, koja se može razgraditi u indigo. Žuta boja urina postaje uočljivija kada se protrese u cilindru, gdje se stvara mnogo svijetle pjene. žuta boja. Urin s nijansom žute boje promatra se s leptospirozom, encefalomijelitisom, trovanjem povezanim s oštećenjem jetre.

Nečistoće gnoja daju urinu sivo-bijelu boju, koja se javlja tijekom upalnih procesa u bilo kojem dijelu genitourinarnog sustava ili susjednih organa (cistitis, pijelonefritis, vaginitis). Mliječno bijela mokraća znak je lipurije (masne degeneracije i razgradnje bubrežnog tkiva) i hilurije (limfostaze bubrega). Urin u prvom slučaju sadrži ogromnu količinu masnih kapljica i masnih cilindara.

Urin crvene boje s različitim nijansama nastaje zbog primjesa krvi (s hematurijom), pigmenata topivih u njemu: hemoglobina i methemoglobina (s hemoglobinurijom) ili hrane (cikla).

Hematurija je simptom mnogih tjelesnih bolesti s disfunkcijom bubrega, bubrežne zdjelice, uretera, mokraćnog mjehura i uretra. Vizualno se može odrediti primjesa krvi u urinu ako je koncentracija crvenih krvnih stanica u njemu veća od 25 000 po 1 μl. Urin je u ovom slučaju crven, u sedimentu postoje krvni ugrušci, eritrociti, supernatant je razjašnjen. Ovo stanje se naziva gruba hematurija. Ako primjesa krvi ne uzrokuje bojenje urina, onda se govori o mikrohematuriji. Često se nalazi mikroskopijom sedimenta urina. Postoje tri oblika makroskopske hematurije: početna (početna), kada se krv oslobađa samo s prvim dijelom urina (s krvarenjem iz uretre), a ostatak urina je normalno obojen; terminal, kada se krv pojavljuje tek na kraju čina mokrenja (s krvarenjem iz mjehura); ukupno, kada je sav urin obojen krvlju. Hemoglobinurija nastaje: kao posljedica pojačane hemolize crvenih krvnih stanica u krvotokšto rezultira razvojem hemoglobinemije. S povećanjem bubrežnog praga za hemoglobin, počinje se izlučivati ​​urinom. S hemoglobinurijom, urin je proziran, sediment se sastoji od pigmentnih cilindara i granula hematoidina, boja urina se ne mijenja tijekom centrifugiranja i filtracije. Koristeći ove jednostavni testovi moguće je točno razlikovati hematuriju od hemoglobinurije, što je svakako od velike važnosti u praksi liječnika.

Boja urina također se mijenja uvođenjem različitih lijekova u tijelo:

crvena, crveno-smeđa boja - pri davanju antipirina, amidopirina, fenotiazina, sulfonamida, fenolftaleina, aloje (kod biljojeda), santonina (sa alkalna reakcija urin), karbolna kiselina, anilinske boje,

ružičasta boja - s uvođenjem acetilsalicilne kiseline, furosemida;

tamno smeđa ili crna - pri davanju salola, naftola, fenilicilata,

tamno do tamnozeleno - kod davanja fenola, katrana, krezola;

zelenkasto-žuta, žuto-smeđa, smeđa - pri davanju eozina, riboflavina, santonina (s kiselim reakcije urina), pikrinska kiselina, klorokin, rabarbara, list aleksandrije;

plava - pri davanju metilensko plavo, tripanblau, indigo karmin.

Treba imati na umu da urin iste boje može biti s različitim bolestima.

Bistrina urina određuje se u staklenom cilindru promjera 5 cm na dnevnom svjetlu prema stupnju čitljivosti tiskanog teksta. Pridržavajte se jedne od sljedećih definicija zamućenja:

slab, umjeren, velik;

proziran, neproziran, mutan;

potpun, nepotpun, nejasan, mutan.

Svježe ispuštena mokraća zdravih životinja je čista, bistra i bez taloga, osim mokraće papkara (Tablica 1). Mokraća konja je mutna, zbog prisutnosti kalcijevog karbonata, netopljivih fosfata, sluzi u njemu u suspendiranom stanju (s diferencijalna dijagnoza urin se bistri dodavanjem klorovodične kiseline). Stoga je otkrivanje svijetle, prozirne mokraće bez sedimenta kod konja pokazatelj prisutnosti patološkog procesa (s poliurijom, gastroenteritisom, upalom pluća, paralitičkom hemoglobinurijom, antraksom). mutna mokraća kod drugih životinjskih vrsta ukazuje na patologiju u mokraćnom sustavu, a pri pregledu sedimenta najčešće sadrži soli (mokraćnu kiselinu, fosfate i ugljičnu kiselinu), epitelne stanice, sluz, masne kapljice, oblikovani elementi krv. Razlikovanje uzroka zamućenja potrebno je kemijski i ovisi o količini i kakvoći hrane, funkciji bubrega, žlijezda znojnica, crijevnoj aktivnosti, srcu i dišnim organima (tablica I).

Miris urina svojstven za različite životinjske vrste i ovisi o koncentraciji hlapljivih tvari u njemu masne kiseline(Stol 1). Što je urin koncentriraniji, to je njegov karakterističan miris izraženiji. Vodenasti urin s poliurijom je gotovo potpuno bez mirisa. Odredite miris svježeg urina. Ako je miris neprimjetan, potrebno je protresti posudu s urinom ili blago topli dio urina.

Postoje sljedeći patološki mirisi urina: truli (gnojno-nekrotični procesi u mjehur), amonijak (fermentacija amonijaka u mjehuru, dugotrajno čuvanje uzorka na zraku), aceton (ketoza, puerperalna pareza, dijabetes melitus), voćni (ketoza, dijabetička koma, listerioza), sladak miris kloroforma (askaridoza). Miris urina ovisi o lijekovima koji se uzimaju oralno, a koji se izlučuju iz tijela zajedno s urinom. Mentol mokraći daje miris mente, terpentina i melema - miris ljubičice, kamfor, fenol, eterična ulja, valerijana zadržavaju svoj specifičan miris.

Konzistencija urina određuje se kapaljkom transfuzijom iz posude u posudu. Može biti tekuća, vodenasta, sluzava (sirupasta). Tekući urin se smatra kada su kapljice urina okrugle i brzo se otkidaju. Kapljica koja se rasteže ili rasteže u obliku niti karakterizira konzistenciju sluznice.

Stol 1.

Svojstva urina klinički zdravih životinja

(prema B.V. Usha, I.M. Belyakov, 2008, 2013)

U svih vrsta domaćih životinja, osim u papkara, mokraća je rijetka i vodenasta. U konja je mokraća sluzava, viskozna zbog primjesa mucina i nukleoalbumina. Gusta, sluzava, sirupasta mokraća kod drugih životinjskih vrsta je patološka pojava, koja ukazuje na upalu organa mokraćnog sustava.

Relativna gustoća urina (OPM) ovisi o mineralima koji su u njemu otopljeni. Kolebanje TMR-a u zdravih životinja ovisi o količini i kvaliteti hrane, radu bubrega, znojnih žlijezda, crijevnoj aktivnosti, srcu i dišnim organima (Tablica 1). Određivanje OPM u kliničkoj i laboratorijskoj praksi provodi se urometrom (hidrometrom), refraktometrom (Uricon-N), dijagnostičkim trakama (Miles, Boehringer Manheim, Lachem) ovisno o volumenu uzorka.

Urin se ulijeva u cilindar; spustite urometar tako da slobodno pluta u njemu. Očitavanje ljestvice uzima se na razini donjeg meniskusa (ako se stvorila pjena, uklanja se filtar papirom). Nakon rada urometri se operu vodom, dezinficiraju i osuše te pohranjuju u kartonske kutije. Postoje dvije vrste urometara - jednodnevni urin s manjom specifičnom težinom (1.000-1.025); drugi je za urin veće specifične težine (1,025-1,050). Trenutno postoje univerzalni urometri s podjelama ljestvice od 1.000 do 1.050. Očitanja urometra računaju se za temperaturu od 15-20 C. Ako je temperatura urina viša od temperature naznačene na urometru, tada se za svaka dodatna 3 o C četvrtoj znamenki očitanja urometra dodaje jedan, ako je manji, oduzima se. S proteinurijom i glukozurijom, OPM se povećava, stoga se vrši korekcija: za svakih 0,1 g / l (1%) šećera, OPM indeks se smanjuje za 0,004, a za svakih 0,3 g / l (3%) proteina - za 0,001.

Uz malu količinu urina, razrijedi se destiliranom vodom 2-3 puta, odredi se OPM i posljednje dvije znamenke pomnože sa stupnjem razrjeđenja. U prisutnosti nekoliko kapi urina, OPM se određuje metodom Tola, Sanforda i Wellsa. U cilindar se ulije mješavina jednakih dijelova kloroforma i benzena, te se spusti kap ispitivanog urina. Uranjanje kapi na dno pokazuje da je OPM veći od relativne gustoće smjese reagensa. Ako kap ostane na površini - spustite. Dodatkom kloroforma (ako kap ide prema dnu) ili benzena (ako je kap na površini) relativna gustoća smjese se podešava tako da se kap zaustavi u sredini tekućine. U ovom slučaju OPM je jednak relativnoj gustoći smjese koja se određuje urometrom.

OPM se može odrediti refraktometrijom, koja je prilično precizna, ali skupa. Njegova prednost je što zahtijeva samo 1-2 kapi urina. Za dobivanje točnih vrijednosti preporuča se pregledati uzorak urina na sobna temperatura i centrifugirajte ga kako biste uklonili sediment difrakcije svjetlosti suspendiran u njemu iz urina. OPM filtriranog uzorka ne razlikuje se za više od 1-2 jedinice u zadnjoj znamenki četveroznamenkastog broja.

Indikator OPM može se koristiti za određivanje funkcionalne sposobnosti bubrega. Prema Schleyeru, ako OPM fluktuira u širokom rasponu tijekom dvosatnog promatranja, onda to ukazuje na dobro funkcionalno stanje bubrega. Naprotiv, stalno nizak (izostenurija) ili visok PMR u svim mjerenjima unutar 2 sata ukazuje na ozbiljnu patologiju bubrega.

Da biste odredili količinu otopljenih čvrstih tvari u urinu, pomnožite posljednje dvije znamenke OPM indikatora s Long koeficijentom (2,66) ili Hascer (2,33), Primjer: dnevna količina urina -6 l, relativna gustoća - 1,025; 25x2,33=58,25 g čvrste tvari u 1 litru, au dnevnoj količini - 58,25x6 = 349,5 g.

Smanjenje OPM-a ukazuje na nedovoljnu sposobnost bubrega da koncentriraju urin i primjećuje se s poliurijom (acetonemija, nefritis, nefroskleroza, dijabetes insipidus). Povećanje OPM-a karakteristično je za dijabetes melitus, nefrozu, zarazne i febrilne bolesti, praćene oligurijom, proljevom, povraćanjem i znojenjem.

KEMIJSKA STUDIJA URINA

U kemijskoj studiji urina najčešće se ograničava na određivanje pH, proteina, glukoze, ketonskih tijela, krvnih pigmenata, indikana, žučnih kiselina i pigmenata. Vrijednost kemijske analize leži u činjenici da se njome mogu otkriti spojevi koji ulaze u mokraću tijekom određenih patoloških procesa. Sve ove kemijske studije treba uvijek procijeniti samo zajedno s drugim studijama iu odnosu na kliničke simptome bolesti. Treba imati na umu da se trenutno, s ciljem provođenja brze kemijske studije urina, izdaju posebni dijagnostički papirnati testovi koji vam omogućuju trenutno obavljanje polukvantitativne analize. Unatoč jednostavnosti analize, moguće su određene pogreške, stoga je u slučaju pozitivne ili sumnjive reakcije potrebno kvantificirati ovaj pokazatelj u urinu pomoću reagensa.

