PCR módszer a húgyúti gyulladásos betegségek diagnosztizálására férfiaknál és nőknél. Mi az a PCR vérvizsgálat és miért van szükség rá?

A PCR diagnosztika egy polimeráz láncreakció alkalmazásán alapuló technika, amellyel egy személyt fertőző, ill. örökletes betegségek. A 12 fertőzés PCR-elemzése eredményt mutat, függetlenül attól, hogy a betegség akut vagy krónikus. Egyes szakértők szerint a PCR 12 kötelező elemzésés ne állítson fel végleges diagnózist anélkül. Az eredmények már jóval a betegség tüneteinek megjelenése előtt is pozitívak lehetnek.

A 20. században az amerikai Cary Mullis felfedezte a polimeráz láncreakció jelenségét. Jelenleg az orvostudomány egyes területein a PCR módszer az arany standard. A módszer a leghatékonyabb a betegség kimutatására az aktív szakaszban, mivel vannak esetek, amikor a hagyományos módszerek nem adnak ilyen eredményt az aktív szakaszban. pontos eredmény.

A PCR diagnosztika előnyei

A fertőző folyamatok PCR segítségével történő diagnosztizálása meglehetősen releváns modern világ. Az ilyen típusú vizsgálat előnyei a következők:

Hírvonal ✆

1. Érzékelés fertőző ágens az elemzésekben. Az elemzés magában foglalja a fertőző ágens DNS-ének vagy RNS-ének azonosítását.
2. A hamis és hibás reakciók gyakorlatilag kizártak.
3. A 12. PCR módszer a legérzékenyebb. Ennek a módszernek köszönhetően a fertőző ágensek egyetlen sejtje is kimutatható.
4. A rejtett kórokozók PCR eredménye a beavatkozást követő 4 órán belül készen áll.
5. A fertőző ágensek hiány nélküli észlelésének képessége jellegzetes tünetek a betegségért. A módszer meglehetősen hatékony egy adott betegség esetén.

A modern világban a fertőzések PCR-diagnosztikája felgyorsult ütemben fejlődik. A technikát aktívan fejlesztik. A PCR vizsgálatok új altípusai vannak kialakulóban. A fejlesztésnek köszönhetően ez a módszer vizsgálat során a lehető legszélesebb kör számára válik elérhetővé, miközben a költségek fokozatosan változnak.

A polimeráz láncreakció alapja

A PCR-módszert kizárólag a laboratóriumi körülmények. Ennek megvalósításához speciális enzimeket használnak, amelyek többszörösére növelik a páciens DNS-ének és RNS-ének szerkezetét. Olyan mennyiségű DNS-t és RNS-t kell kialakítani, hogy vizuális elemzést lehessen végezni. A vizsgálat során az RNS vagy DNS szakasz másolatát másolják, amely ideálisan illeszkedik a szükséges feltételekhez.

A laboratórium olyan adatbázist vezet, amely felsorolja a különböző fertőző ágensek pontos szerkezetét. A PCR módszernek köszönhetően nemcsak a kórokozót láthatja, hanem mennyiségi arányát is kiszámíthatja.

A PCR-diagnosztika bizonyos újításokat is tartalmaz, amelyek között a következők különböztethetők meg:

• mutációk bevezetése;
• az egyes DNS-fragmensek összekapcsolása;
• az apaság megállapítása stb.

PCR-analízissel kimutatott fertőzések

A PCR-diagnosztika a következő fertőző folyamatokat képes feltárni:

• a következő fajták hepatitisei: A, B, C, G;
• Epstein-Barr vírus, kórokozó fertőző mononukleózis;
• citomegalovírus;
• Mycobacterium tuberculosis;
• 1. és 2. típusú herpesz;
• számos szexuális úton terjedő fertőzés: ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis.
• HPV és onkogén alfajai;
• kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás és borreliosis;
• Candida fertőzés;
• listeriosis;
• Helicobacter pylori fertőzés.

És ez csak néhány a leggyakoribb fertőzések közül, amelyek PCR-rel kimutathatók. A PCR vérvizsgálatot aktívan használják az orvosi gyakorlat nőgyógyászati ​​területén, valamint olyan területeken, mint:

• pulmonológiai;
• ftiziátriai;
• gasztroenterológiai;
• onkológiai;
• az orvostudomány sok más ága.

Az elemzéshez szükséges anyaggyűjtés szabályai

Az idegen DNS-t és RNS-t egy adott személy különféle testnedveinek vizsgálatával lehet kimutatni. Annak érdekében, hogy egy személyt bizonyos nemi úton terjedő fertőzések jelenlétére megvizsgálhassunk, mintát kell venni a beteg nemi szerveiből (kenet vagy kaparás) és vizeletéből.

Ha szükségessé válik egy személy vizsgálata különféle fajták fertőzések (HIV, herpesz, hepatitis és mások), majd PCR-elemzést végzünk, amelyhez a beteg vérét használják.

Diagnosztizálni herpetikus elváltozás, mononucleosis, kenetet kell venni a beteg szájüregéből. A CMVI megerősítéséhez a páciens vizeletét elemzésre veszik. Vannak esetek, amikor az agy-gerincvelői folyadékot vizsgálják a felmerült neurológiai rendellenességek okainak meghatározására.

Ugyanakkor a pulmonológus PCR módszerrel megvizsgálja az adott beteg mellhártyájából származó köpetet és folyadékot.

Ha egy újszülöttnél méhen belüli fertőzés gyanúja merül fel, az orvosok a magzatvíz elemzését végzik egy terhes nőtől és egy méhlepény-szövetdarabot.

Az elemzés átadása: az eljárás jellemzői és az eredmények értelmezése

Minden PCR módszerrel vizsgált beteg a legmegbízhatóbb eredményt kapja. NÁL NÉL ez az eset a hibák előfordulása gyakorlatilag kizárt. Az elemzés eredményeit elég gyorsan elkészítik, ami megkönnyíti a diagnózist és biztosítja az időben történő kinevezést orvosi intézkedések.

A PCR eredmény megbízhatósága közvetlenül függ a vizsgálatra szánt anyag szállításának helyességétől. Az anyagot nem szabad szennyezni, különben a vizsgálat eredménye nem lesz objektív. A legtöbbre fontos ajánlásokat A PCR-elemzés benyújtása előtt a következő követelmények érvényesek:

1. Az elemzés előtt egy nappal tilos szexuális tevékenységet folytatni.
2. A fertőzések kimutatására szolgáló vérvizsgálatot reggel éhgyomorra kell venni.
3. A vizeletet reggel steril tartályban adják be.

Az elemzés eredménye a kérdéses eljárás után 1,5-2 napon belül elkészül. Vannak helyzetek, amikor az eredményt még aznap el lehet készíteni.

Az eredmények megfejtése

Az ilyen típusú vizsgálat eredménye lehet pozitív vagy negatív. A vérvizsgálat negatív eredménye azt jelzi, hogy a benyújtott anyagban nincsenek fertőző elemek. Nagyszámú Az elvégzett PCR elemzések negatív elemzést mutatnak.

A pozitív PCR analízis megerősíti azt a tényt, hogy a benyújtott anyagban fertőző ágenseket találtak és kiváló minőségűek, maximum hatékony kezelés beteg.

Az eredmény pozitív lehet, de a betegségnek nincsenek megnyilvánulásai. Ez vagy a betegség kezdetét, vagy annak hordozását jelzi. Ha a betegség hordozóját észlelik, nincs szükség terápiás intézkedésekre. Csak szakemberhez kell fordulnia. Példák az ilyen betegségekre:

• papillomavírus fertőzés;
• herpesz stb.

