Kunstlik viljastamine. Kui sageli IVF-i kasutatakse?

Kehaväline viljastamine (lat. ekstra - väljast, väljast ja lat. corpus - keha, st kehaväline viljastamine, lühend ECO) on viljatuse korral kasutatav kunstlik viljastamine. Sünonüümid: "in vitro viljastamine", "in vitro viljastamine", " kunstlik viljastamine", sisse inglise keel lühendatult IVF( in vitro viljastamine).See tehnoloogia võimaldab naistel saada emaks kõige lootusetumatel juhtudel. IVF-i tehakse kõigis maailma arenenud riikides ja igal aastal sünnib mitu tuhat katseklaasi last. Usklike jaoks, kelle hulgas on ka lastetuid, tekib üsna põhjendatult küsimus: kas see meetod on õigeusu kiriku seisukohalt vastuvõetav? Proovime mõista, kuidas IVF toimub ja milliseid tagajärgi see toob.

Natuke ajalugu

IVF-i käigus eemaldatakse naise kehast munarakk ja viljastatakse kunstlikult "in vitro" ("in vitro") tingimustes, saadud embrüot hoitakse inkubaatoris, kus see areneb 2-5 päeva, misjärel embrüo on. jaoks ülekantud emakaõõnde edasine areng.

Esimest korda edukalt meditsiinitehnoloogiaÜhendkuningriigis rakendati 1977. aastal, mille tulemusena sündis 1978. aastal Louise Brown, kes oli esimene katseklaasis eostatud inimene. Esimene Nõukogude Liidus IVF-iga eostatud laps (tüdruk) sündis 1986. aasta veebruaris. Protseduur viidi läbi Moskvas, emade ja laste tervise keskuses, praeguse nimega Teaduskeskus sünnitusabi, günekoloogia ja perinatoloogia (SC AGiP). Veidi hiljem, Leningradis, samal 1986. aastal sündis poiss Kirill. Nendele sündmustele eelnes tõsine uurimistöö, mida hakati Nõukogude Liidus sihikindlalt läbi viima alates 1965. aastast. Sel ajal loodi varajase embrüogeneesi rühm, mis 1973. aastal kasvas eksperimentaalse embrüoloogia laboriks (juhataja prof. B. Leonov). 1994. aasta andmetel sündis selles laboris üle 1,5 tuhande lapse. 1990. aastal elas meie planeedil üle 20 000 katseklaasi beebi. Aastal 2010 - ca 4 miljonit.Kõige intensiivsusega saavutab IVF protseduur Iisraelis, kus aastas on 3400 IVF protseduuri 1 miljoni elaniku kohta.

Näidustused:
IVF-i protseduuri näidustused on erinevaid vorme meeste ja naiste viljatus. Vastavalt Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi korraldusele N67 on IVF-i näidustus "viljatus, mis ei allu ravile või selle ületamise tõenäosus IVF-iga on suurem kui teiste meetoditega. Vastunäidustuste puudumisel võib IVF-i teha abielupaari (naine, kes ei ole abielus) taotlusel, kellel on mis tahes vormis viljatus.

Vastunäidustused: IVF-i vastunäidustused on naise seisundid, mille korral rasedus ja sünnitus ohustavad ema või lapse tervist, nimelt:

somaatilised ja vaimuhaigus, mis on raseduse ja sünnituse kandmise vastunäidustused;
emakaõõne kaasasündinud väärarengud või omandatud deformatsioonid, mille puhul ei ole võimalik embrüoid implanteerida ega rasedust kanda;
munasarja kasvajad;
emaka healoomulised kasvajad, mis vajavad kirurgilist ravi;
terav põletikulised haigused mis tahes lokaliseerimine;
mis tahes lokaliseerimisega pahaloomulised kasvajad, sealhulgas anamneesis.

Mehepoolseks IVF-i läbiviimiseks ei ole vastunäidustusi.

Tehnoloogia

IVF-tehnoloogia viiakse läbi spetsialiseeritud raviasutused tingimustes ambulatoorne ravi. Kehavälise viljastamise protseduuri läbiviimiseks on vaja hankida munarakud, hankida spermatosoidid, läbi viia kehaväline viljastamine, embrüo kasvatamine ja embrüo viimine naise emakasse.