Reakcija urina kod životinja ovisi o njihovoj vrsti, hranidbi i funkcionalnom stanju organizma (Tablica 1). Mokraća biljojeda je alkalna, što je posljedica biljne hrane. Soli organskih kiselina ili baza, izgaraju u procesu izmjene na ugljični dioksid, glavni su izvor stvaranja alkalno-reaktivnih proizvoda. Urin mesoždera je kiseo, ovisi o nakupljanju kiselih spojeva kao rezultat oksidacije sumpora, fosfora, proteina hrane. Po prirodi kiselosti urina dijelimo na potencijalnu (titrirajuću) i pravu (aktivnu). Potencijalna kiselost ovisi o ukupnom sadržaju kiselina u mokraći, bez obzira na stupanj njihove disocijacije, odnosno sposobnosti davanja vodikovih iona u otopinu. Prava kiselost mokraće ovisi o koncentraciji vodikovih iona i posljedica je stupnja disocijacije kiselina u mokraći.

Koncentracija vodikovih iona označena je pH vrijednošću. Ovaj se pokazatelj određuje u svježem urinu, budući da se ugljični dioksid oslobađa stajanjem, a pH se pomiče na alkalnu stranu. Proučavanje reakcije urina provodi se pomoću tekućih indikatora prema Andreevu (indikator bromtimol plavo, pH raspon = 6,0-7,6) i prema Magarshaku (indikatorska mješavina otopina neutralnog crvenog i metilen plavog, pH raspon = 6,2-7,8). ), indikatorski papir ("Rifan" (Rusija), univerzalni "RKS" (Rusija), "Nonofan" (Češka), "Multistics" (Austrija), "Combur-test" (Njemačka), "Biofan-Z" ( Njemačka); raspon pH = 1,0-10,0). Više ako je potrebno točna definicija Pribjegava se pH urina metodama: elektrometrijskom (na pH metru), titracijom, kolorimetrijom (koristeći set indikatora i Michaelisov komparator).

Kiseli urin opaža se tijekom gladovanja, ketoze, kolitisa, upale pluća i drugih bolesti koje se javljaju s groznicom. Lužnata reakcija svježe izlučene mokraće mesojeda i svejeda ukazuje na propadanje tkiva mokraćnih organa zbog novotvorina i upale mokraćnog mjehura kao posljedice fermentacije mokraće (cistitis, pijelitis). Kod acidoze u mokraći može se povećati količina klorida, a smanjiti natrija i kalija, a kod alkaloze obrnuto. Stoga se informativnost određivanja pH urina povećava u kombinaciji s rezultatima drugih laboratorijskih i kliničkih pokazatelja, kao i usporedbom pH urina i krvi (Tablica 2).

Standardizirana tehnologija kliničke laboratorijske analize urina. Analiza urin Općenito.

Pravi standardizirani analitička tehnologija utvrđuje jedinstvene zahtjeve za provedbu opća analiza urina u kliničkim dijagnostičkim laboratorijima (CDL) zdravstvenih ustanova

1. Svrha studije

Tehnologija "Opća analiza urina" provodi se za dijagnosticiranje bolesti, tijekom preventivnih pregleda, za praćenje tijeka bolesti i učinkovitosti liječenja.

Proučavanje urina ima veliku dijagnostičku vrijednost ne samo u bolestima bubrega, već iu mnogim drugim organima i sustavima tijela.

Kompleks metoda za opću analizu urina uključuje:

Makroskopska procjena koja opisuje opća fizikalna svojstva;

Fizička mjerenja (volumen, relativna gustoća);

Kemijska istraživanja koja se provode pomoću dijagnostičkih test traka (kvalitativna i semikvantitativna analiza): određivanje pH, relativne gustoće, proteina, glukoze, ketonska tijela, bilirubin, urobilinogen, krv, leukociti, nitriti, askorbinska kiselina; ili kemijske metode potvrditi rezultate određivanja proteina, glukoze i drugih pokazatelja dobivenih test trakama.

Mikroskopski pregled sedimenta urina.

2. Zahtjevi za osiguranje provedbe tehnologije

2.1 Zahtjevi za stručnjake i pomoćno osoblje

Popis stručnjaka s višim i srednjim obrazovanjem uključenih u implementaciju ove tehnologije:

Glukoza,

ketonska tijela,

bilirubin,

urobilinogen,

Eritrociti/hemoglobin,

Nitriti

Leukociti (neutrofili).

Vitamin C

NAPOMENA 1 Ispitna zona askorbinske kiseline koristi se kao kontrolni parametar kako bi se uzeo u obzir rizik od dobivanja netočnih rezultata kao što su važni pokazatelji poput hemoglobina, glukoze, bilirubina, urobilinogena, relativne gustoće. U nedostatku zone za procjenu sadržaja askorbinske kiseline, potrebno je obratiti pozornost na popis lijekova koje uzima pacijent.

Za studiju se koristi svježe prikupljeni urin, koji je pohranjen najviše četiri sata prije analize. Ako se testiranje odgodi, urin treba čuvati u hladnjaku. Korištenje konzervansa je nepoželjno jer mogu inhibirati neke testove.

Prije studije, urin se temeljito (bez pjene) miješa.

Metodologija istraživanja: izvadite iz kutije potreban broj traka za analizu bez dodirivanja područja za testiranje rukama. Posudu treba brzo zatvoriti poklopcem kako bi se spriječio prodor vlage iz zraka.

NAPOMENA 2 U poklopcu ili unutar spremnika nalazi se sredstvo za sušenje koje apsorbira vlagu kada se spremnik otvori. To osigurava dugi vijek trajanja trakica čak i nakon otvaranja kućišta.

Nakon uklanjanja viška urina, traku treba držati vodoravno kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija s reagensima iz susjednih područja. Prilikom utvrđivanja rezultata pretrage urina na reflektirajućem fotometru, dijagnostička traka se nakon uklanjanja viška mokraće stavlja u poseban držač, transporter ili na mjesto očitavanja rezultata (ovisno o izvedbi uređaja). Analizator urina (reflektirajući fotometar) provodi polukvantitativno mjerenje parametara u standardnom načinu rada.

NAPOMENA 3 – Kada radite na nekim analizatorima, to nije potrebno preliminarno uklanjanje višak urina, jer se uklanja tijekom kretanja trake na transporteru do fotometra, u kojem se otkriva rezultat. Ponekad analizator ima zasebnu funkciju uklanjanja viška urina.

Nakon što se traka stavi u analizator, slijedi mjerenje i ispis rezultata. Bilježe se patološki nalazi posebne bilješke(zastave). U testnim trakama za ispitivanje urina na reflektirajućim fotometrima s polukvantitativnim određivanjem predviđene su takozvane kompenzacijske zone. Te su zone obično bijela boja, nije impregniran reagensima. Oni su svojevrsni "prazni uzorci", čije je postavljanje potrebno za instrumentalnu kompenzaciju bojenja reakcijskih zona nativnim urinom pri određivanju kemijskih komponenti.

U nekim slučajevima (hitna analiza urina u nedostatku fotometra, mjerenje parametara na pregledu liječnika opće prakse, u prisutnosti intenzivne boje urina koja mijenja boju pozadine), rezultati se mogu procijeniti vizualno nakon određenog vremena koje je navedeno u uputama. Za pouzdane rezultate potrebno je točno pridržavati vremena izlaganja. Nakon uranjanja trake u urin, boja ispitnih zona se uspoređuje s bojom odgovarajućih zona na skali boja na pernici i bilježi se rezultat.

Vremenski razmak između nanošenja urina na trakicu i trenutka očitavanja rezultata ključan je za točnost određivanja: prekratak interval može uzrokovati podcjenjivanje rezultata zbog nepotpune reakcije boje, a predug interval zbog nestabilnosti obojenog proizvoda.

Vizualna procjena rezultata prema ljestvicama boja otisnutim na posudama za čuvanje trakica može se izraziti u jedinicama koncentracije iu obliku polukvantitativne (ordinalne) ocjene rezultata: "negativno" (-), " sumnjivo” (+-), “pozitivno” (+, ++, +++ ili ++++).

Za potvrdu rezultata studija dobivenih pomoću dijagnostičkih test traka koriste se kemijske metode (Dodatak B).

3.6 Mikroskopski pregled urina

3.6.1. Zahtjevi za uzorak sedimenta urina za mikroskopsko ispitivanje.

Istraživanje se provodi u prvom jutarnjem dijelu urina, koji je najkoncentriraniji, što pridonosi povećanju broja sedimentnih elemenata, ili u slučajnom (randomiziranom) dijelu. Prije provođenja studije liječnik mora imati informacije o vremenu prikupljanja urina i rezultatima fizikalna i kemijska istraživanja. Uvjeti čuvanja uzorka urina moraju se strogo pridržavati. Pretragu sedimenta potrebno je obaviti unutar 4 sata nakon uzimanja urina, a kod kasnijeg pregleda uzorak urina treba čuvati u hladnjaku bez zamrzavanja. Većina konzervansa utječe na rezultate test traka i ne preporučuju se, ali timol se može koristiti ako je potrebno (nekoliko kristala po uzorku urina). Vakuumske cijevi koje sadrže stabilizator za stanični elementi, što ne utječe na rezultate test traka.

3.6.2. Vrste mikroskopskih istraživanja.

Mikroskopski pregled u općoj analizi urina provodi se u nativnom preparatu na stakalcima u zamračenom polju mikroskopa ili sa spuštenim kondenzorom. U prisutnosti stanica koje se teško diferenciraju, mogu se koristiti supravitalne boje (Sternheimerova boja, vidi odjeljak 4.5.1.).

Osim vizualnog mikroskopskog pregleda, koristi se studija uz pomoć automatskih i poluautomatskih analizatora.

3.6.3. Priprema sedimenta urina i priprema preparata za mikroskopski pregled:

Laboratorij mora odobriti postupak pripreme sedimenta mokraće i pripreme pripravka za mikroskopski pregled te postupak provođenja samog mikroskopskog pregleda sukladno normi. Svaki zaposlenik mora izvršiti sve korake analize na isti način i procijeniti mikroskopske elemente sedimenta koristeći iste kriterije za identifikaciju. Volumen urina koji se centrifugira treba odabrati u svakom laboratoriju i koristiti dosljedno, npr. 10 ml; ako će se u nekim slučajevima koristiti manji volumeni (npr. u pedijatriji, neonatologiji), to se navodi u zaključku.

Oko 10 ml jutarnjeg dijela urina stavlja se u epruvetu centrifuge nakon temeljitog miješanja. Kutna brzina centrifugiranja ovisi o polumjeru centrifuge. Kod uporabe centrifuge polumjera 17 - 18 cm (npr. OPN 1 i sl.) centrifugiranje se provodi pri kutnoj brzini od 1500 o/min tijekom 10 minuta. Kada se koristi centrifuga različitog radijusa, urin se centrifugira na 400 G također 10 minuta. Kutna brzina rotacije rotora u o/min izračunava se iz formule ili određuje iz Dole i Kotziasovog nomograma.

NAPOMENA: G je relativno centrifugalno ubrzanje, koje ovisi o polumjeru centrifuge. U uputama za moderne centrifuge navedeni su radijus i formula za pretvaranje centrifugalnog ubrzanja u kutnu brzinu. Predlaže se sljedeća formula za pretvorbu: o/min = [√(G/r x 1,118)] x 1000, gdje je: G - relativno centrifugalno ubrzanje, r - polumjer centrifuge u mm.

Neke centrifuge automatski pretvaraju centrifugalno ubrzanje u kutnu brzinu.