Általában a nyálban, a leválásból származó kaparékban találhatók nyaki csatorna, húgycső. Emlékeztetni kell azonban arra, hogy egy beteg ember teljesen egészséges embereket fertőzhet meg, annak ellenére, hogy az övé ezt a betegséget egyáltalán nem aggódik. A betegség előrehaladhat krónikus forma. Meg kell jegyezni, hogy azokban az esetekben, amikor a PCR vérvizsgálat kimutatta pozitív eredmény, a terápiás intézkedések kijelölése egyszerűen szükséges.

A PCR-elemzésnek kvantitatív jellemzője is van. A mennyiségi eredményt csak szakember értékeli, az egyedi különféle fertőzések. Alapján mennyiségi jellemző, az orvos képes megérteni, mennyire aktív ez a kóros folyamat, hogy pontosan meghatározza egy adott betegség fejlődési stádiumát. A kapott eredmények elemzésével a szakember választhat szükséges gyógyszerés esetleg újragondolja a gyógyszer adagolását.

A PCR diagnosztika pontossága

A szakemberek PCR 3-at kapnak a legfontosabb jellemzőket, amelyek között szerepel:

1. Pontosság.
2. Specificitás.
3. Érzékenység.

A fertőzések diagnosztizálása PCR-rel rendelkezik inkább fertőző ágensek kimutatása. A vér és más folyadékok PCR-elemzése nagyon specifikus. Segítségével könnyen azonosíthat egy adott fertőző folyamatot. A PCR diagnosztika nagyon érzékeny. Ha a vizsgálati anyag tartalmaz minimális mennyiség fertőző ágensek esetén a PCR módszer mindig pozitív lesz.

A legritkább a hamis pozitív eredmény. Ha nincs fertőzés, akkor az eredmény negatív.

PCR látens fertőző folyamatokhoz

Ha valakit STI-vel gyanúsítanak, vérvizsgálatot kell rendelni rejtett fertőzések. A nemi betegségeket csak a beteg vizsgálatával lehet kimutatni. Betegségek, mint például:

• chlamydia;
• ureaplasmosis;
• gonorrea;
• herpesz;
• gardnerellosis;
• mycoplasma.

A fenti szexuális fertőzések meglehetősen gyakoriak és egyben alattomosak. A kezdeti szakaszban a betegség kialakulását, nem adnak fényes tüneteket, és a betegek nem kérnek segítséget. Ezeknek a fertőzéseknek a gyanúja esetén PCR vérvizsgálat, a húgycső és a nyaki csatorna nyálkahártyájának kaparása szükséges.

Az STI-k nagyon negatív hatással vannak a szaporító rendszer. Meddőséget vagy fejlődési rendellenességeket okozhatnak a magzatban. Ebben a tekintetben a terhesség megtervezése előtt PCR-tesztet kell végeznie.

A PCR 12 fertőzés esetén népszerű. A PCR 12-es diagnózis a nemi szervekből vett tamponok segítségével történik. Az anyagot a vizeletürítés után 2 órával veszik. 2 nappal a vizsgálat előtt nem szabad kúpokat behelyezni a hüvelybe, és nem szabad öblítést végezni. Az elemzés eredménye 2 napon belül elkészül.

A PCR költsége a vizsgált fertőzéstől függően változik. Az ár 200 és 500 rubel között mozog minden fertőzésre. Magánlaboratóriumban önállóan, orvosi beutaló nélkül lehet belépni és kivizsgáltatni.

PCR (polimeráz láncreakció) - a molekuláris biológia elérése, a klinikai kutatás egyik fő módszere laboratóriumi diagnosztika 20. század vége és 21. század eleje, hozva nagy haszon ban ben különböző területeken orvostudomány.

Így még ha több millió sejt között is emberi test nem maga az élő vírus vész el, hanem csak egy részecskéje a DNS-ének, akkor a PCR, ha semmi nem zavarja, valószínűleg megbirkózik a feladattal, és pozitív eredményt jelent az „idegen” tartózkodásáról. Ez a PCR lényege és fő előnye.

Előnyök és hátrányok

A PCR diagnosztikát végző laboratórium a legmagasabb követelményeket támasztja a berendezések, a vizsgálati rendszerek és az egészségügyi személyzet képzettsége tekintetében. Ez egy csúcstechnológiás laboratórium, amely rendkívül érzékeny és nagyon specifikus reagensek arzenáljával rendelkezik, így nincs különösebb hátránya. Hacsak távollétében nem ad pozitív eredményt klinikai megnyilvánulásaiés ezzel dilemma elé állítja a klinikust: érdemes-e elkezdeni a kezelést vagy sem?

A pácienst megfigyelő orvos kételkedni kezd a vizsgálati eredmények megbízhatóságában, mivel nem látja a betegség jeleit. De mégis, tekintettel a PCR rendszer nagy érzékenységére, nem szabad elfelejteni, hogy még a preklinikai stádiumban is kimutatja a kórokozót, és a pozitív eredmény ebben az esetben inkább előny, mint hátrány. Ennek alapján a kezelőorvosnak magának kell döntenie a terápia célszerűségéről, figyelembe véve egyéb pro és kontra érveket.

A polimeráz láncreakciót használó diagnosztika előnyei nyilvánvalóak:

• Magas specifitás eléri a 100%-ot, mivel a kiválasztott mintában egy adott szervezetben rejlő, de az embertől idegen nukleinsavrészecskék vannak jelen;
• Nagy teljesítményű, mert a PCR egy csúcstechnológiás automatizált technika, amely lehetőséget ad a vizsgálat elvégzésére az anyagmintavétel napján, és ezáltal megszabadítja a pácienst a felesleges aggodalmaktól;
• A PCR egyetlen mintán dolgozva képes több vizsgálat elvégzésére és kb több kórokozó kimutatása ha ilyen feladata van. Például a chlamydia fertőzés diagnosztizálása során, ahol a PCR az egyik fő módszer, a chlamydia mellett a Neisseria (gonococcus) is kimutatható - a kórokozó. Ráadásul ez nem befolyásolja negatívan az eredmények megbízhatóságát;
• PCR vizsgálat veszélyes mikroorganizmus lappangási időszak amikor még nem volt idejük kézzelfogható károkat okozni a szervezetben, azaz korai diagnózis figyelmeztet a közelgő fejleményekre kóros folyamat, amely lehetővé teszi a felkészülést és a teljes fegyverzetbe vételt.

Ezen túlmenően a diagnosztika során időnként felmerülő félreértések elkerülése érdekében a PCR azzal is védekezik, hogy eredményei rögzíthetők (fénykép, számítógép), hogy azokat szükség esetén szakértői célra felhasználhassák.

A PCR-válaszok normáját negatív eredménynek tekintik., amely az idegen nukleinsavak töredékeinek hiányát jelzi, a pozitív válasz fertőzés jelenlétét jelzi a szervezetben, a digitális értékek a vírus állapotát és koncentrációját jelzik a vizsgálat időpontjában. Az elemzés teljes átiratát azonban olyan orvos végzi, aki speciális képzésen esett át a "PCR" témában. Nincs értelme annak, hogy saját maga próbálja értelmezni az eredményeket, mivel lehetséges, hogy ez valószínűleg megtörténik, hogy félreérti és előre aggódik.

Mitől fél a PCR, mire képes, és hogyan lehet rá felkészülni?

Mint minden más tanulmánynál, néha a teszteredmények hamis pozitívak vagy hamis negatívak ahol a PCR sem kivétel. Ez a következő esetekben fordulhat elő:

1. Szabálysértések technológiai folyamat a reakció egyik szakaszában;
2. Az anyaggyűjtésre, tárolására vagy szállítására vonatkozó szabályok be nem tartása;
3. Idegen szennyeződések jelenléte az anyagban.

Ez arra utal, hogy a PCR-t - a fertőzések diagnosztizálását körültekintően, körültekintően és pontosan kell megközelíteni, ellenkező esetben az anyagminták szerkezeti felépítését megváltoztathatják, vagy akár össze is omolhatnak.