Reeglina püüavad nad kehavälise viljastamise jaoks saada mitu munarakku, kuna see suurendab selle meetodiga viljatusravi efektiivsust. Kuna see on naise jaoks normaalne menstruaaltsükli Kui küpseb üks munarakk, siis mitme munaraku saamiseks viiakse läbi nn superovulatsiooni stimulatsiooni protseduur. Selleks määratakse patsiendile hormonaalsete ravimite süstid.

Munaraku küpsemist ei saa mitteinvasiivsete meetoditega otseselt määrata. Seetõttu hinnatakse munarakkude küpsemist kaudselt munasarja folliikulite kasvu järgi. Folliikulite kasvu jälgitakse ultrahelimasinate abil. Jõudes domineeriv folliikuli teatud suurusega (16-20 mm) on ette nähtud munarakkude väljavõtmise protseduur - munasarja folliikulite punktsioon. Folliikuli punktsioon viiakse läbi üldanesteesia (sagedamini) või kohaliku (harvemini) tuimestuse all, nõel tehakse transvaginaalselt, nõela kulgu kontrollib ultraheliaparaat. Punktsiooni eesmärk on aspireerida (imeda) folliikuli sisu (folliikulaarne vedelik). Saadud vedelikku uuritakse munarakkude tuvastamiseks mikroskoobi abil.

Avastatud munad pestakse folliikulite vedelikust ja viiakse koos kultiveerimissöötmega laboriklaasile. Laboratoorsete klaasnõudena kasutatakse Petri tasse või kultiveerimisplaate. Munanõuded asetatakse inkubaatoritesse, kus neid hoitakse kuni viljastamiseni.

Tavaliselt ei põhjusta hormonaalsete ravimite kasutamine ja folliikulite punktsioon negatiivsed reaktsioonid patsiendil, kuid mõnikord võivad tekkida tüsistused. Superovulatsiooni stimulatsiooni tüsistus on munasarjade hüperstimulatsiooni sündroom (OHSS), mis võib tekkida mitu päeva pärast stimulatsiooni lõppu. OHSS tekib siis, kui küpseb suur hulk folliikuleid, mis muunduvad kollaskeha, eritama suur hulköstrogeen. Kell raske kurss OHSS võib vajada patsiendi hospitaliseerimist. Folliikuli punktsiooni tüsistus võib olla munasarja hematoom.

Kui patsiendilt munarakke ei ole võimalik saada (munasarjade puudumine, menopaus jne), on võimalik kasutada doonormune (st teise naise mune). Munarakudoonorina võib tegutseda omakasupüüdmatu doonor (sugulane, sõber) või tasuline doonor. Munadoonoriga töötamise tingimused on reguleeritud Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi korraldusega N67

Kui abikaasa spermat ei ole võimalik kasutada (vastavalt meditsiinilised näidustused) või kui patsiendil ei ole seksuaalpartnerit, on võimalik kasutada doonorsperma. Doonorsperma kasutamine eeldab abikaasa kohustuslikku kirjalikku nõusolekut ja seda reguleerib Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi korraldus N67. Selle korralduse kohaselt kasutatakse doonorsperma mitte varem kui pärast 6-kuulist säilitamist külmutatud olekus, et saada andmeid sperma puudumise kohta. nakkushaigused spermadoonorilt.

IVF-i viivad vahetult läbi embrüoloogid embrüoloogilise labori tingimustes. Väetamine ise toimub kahel viisil:

1) in vitro seemendamine;

2) intratsütoplasmaatiline sperma süstimine (ICSI, ICSI).

Algul rohkem lihtne viis munarakkudele, mis on toitainekeskkonnas, lisatakse spermatosoidide suspensioon. Spermatosoidid lisatakse kiirusega 100-200 tuhat muna kohta. 2-3 tunni jooksul siseneb üks spermatosoididest munarakku ja viljastab selle seeläbi. Teise meetodi (ICSI) puhul süstitakse sperma munarakku "käsitsi", kasutades mikrokirurgilisi instrumente. ICSI-d kasutatakse siis, kui sperma kvaliteet on väga halb, kui viljastumist ei ole võimalik saada isegi tassis.

Pärast sperma tungimist loetakse munarakk embrüoks. Eduka väetamise tõenäosus on 60-70%. Embrüod sisaldavad kunstlikud tingimused 2 kuni 6 päeva

Embrüo siirdamine emakasse toimub 2-5 päeva pärast munaraku viljastamist. Protseduur ei vaja anesteesiat (valu vaigistamist) ja tehakse günekoloogilisel toolil mõne minuti jooksul. Embrüo viiakse emakasse spetsiaalse elastse kateetri kaudu emakakaela kaudu. Vastavalt Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi korraldusele N 67 ei ole mitmikraseduse vältimiseks soovitatav üle 4 embrüo emakaõõnde viia. Kaasaegne praktika IVF Venemaal on selline, et nad tavaliselt kannavad 2 embrüot.