Zatim se brzim prevrtanjem epruvete drenira supernatant urina (supernatant) ostavljajući samo talog, nakon čega se 1 kap taloga (približno 40 μl) istom Pasteur-ovom pipetom prenese na predmetno stakalce i pokrije pokrovnim stakalcem. . Pokrivno stakalce treba potpuno prekriti sediment bez mjehurića. S viškom tekućine preparat postaje višeslojan što otežava mikroskopski pregled. S malim volumenom urina, na primjer, u dojenčad, centrifugirajte sav urin koji je ostao nakon analize na dijagnostičkim trakama, ocijedite supernatant i ostavite samo sediment.

Korištenje stakalca umjesto stakalca i pokrovnih stakala stvara standardiziranije okruženje za mikroskopiranje.

Standardizacija pripreme pripravaka sedimenta urina omogućuje dobivanje usporedivih rezultata mikroskopskog pregleda u različitim laboratorijima.

3.6.4 Mikroskopski pregled nativnog preparata sedimenta urina.

Proučavanje preparata počinje malim povećanjem (cca. x8 ili x10, vol. x10) za opći pregled, a detaljnije proučavanje preparata s kvantitativnom ocjenom elemenata organiziranog i neorganiziranog sedimenta provodi se na veliko povećanje (približno x8 ili x10, volumen x 40) . Ako se elementi sedimenta nalaze u svakom promatranom polju, tada se kvantitativna ocjena izražava njihovim brojem u vidnom polju, s mala količina elemenata, kada se ne nalaze u svakom vidnom polju, - brojem u preparatu (broj u preparatu se procjenjuje pri malom povećanju).

Razlikovati organizirani i neorganizirani sediment.

3.6.4.1. Organizirani sediment urina.

U organiziranom sedimentu mokraće razlikuju se stanice 3 vrste epitela (skvamozni, prijelazni i bubrežni), eritrociti, leukociti, cilindri, gljivice i bakterije. Tumorske stanice također su dio organiziranog sedimenta urina.

ravnog epitela. U muškaraca skvamozni epitel ulazi u mokraću samo iz donje trećine uretre, a u mokraći zdravi muškarci on se gotovo nikad ne javlja. U žena, pločasti epitel ulazi u mokraću iz uretre i rodnice, tako da je gotovo uvijek prisutan u ženskoj mokraći. Skvamozni epitel velike su poligonalne ili zaobljene stanice s malom jezgrom, neobojene i ne sadrže zrnca ili inkluzije. Djevojke do pubertet a kod žena u menopauzi, pločasti epitel koji je otpao sa stijenki rodnice je manji, njegova jezgra je veća, što ponekad dovodi do grešaka u mikroskopiranju. Skvamozni epitel nalazi se u obliku pojedinačnih stanica ili slojeva.

Napomena 1 - B urinarni sediment stanice se gotovo uvijek nalaze pločasti epitel od pojedinačnog u pripremi do pojedinačnog u vidnom polju. dijagnostička vrijednost stanice skvamoznog epitela nemaju.

prijelazni epitel. Prijelazne epitelne stanice ulaze u urin iz bubrežne zdjelice, uretera, mjehura, uretre. Epitelne stanice su 3-6 puta veće od leukocita i karakterizirane su izraženim polimorfizmom. NA različitih odjela prijelazni epitel mokraćnog sustava razlikuje se po veličini, obliku stanica, broju jezgri. Dakle, stanice prijelaznog epitela mjehura su velike zaobljene stanice koje sadrže od 1 do 3 ili više jezgri. Zajedničke značajke je bojenje citoplazme u žućkastu boju kao rezultat kontakta s pigmentima urina i prisutnosti fine granulacije. Moguća je pojava vakuola i kapljica masti u citoplazmi.

NAPOMENA 2. Kod zdrave osobe u preparatu se nalaze pojedinačne stanice. Uočava se povećanje sadržaja prijelaznog epitela upalne bolesti mokraćni put, prostate, s opijenošću razne etiologije. Nakon otkrivanja veliki broj prijelaznog epitela, nije potvrđeno dijagnozom, preporuča se provesti citološki pregled.

bubrežni epitel. Bubrežni epitel ulazi u mokraću iz tubula nefrona. Morfološki, predstavlja male stanice 1,5-2 puta veće od leukocita u promjeru, nepravilno zaobljene, četverokutnog ili ovalnog oblika s prilično velikom jezgrom. Budući da je epitel u dugom kontaktu s pigmentima mokraće, obojen je u različite nijanse žute boje. U stanicama bubrežnog epitela izraženi su elementi degeneracije koji se očituju grubom granularnošću (proteinska degeneracija), često prekrivajući jezgru, prisustvom vakuola ili masnih kapljica. Stanice bubrežnog epitela raspoređene su u skupine, lance ili komplekse. U urinu koji sadrži bilirubin, bubrežne epitelne stanice nabubre i izgledaju veće, okruglije i obojene bilirubinom.

Najčešće laboratorijske pogreške odnose se na identifikaciju bubrežnog epitela. Ako je teško razlikovati stanice sedimenta mokraće, preporuča se koristiti supravitalno bojenje, koje omogućuje diferencijaciju stanica sedimenta mokraće.

NAPOMENA 3 Bubrežni epitel nastaje kao posljedica oštećenja tubula kod bolesti bubrega, s različite vrste opijenost, uključujući lijekove i toksine, kao i nakon anestezije. Masna degeneracija bubrežnog epitela ukazuje na težinu lezije.

Leukociti. U urinu zdravih ljudi, leukociti se gotovo uvijek nalaze. To su male, okrugle, bezbojne ili sivkaste stanice, 1,5-2 puta veće od eritrocita. U pravilu, leukociti u urinu predstavljeni su segmentiranim nuklearnim neutrofilima (95%), rjeđe limfocitima ili eozinofilima. Otkrivanje visokog sadržaja leukocita na pozadini bakteriurije ukazuje na piuriju (gnoj u urinu). U preparatu se leukociti mogu nalaziti zasebno ili u obliku nakupina. Prisutnost klastera mora biti navedena na obrascu studije.

Napomena 4 - Broj leukocita ovisi o spolu i dobi: kod dječaka prije puberteta ne moraju se pojaviti, kod odraslih se u vidnom polju nalaze 0-3 leukocita.

Napomena 5 - Sadržaj leukocita u urinu povećava se s bolestima bubrega i mokraćnog sustava infektivne i upalne prirode.

NAPOMENA 6 U urinu niske relativne gustoće, leukociti mogu nabubriti, a u visoko alkalnom urinu mogu biti uništeni.

Eritrociti. Eritrociti su po obliku slični diskovima žućkasto-zelenkaste boje, sadrže hemoglobin (nepromijenjene crvene krvne stanice). Crvena krvna zrnca koja su izgubila hemoglobin imaju oblik prstenova (promijenjena crvena krvna zrnca). Eritrociti ulaze u mokraću iz bubrega, urinarnog trakta i spolnih organa. Bubrežno podrijetlo eritrocita potvrđuje prisutnost odljeva eritrocita.

Napomena 7 - U urinu zdravih osoba dopuštena je prisutnost pojedinačnih eritrocita u preparatu. Promijenjene crvene krvne stanice nalaze se u kiseloj mokraći. Podjela eritrocita na promijenjene i nepromijenjene nije od presudne važnosti za rješavanje pitanja izvora hematurije. U oštro alkalnom urinu, eritrociti su uništeni. S velikim brojem promijenjenih crvenih krvnih stanica u mokraći može se otkriti slobodni hemoglobin.

NAPOMENA 8. Oblik eritrocita ovisi o osmolalnosti urina. U urinu s niskom relativnom gustoćom, eritrociti se povećavaju u promjeru, u nekim slučajevima može doći do hemolize. u mokraći sa visoka gustoća eritrociti smanjuju veličinu, dobivaju zvjezdasti oblik.

Napomena 9—Eritrocite u urinu treba razlikovati od spora kvasca i okruglih i ovalnih kristala oksalata. Spore gljiva, za razliku od eritrocita, češće su ovalnog oblika, oštrije lome svjetlost, plavkaste su boje i pupaju. Ovoidni oksalati su obično, iako ne uvijek, promjenjive veličine i oštro lome svjetlost. Dodatak pripravku taloga kapi od 30% octena kiselina dovodi do hemolize eritrocita, ostavljajući gljive i kristale kalcijeva oksalata nepromijenjenima.

NAPOMENA 10 - Hematurija se može otkriti s lezijama bubrežnog parenhima, s teškim tjelesnim naporom, s lezijama urinarnog trakta, s bolest bubrežnih kamenaca, s neoplastičnim procesima, s dismetaboličkom nefropatijom i s predoziranjem antikoagulansima neizravnog djelovanja.

Cilindri. Cilindri su proteinski i stanični odljevci bubrežnih tubula. U srcu svakog cilindra nalazi se protein koji djeluje kao ljepljivi materijal. Protein u cilindrima predstavljen je hijalinskom masom, a tijekom stagnacije je voskast.

Postoje sljedeće vrste cilindara: hijalinski, granularni, voštani, epitelni, eritrocitni, pigmentni, leukocitni.

Napomena 11. Za formiranje cilindara potrebno je poštivati sljedeće uvjete: prisutnost proteina u primarnom urinu, kisela reakcija primarnog urina, kršenje odljeva ili stagnacije urina, kršenje opskrbe krvlju u tubulima. Cilindri se nalaze u kiseloj mokraći. Odljevci se otapaju u alkalnom urinu.

Hijalinski cilindri imaju nježne konture, prozirni su i teško vidljivi na jakom svjetlu. Na površini može biti blaga zrnatost zbog amorfne soli ili stanični otpad. Napravljen od presavijenog proteina.

Napomena 12 - Pojava hijalinskih odljeva ukazuje na razvoj proteinurije, povećanu propusnost glomerularnih kapilara. U urinu zdrave osobe u preparatu se mogu naći pojedinačni hijalinski cilindri.

Zrnasti cilindri imaju oštrije konture i sastoje se od guste zrnaste mase. žućkaste boje, nastaju tijekom razgradnje bubrežnih epitelnih stanica u stanju granularno-proteinske degeneracije.

Voštani cilindri imaju oštre konture, gustu krupnozrnastu strukturu, karakteristične pukotine i lomove, žutu ili blago žućkastu boju. Nastaju od zbijenih hijalinskih i zrnastih cilindara tijekom zadržavanja u tubulima. Prisutnost voštanih cilindara ukazuje na ozbiljno dugotrajno oštećenje bubrega.

Odljevci epitela imaju jasne neravne konture a sastoje se od stanica bubrežnog epitela, gusto raspoređenih na hijalinoj osnovi.

Pigmentirani odljevi mogu se naći u hemoglobinuriji i mioglobinuriji; smeđa boja, slični su zrnastima.

Eritrocitni cilindri žućkaste boje sastoje se od mase eritrocita, formiraju se s bubrežnom hematurijom.

Odljevi leukocita siva boja nastaju iz mase leukocita, nalaze se u gnojnim procesima u bubrezima.

Napomena 13 - Osim pravih cilindara formiranih od proteina i stanica, ponekad se u urinarnom sedimentu nalaze lažni cilindri - cilindrične tvorevine od amorfnih soli koje nemaju praktičnu važnost. Ove se tvorevine otapaju kada se lijek zagrije ili se lijeku doda kap 10% lužine u kiseli urin ili 30% octene kiseline u lužnat.

Napomena 14 - Cilindrurija je simptom oštećenja bubrežnog parenhima: hijalinski odljevi potvrđuju bubrežnu proteinuriju, a leukocitni i eritrocitni odljevi potvrđuju bubrežno podrijetlo leukociturije i hematurije.

3.6.4.2. Gljivične blastospore mogu se naći u sedimentu urina. rod Candida razlikovati od eritrocita. Za razliku od eritrocita, spore pupoljka gljive imaju plavičastu nijansu i oštrije lome svjetlost. Dodavanje kapi 30% octene kiseline lizira eritrocite, ostavljajući spore gljivice nepromijenjene.