A PCR diagnosztika szakaszai. A hamis eredmények a vizsgálat bármely szakaszában megsérthetik

A fertőzések PCR diagnosztikája többek között az "arany standardok" kategóriájába tartozik laboratóriumi módszerek, így számos olyan betegség kórokozója után kutatható, amelyeknek első ránézésre semmi közük egymáshoz:

• Tuberkulózis eltérő lokalizáció, tüdőgyulladás (beleértve az atipikus, chlamydia által okozott);
• Gyermekkori fertőzések ( kanyaró rubeola, mumpsz, kanyaró);
• diftéria;
• szalmonellózis;
• zoonózis fertőző betegség- listeriosis (a betegséget a nyirokcsomók, a központi idegrendszer és a belső szervek károsodásával járó különféle tünetek jellemzik);
• Az Epstein-Barr vírus behatolása által okozott betegségek (fertőző mononukleózis stb.);
• Papillomavírus fertőzés által kiváltott onkológiai patológia (HPV és típusai);
• Borreliosis (Lyme-kór, kullancs-encephalitis);
• Helicobacter pylori fertőzés, melynek kórokozója az emberi gyomorban élő mikroba Helicobacter pylori. Bebizonyosodott, hogy a Helicobacter gyomor- vagy nyombélrák kialakulását okozza;
• és gyakorlatilag minden.

A nemi úton terjedő fertőzések PCR diagnosztikája különösen fontos, mivel az így előidézett betegségek gyakran hosszú idő klinikai megnyilvánulások nélkül fordulnak elő, de a terhesség alatt kezdenek aktívabbá válni, és ezáltal veszélyeztetik a gyermek egészségét, sőt életét. És viselkedj hasonlóan. Némelyikük ("fáklya") egyidejűleg kapcsolódik az STI-khoz, így az utóbbiak részletesebb megfontolást igényelnek. A legnépszerűbb módszerekkel ben ismerkedhet meg az olvasó következő szakaszokat cikkeket.

Hogyan kell megfelelően felkészülni a megbízható eredmény érdekében?

Azonnal megjegyezzük, hogy a PCR előkészítése meglehetősen egyszerű, nem igényel különösebb erőfeszítést a páciens részéről. Csak három egyszerű feladatot kell végrehajtania:

1. A teszt elvégzése előtt 24 órával ne éljen együtt;
2. A vénából származó vér felvételéhez és elemzéséhez éhgyomorra kell jönnie, mellesleg nem ihat sem;
3. A vizeletet éjszaka kell átadni (reggel - a gyógyszertárban előző nap vásárolt steril edényben).

A PCR bármilyen biológiai környezetben működhet

A PCR módszer nem „vérszomjas”, ezért bármilyen fertőző ágenst tartalmazó biológiai környezetet elfogad. a választás - mit kell venni a kutatáshoz, az az orvosnál marad.

Így a kórokozó keresése során a vérvizsgálaton kívül (bár az is megfelelő és a legtöbb esetben más anyaggal párhuzamosan is) használhatja:

• (az urogenitális traktus ürítése);
• Nyálkakaparás szájüreg, kötőhártya, nasopharynx, genitális traktus (nőknél a méhnyakból és a hüvelyből, férfiaknál a húgycsőből veszik ki);
• nyál;
• sperma;
• prosztatalé;
• A placenta szövetei és a magzatvíz (magzatvíz);
• Vizelet üledék (centrifugálás után), például bizonyos STI-k és Mycobacterium tuberculosis kimutatására;
• Köpet és pleurális folyadék ugyanarra a célra;
• váladékok;
• cerebrospinális folyadék gyanúja esetén fertőzés CNS;
• A májból, nyombélből, gyomorból stb. vett biopsziás anyag (biopszia).

Hozzáteszem a fentiekhez, hogy minden esetben, még kaparékban, váladékban is lesz elegendő anyag a vizsgálathoz, hiszen a PCR vizsgálat nem igényel nagy mennyiséget, elég néhány mikroliter az elemzéshez, amit általában egy Eppendorf típusú mikrocsövet és tanulmányozásra küldték.

Betegségek és a PCR alkalmazása

A HIV és a polimeráz láncreakció

Általában, amikor az immunoblot pozitív eredménye névtelen vizsgálaton megy át, a diagnózist újra megismétlik. Ha a diagnózis megerősítést nyer, a beteg további vizsgálatokat ír elő:

1. Immunológiai reakciók segítségével meghatározzuk azon CD 4 limfociták (immunkompetens sejtek - T-helperek vagy helperek) abszolút értékét, amelyeket a fertőzés először megfertőz, majd elveszítik alapvető tulajdonságaikat, és nem tudnak különbséget tenni saját” és „idegen”. Elviszik a vérplazmában keringő vírus RNS-ét a szervezet normál sejtjeihez, és nem reagálnak rájuk;
2. A vírus RNS kimutatása PCR-rel és a vírusrészecskék koncentrációjának kiszámítása a kóros folyamat stádiumának, súlyosságának és prognózisának megállapítása érdekében ezen adatok alapján. Természetesen a „norma” szó ebben a vonatkozásban nem létezik, mivel a reakció mindig pozitív, a digitális értékek dekódolása pedig az orvos hatáskörébe tartozik.

PCR és hepatitis

A PCR módszerrel kimutathatók a kórokozók, leggyakrabban a tesztet a más módszerekkel rosszul kimutatható hepatitis C diagnosztizálására használják.

A hepatitis C vírus (RNS-tartalmú) viselkedésében az emberi szervezetben hasonlít a HIV-re. Beékelődve a májsejtek (hepatociták) genomjába, ott várakozik a szárnyakban, ami legalább 2 év múlva, de legalább 20 év múlva megérkezhet, ezért az orvosok "szelíd gyilkosnak" nevezték. A hepatitis C rosszindulatú folyamat kialakulásához vezet a máj parenchymában, amely késői szakaszok. Mindezek az események az immunrendszert nem veszi észre, összetéveszti a vírust hepatocitával. Igaz, bizonyos mennyiségben a vírus elleni antitestek termelődnek, de nem adnak megfelelő immunválaszt. A hepatitis C diagnosztizálására az ELISA nem túl informatív, mivel azt jelzi, hogy a vírus nyomokat hagyott maga után, és nem tudni, hogy elhagyta-e magát. A HCV esetében ismertek az öngyógyító esetek, miközben a vírus elleni antitestek megmaradnak és keringenek egy életen át (immunológiai memória). A PCR észrevehetően megelőzi az antitestek képződését, és már 1-1,5 héten belül képes kimutatni a vírusrészecskét, míg az antitestek 2 hónap és hat hónap közötti tartományban jelenhetnek meg

PCR diagnosztika az emberi szervezetben burjánzó hepatitis C vírus gyanúja esetén a legtöbb legjobb módszer kutatás, mert csak ő képes felismerni a "szelíd ellenség" jelenlétét a páciens vérében vagy májbiopsziájában.

Néha azonban vannak olyan esetek, amikor az AT pozitív, és a PCR eredménye negatív. Ez néha megtörténik, amikor a vírus mennyisége nagyon alacsony, vagy amikor a májban alvó állapotban van, anélkül, hogy felszabadulna véráram. Annak érdekében, hogy mégis megtalálják az igazságot, a pácienst újra elemzik, vagy akár többször is.

Papillomavírus fertőzés

Ha az öngyógyulás nem következik be, az is, anélkül, hogy megnyilvánulna, hosszú ideig fennmaradhat a gazdaszervezetben, ami nem is sejti, mivel PCR nem történt, és a betegség tünetei sem voltak. A papillomavírus-fertőzés jelenléte azonban, bár látens, korántsem közömbös az emberi egészség szempontjából, ahol bizonyos típusú vírusok onkológiai betegségek(16., 18. típus).