In vitro viljastamise (IVF) efektiivsus üldiselt on umbes 30-35%. Väärtus võib varieeruda olenevalt vanusest, viljatuse põhjustest, arstide kvalifikatsioonist ja kliiniku tasemest (tänu asjaolule, et materiaalne ja tehniline varustus ei oma tähtsust). 20-st toimunud rasedusest lõpeb sünnitusega keskmiselt 18. Pärast embrüote sissetoomist kord 3 päeva jooksul on vaja kontrollida hormoonide taset veres. 12 päeva pärast tehakse rasedustest.

Mitmikraseduse korral tehakse naise soovil vähendamine – soovimatute embrüote eemaldamine. Vähendamine toimub 5 kuni 13 nädala jooksul, parimaks perioodiks peetakse 8 ja 9 nädalat. Oma tähenduses on reduktsioon sama abort, ainult et sellega ei hävine kõik eostatud lapsed, vaid üks või mitu ning üks, kaks või (harva kolm) jääb elama ja arenema.

Kuni 6 nädala jooksul toimub redutseerimine vaakum-aspiraatoriga, mis viiakse emakaõõnde “tarbetu” embrüole ja imetakse ära. 7-8 nädala jooksul tungib spetsiaalne nõel invaginaalselt rindkere õõnsus embrüo ja teha kaltsiumkloriidi süst, mille järel laps sureb ja tema keha lahustub. 9–13 nädala jooksul jääb redutseerimisvahendiks täpselt sama nõel, ainult see sisestatakse läbi raseda naise kõhu. Seda meetodit peetakse kõige mugavamaks ja ohutumaks nii ülejäänud lootele kui ka naisele endale.

sünnitus

Sünnitus raseduse ajal pärast IVF-i ei erine tavapärasest. Juhtudel, kui viljatuse põhjuseks on naise haigus, toimub sünnitus konkreetset haigust arvesse võttes ja sellel pole viljastamismeetodiga mingit pistmist.

Arstide sõnul ei erine katseklaasis eostatud lapsed teistest. Sellest hoolimata on arvamus, et sellised lapsed õpivad paremini, kuid on palju impulsiivsemad ja haigestuvad sagedamini. Mõned arstid usuvad, et selle põhjuseks võib olla soovitud lapse ülekaitse.

Kiriku arvamus

Valges raamatus "Sotsiaalse kontseptsiooni alused" (2000), vene keel õigeusu kirik leiab erinevaid probleeme bioeetika, mis hõlmab viljatuse ületamise küsimusi. Viljatuse ületamiseks moraalselt lubatud meetodid hõlmavad "kunstlikku viljastamist abikaasa sugurakkudega, kuna see ei riku abielu terviklikkust, ei erine põhimõtteliselt loomulikust viljastumisest ja toimub abielusuhete kontekstis".

Kirik annab tauniva hinnangu nendele kehavälise viljastamise võimalustele, kus kasutatakse doonorsperma, doonormunarakke või surrogaatema: „Doonormaterjali kasutamine õõnestab peresuhete aluseid, kuna see tähendab, et laps lisaks „sotsiaalsele” , on ka nn bioloogilised vanemad. "Asendusemadus", st viljastatud munaraku kandmine naise poolt, kes pärast sünnitust lapse "klientidele" tagastab, on ebaloomulik ja moraalselt vastuvõetamatu ... ". Kirik on vastu ka neile IVF-i võimalustele, mille puhul neid saab teadlikult hankida suur kogus embrüoid kui on vajalik emakasse siirdamiseks: “Moraalselt vastuvõetamatu koos Õigeusu punkt Vaadeldakse ka kõiki in vitro (kehavälise) viljastamise variante, mis hõlmavad "liigsete" embrüote ettevalmistamist, säilitamist ja tahtlikku hävitamist. Kiriku poolt hukkamõistetud abordi moraalne hinnang põhineb inimväärikuse tunnustamisel isegi embrüo puhul. See on vähendamisprotseduur, mis sunnib teid IVF-ile ütlema "ei", kuna elusate embrüote hävitamist peetakse mõrvaks.