3.6.4.3. Neorganizirani sediment urina.

Neorganizirani sediment mokraće su spojevi koji su se istaložili u obliku kristala ili amorfne mase. Priroda sedimenta ovisi o koloidnom stanju urina, pH vrijednosti i nekim drugim čimbenicima.

U kiseloj mokraći nalaze se: mokraćna kiselina, urati, kiseli urat, natrijev kalcijev sulfat, hipurična kiselina.

U kiselom, neutralnom i alkalnom urinu nalaze se: kiseli amonijev urat, kalcijev oksalat,

Amorfni fosfati nalaze se u neutralnom i alkalnom urinu.

Alkalni urin sadrži: kalcijev karbonat, magnezijev fosfat,

U blago kiseloj, neutralnoj i alkalnoj mokraći nalaze se: magnezijev amonijev fosfat, kalcijev fosfat.

Kristali aminokiselina i drugih spojeva koji se nalaze u patologiji:

Tirozin

Kolesterol,

bilirubin,

hemosiderin,

hematoidin,

Medicinski kristali.

3.6.5. Mikroskopski pregled sedimenta urina obojenog supravitalno.

Supravitalno bojenje se koristi kada je teško razlikovati stanične elemente i cilindre.

Za supravitalno bojenje koristi se Sternheimerova boja.

Dostupan je gotov set reagensa za bojenje sedimenta urina prema Sternheimeru, koji se sastoji od dvije boje. Radna otopina se priprema miješanjem dva jednaka dijela.

Napredak definicije. Centrifugirajte svježi jutarnji urin. Dodajte 1 kap reagensa u 0,5 ml taloga, promiješajte i inkubirajte 5 minuta. Zatim se kap obojanog taloga stavi na predmetno stakalce, pokrije pokrovnim stakalcem (ili napuni komoru ploče za predmetno stakalce) i ispita pod mikroskopom. Stanične jezgre se boje sa Plava boja, citoplazma - u ružičastoj, hijalinski cilindri - u plavoj, voštani - u svijetlo crvenoj, zrnati - u smeđoj boji.

3.7. Automatizirana analiza urina

Automatizirana analiza urina provodi se na uređajima za kemijsku analizu i mikroskopski pregled urina. Ovi uređaji mogu kvantitativno analizirati sediment urina.

Princip rada uređaja temelji se na tankoslojnoj protočnoj mikroskopiji, pregled obojenog urina vrši se video sustavom i brzim slikovnim procesorom. Sustav automatski klasificira pronađene elemente i osigurava visoku ponovljivost.

Druga vrsta instrumenata centrifugira uzorak u epruvetama posebno prilagođenim za promatranje pod mikroskopom. Postoje sustavi koji pojednostavljuju pripremu uzorka ili smanjuju potrebni volumen. Svi ovi uređaji koriste različite metodologije, ali svi sortiraju uzorke i pomažu smanjiti ručno rukovanje uzorcima urina.

Poluautomatski i potpuno automatski čitači traka s reagensom opisani su u 4.4.3.

4. Zapisivanje rezultata pretrage urina

Svaki zaposlenik laboratorija treba koristiti iste obrasce (obrasce rezultata ispitivanja) za evidentiranje rezultata. Obrazac mora sadržavati naziv laboratorija i medicinske organizacije; podaci o pacijentu dovoljni za njegovu identifikaciju; titula biološki materijal i svi proučavani pokazatelji; datum primitka uzorka i, ako je primjenjivo, vrijeme primitka; rezultati istraživanja; referentni intervali; ime i potpis djelatnika koji je izradio elaborat. Postupak izdavanja rezultata mora biti određen uputom koju je odobrio voditelj medicinska organizacija. Također se moraju evidentirati sva odbijanja pretrage urina (uz razlog odbijanja).

5 Osiguranje kvalitete izvedbe tehnologije analize urina

5.1 Programi osiguranja kvalitete

Programi osiguranja kvalitete uključuju dosljedno praćenje svakog aspekta postupka kako bi se osiguralo dostatno visoke mogućnosti dijagnostika i praćenje stanja bolesnika. Programi osiguranja kvalitete trebaju obuhvatiti sve faze rada i uspostaviti veze između svih komponenti procesa (pacijenta, laboratorija, kliničara). Provođenje kontrole kvalitete laboratorijskih istraživanja koja se sastoji od ispitivanja kontrolnih materijala (interna laboratorijska kontrola kvalitete i sudjelovanje u vanjskom ocjenjivanju) samo je jedan od vidova osiguranja kvalitete. Kontrola je također neophodna u fazama prikupljanja uzoraka, skladištenja, dostave, ručne obrade, registracije i izdavanja dokumenata. Također treba kontrolirati tehničku osposobljenost osoblja, kontinuirani nastavak obrazovanja. Za uspješnu provedbu svih kontrolnih aktivnosti potrebno je pridržavati se pravila navedenih u normi GOST R ISO 15189-2006 "Medicinski laboratoriji - posebni zahtjevi za kvalitetu i osposobljenost". U skladu sa zahtjevima ove norme, laboratorij izrađuje “Priručnik kvalitete” koji treba odražavati sve aktivnosti osiguranja kvalitete.

5.2 Vođenje evidencije kontrolnih aktivnosti

Registracija kontrole treba se provoditi na svim razinama: predanalitičkoj, analitičkoj i postanalitičkoj, za svaku fazu treba razviti i dokumentirati pravila za provođenje svih postupaka.

Za kliničke odjele treba izraditi obrazac zahtjeva za ispitivanje, uključujući datum zakazivanja i uzimanja uzorka, podatke o identifikaciji pacijenta, dijagnozu, podatke o lijekovima ili dijagnostičke procedure ako mogu utjecati na rezultate studije.

Za medicinsko osoblje koje uzima materijal treba izraditi uputu koja sadrži uvjete za pripremu pacijenta i postupak uzimanja biomaterijala. Upute trebaju sadržavati pravila za dostavu uzoraka, uključujući uvjete i rokove čuvanja uzoraka i pravila za siguran transport. Za pacijente koji sami prikupljaju materijal sastavljaju se memorandumi.

Za laboratorijsko osoblje treba definirati kriterije za prihvaćanje i odbijanje prihvaćanja uzoraka (točka 5.3.), zahtjeve za registraciju uzorka, obradu, označavanje i skladištenje uzoraka prije analize. Analitička faza provodi se u skladu s metodama istraživanja (vidi točku 8.3.). U postanalitičkoj fazi potrebno je razviti pravila za ocjenu prihvatljivosti rezultata analize, koja bi trebala uključivati ​​analitičku pouzdanost prema podacima unutarlaboratorijske kontrole kvalitete, procjenu moguće interferencije lijekova, usporedbu rezultata s referentnim intervalom, verifikaciju. točnosti registracije. Obrazac za izdavanje nalaza mora biti odobren od strane ustanove i dogovoren s odjelima za liječenje.

Registracija također mora obuhvatiti kontrolne materijale i ocjenu performansi instrumenata. Potrebno je u svakom laboratoriju imati izrađene i tiskane upute za otkrivanje i ispravljanje pogrešaka, rezultata koji izlaze izvan kontrolnih granica.

Evidentiranje traka s reagensima u dnevnik ili računalo mora biti dostupno na radnom mjestu i mora uključivati:

Broj kompleta traka s reagensima i datum isteka;

Datum otvaranja spremnika s trakama (ovaj podatak također treba biti zabilježen na spremniku);

Svi rezultati kontrole pacijenata i kvalitete:

Datum i vrijeme uzimanja uzorka i prijema u laboratorij:

Identifikacijski podaci zaposlenika koji izvodi studiju.

5.3 Upute za korištene laboratorijske postupke

Metodologija izvođenja laboratorijskih pretraga treba biti dokumentirana i dostupna na radnom mjestu. Postupak se treba temeljiti na uputama za korištenu opremu i/ili komplete reagensa, smjernice ili druge dokumente odobrene u u dogledno vrijeme. Opis postupka treba sadržavati: načelo metode, korištene reagense i instrumente, tijek istraživanja, analitičke karakteristike metode i postupke umjeravanja. Osim toga, opis mora sadržavati sljedeće podatke:

Postupak prikupljanja i prijevoza uzorka;

kriteriji za prihvaćanje ili odbijanje uzoraka urina (uzimajući u obzir duljinu vremena čuvanja uzorka nakon uzimanja, korištenje konzervansa, dovoljno urin za istraživanje, itd.);

Informacije o kontrolnim materijalima; metodologija kontrole kvalitete;

Referentni intervali;

Potvrdna studija;

Način registracije rezultata;

Mjere opreza vezane uz biološku opasnost ispitivanog materijala.

Uzroci lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata.

5.4 Kontrola kvalitete materijala i opreme

Kontrola kvalitete materijala i opreme uključuje:

Pravilno skladištenje reagensa i dijagnostičkih traka,

Usklađenost s rokom valjanosti reagensa i dijagnostičkih test traka, što sprječava korištenje pokvarenih ili isteklih reagensa i važna je komponenta osiguranja kvalitete;

Dostupnost uputa za rad uređaja na radnom mjestu;

Dostupnost dnevnika registracije servisnog održavanja i popravka opreme.

5.5 Intralaboratorijska kontrola kvalitete analize urina

Postoje dvije glavne vrste kontrole kvalitete laboratorijskih istraživanja: unutarlaboratorijska kontrola i vanjska procjena kvalitete.

Intralaboratorijska kontrola je sustav dnevnog praćenja točnosti rezultata dobivenih u laboratoriju.

5.5.1.Kontrola kvalitete kemijskih studija urina.

Za kemijsku analizu pomoću dijagnostičkih test traka potrebno je kontrolirati sve komponente trake na dvije razne razine kako bi se osigurala pouzdanost rezultata. Intralaboratorijska kontrola kvalitete provodi se uzorcima urina zdravih ljudi, normalnim i patološkim uzorcima urina pacijenata. Tamo gdje su dostupni komercijalni višekomponentni kontrolni materijali, unutarlaboratorijska kontrola kvalitete provodi se pomoću njih.

Prilikom otvaranja potrebno je izvršiti kontrolu kvalitete novo pakiranje s dijagnostičkim trakama. Prilikom mijenjanja test traka pažljivo proučite upute proizvođača jer se metode mogu razlikovati od osobe do osobe. različitih proizvođača, što može utjecati na vrijeme razvoja reakcije boje i tumačenje rezultata. Trake različitih proizvođača ne smiju se miješati. Preporuča se paralelno testiranje sa starim i novim serijama trakica na kontrolnim materijalima ili uzorcima urina pacijenta.

Napomena - Trake različitih proizvođača koriste se samo za vizualnu procjenu rezultata. Kod rada na analizatorima mokraće potrebno je raditi na trakama određenog proizvođača ili trake prilagođene ovom analizatoru.

Ako se rezultati test trakica razlikuju od očekivanih vrijednosti, potrebni su potvrdni testovi koji otkrivaju iste tvari s većom osjetljivošću ili specifičnošću, ali koriste različite reakcije, budući da ponovljene reakcije dijagnostičkim trakicama nisu potvrdni test. Na primjer, kod određivanja proteina koristi se potvrdni test s pirogalol crvenilom ili sulfosalicilnom kiselinom (Dodatak B)

5.5.2. Kontrola kvalitete mikroskopskih pretraga.

Kontrolu kvalitete mikroskopskih pretraga potrebno je provoditi svaki dan pregleda. Za kontrolu ponovljivosti može se koristiti studija paralelnih uzoraka urina (duplikata), koja se preporučuje za identifikaciju cilindara, bubrežnog epitela i drugih uniformnih elemenata.