Gyakrabban a lakosság női fele szenved HPV-től, mivel a vírus jobban szereti a nőstényeket genitális terület, és különösen a méhnyak, ahol bizonyos típusú vírusok hozzájárulnak a diszpláziás folyamatok kialakulásához, majd a méhnyakrák kialakulásához, ha a diszpláziát nem kezelik és a vírus felszabadul. Tehát a polimeráz láncreakció kimutatja a vírus DNS-ét, majd jelzi a nő szervezetében megtelepedett „rossz” vagy „jó” (onkogén vagy nem onkogén) típust.

Egyéb STI-k és TORCH-fertőzések

Nyilvánvaló, hogy a polimeráz láncreakció bármilyen idegen nukleinsavból álló szerkezetet találhat, így ez a teszt minden STD és TORCH fertőzés kimutatására alkalmas, azonban nem mindig alkalmazzák. Miért kell mondjuk ilyen drága kutatásokat végezni a gonococcus kimutatására, ha vannak megfizethetőbbek és olcsóbbak?

A TORCH fertőzések és az STI-k annyira összefüggenek egymással, hogy néha nehéz meghatározni, hogy egy adott kórokozót melyik csoportba kell besorolni. Általában nehéz lehet megérteni őket, mivel ezek meglehetősen változatos mikroorganizmuscsoportok, amelyek mindig vagy csak akkor terjedhetnek szexuális úton. bizonyos feltételek(immunhiány), és csak terhesség alatt lehet érdekes, az esetleges negatív hatás lefolyásán és a magzaton.

A látens fertőzések kimutatásának fő módszere a PCR

A klinikai megnyilvánulások kialakulásának alapja a különböző kórokozók, melyeket csak PCR-rel lehet megtalálni, ami annak fő feladata, esetenként ELISA-val együtt, hol pedig mint az egyetlen megerősítő vizsgálat, különösen, ha nincsenek a betegség tünetei. Ilyen nehéz helyzet polimikrobiális fertőzést hozhat létre, amely a nyilvánvaló kórokozók mellett opportunista kórokozókat is tartalmaz.

Az ureaplazma gyakran a mikoplazmával párhuzamosan fordul elő.És ez nem véletlen. Ezek a fajok, akárcsak a chlamydia, sem nem vírusok, sem nem baktériumok, a sejtek belsejében élnek és az STI-k közé tartoznak, bár jelenlétük egészséges test szintén nem ritka. Tehát az egészséges hordozó és a beteg ember megkülönböztetéséhez speciális módszerekre van szükség, ahol a PCR-t tartják a legmegbízhatóbbnak, mivel e mikroorganizmusok szerkezetének és viselkedésének sajátosságai miatt más vizsgálatok nem hatékonyak.

Ami az (1., 2. típusú) és a szintén a herpeszvírusokhoz tartozó (5. típusú) vírusokat illeti, itt is kétértelmű a helyzet. A világ népességének fertőzöttsége megközelíti a 100%-ot, ezért ebben az esetben nagyon fontos a vírus azonosítása és annak dózisa, ami különösen fontos a terhesség alatt, mert egy felnőtt számára a vírus, amely gyökeret vert test gyakran nem okoz gondot, és nem ad jeleket a betegség.

Ezért az orvos által felírt ilyen vizsgálatot nem szabad figyelmen kívül hagyni, mert bizonyos esetekben a polimeráz láncreakció kötelező, ill. szükséges módszer ellen védekezni képes laboratóriumi diagnosztika súlyos szövődmények nemcsak nő, hanem kicsi, még meg sem született kisember is.

Végezetül szeretném megjegyezni, hogy egy ilyen csodálatos módszer, mint a PCR, több mint 30 éve szolgálja az emberiséget. A vizsgálat feladatai ugyanakkor nem korlátozódnak a fertőző betegségek kórokozóinak felkutatására. A molekuláris biológia talaján megszületett polimeráz láncreakció elválaszthatatlanul összefügg a genetikával, sikeresen alkalmazzák a törvényszéki személyazonosításra, az igazságügyi orvostanban az apaság megállapítására, az állatorvoslásban, ha az állatklinikának lehetősége van drága berendezések beszerzésére, valamint egyéb területeken (ipar, Mezőgazdaság stb.).

Videó: PCR - lényeg és alkalmazás

A rendkívül informatív PCR módszer (polimeráz láncreakció) lehetővé teszi korai észlelés különféle genetikai és fertőző betegségek, amelyek akut vagy krónikusan fordulnak elő. Ezenkívül még abban a szakaszban is azonosíthatók, amikor semmilyen tünetet nem mutatnak. Leggyakrabban arra PCR elemzés szexuális úton terjedő fertőzések (STD-k, STI-k) kimutatására használják.

A PCR analízis olyan molekuláris diagnosztikai módszerre vonatkozik, amely a kórokozó nukleinsav (DNS) bizonyos fragmentumai kis koncentrációjának többszörös növelésén alapul bármilyen biológiai anyagban (méhnyakból, hüvelyből, húgycsőből, vérből, nyálból, köpet stb.), és összehasonlítja DNS-ét vagy RNS-ét egy adatbázissal ismert fajok fertőző ágensek.

A technikát az amerikai Carrie Mullis fejlesztette ki a múlt század 80-as éveiben. 1993-ban a tudós díjazott lett Nóbel díj a kémia területén. Ma a PCR-vizsgálat egyfajta "arany standardnak" számít a fertőzések túlnyomó többségének diagnosztizálására. A PCR elemzést széles körben használják az orvosi gyakorlatban a betegség természetének és stádiumának tisztázására pontos diagnózis. Nagyon gyakran vannak olyan esetek, amikor az összes ismert immunológiai, virológiai és bakteriológiai módszer nem működik. Ezután PCR lesz az egyetlen módja, amely segítségével azonosítható a betegség aktív stádiuma.

A PCR diagnosztika előnyei más módszerekkel szemben

A PCR technika talált széles körű alkalmazás a modern orvoslásban számos vitathatatlan előnye miatt. Beszéljünk róluk részletesebben.

A kórokozó jelenlétének közvetlen kimutatása

Sok a hagyományos diagnosztikai módszerek markerek meghatározásán alapulnak - fehérjék, amelyek a kórokozó salakanyagai. Egy ilyen diagnosztikai elv csak közvetett módon erősítheti meg a patológiát. A PCR módszer biztosítja közvetlen meghatározás kórokozó, mivel a kórokozó szervezetek DNS-ének meghatározott szakaszait azonosítja.

Magas specifitás

A PCR technika rendkívül specifikus, mivel lehetővé teszi olyan DNS-fragmensek kimutatását, amelyek csak egy adott fertőző ágensre jellemzőek. Immunológiai módszerek alkalmazásakor továbbra is lehetséges hamis eredményt kapni (a diagnózis tévedései a keresztreagáló antigénekkel járnak). Ami a PCR-t illeti, itt a hibák kizártak, mivel a specificitást ebben az esetben a primerek nukleotidszekvenciája határozza meg.

Magas érzékenység

Ezzel a módszerrel még az egyes kórokozókat is meghatározzák. A fertőző ágenseket akkor is kimutatják az emberi szervezetben, ha más diagnosztikai módszerek nem tisztázzák a helyzetet (különféle immunológiai mikroszkópos és bakteriológiai kutatási módszerekről beszélünk).

Összehasonlításképpen közöljük az adatokat. A mikroszkópos és immunológiai módszerek érzékenysége 103-105 sejt, a PCR érzékenysége 10-100 sejt mintánként.