5.6 Vanjska procjena kvalitete

Vanjska procjena kvalitete nužna je za procjenu ispravnosti laboratorijskih rezultata i usporedivosti rezultata dobivenih u različitim laboratorijima. Svaki laboratorij mora nužno sudjelovati u vanjskoj procjeni kvalitete. Posebne organizacije ovlaštene za međulaboratorijsku ocjenu kvalitete laboratorijskih istraživanja, uključujući i opću analizu urina, povremeno (više puta godišnje) raspoređuju kontrolne uzorke između laboratorija s utvrđenim sadržajem kemijskih komponenti za kontrolu ispravnosti ili mikrofotografije pripravaka nativnog sedimenta urina. Rezultati dobiveni od strane laboratorija se bilježe, a zaključci se šalju laboratorijima koji su sudjelovali radi usporedne procjene ispravnosti studije. U slučaju nezadovoljavajuće ocjene rezultata, laboratorij mora poduzeti odgovarajuće mjere za ispravljanje svojih pogrešaka.

5.7 Kontinuirana edukacija specijalista

Kako bi se osigurala kvaliteta analize, kvalifikacije osoblja trebale bi odgovarati složenosti studije koja se provodi. Svo laboratorijsko osoblje treba povremeno (jednom svakih pet godina) proći obuku o ciklusima usavršavanja koje provode medicinski obrazovne ustanove uz odgovarajuću licencu. Svaki stručnjak mora se baviti samoobrazovanjem. Laboratorij bi trebao imati dostupnu najnoviju literaturu za korištenje, uključujući periodika na laboratorijskoj dijagnostici i atlasima. Laboratorijski stručnjaci trebaju sudjelovati na konferencijama i seminarima.

Potpuni mikroskopski pregled treba provoditi samo posebno obučeno osoblje, u nedostatku takvih stručnjaka, laboratorij može koristiti dijagnostičke test trake za dobivanje polukvantitativnih informacija o hematuriji, piuriji i bakteriuriji.

6. Zahtjevi za način rada i odmora, dijeta i ograničenja u pripremi pacijenta za prikupljanje urina za analizu urina

Na rezultate analize urina, koja uključuje određivanje niza kemijskih analita, mogu utjecati različiti čimbenici: tjelesna aktivnost, lijekovi itd., stoga uvjete pripreme bolesnika za uzimanje uzorka urina treba standardizirati i opisati. detaljno u odgovarajućim uputama za pacijenta.

Pogledajte Dodatak A.

7. Troškovi rada za provedbu tehnologije kliničke laboratorijske analize urina

Tablica 1 ─ Troškovi rada u UET-u za implementaciju kompleksa liječnička služba"Opća analiza urina"

DODATAK A

Prikupljanje uzoraka urina, uvjeti skladištenja i isporuke (predanalitička faza)

A.1 Uvod

Predanalitička faza se provodi u medicinskom odjelu, a nakon dostave biomaterijala u laboratorij, u samom laboratoriju. Kliničari pripremaju prijave za istraživanje. U prijavi je potrebno navesti puno ime i prezime pacijenta, spol, dob ili godinu rođenja, način uzimanja biomaterijala (npr. uzimanje urina kateterom), vrijeme uzimanja urina, dio uzorka urina (jutarnji, nasumični). ), moraju se navesti konzervansi (ako se koriste). klinička dijagnoza, barem na razini dijagnostičke pretpostavke i utjecaja na analizu lijekovi. Odsutnost u redoslijedu dijagnoze ili lijekova koje pacijent uzima, a koji utječu na rezultate, može dovesti do netočne interpretacije rezultata i pogreške u dijagnozi. Medicinsko osoblje odjela odgovorno je za pripremu bolesnika, ispravna zbirka materijala sam bolesnik (po potrebi materijal se uzima kateterom), čuvanje uzorka na točno određeno vrijeme nakon uzimanja i dostavljanje uzorka urina u laboratorij. Laboratorij treba osigurati pisane upute za medicinsko osoblje kliničkih odjela o prikupljanju, čuvanju i transportu uzoraka urina.

NA ambulantne postavke pacijent sam prikuplja urin kod kuće bez nadzora medicinskog osoblja, stoga u svakom laboratoriju treba sastaviti posebne upute (dopise) za pacijente, kojih se pacijent mora strogo pridržavati kako bi osigurao jedinstvene uvjete za prikupljanje materijala. Preporuča se dati pacijentu poseban spremnik za uzimanje uzorka.

Nastavak predanalitičke faze u laboratoriju sastoji se od primanja i registracije ulaznog biomaterijala, pohranjivanja, ako je potrebno, do studije, obrade i pripreme za studiju.

A.2 Priprema pacijenta

Priprema bolesnika za prikupljanje urina treba biti standardizirana, za što je potrebno uzeti u obzir: vrijeme jela; trajanje odmora, položaj tijela, kao i tjelesna aktivnost prije uzimanja (prevencija ortostatskih i sl tjelesna aktivnost proteinurija); za neke pokazatelje - dnevni bioritmovi; utjecaj lijekova i toksičnih čimbenika. Prikupljanje urina za opću analizu provodi se na uobičajeni način režim prehrane, natašte.

Treba ukinuti lijekove koji ometaju određivanje određenih komponenti (vidi Dodatak B); ako to nije moguće, uzimanje ovih lijekova navodi se u prijavi za istraživanje.

A.3 Vrste uzoraka urina:

Slučajni (randomizirani) uzorak;

Prvi jutarnji uzorak;

Uzorak dnevnog urina (za vrijeme jednako 24 sata);

Uzorak primljen u različito vrijeme (na primjer, 10-12 sati, 2-3 sata).
Za analizu urina obično se koristi jutarnji ili slučajni uzorak.

A.4 Prikupljanje uzoraka urina za tehnologiju analize urina

A.4.1 Nasumično prikupljanje uzorak urina

Nasumični uzorak može se prikupiti u bilo koje neodređeno vrijeme (koristi se, na primjer, za kemijska istraživanja pomoću dijagnostičkih test traka). Za analizu urina najčešće se uzimaju nasumični uzorci dojenčadi, budući da nije moguće uzeti uzorak u dužem ili strogo određenom vremenskom razdoblju, kao i hitnih bolesnika.

A.4.2 Uzimanje jutarnjeg uzorka urina

Za opću analizu obično se prikuplja jutarnji dio urina.

Prikupiti prosječnu količinu urina na prazan želudac odmah nakon spavanja (poželjno je da prethodno mokrenje nije bilo kasnije od 2 sata ujutro) u suhu, čistu, ali ne sterilnu posudu, sa slobodnim mokrenjem. Prije skupljanja urina provodi se temeljita toaleta vanjskih spolnih organa. Pacijenti vezani za krevet prethodno se operu otopinom slabog antiseptika, zatim se perineum obriše u smjeru od genitalija do anus. Prilikom prikupljanja urina od ležećih bolesnika, potrebno je osigurati da se posuda nalazi iznad perineuma kako bi se izbjegla kontaminacija iz anusa.

NAPOMENA 1 Kateter ili punkcija mokraćnog mjehura smije se koristiti samo u ekstremni slučajevi- u novorođenčadi, dojenčadi, bolesnika s bolestima prostate, neuroloških bolesnika koji ne kontroliraju mokrenje, ponekad - za mikrobiološka istraživanja. Nemoguće je uzeti urin za istraživanje iz dugotrajnog katetera!

Napomena 2 ─ Prilikom prikupljanja urina za pregled u dojenčadi i male djece koriste se posebne vrećice s hipoalergenim ljepilom za kožu, zbog čega vrećica za prikupljanje urina čvrsto prianja uz kožu, spremnik se provjerava svakih 15 minuta, prikupljeni uzorak se izlijeva u u posudu za skupljanje urina, označiti i transportirati.

Ako je moguće, urin treba odmah sakupiti u posude u kojima će biti dostavljen u laboratorij. Preporučljivo je koristiti posudu sa širokim grlom (promjer grla posude najmanje 4 cm) zapremine 100 ml s poklopcem. Posuda mora imati široka baza kako biste izbjegli slučajno prskanje. Nemoguće je uzeti urin iz posude, patke, lonca, jer čak i nakon ispiranja ovih posuda na stijenkama može ostati talog fosfata koji pridonosi razgradnji svježeg urina.

Napomena 3 ─ Ako nije sav prikupljeni urin dostavljen u laboratorij (npr. ako je količina urina veća od 100 ml), tada se mora sakupiti u suhu, čistu posudu i pretočiti u posudu u kojoj će se dostaviti u laboratorij, temeljito promiješati prije odvajanja dijela tako da se formirani elementi i kristali ravnomjerno rasporede po volumenu.

Trenutno se proizvode posebne jednokratne posude za skupljanje urina od 100 ml od nelomljivog materijala (plastike) koji je inertan u odnosu na sastavni dijelovi urin, graduiran, s poklopcem koji čvrsto prianja. Posuda i poklopac ne smiju sadržavati tvari koje ometaju kemijska definicija. Takvi spremnici mogu biti dio vakuumskog sustava za prikupljanje urina (ako je potrebno za održavanje sterilnosti u prikupljanju urina). Spremnik mora biti odgovarajuće označen, a nakon uzimanja na posudu se lijepi naljepnica koja mora sadržavati sve potrebne podatke o bolesniku ( puno ime, identifikacijski broj, datum i vrijeme uzimanja uzorka, primjena hladnjaka ili konzervansa). Naljepnica se stavlja na spremnik, a ne na poklopac kako bi se izbjegle pogreške u identifikaciji. Prikupljeni urin dostavlja se u laboratorij što je prije moguće. Ako je potrebno transportirati uzorke urina, treba koristiti posebne transportne posude, koje moraju biti dobro zatvorene, poklopac se mora lako otvarati.

Napomena 4 - nakon cistoskopije, liječnici bi trebali propisati analizu urina najkasnije 5-7 dana kasnije.

A.5 Čuvanje uzorka urina

Dugotrajno čuvanje urina na sobnoj temperaturi prije pregleda dovodi do promjene fizičkih svojstava, razaranja stanica i rasta bakterija. Urin prikupljen za opću analizu može se čuvati na sobnoj temperaturi ne više od 4 sata, korištenje hladnjaka sprječava uništavanje oblikovanih elemenata, ali može utjecati na rezultate određivanja relativne gustoće. Korištenje konzervansa je nepoželjno, ali je dopušteno ako između mokrenja i pregleda prođe više od 4 sata (nekoliko kristala timola na 100 ml urina zadržavaju dobro oblikovane elemente i ne ometaju kemijska ispitivanja)

DODATAK B

(referenca)

Analiza urina pomoću dijagnostičkih test traka

Dijagnostičke test trake za određivanje jednog ili više analita u urinu namijenjene su za jednokratnu upotrebu (vidi točku 5.5 „Tehnologija izvođenja kemijskih testova urina koji su dio opće analize urina pomoću dijagnostičkih test traka“). Laboratoriji bi trebali koristiti samo test trake koje su odobrene za uporabu na propisani način i prije isteka roka valjanosti otisnutog na pakiranju.

Za opći test urina koriste se trake koje uključuju 10 ili 11 indikatora (točka 4.5.3.), Askorbinska kiselina je 11. pomoćni indikator, jer utječe na rezultate drugih testova. Dostupne su i kombinirane test trake za posebne namjene, kao što je praćenje terapije. dijabetes(glukoza i ketonska tijela), bolesti bubrega i mokraćnog sustava (leukociti, nitriti, pH, glukoza, proteini i krv), za bolesti hepatobilijarnog sustava (urobilinogen i bilirubin). Ove trake se ocjenjuju samo vizualno. Kemijske metode koje se koriste u testnim trakama temelje se na reakcijama boja koje daju promjenu boje testnog područja trake. Vizualna procjena provodi se na ljestvici boja. Rezultati test traka namijenjenih općoj analizi urina ocjenjuju se kvalitativno ili polukvantitativno pomoću reflektirajućeg fotometra (vidi stavak 4.4.3.).