A módszer egyetemessége

A PCR technika a patogén organizmusok DNS-ének vizsgálatán alapul. A vizsgálat során meghatározzák az RNS- vagy DNS-fragmenseket, amelyek specifikusak specifikus fertőző ágensekre. Mivel minden nukleinsavnak hasonló kémiai összetétel, nál nél laboratóriumi elemzés egységes módszerek alkalmazhatók. Ez azt jelenti, hogy egy minta vizsgálata több kórokozó azonosítását teszi lehetővé egyszerre.

Gyors eredmények

Ez a technika nem igényli a kórokozók kultúrájának termesztését, ami meglehetősen sok időt vesz igénybe. Az anyag feldolgozására és a reakciótermékek azonosítására szolgáló egységes technológia alkalmazásának, valamint az automatizált amplifikációs folyamatnak köszönhetően a teljes kutatási folyamat mindössze néhány órát vesz igénybe.

A látens fertőzések kimutatásának képessége

A PCR technika lehetővé teszi a preklinikai diagnosztika (kórokozók kimutatása a tünetek megjelenése előtt) és retrospektív diagnosztika (kórokozók kimutatása a tünetek megjelenése előtt) hatékony elvégzését. múltbeli betegség). Tehát a preklinikai diagnózis megvan nagyon fontos lappangási időszakban lévő beteg vizsgálatakor lehetséges betegség- az állítólagos fertőzés után az első jelek megjelenése előtt.

A PCR egyik fontos előnye, hogy biológiai maradványokat vagy archív anyagokat is felhasználhatunk az elemzéshez. Ez lehetővé teszi az apaság és a személyiség azonosítását.

A mai napig a PCR diagnosztikai módszerek tovább fejlődnek. Magát az elemzési technológiát fejlesztik, és újak is típusú PCR. NÁL NÉL orvosi gyakorlat innovatív tesztrendszereket vezetnek be erre a reakcióra. Ennek köszönhetően gyors fejlődés tudomány, az eljárás költsége csökken, és most PCR vizsgálat számos betegcsoportra alkalmazható.

Ez a diagnosztikai módszer egy adott RNS- vagy DNS-szakasz többszöri megkettőzésén alapul. Ezt a folyamatot a laboratóriumban speciális enzimek segítségével végzik. Ennek eredményeként annyi DNS (RNS) szakasz képződik, amennyi a vizuális vizsgálathoz szükséges. Az eljárás során csak a meghatározott feltételeknek megfelelő terület másolása történik meg (ha a vizsgált mintában jelen van).

A biológiai anyagot, amelyet meg kell vizsgálni a kórokozók DNS-ének vagy RNS-ének jelenlétére, egy erősítőbe helyezik. (Az adott helyzettől függően a nemi szervekből ürített vért, vizeletet, nyálat vesznek elemzésre). Ezután speciális enzimeket adnak a mintákhoz. RNS-hez vagy DNS-hez kötődnek patogén mikrobák, és elindul a másolási szintézis. A másolás többlépcsős folyamat, amely láncreakcióként megy végbe. Ennek eredményeként több száz vagy akár több ezer példány is megjelenhet.

A diagnosztika következő szakaszában az eredményeket elemzik és összehasonlítják a fertőző ágensek adatbázisával.

A PCR technika nemcsak a típus meghatározását teszi lehetővé kórokozó szervezet, hanem következtetéseket vonhatunk le az emberi szervezetben lévő fertőző ágensek számáról is.
Ma már megnyílik az ilyen technológiák használata széles lehetőségeket mutációk, DNS szakaszok splicing vizsgálatában. A modern orvostudományban a módszert az apaság meghatározására, az új gének azonosítására és még sok másra kezdték alkalmazni.

Sokoldalúságának köszönhetően a PCR módszer széles körben alkalmazható az urológiában, nőgyógyászatban, pulmonológiában, onkológiában, hematológiában, ftiziológiában, fertőző betegségek gyakorlatában és az orvostudomány más területein.

Anyag a PCR elemzéshez

A PCR diagnosztikához különféle biológiai közegeket, emberi szervezetből vett folyadékokat használnak: köpet, nyálka, nyál, vizelet, vér, hámsejtek, méhlepény szövetek, pleurális folyadék, magzatvíz, prosztatalé stb.

Az STD-k (STI-k) diagnosztizálása során elemzik a férfi és női nemi szervek váladékait. Ehhez kenetet vagy kaparást kell végezni a húgycsőből vagy a méhnyakból. A vizeletet kutatásra is használják.

A fertőzések (herpesz, mononukleózis, CMVI, toxoplazmózis, HIV, hepatitis B és C) kimutatására vért vesznek elemzésre. Sérülés gyanúja esetén idegrendszer kerítést készíteni gerincvelői folyadék.

Pulmonológiai vizsgálatokhoz pleurális folyadékot és köpetet használnak.

Azonosítani méhen belüli fertőzések A placenta szöveteit és a magzatvizet elemzik.

PCR STI-k és egyéb fertőzések esetén

Milyen fertőzések mutathatók ki PCR elemzéssel

HIV fertőzés (humán immunhiány vírus HIV-1 kimutatható).

Vírusos hepatitis A, B, C, G (RNS-HAV, DNA-HBV, RNS-HCV, RNS-HGV).

STI-k (szexuális úton terjedő fertőzések) - ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis.

Fertőző mononukleózis (az Epstein-Barr vírus DNS-e - EBV).

Citomegalovírus fertőzés (DNS-CMV).

Herpesz fertőzés (DNS vírus) herpes simplex HSV 1. és 2. típus).

Tuberkulózis (mycobacterium tuberculosis).

Onkogén vírusok - papillomavírus fertőzés (humán papillomavírus (beleértve annak onkogén fajait: 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 és 59).

Borreliosis, kullancsencephalitis.

Listeriosis.

Candidiasis (a Candida nemzetségbe tartozó gombák).

Helicobacter pylori fertőzés
és mások.

PCR elemzés elkészítése és benyújtása

A PCR-diagnosztikához anyagot benyújtó betegek gyors és pontos eredményt várnak. Ennek során figyelembe kell venni fontos pont- a diagnosztika megbízhatósága nem csak a szakemberek professzionalizmusától és az orvosi laboratórium képességeitől függ. Annak érdekében, hogy a vizsgálat informatív legyen, magának a páciensnek kell erőfeszítést tennie. Tehát szigorúan be kell tartani az orvos összes ajánlását, és gondosan követni kell az anyaggyűjtésre való felkészülés szabályait. Nagyon fontos a biológiai minták szennyeződésének megelőzése, ellenkező esetben a vizsgálat eredményei torzulnak.

Előkészítés a PCR analízishez

Az eljárásra való felkészülés nem jár különösebb nehézségekkel. Csak emlékezzen néhány szabályra:

A PCR-elemzéshez a vért éhgyomorra veszik. A vért általában reggel steril tűvel veszik a vénából egy speciális edénybe.

Az anyag mintavétele előtti napon szexuális absztinencia mutatkozik, amikor PCR-kenetet vesznek STI-k miatt.

A vizelet PCR-elemzéséhez az első adagot veszik, a tartálynak sterilnek kell lennie.

Hogyan készítsünk PCR-elemzést férfiaknál és nőknél

A PCR-elemzést férfiaktól és nőktől veszik oltószoba, ez vénából vett vér, nyál, garatból vett tampon, mandulák, orrgaratból vett tamponok stb. A gyűjtés módja nem különbözik.

Az STI-k PCR-jét átadják terhességi klinika nál nél nőgyógyászati ​​vizsgálat nőknél ezek a hüvelyből, méhnyakból, húgycsőből származó kenetek. Férfiaknál az andrológusnál vagy venereológusnál tett látogatás során ez a húgycsőből származó kenet.

A PCR-hez szükséges anyagminta sémái

Mennyi ideig tart a PCR

A betegeknek nem kell sokat várniuk a PCR vizsgálat eredményére. A teljes elemzési eljárás általában több órától (valós idejű PCR) 2-10 napig tart. Általános szabály, hogy a páciens 2-5 napon belül megkapja az elemzés eredményét, legfeljebb 10 napon belül, az elemzés típusától függően. A leghosszabb idő a HIV és a hepatitis PCR vérdiagnosztikája, a legrövidebb a kenet és a kaparás - 2-3 nap.

A negatív eredmény erre utal Ebben a pillanatban fertőző ágensek nyomai nem mutathatók ki a biológiai anyagban. Azaz a fertőzés, amelyre a vizsgálatot elvégezték, hiányzik.

A pozitív eredmény a kórokozó nyomainak kimutatását jelzi a biológiai mintákban. Ez azt jelenti, hogy be rendelkezésre álló idő fertőzés van az emberi szervezetben.
Vannak esetek, amikor a PCR pozitív eredményt ad, de aktív fertőző folyamat nem látható. Ez körülbelül az "egészséges kocsi"-nak nevezett jelenségről. Az ilyen betegek kezelése nem szükséges, de állandó dinamikus felügyelet alatt kell lenniük. Az ilyen helyzetek jellemzőek vírusos fertőzések: Epstein-Barr vírus(EBV), genitális herpesz, citomegalovírus fertőzés (CMVI), humán papillomavírus (HPV), melyben helyi gócokból (húgycső, nyaki csatorna, nyálkaparás) vesznek mintát kutatás céljából. Ugyanakkor nem szabad megfeledkeznünk arról, hogy az egészséges hordozó átadhatja a fertőzést másoknak. Ezenkívül nem kizárt a fertőző folyamat aktiválása. Azokban az esetekben, amikor a PCR pozitív eredményt ad a vérvizsgálat során, ez már nem tekinthető hordozónak. Az ilyen betegeknek szüksége van specifikus kezelés a kimutatott kórokozó által okozott betegség.

A mennyiségi mutatók nem rendelkeznek általános fokozatokkal. Ezeket az orvos minden egyes fertőzésre egyedileg értékeli. A kvantitatív eredmény lehetővé teszi a fertőzés aktivitásának meghatározását és a folyamat szakaszának meghatározását.

A PCR módszer megbízhatósága

A módszertan hatékonyságának értékeléséhez három kritériumot kell figyelembe venni:

- Pontosság- fertőzés (vagy hiánya) nagy valószínűséggel történő kimutatása.

- Specifikusság– egy adott kórokozó meghatározásának pontossága.

- Érzékenység– a kórokozó azonosításának lehetősége még kis mennyiségű genetikai anyaggal is a biológiai mintákban.

A PCR módszer alkalmazásakor szinte lehetetlen hamis pozitív eredményt elérni (vagyis ha a kórokozó hiányzik, akkor pozitív teszt nem fog).

Lehetséges hamis negatív eredmény, de ez meglehetősen ritkán fordul elő. Hasonló helyzetek akkor fordulhat elő, ha a fertőzés a vizsgálat időpontjában inaktív. Például, krónikus fertőzés inaktív vagy látens fertőzés.

PCR elemzés: videó

A PCR-elemzésről először 1983-ban került sor. Ezt a technikát Cary Mullis és laboratóriumi munkatársai fejlesztették ki. Azóta a tanulmány népszerűsége folyamatosan nőtt, mert. Számos előnnyel rendelkezik más módszerekkel szemben.

A mai napig a PCR-diagnosztika a mérce vagy szabvány a fertőzések és kórokozók kimutatásában, különösen a tünetmenteseknél. Először is ez a preklinikai diagnosztika.

Analízis elvégzése PCR gépben

A PCR analízis lényege abban rejlik, hogy a kémcsőben klónoznak (megsokszorozzák) a nukleinsavak (DNS vagy RNS) szekvenciáit, amelyek jellemzőek egy bizonyos fajta kórokozók.

A PCR rövidítés a polimeráz láncreakciót jelenti.

itthon megkülönböztető vonás ennek a módszernek az erősítése, azaz. a kívánt gén vagy fragmentum hatalmas számú másolatának létrehozása. Mindez a testen kívül termelődik, azaz. in vitro.

Tehát, ha 20 PCR-ciklust végzünk, akkor körülbelül 1 millió vagy több másolatot kapunk. Ez lehetővé teszi a fertőzés kimutatását kis mennyiségű forrásanyag esetén is, amikor más elemzési módszerek tehetetlenek. Ez határozza meg ennek a módszernek a nagy érzékenységét.

Egyszerű szavakkal, rajzolhat egy ilyen analógiát - nem fog észrevenni egy kis homokszemet a padlón, de a homokszemek számának milliószoros növelése után (PCR) egy homokhalom már jól látható lesz. .

A fertőzések PCR-módszerrel történő elemzésének fő előnyei a következők:

• legmagasabb érzékenységés specifitás a fertőző ágensek kimutatására használt egyéb módszerekkel összehasonlítva;
• a mikroorganizmusok kimutatásának képessége különféle biológiai anyagokban (vér, vizelet, hüvelyváladék, nyál stb.);
• több okozó mikroorganizmus egyidejű azonosításának képessége, ha vannak ilyenek. Összehasonlításképpen a bakteriológiai módszerek alkalmazása nem ad ilyen lehetőséget, mert. különböző kórokozó mikrobák tenyésztéséhez különböző táptalajokat kell használni;
• biológiai anyag szállításának lehetősége, mert a kórokozó azonosításához nem szükséges életben tartani;
• elemzési sebesség;
• az etiológiai diagnózis pontossága;
• a kórokozók mennyiségi meghatározásának lehetősége - különösen releváns feltételesen patogén mikrobák, amely csak egy bizonyos koncentráció elérése után okozhat betegséget;
• a fertőző folyamat lefolyásának szabályozása a kezelés során.

PCR elemzés fertőzések kimutatására

Jelenleg a polimeráz láncreakciós módszer határozza meg a szexuális (és egyéb) fertőző betegségek többségét. A diagnosztika széles körben elterjedt annak köszönhetően nagy érzékenységés a specifikusság.

A chlamydia PCR-analízise különösen népszerű.

Ez annak a ténynek köszönhető, hogy ezek a mikroorganizmusok intracellulárisan élnek, ami bizonyos nehézségeket okoz kimutatásukban.

A PCR-diagnosztika lehetővé teszi a chlamydia minimális mennyiségének kimutatását is, amely általában még nem vezet a megjelenéshez klinikai tünetek. Már az is, hogy a vizsgált anyagban csak 2 nukleinsavmolekula van jelen, lehetővé teszi a kiváltó fertőzés azonosítását.

És ez egy zálog sikeres kezelés, amely a preklinikai szakaszban kezdődik.

A fertőzéseket is azonosítják:

• vírusos hepatitisz;
• tuberkulózis;
• kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás;
• különféle nemi betegségek stb.

A PCR diagnosztika számos más fontos feladat megoldását is lehetővé teszi:

• a terápia figyelemmel kísérése és hatékonyságának értékelése;
• a „vírusterhelés” meghatározása, amely alapján a gyógyszer dózisának egyéni kiválasztása történik;
• farmakológiailag rezisztens (gyógyszerekkel szembeni érzéketlenség) mikroorganizmus törzsek azonosítása.

Felkészülés az elemzés leadására

Nem szükséges a PCR-rel végzett elemzés célzott előkészítése. Nagyon fontos azonban, hogy a szakember mindennek megfelelően vegye át az anyagot szükséges feltételeket sterilitás.

Tehát például speciális vákuumrendszerekkel kell vért venni, speciális kémcsöveket kell használni a nemi szervek titkának vételére stb.

Bizonyos esetekben az anyagot a laboratóriumba kell szállítani. Ennek helyes végrehajtásához a tartályt hermetikusan le kell zárni biológiai anyag. Ez megakadályozza a külső környezetben élő más mikroorganizmusok behatolását.