Princip i osjetljivost metode, utjecaj razni faktori, sastav reakcijskog medija, redoslijed rasporeda analita za različite proizvođače traka mogu se razlikovati. Stoga, prije rada s trakama, morate pažljivo pročitati upute, obraćajući pozornost na svaki parametar koji se određuje. Prilikom provođenja istraživanja potrebno je pridržavati se uputa proizvođača. Prije rada s trakama, urin treba dobro promiješati.

NAPOMENA U opisu testova navedeni su samo oni čimbenici utjecaja koji su zajednički većini traka. Čimbenici koji utječu na razvoj boje testnog područja, dobivanje lažno pozitivnih ili lažno negativnih rezultata pri korištenju traka određenog proizvođača, detaljno su opisani u uputama.

B.1 Relativna gustoća

princip ispitivanja. Test odražava koncentraciju iona u urinu. U prisutnosti kationa, kompleksni reagens oslobađa protone, što dovodi do promjene boje bromtimol plavog indikatora od plave preko plavozelene do žute. Test ne uzima u obzir sadržaj uree i glukoze.

Ljestvica boja omogućuje vam da dobijete rezultate relativne gustoće u rasponu od 1.000-1.030 s intervalom od 0.005. Rezultati mjerenja dobro koreliraju s podacima o gustoći urina dobivenim refraktometrom.

U alkalnom urinu (pri pH 7 ili više), pokazatelji gustoće su podcijenjeni. U tom slučaju, vrijednosti gustoće izmjerene trakama moraju se ispraviti u skladu s preporukama navedenim u uputama (obično dodajte 0,005). Brojni analizatori automatski provode korekciju gustoće pri visokoj pH vrijednosti urina. Askorbinska kiselina također podcjenjuje vrijednost gustoće. Mogući utjecaj gustoća proteina, keto kiselina i glukoze navedena je u priloženoj metodi, koju je potrebno pažljivo proučiti prije rada.

Napomena ─ Ograničenje intervala mjerenja gustoće od 1.000-1.030 ne dopušta uvijek korištenje ove metode.Ako je potrebno, gustoća se može izmjeriti urometrom.

Princip testa: reakcija urina se utvrđuje univerzalnim indikatorom ili mješavinom indikatora. U zoni mjerenja pH uočava se niz jasnih promjena boje pri pH vrijednostima od 5-9.

Svježe izlučena mokraća zdravih ljudi ima pH 5-6.

Izvori grešaka. Ako se uzorak čuva dulje vrijeme, pH vrijednost urina se povećava, reakcija urina postaje alkalnija zbog kontakta sa zrakom i povećanja broja bakterija.

B.3 Protein

princip ispitivanja. Test zona za određivanje proteina na multitest traci sadrži pufer i indikator koji mijenja boju u prisutnosti proteina. Kao indikator koristi se organsko bojilo bromofenol plavo ili druge tvari, na primjer, 3,3,5,5-tetraklorofenol-3,4,5,6-tetrabromosulfoftalein. Boja ispitne zone ovisi o indikatoru.

Granice osjetljivosti. Trake različitih proizvođača imaju različitu osjetljivost na proteine. Standardna osjetljivost za protein je 0,15 g/L ili 0,3 g/L. Neki proizvođači proizvode trake visoke osjetljivosti za proteine ​​- 0,1 g / l. Unatoč činjenici da se promjena boje može pojaviti pri koncentraciji proteina u urinu od 0,06-0,08 g / l, smatra se da je prisutnost proteina ne manja od osjetljivosti trake. Osjetljivost ne ovisi o načinu registracije - instrumentalnoj ili vizualnoj. Sadržaj proteina manji od osjetljivosti trake ne može se odrediti jer ne postoji usporedna ljestvica.

Specifičnost. Indikator je najosjetljiviji na albumin. Koncentracija dobivena analizatorom ili usporednom skalom boja dobro korelira s koncentracijom albumina u urinu dobivenom kemijskim metodama. Za globuline, Bens-Jones mijelomski protein i neke druge proteine, osjetljivost trake je znatno manja, pa se ti proteini određuju manje učinkovito. Pacijenti koji testiraju bjelančevine ispod osjetljivosti trake, ili bjelančevine koje nisu albumin, mogu biti negativni ili će koncentracija bjelančevina biti izrazito niska. Stoga, kada se koriste dijagnostičke trake u analizi urina pacijenata s multiplim mijelomom, sa bubrežna patologija, kao i u trudnica, preporuča se provesti kvalitativno određivanje proteina s 20% sulfosalicilne kiseline, au pozitivnih uzoraka- kvantitativno jednom od kemijskih metoda.

Izvori grešaka. Čimbenici utjecaja navedeni su u uputama za trake. U nekim uzorcima mogu se dobiti lažno pozitivni rezultati tijekom ili nakon infuzije krvnog nadomjeska polivinilpirolidona, tijekom uzimanja lijekova koji sadrže kinine ili kinoline; ako ima ostataka dezinfekcijska sredstva. Nakon tretmana fenazopiridinom može se primijetiti crvenkasto obojenje testnog područja.

Ocjena rezultata ovisi o osjetljivosti trake i korištenom indikatoru, pa se može razlikovati od proizvođača do proizvođača. Prva pozitivna boja za bjelančevine odgovara osjetljivosti trake, odnosno prvom prozoru s pozitivnim rezultatom na skali boja ili prvoj detektabilnoj vrijednosti na analizatoru urina. Test ne hvata niže koncentracije. Analizator očitava rezultat u standardnom načinu rada. Vrijeme izlaganja za vizualnu procjenu naznačeno je u postupku analize, obično odgovara 60 sekundi. Boja koja ne dosegne razinu osjetljivosti ocjenjuje se kao "negativan rezultat" i od strane analizatora i vizualno, čak i ako ne odgovara strogo "negativnoj" vrijednosti.

Mala količina proteina može se otkriti kod zdravih ljudi kao varijanta fiziološke vrijednosti. Protein se može pojaviti u malim količinama kod pacijenata na proteinskoj dijeti, nakon parne kupelji i kod žena u predmenstrualnom razdoblju.

B.4 Leukociti

Načelo . Test površina za određivanje leukocita sadrži indoksileter koji detektira granulocitnu esterazu. Indoxyl započinje reakciju s diazonijevom soli, a ispitno područje mijenja se iz bež u ljubičasto.

Specifičnost. Test otkriva aktivnost esteraze u granulocitima i makrofagima, koji se pojavljuju kada kronične upale. Ovaj test može detektirati i cijele i uništene bijele krvne stanice, koje se ne mogu identificirati mikroskopskim pregledom. Osobito je relevantna procjena uništenih leukocita u alkalnom urinu, gdje su eritrociti i leukociti uništeni, a odljevci otopljeni.

Izvori grešaka. Čimbenici utjecaja navedeni su u metodologiji analize. U uzorcima urina koji su jako obojeni bilirubinom ili nitrofuranima, može doći do nespecifične promjene boje u testnom području. Konzervansi mogu utjecati na rezultate testa (na primjer, formalin i formaldehid daju lažno pozitivne rezultate).

Razred. Prvi pozitivan rezultat, dobiven na analizatoru ili skali boja, pokazuje koncentraciju od približno 10-25 leukocita po µl (10.000 - 25.000 leukocita po ml). Nadalje, rezultati se distribuiraju u skladu sa karakteristikama traka. Rezultati analizatora ili trake u boji su prosječne vrijednosti dobivene u komori za brojanje kada je metoda kalibrirana.

Ako postoje sumnjive vrijednosti koje se ne mogu jasno klasificirati kao "negativne" ili prvi pozitivan rezultat u analizi u standardnom načinu rada, potrebno je ponovno procijeniti testnu zonu u više kasni datumi, koji su navedeni u metodi analize (obično 90 ili 120 sekundi). Naknadne promjene boje se ne uzimaju u obzir. Kod visokih koncentracija leukocita (više od 500 leukocita po µl), broj leukocita se ne može identificirati. Ako se pri inicijalnom pregledu u urinu bolesnika nađe 10-25 leukocita po µl, odnosno prvi pozitivan nalaz, test treba ponoviti u svježe prikupljenom uzorku urina.

NAPOMENA Esteraza, kao i druge proteinaze, razgrađuje proteine. vezivno tkivo, pa tijelo proizvodi velik broj različitih inhibitora proteinaza. Ozbiljno izlučivanje inhibitora mokraćom može uzrokovati negativan rezultat testa leukocita. Urinarni inhibitori mogu biti endogenog (nastaju u tijelu) ili egzogenog (npr. lijekovi) podrijetla.

B.5 Nitriti.

Određivanje nitrita je test probira za okultnu bakteriuriju, jer većina bakterija reducira nitrat u nitrit. pozitivna reakcija dijagnostičke trake otkrivene u 90% svih slučajeva zarazne bolesti mokraćni put. Sposobnost redukcije nitrata ima većina bakterija koje uzrokuju upalni procesi u bubrezima i mokraćni put (coli, proteus, salmonela itd.).

Načelo. Aromatski amini sulfonamida reagiraju s nitritima na kisela sredina uz stvaranje diazonijeve soli, koja u interakciji s indikatorom mijenja boju ispitne zone trake.

Osjetljivost testa odgovara sadržaju od oko 105 bakterija/ml, što odgovara 0,8 mg/l nitrita. Pozitivna reakcija rezultira promjenom boje testnog područja od bijele preko blijedoružičaste do svijetloružičaste ili crvene.

Specifičnost. Test je specifičan za nitrite.

Izvori grešaka. Čimbenici utjecaja navedeni su u metodologiji analize.

Lažno pozitivni rezultati mogu se dobiti ako se urin duže vrijeme čuva na toplom mjestu zbog rasta egzogenih bakterija.

Za reakciju redukcije nitrata u nitrite potrebna je prisutnost nitrata u urinu, bakterija koje reduciraju nitrate i dovoljno vremena za reakciju pretvaranja nitrata u nitrite. Stoga, u prisutnosti bakterija koje stvaraju nitrite, lažno negativni rezultati mogu se dobiti s kratkim razdobljem urina u mjehuru, u odsutnosti ili niskom sadržaju nitrata u urinu tijekom posta, u nedostatku povrća u prehrani , ili kada parenteralnu prehranu. Lažno negativni rezultati također mogu biti povezani s prisutnošću mikroorganizama koji pretvaraju nitrit u mokraći. Uz lažno negativan rezultat, test leukocita može poslužiti kao potvrda bakterijske infekcije.

Za dobivanje pouzdane rezultate koristite ili jutarnji dio urina ili urin sakupljen nakon 4-satne pauze. Studiju treba provesti unutar 4 sata. Antibiotici i pripravci askorbinske kiseline moraju se otkazati 3 dana prije analize.

Razred. Svaki stupanj promjene boje u ružičastu smatra se pozitivnim.

Odsutnost promjene boje na jednom testu ne isključuje infekciju zbog fluktuirajućih razina nitrita u urinu. U tim slučajevima potrebna je ponovna analiza.

Napomena - Neke vrste bakterija (streptokoki, pseudomonade, neisseria i dr.) nemaju sposobnost redukcije nitrata i ne stvaraju nitrite.

B.6 Krv

Princip metode. Hemoglobin i mioglobin, koji imaju svojstva peroksidaze, razgrađuju supstrat impregniran u ispitno područje uz stvaranje vodikovog peroksida, koji se razlaže u vodu i atomski kisik. Potonji oksidira indikator (derivat benzidina ili neki drugi) uz stvaranje obojene tvari. Intenzitet boje ovisi o količini pigmenta, a boja reakcijske zone ovisi o korištenom indikatoru.