A PCR-elemzés eredménye kétféle lehet:

• pozitív - kórokozó észlelve;
• negatív - a kórokozót nem észlelték.

Tudnia kell – távollétében is klinikai tünetek pozitív eredmény érhető el.

Ebben az esetben az adatokra kell összpontosítani polimeráz reakció, mert lehetővé teszi a betegség azonosítását a preklinikai szakaszban.

Néha kétséges választ kaphatunk, ha az azonosított példányok száma megfelel a norma felső határának. A betegség okának tisztázása érdekében meg kell ismételni az elemzést, megadva Speciális figyelem a biológiai anyag gyűjtésének feltételei.

Mennyire pontos a PCR diagnosztika?

A PCR-diagnosztika fő előnyei több tézis formájában is megfogalmazhatók:

• a kórokozó mikroorganizmusok hatalmas számú másolatának megszerzésének lehetősége;
• a nagy számú másolat a sikeres szekvenálás (észlelés) kulcsa.

Ez nagy pontosságú PCR-elemzést biztosít az intracelluláris kórokozók és a lassan növekvő mikroorganizmusok kimutatására.

Ezért a módszer különösen informatív a mycobacterium tuberculosis és más hasonló fertőző ágensek kimutatására. Ennek a legnagyobb a pontossága, és nem kell újra ellenőriznie a kapott eredményeket (kivéve a véletlenszerű eseteket).

A legtöbbet kihozni megbízható eredményeket két fő feltételnek kell teljesülnie az exogén (külső) fertőzés megelőzésére:

• helyes anyagbevitel;
• helyes szállítás.

Az egyik ultraprecíz modern orvosi kutatás a vérplazmában lévő molekuláris genetikai kapcsolatok vizsgálatán alapul a PCR (PCR) - polimeráz láncreakció elemzése. A PCR-módszer lehetővé teszi a páciens szervezetében a fertőzések és vírusok által okozott, vagy a betegséggel összefüggő bizonyos betegségek kimutatását. genetikai betegségekörökölt. A PCR elemzés segít azonosítani azokat a betegségeket, amelyek mind akut, mind krónikus, tünetmentes stádiumban fordulnak elő. Egy ilyen vizsgálat nagyon fontos a betegségek kialakulásának megelőzése szempontjából: a betegség kialakulásának legelején észlelve a betegség mindaddig gyógyítható, amíg az el nem kezdi tönkretenni a beteg szervezetét, vagy minimálisra csökkenti annak következményeit.

Ma a PCR-diagnosztika az "arany standard" a fertőző betegségek többségének meghatározásában. Minden klinikán vagy laboratóriumban naponta végeznek ilyen vizsgálatot, eredményei számos diagnózis alapját képezik, és bizonyos esetekben a polimeráz láncreakció adatainak dekódolása az alapja egy adott betegség meghatározásának.

A PCR módszer gyakran segít az orvosoknak olyan esetekben, amikor más vizsgálatok és diagnosztika tehetetlen, vagy amiatt korai fázis a betegség kialakulása nem tudja meghatározni a patogén mikroflóra jelenlétét a páciens testében. A PCR módszerrel történő diagnózis több pontos elemzés mint bármely más, az emberi szervezetben előforduló baktériumok, vírusok és immunrendszeri rendellenességek vizsgálatával kapcsolatos módszerek.

A PCR módszer előnyei közé tartozik a nagy pontosság – a DNS vagy RNS egy szakaszának vizsgálata során 100%-ban kimutatja a patogén mikroflórát, amely okozhat súlyos betegség. Ennek a módszernek nincs hamis pozitív eredménye - nagy specifitása van, amely lehetővé teszi a lánc egy meghatározott szakaszának azonosítását a DNS és az RNS szerkezetében, amely a betegség specifikus kórokozóját tartalmazza. Ráadásul a PCR-vizsgálat annyira érzékeny, hogy több milliárd sejt közül képes azonosítani egy vírussal fertőzöttet, és pontosan azonosítani a vírust és a kórokozóját is. Más jól ismert vizsgálatokkal összehasonlítva, amelyek érzékenysége nem haladja meg a 100-105 sejtet a vizsgálat során vett mintában, a PCR diagnosztika 10-1000 sejt vizsgálatát teszi lehetővé.

Nem magát a szérumot vagy plazmát vizsgálják, hanem a dezoxiribonukleinsavakat vagy ribonukleinsavakat (DNS és RNS), vagyis azoknak a baktériumoknak és vírusoknak a genetikai anyagát, amelyek a páciens szervezetében jelen vannak, és betegségek kialakulását provokálhatják. Minden vírusnak megvan a sajátja egyedi módszer kimutatását, ezért a vizsgálat eredménye mindig pontos.

Egy vizsgálat során egy vagy több káros mikroorganizmus kimutatható.

A PCR diagnózisa más bakteriológiai és immunológiai vizsgálatokkal ellentétben nagyon gyorsan történik. Ha egy-tíz napig tart a t-nál kevesebb elvégzése, akkor a PCR-vizsgálatot 5-7 órán belül elvégzik.

Elég gyakran PCR-kenetet végeznek preklinikai vagy retrospektív vizsgálatként. Az első módszer a potenciálisan veszélyes patogén mikroorganizmusok azonosítása, amelyek már megkezdték pusztító tevékenységüket a szervezetben, de a betegségek még mindig nem jelentkeznek. A második vizsgálat a vírusok és fertőzések kimutatása a kezelés után, amikor az adatok szerint standard elemzések, a beteg egészségesnek számít, a betegségnek nincsenek tünetei, de egyes sejtekben még előfordulhatnak veszélyes kórokozók. Ezek az egyedülálló diagnosztikai képességek lehetővé teszik annak meghatározását fertőző betegségek lappangási időszakban, amikor éppen bekerült az emberi szervezetbe, de nem volt közérzetromlás, valamint rejtett áramlat betegség, ha a beteg egészségesnek érzi magát, de a vírus jelen van a szervezetben, bár nem érezteti magát.

A PCR-diagnosztikát nemcsak vírusok és baktériumok azonosítására használják, hanem egy személy azonosítására is DNS-fragmensek alapján, valamint a rokonság meghatározására (apaság, anyaság stb.).

Az elmúlt évtizedekben a PCR-diagnosztika, az orvostudomány és a tudomány más ágaihoz hasonlóan, messze előrelépett. Mára a bioanyag-kutatás folyamatában használt berendezéseket továbbfejlesztették, új típusú polimeráz láncreakciók jelentek meg, új tesztrendszerek jelentek meg, amelyek csökkentik az elemzés költségeit és növelik annak pontosságát. Ennek köszönhetően a PCR-elemzés a lakosság számára is elérhetőbbé vált, és ezerszeresére nőtt azoknak a száma, akiknek életét a PCR módszerrel történő korai betegségek diagnosztizálása mentette meg.

Mi ennek a tanulmánynak az alapja

Ami megengedi ez a tanulmány ennyire pontos? Ez amplifikáció, azaz a dezoxiribonukleinsav vagy ribonukleinsav lánc egy részének ismételt megkettőzése, amelyhez speciális enzimeket és berendezéseket használnak. A DNS vagy RNS egy részének több százszoros nagyításával lehetővé válik azok vizuális tanulmányozása.

A lánc egyik vagy másik szakaszának növelése és tanulmányozása előtt azonban a szerkezet előzetes vizsgálaton esik át a potenciálisan vírus által érintett területek jelenlétére vonatkozóan. Ha ilyen régiókat találunk, azokat amplifikációnak vetjük alá.

A diagnosztika a következőképpen történik. Először a szervezetben lévő biológiai folyadékot vesznek ki a páciensből elemzés céljából. Ez lehet vér, vizelet, nyál, könny vagy nemi szervek nyálka. Az összegyűjtött bioanyagot közvetlenül az erősítőbe helyezik, ahol enzimatikus reagenseket vezetnek be, amelyeket úgy terveztek, hogy közvetlenül egyesüljenek a vírusok és fertőzések DNS- és RNS-szelvényeivel. Amint a reagens és a vírus kötődik, a készülék kijavítja ezt a területet, és elkezd másolatokat készíteni erről a területről, többszörösére növelve. Az ilyen másolás folyamatosan, "a lánc mentén" történik, ami több száz, esetenként több ezer minta beszerzését teszi lehetővé a kutatáshoz.

A következő lépés az eredményül kapott diagramok összehasonlítása az adatbázisban elérhető vírusok és fertőzések adataival. Tehát közvetlenül megtalálhatók patogén mikroorganizmusok, megállapítják a testben való jelenlétük számát és idejét (milyen régen léptek be a szervezetbe).

A PCR-diagnosztika ma már nemcsak a kimutatott vírusok és a már ismert vírusok összehasonlítását teszi lehetővé, hanem mutációk azonosítását is, valamint javaslatot tesz arra is, hogy ezek a mutációk mire vezethetnek.

A tudósok - genetikusok széles körben alkalmazzák a PCR-kutatás módszerét a DNS egyes metszeteinek keresztezésére és új típusú gének és mutációk tanulmányozására.

Polimeráz láncreakcióval meghatározott vírusok és fertőzések

A PCR lefolytatása során számos baktériumot és fertőzést találhat, amelyek súlyos, sőt néha még súlyosabb fertőzéseket is okoznak gyógyíthatatlan betegségek. Először is, ez a humán immunhiány vírus, és a látens vagy lappangási időszakban, amikor a következményei még nem nyilvánultak meg. Ez nagyon fontos olyan esetekben, amikor más HIV-tesztek még nem hoztak eredményt: az esetleges fertőzést követő első hat hónapban vagy HIV-pozitív anyától született újszülötteknél.

Ezenkívül a PCR-kutatás mindenféle hepatitist, mononukleózist tár fel fertőző természet, citomegalovírus fertőzések, herpesz, minden szexuális úton terjedő fertőzés (ureaplasma, chlamydia, mycoplasma, trichomonas, gardnerella stb.).

Meghatározzák a tuberkulózis kórokozóit is, valamint az onkogén osztályba tartozó fertőzéseket, vagyis azokat, amelyek később növekedést okozhatnak. rosszindulatú daganatok(humán papillómavírus). Könnyebbé, de nem kevésbé veszélyes fertőzések a PCR-vizsgálatok által meghatározott borreliózis, kullancsencephalitis, gombás fertőzések(Candida) és Helicobacter pylori.

A patogén mikroflóra mindezen képviselői okozhatnak veszélyes betegségek ban ben különböző részek a páciens testét, ezért a PCR technikát szinte minden iparágban alkalmazzák modern orvosság. Segítségével nőgyógyászati ​​és urológiai betegségek, PCR vizsgálatra időpontot kérhet fertőző szakorvostól, tüdőgyógyásztól és ftiziátertől. Nem ritka a polimeráz láncreakció alkalmazása a gasztroenterológia, hematológia, onkológia stb.

Hogyan gyűjtsünk bioanyagot a diagnosztikához

A diagnosztikához a páciensnek bioanyagot kell biztosítania, amely tartalmazhat patogén képviselői mikroflóra. Kutatásra alkalmas anyagként az adott szervben jelenlévő folyadékokat veszik.

Tehát az elemzéssel kimutatható vírusok és fertőzések, DNS és RNS a beteg vérében, vizeletében és nyálában, valamint az orr, a nemi szervek nyálkahártyájában élnek. Többben ritka esetek amikor a születendő gyermek mélyreható diagnózisára van szükség, folyadékot vesznek elemzésre magzatvíz zsák vagy a placenta szövetei. A vírusok diagnosztizálására tuberkulózist okozva, köpet lesz szükség, és a papillómákat (szemölcsöket) okozó vírus kimutatására, a hámból való kaparással.

Ha az elemzés a diagnózis felállítására irányul nemi fertőzések szexuális érintkezés útján terjed, ill háztartási módon, az orvos tampont vagy kaparást vesz hüvelyi folyás, nyálka ki húgycső férfiaknál és a nyaki csatornát nőknél. Ezenkívül bizonyos esetekben nemcsak a nemi szervek nyálkahártya-váladékára, hanem a beteg vizeletére is szükség lehet.

A herpesz, fertőző mononukleózis, minden típusú hepatitis és a humán immunhiány vírus diagnosztizálásához vérszérumra lesz szükség, mivel további bioanyag lehet: a beteg vizelete (valamint citomegalovírus fertőzés), valamint egy toroktisztító pálcikát.

Ha a polimeráz láncreakció feladata a központi és perifériás idegrendszer munkáját befolyásoló fertőzések diagnosztizálása, a gerincvelő-folyadékot kutatásra veszik.

Hogyan készüljünk fel egy tanulmányra

Annak érdekében, hogy a polimeráz láncreakció eredményei a lehető legpontosabbak legyenek, és a diagnózis helyes legyen, és tükrözze a betegség képét, alaposan fel kell készülni a bioanyag elemzésre történő szállítására.

A vizsgálat eredménye nagyobb mértékben függ a laboráns professzionalizmusától, a felszereléstől és a kapott adatokat megfejtő orvos képzettségétől. De sok múlik a betegen, aki megkapta a találkozót erre a diagnózisra.

Az első szabály, amelyet be kell tartani az anyag átadásakor, a teljes sterilitás és a kapott tisztaság biológiai folyadék. Ha a vér, az agy-gerincvelői folyadék vagy a magzatvíz levétele során semmi sem múlik a betegen, akkor a vizelet-, köpet- és kenetfelvételt gondosan elő kell készíteni. Ha idegen mikroorganizmusok kerülnek a vizsgálati anyagba, azok jelentősen befolyásolják az elemzés végső adatait, és az orvosi kezelés rossz taktikájának megválasztásához vezetnek.

És ez nem csak a feleslegesek fogadásával van tele gyógyszerek, hanem a szervezet más szervei és rendszerei munkájának romlása is.

Az ilyen következmények elkerülése érdekében a betegnek többször is el kell végeznie egyszerű szabályok amely segít a tesztek helyes letételében.

1. Az összes belső folyadék mintavétele szigorúan éhgyomorra történik, csak tiszta, szénsavmentes vizet szabad inni;
2. A nemi szervekről való mintavételkor a bioanyag felvétele előtt 24 órával tilos bármilyen szexuális érintkezés;
3. A vizeletet és a köpetet a laboratóriumban kiállított, vagy a gyógyszertárban erre a célra vásárolt speciális steril tartályokba adjuk át. A vizelet gyűjtése előtt a külső nemi szerveket alaposan le kell mosni mosó szappan, engedje le a vizelet első részét, a középső részt pedig gyűjtse egy edénybe.

Ilyen egyszerű szabályok a képzés segít abban, hogy a legpontosabb kutatási adatokhoz jusson, és gyorsabban induljon el megfelelő kezelés. Általában néhány órán belül elkészül a vizsgálat eredménye, de leggyakrabban a laboratóriumokban a bioanyag mintavételét követő napon adják ki az eredményeket. A páciens egy laboratóriumi nyomtatványt kap a kezébe, amely a beteg személyes adatait és a szervezetében talált vírusokat tartalmazza.

A kapott eredmények teljes átírását a vizsgálatra beutaló orvos készíti el, ő állítja fel a végső diagnózist is. Néha, a diagnózis eredményei alapján, javasolható lefolytatás további vizsgálatok valamint szűk szakemberek vizsgálata és konzultációja. De leggyakrabban a polimeráz láncreakció eredményei képezik a végső diagnózis alapját.