Test vam omogućuje prepoznavanje crvenih krvnih stanica, hemoglobina i mioglobina. Netaknute crvene krvne stanice se liziraju, oslobođeni hemoglobin reagira, uzrokujući točkastu promjenu boje. Hemoglobin i mioglobin ravnomjerno mijenjaju boju cijelog testnog područja. Reakcija je osjetljivija na hemoglobin i mioglobin nego na eritrocite.

Osjetljivost test zone multitest trakica na prisutnost krvi u urinu ovisi o vrsti trakica i kreće se od 5 do 20 eritrocita/µl. Granica osjetljivosti je 5 eritrocita po µl (5000/ml). Za visoko osjetljive testove, osjetljivost testa je blizu granice fiziološke hematurije. Više osjetljivosti i granica detekcije navedene su u uputama.

Specifičnost. Test je specifičan za hemoglobin i mioglobin. Ostale stanične komponente ne utječu na rezultat.

Izvori grešaka. Visoke razine askorbinske kiseline, visok sadržaj proteina i potpuni izostanak hemolize crvenih krvnih stanica mogu dovesti do lažno negativnih ili niskih rezultata. U potonjem slučaju test može biti negativan ako u sedimentu mokraće ima eritrocita.

U nekim vrstama trakica područje reagensa je impregnirano smjesom jodata, koja oksidira askorbinsku kiselinu, tako da čak ni njezine visoke koncentracije u urinu ne utječu na rezultat.

Ostaci oksidirajućih sredstava koji sadrže klor mogu dovesti do lažno pozitivnih rezultata. Utjecajni čimbenici su detaljnije navedeni u uputama za trake.

Razred. Obojena skala ima odvojene zone za procjenu hemoglobina i eritrocita.

RBC: Točkasta ili kompaktna boja na test traci označava normalne RBC. Intervali koncentracija potrebni za tumačenje rezultata dobivenih ovom vrstom trakica navedeni su u uputama. Na visoka koncentracija područje ispitivanja eritrocita može imati uniformu tamna boja, čija je boja izvan utvrđenih vrijednosti. U tom slučaju potrebno je razrijediti uzorak 10 ili 100 puta s 0,9% otopinom natrijeva klorida i naknadno ponoviti test.

Hemoglobin. Homogena boja testnog područja ukazuje na prisutnost slobodnog hemoglobina, hemoglobina iz liziranih ili promijenjenih eritrocita i mioglobina. Ovom metodom nemoguće je razlikovati hemoglobin od mioglobina. Intervali koncentracija potrebni za tumačenje rezultata dobivenih ovom vrstom trakica navedeni su u uputama. Slabije bojenje od prvog pozitivnog rezultata ukazuje na potrebu ponovnog testiranja i može biti posljedica odsutnosti hemolize eritrocita. Hemoliza eritrocita je neophodan uvjet za pojavu obojene reakcije, jer hemoglobin, koji se nalazi unutar eritrocita, ne ulazi u kemijsku reakciju. Uz djelomičnu hemolizu eritrocita, istodobno se pojavljuje difuzno i ​​točkasto bojenje.

Usporedba s mikroskopski pregled Nacrt.

Kada se uspoređuju rezultati ispitivanja s mikroskopskim pregledom sedimenta, treba obratiti pozornost na sljedeće:

1. Traka utvrđuje nepromijenjene, a glede hemoglobina promijenjene i uništene eritrocite. Stoga se pri analizi alkalne mokraće, u kojoj su eritrociti uništeni i ne mogu se otkriti mikroskopski, prisutnost eritrocita može otkriti hemoglobinom.

2. U prisutnosti promijenjenih crvenih krvnih zrnaca, testna zona trake pokazat će hemoglobin.

3. Ova metoda otkriva samo eritrocite, koji se pod mikroskopom moraju razlikovati od blastospora i jajolikih oksalata.

Određena odstupanja između rezultata dobivenih pomoću traka i mikroskopije mogu biti posljedica nepoštivanja standardnih uvjeta za dobivanje sedimenta urina (način centrifugiranja, volumen urina za sediment) i pripreme pripravka za mikroskopiranje.

B.7 Glukoza

princip ispitivanja. Određivanje glukoze temelji se na specifičnoj reakciji glukoza-oksidaze. D-glukoza se uz sudjelovanje enzima glukoza-oksidaze pretvara u glukonsku kiselinu uz stvaranje vodikovog peroksida koji u prisutnosti peroksidaze oksidira indikator u obojeni spoj. Boja reakcijske trake ovisi o korištenom indikatoru.

Osjetljivost metode. U pravilu, osjetljivost trakica odgovara 2-3 mmol / l i prelazi granice fiziološke koncentracije, koja se kreće od 0,12 do 1,8 mmol / l. Visoka osjetljivost trake, s jedne strane, omogućuje vam da odredite čak i malu glukozuriju s u Velikoj mjeri pouzdanosti, s druge strane, pri fiziološkoj koncentraciji glukoze dobit će se negativan rezultat. Polukvantitativno mjerenje koncentracije je u rasponu od 2-3 do 55-60 mmol/l, ovisno o trakicama koje se koriste. Stoga se koncentracija glukoze može mjeriti u širokom rasponu. Točne vrijednosti osjetljivost trakica i granice mjerenja navedeni su u uputama.

Izvori grešaka. Registriranje smanjenih ili negativnih rezultata može se uočiti kada visok sadržaj askorbinska kiselina. Lažno pozitivni rezultati mogu biti uzrokovani zaostalim vodikovim peroksidom ili oksidirajućim sredstvima koja sadrže klor u posudi za sakupljanje urina.

Razred. Koncentracija koja odgovara prvom pozitivnom rezultatu i razmaci za određene koncentracije ovise o vrsti trakica i navedeni su u uputama.

B.8 Ketonska tijela

Načelo. Definicija ketonskih tijela temelji se na Legal reakciji. Acetoctena kiselina i aceton reagiraju s natrijevim nitroprusidom kako bi alkalna sredina da se formira ljubičasti kompleks.

b-hidroksimaslačna kiselina ne reagira s natrijevim nitroprusidom.

Osjetljivost. Test je 10 puta osjetljiviji na acetooctenu kiselinu nego na aceton. Granice osjetljivosti za acetooctenu kiselinu su obično 0,5 mmol/l (5 mg/100 ml).

Izvori grešaka. Kaptopril (natrij 2-merkaptoetansulfonat) i druge tvari koje sadrže slobodne sulfhidrilne skupine mogu dati lažno pozitivne rezultate. Popis čimbenika utjecaja naveden je u uputama za trake.

Neki spojevi, kao što su fenilketoni i ftaleini, uzrokuju razvoj crvene boje koja se razlikuje od ljubičasta karakterističan za aceton i acetoctenu kiselinu.

Razred. U zdravih ljudi koncentracija ketonskih tijela otkrivena Pravnom reakcijom ne prelazi 0,5 mmol / l. Povećanje razine ketonskih tijela dovodi do pojave ljubičaste boje. Intenzitet boje raste s povećanjem koncentracije. Granice mjerenja i interpretacija rezultata u skladu sa skalom boja navedena su u uputama za trake.

B.9 Bilirubin

Načelo. Test se temelji na diazo reakciji. Kada bilirubin stupa u interakciju s diazonijevom soli u kiselom mediju, nastaje obojeni kompleks, čiji se intenzitet boje povećava s povećanjem koncentracije bilirubina. Boja obojenog spoja ovisi o korištenom indikatoru.

Osjetljivost. U praksi, osjetljivost je oko 9 µmol/l (0,5 mg/100 ml) bilirubina. Više niska koncentracija bilirubin se može otkriti s relativno malom vjerojatnošću.

Izvori grešaka. Test može biti lažno negativan ako je prisutan u urinu. velike količine askorbinska kiselina, nitrit ili mokraćne kiseline, s produljenim skladištenjem urina na svjetlu, pa svjetlost uzrokuje uništavanje bilirubina. Lažno pozitivne rezultate mogu uzrokovati lijekovi koji boje urin u crveno ili crveno u kiseloj sredini (fenazopiridin) i visoke razine urobilinogena.

Razred. Granice mjerenja i interpretacija rezultata u skladu sa skalom boja navedena su u uputama za trake. Čak i malo bojenje je pozitivan rezultat. Komponente urina koje uzrokuju intenzivnu žutu boju mogu promijeniti nijansu mrlje.

B.10 Urobilinogen

Načelo. Određivanje urobilinogena multitest traka temelji se na diazoreakciji sa stabilnom diazonijevom soli u kiselom mediju. Boja obojenog spoja ovisi o korištenom indikatoru. Intenzitet boje odgovara koncentraciji urobilinogena.

NAPOMENA Dva derivata bilirubina (urobilinoida) mogu biti prisutna u ljudskom urinu: sterkobilinogen i urobilinogen. Zdrava osoba sadrži sterkobilinogen. Kod bolesti jetre poremećena je pretvorba urobilinogena u pirole, te se pojavljuje u mokraći. Po kemijska struktura oba spoja su vrlo bliska, ne mogu se razlikovati konvencionalnim kemijskim metodama, tako da reakcija boje otkriva oba spoja, ali tradicionalno se u dijagnostičkim trakama nazivaju urobilinogen.

Osjetljivost ovisi o korištenim trakama i navedena je u uputama, kao i granice mjerenja. Fiziološka granica koncentracija je od 5 do 17 µmol/l (1 mg/100 ml). Usporedba boja omogućuje vam razlikovanje norme od patologije. Specifičnost. Test se temelji na reakciji specifičnoj za urobilinogen. Na njega ne utječu druge tvari koje reagiraju s diazo spojevima, kao ni čimbenici koji ometaju Ehrlichovu reakciju.

Test omogućuje razlikovanje fiziološke od patološke urobilinogenurije, ali se ne može koristiti za dokazivanje totalna odsutnost urobilinogen.

Izvori grešaka. Lažno negativni rezultati mogu se dobiti s produljenim skladištenjem urina, osobito kada je izložen sunčeva svjetlost. Reakcija se usporava u prisutnosti velikih količina formaldehida.

Lažno pozitivni rezultati mogu se dobiti s određenim lijekovima, poput fenazopiridina. Utjecajni čimbenici su detaljnije navedeni u uputama za trake. Velika količina bilirubina može uzrokovati plavo-zelenu boju zbog stvaranja biliverdina.

Razred. Granice mjerenja i interpretacija rezultata u skladu sa skalom boja navedena su u uputama za trake.

Više visoke razine razine urobilinogena opažaju se nakon uzimanja obroka bogatog ugljikohidratima.

DODATAK B

Potvrda rezultata dobivenih test trakama drugim metodama: određivanje relativne gustoće urometrom, proteina, glukoze, bilirubina i urobilinogena - kemijskim metodama.

B.1 Mjerenje relativne gustoće urina urometrom.

Mjerenje relativne gustoće urometrom smatra se referentnom metodom i koristi se kod dobivanja niske odn visoke vrijednosti gustoća kada se određuje test trakama.

Relativna gustoća je omjer mase uzorka urina i mase jednakog volumena destilirane vode pri istoj temperaturi. Odnos je izražen brojčane vrijednosti; normalne vrijednosti: 1.003 - 1.035. Relativna gustoća urina ovisi o koncentraciji tvari otopljenih u njemu (urea, natrijeve soli, bjelančevine, glukoza itd.).

Napomena ─ Pri mjerenju s test trakama, neionizirane tvari (glukoza, radiokontaktna sredstva) ne utječu na rezultate, jer se princip mjerenja temelji na ovisnosti relativne gustoće o koncentraciji iona.

Za određivanje relativne gustoće koriste se urometri (kombinirani areometri) s rasponom ljestvice od 0,001 do 1,050. Kod uporabe urometra potrebno je da on pluta u posudi (cilindru) i ne dodiruje stijenke, za što je potrebna dosta široka posuda i relativno velika količina urina. Na određivanje relativne gustoće urometrom utječe temperatura na kojoj se vrši mjerenje. Urometri su kalibrirani za mjerenje pod strogim određena temperatura(15°, 20°, 22°C) naznačeno na uređaju. Svako odstupanje od te temperature rezultira promjenom volumena, a time i koncentracije otopljene tvari i relativne gustoće. Na temperaturi iznad ove povećava se volumen urina, smanjuje koncentracija i relativna gustoća, pad temperature dovodi do povratni učinak. Kada se temperatura promijeni za tri stupnja, relativna gustoća se promijeni za 0,001. Prisutnost proteina i glukoze povećava relativnu gustoću: svaka 3 g/l proteina daje povećanje od 0,001, svakih 10 g/l glukoze - za 0,004.

B.2 Mjerenje koncentracije proteina u mokraći kemijskim metodama.

Mjerenje koncentracije proteina u urinu kemijskim metodama provodi se u supernatantu (supernatantu) nakon centrifugiranja urina u standardnom načinu (1500 o/min 10 min).

B.2.1 Referentna metoda za mjerenje koncentracije proteina u urinu je biuretska metoda, koja otkriva polipeptidne veze i neovisna je o aminokiselinskom sastavu proteina. On je sa ista učinkovitost određuje albumine, globuline i druge proteine. Zbog niske osjetljivosti metode, određivanje proteina u urinu zahtijeva taloženje i koncentraciju proteina, stoga se, zbog visokog intenziteta rada, metoda praktički ne koristi u laboratoriju. Od kemijskih metoda preporučuje se ispitivanje proteina u urinu sulfosalicilnom kiselinom (SSA) i pirogalol crvenim (PGK).

B.2.2. Mjerenje koncentracije proteina u mokraći sulfosalicilnom kiselinom.

Princip metode: kada protein urina komunicira s CSC, dolazi do denaturacije proteina i stvaranja taloga, što dovodi do zamućenja otopine. Stupanj zamućenja uvjetno je proporcionalan sadržaju proteina u otopini.

Detekcija proteina s CCK (kvalitativni uzorak).

Reagensi: 20% otopina sulfosalicilne kiseline.

Tijek određivanja: oko 3 ml supernatanta urina ulije se u 2 epruvete (pokusni i slijepi uzorak). U uzorak za ispitivanje doda se 6-8 kapi reagensa. Na tamna pozadina usporediti pokusne i slijepe uzorke. Mutnoća u pokusnom uzorku ukazuje na prisutnost proteina, uzorak se smatra pozitivnim.

NAPOMENA 1 U slučaju alkalne reakcije, dio urina za pretragu se zakiseli s 2-3 kapi slabe octene kiseline.

Kvantitativno određivanje proteina s CCK.

Reagensi: 3% otopina SSC, 0,9% otopina natrijeva klorida (fiziološka otopina), 1% otopina za kalibraciju proteina.

Oprema: fotometar, automatske pipete, epruvete.

Tijek određivanja: u 1 ml urina dodati 3 ml 3% SSC, promiješati i inkubirati 10 minuta. Vrijeme inkubacije bilježi se na prvom uzorku. Uzorak urina koristi se kao slijepa proba. fiziološka otopina. Slijepi uzorak stavlja se zasebno za svakog pacijenta. Na kraju perioda inkubacije mjeri se apsorbancija ispitnog uzorka u odnosu na slijepu probu na valnoj duljini od 590-650 nm. Određivanje koncentracije provodi se prema rasporedu umjeravanja ili prema tablici sastavljenoj u skladu s rasporedom.

Kalibracijska tablica. Za izradu grafikona pripremite razrjeđenja 1% otopine proteina za kalibraciju s fiziološkom otopinom do konačne koncentracije od 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 i 1 g/l.

Svako od razrjeđenja analizira se na isti način kao i uzorak urina. Na temelju rezultata analize gradi se kalibracijski grafikon u koordinatama: apsorpcija (ordinata), koncentracija (apscisa). Linearnost metode održava se do 1 g/L. Kod koncentracija proteina iznad granice linearnosti, uzorak urina se razrijedi fiziološkom otopinom 5-10 puta i rezultat mjerenja se množi s razrjeđenjem.

Referentne granice: 0,01-0,140 g/l, 0,05-0,08 g/dan. (autor, 1997).

NAPOMENA 2. Albumin i protein koji se sastoji od mješavine albumina i globulina mogu se koristiti kao kalibracijski uzorak. Korištenje miješanog proteina kao standarda povećava pouzdanost rezultata. Za izradu kalibracijskog grafikona dostupni su gotovi setovi kalibracijskih uzoraka proteina.

Napomena 3 - U Rusiji se proizvode gotovi setovi reagensa za određivanje koncentracije proteina s CCK.

Izvori grešaka. Lažno pozitivni rezultati mogu se dobiti u prisutnosti jodnih kontrastnih sredstava u mokraći, velike količine penicilina i sulfonamida te visoke koncentracije mokraćne kiseline. Nedostaci metode uključuju nisku stabilnost precipitata, složenu nelinearnu ovisnost apsorpcije o koncentraciji proteina, značajne razlike u sastavu proteina kalibratora i uzorka urina, nepotpuno taloženje određenog broja proteina u analiziranom uzorku, što dovodi do podcijenjeni rezultati. SSC test privlačan je samo zbog svoje jednostavnosti i niske cijene.

B.2.3 Kvantifikacija proteina s pirogalol crvenilom

Princip metode: vezanjem proteina s organskom bojom, pirogalol crvenilom, u kiselom mediju nastaje obojeni kompleks čiji je intenzitet boje proporcionalan sadržaju proteina u uzorku. Kompleks je otporan na mnoge spojeve, uključujući lijekove, soli, baze, kiseline.

Reagensi. Za određivanje proteina koriste se gotovi kompleti reagensa koje proizvode različiti proizvođači. otopina za kalibraciju proteina uključena je u komplet.

Oprema: fotometar, automatske pipete.

Tijek određivanja je naznačen u postupku analize. Mjerenje apsorbancije provodi se na valnoj duljini od 600 nm. Apsorpcija ostaje stabilna na temperaturi mjerenja od 25 do 370C najmanje 30 minuta nakon završetka kemijska reakcija. Linearnost metode doseže 4 g/l proteina, a osjetljivost je 0,03-0,04 g/l. Metoda se odlikuje dobrom ponovljivošću rezultata, jednostavnošću i lakoćom izvođenja.

NAPOMENA 4 PGA boja se ne sorbira na stijenkama kiveta do koncentracije proteina od 5 g/l, pa se metodom mjeri koncentracija proteina na automatskim biokemijskim analizatorima.

Specifičnost. Metoda je najosjetljivija na albumin, ali njena osjetljivost na globulin i mijelomski protein je unutar 70% u usporedbi s albuminom. Korištenje miješanog proteina kao kalibracijskog uzorka smanjuje moguću pogrešku u određivanju.

Izvori grešaka. Mogući izvori grešaka i čimbenici utjecaja navedeni su u postupku analize. Tvari prisutne u urinu daju ukupnu pogrešku od oko 2%.

B.3 Određivanje glukoze kemijskim metodama

Za određivanje glukoze koriste se metode glukoza oksidaze ili heksokinaze.

Princip metode glukoza oksidaze: metoda se temelji na oksidaciji glukoze glukozo oksidazom uz stvaranje vodikovog peroksida, koji pod djelovanjem peroksidaze oksidira ortotolidin ili drugu tvar, kao što je fenolftalein, pri čemu nastaje boja, čiji se intenzitet mjeri fotometrijski.

Postoje gotovi setovi reagensa za izvođenje metode glukoza-oksidaze, morate pažljivo proučiti upute i točno ih slijediti.

Koncentracija glukoze u mokraći može se odrediti i metodom heksokinaze pomoću gotovih setova reagensa i na analizatoru glukoze pogodnom za određivanje koncentracije glukoze u mokraći.

Referentne granice:< 0,5 г/сутки (< 2,78 ммоль/сутки); 1-15 мг/100 мл (0,1 -0,8 ммоль/л), (по, 1997).

B.4 Detekcija bilirubina u mokraći (Fuchet kvalitativni test)

Princip metode: test se temelji na oksidaciji bilirubina u biliverdin pod djelovanjem željeznog klorida, koji je uključen u Foucheov reagens, uz stvaranje plavo-zelene boje.

Reagensi: 15% otopina barijevog klorida, Foucheov reagens (25 g trikloroctene kiseline otopi se u 100 ml destilirane vode i doda se 10 ml 10% otopine feriklorida).

Tijek određivanja: u 10 ml urina dodati 5 ml 15% otopine barijevog klorida, promiješati, filtrirati. Na filtar se nakapaju 1-2 kapi Foucheovog reagensa. U prisutnosti bilirubina na filtru se pojavljuje zelenkasta ili plavozelena mrlja. Alkalni urin prije studije zakiseli se s nekoliko kapi koncentrirane octene kiseline.

B.5 Detekcija urobilinogena u urinu (kvalitativni Neubauer test). Princip metode: test se temelji na interakciji urobilinogena s para-dimetilaminobenzaldehidom pri čemu nastaje crveni spoj.

Reagensi: Ehrlichov reagens: 2 g paradimetilaminobenzaldehida otopi se u 100 ml 20% otopine klorovodične kiseline.

Tijek određivanja: u 1 ml urina doda se 1 kap Erlichovog reagensa, bilježi se vrijeme. Crvena boja urina u prvih 30 sekundi znači pozitivan rezultat (povećanje urobilinogena). Odsutnost boje ili njezin razvoj nakon 60 sekundi ukazuje na normalan sadržaj urobilinogena.

Ometaju određivanje urobilinogena: bilirubin, porfobilinogen, neki lijekovi (para-aminosalicilna kiselina, sulfonamidi itd.). Ako se otkrije bilirubin, uklanja se taloženjem s barijevim kloridom i naknadnom filtracijom, u filtratu se provodi test na urobilinogen. Da bi se razlikovala boja uzrokovana urobilinogenom ili porfobilinogenom, jednaka količina kloroforma dodaje se mješavini urina i Ehrlichovog reagensa, u prisutnosti urobilinogena boji se sloj kloroforma (donji sloj), u prisutnosti porfobilinogena, gornji vodeni sloj. Sulfonamidi i para-aminosalicilna kiselina daju zamućenje i narančastu boju Ehrlichovim reagensom, urobilinogen se ekstrahira petrolejom ili dietil eter i ispitivanje se ponavlja s eterskim ekstraktom.

Bibliografija

1. GOST R 52905 -2007 (ISO 15190:2003) Sigurnosni zahtjevi.

2. "Uputa o mjerama za sprječavanje širenja zaraznih bolesti pri radu u kliničkim dijagnostičkim laboratorijima zdravstvenih ustanova." Moskva, 1991.

3. "Pravila za skupljanje, skladištenje i zbrinjavanje otpada iz zdravstvenih ustanova." SanPiN 2.1.1.728-99., Moskva, 1999

4. GOST R 53079.4-2008 Medicinske laboratorijske tehnologije. Osiguravanje kvalitete kliničkih laboratorijskih istraživanja. Dio 4 Pravila za provođenje predanalitičke faze.

5. GOST R ISO 15189 -2006 Medicinski laboratoriji. Posebni zahtjevi za kvalitetu i osposobljenost.

Nacrt standarda pripremili su:

, (MMA im.); (RSMU), (RMAPO); (RONTS nazvan po RAMS-u).

Naziv "Opća analiza urina", tradicionalno uvriježen u našoj zemlji, u inozemstvu se označava izrazom "Urinaliz".