Kirik juhib tähelepanu ka tõsiasjale, et: "Sigimismeetodite kasutamine väljaspool Jumala õnnistatud perekonna konteksti muutub teomahismi vormiks, mida teostatakse inimese autonoomia ja valesti mõistetud isikuvabaduse kaitsmise varjus."

Kunstlik viljastamine

Kunstlik viljastamine

Kunstlik viljastamine on viljastamise protsess, mis viiakse läbi sperma viimisega otse emakasse (kunstlik viljastamine) või in vitro meetodil (väljaspool keha, “in vitro”), s.o. kehaväline (IVF).

Kunstliku viljastamise tüübid:

1. kunstlik viljastamine abikaasa või doonori spermaga (IISM/IISD);
2. in vitro viljastamine (IVF).

Sõltuvalt naise tunnistusest valitakse kunstliku viljastamise programm.

1. Emakasisene viljastamine on spetsiaalselt valmistatud spermatosoidide viimine spetsiaalse kateetri abil otse emakaõõnde.

   Nii et sperma ei läbi barjääre happeline keskkond tupe ja emakakaela tihe kaitsev lima ning satub koheselt emakaõõne neutraalsesse keskkonda.

   Pärast seda liiguvad spermatosoidid iseseisvalt munajuhadesse ja munarakk viljastatakse samamoodi nagu loomuliku seksuaalkontakti ajal.

   Kirjanduse andmetel on naise kunstlikku viljastamist viljatuse ravivahendina kasutatud juba üle 100 aasta. See protseduur teostatakse ainult spetsialiseeritud meditsiinikliinikutes täielik läbivaatus mehed ja naised.

   Emaka ja munajuhade seisundi uurimine on kohustuslik - hüsterosalpingograafia ( röntgenuuring kasutades kontrastaine) või laparoskoopia (emaka uurimine kasutades optiline instrument- laparoskoop), et kontrollida suguelundite läbilaskvust.

   Seemendamiseks võib kasutada nii natiivset ("elus") kui ka külmsäilitatud spermat (eelnevalt sulatatud). Sperma enne kunstlikku viljastamist puhastatakse ja kontsentreeritakse.

   Kunstlikku viljastamist soovitatakse naistele, kellel on suurenenud emakakaela lima viskoossus või tupekeskkonna happesus. Partneri poolt võib esineda selliseid sümptomeid nagu erektsioonihäired, liikuvate spermatosoidide arvu vähenemine või suurenenud viskoossus sperma jne.

   Protseduur viiakse läbi kliiniku operatsioonitoas, günekoloogilisel toolil spetsiaalse kateetriga süstlaga, mille kaudu süstitakse sperma emakaõõnde. Pärast seda protseduuri peate lamama 15-20 minutit. Protseduur ei vaja anesteesiat.

2. IVF - in vitro fertilisation - on kunstliku viljastamise meetod, mille käigus kombineeritakse väljaspool keha, in vitro ("klaasis", s.o laboratoorses katseklaasis) isasseemnerakud ja emasloomad (varem munasarjadest ekstraheeritud).

   Seal toimub iseseisev viljastumine ja saadud embrüod (1 või 2) viiakse mõne päeva pärast üle naise emakas, kus üks või mõlemad implanteeritakse endomeetriumi (emakaõõne limaskesta) ja arenevad 9 kuu jooksul.

   Ovulatsiooni stimuleerimine viiakse läbi 2-3 nädalat munarakkude saamiseks hormonaalsed ravimid. Pärast mitme munaraku korraga küpsemist eemaldab reproduktoloog need munasarjadest (teeb folliikuli punktsiooni) ja viib need üle embrüoloogialaborisse.

   Kunstlik viljastamine ICSI abil- See on üks IVF-i sortidest. Sel juhul süstib embrüoloog spetsiaalsete tööriistade abil mikroskoobi tugeva suurendusega munarakku kõige viljakama spermatosoidi.

   Pärast sellist viljastamist saadud embrüo ei erine looduslikult eostatud embrüotest, samuti kandub see mõne päeva pärast naise emakasse ja areneb 9 kuud. See meetod edukalt kasutatud meeste teguriga viljatusega patsientidel, kui esineb kõrvalekaldeid normaalsed näitajad sperma või pärast TESA biopsiat asoospermia jaoks.

Doonorprogrammid kunstlikuks viljastamiseks

Kui ühel abikaasadest ei ole oma terveid sugurakke, võib IVF-i teha ka doonorsperma, doonormunarakuga. Enne sugurakkude loovutamist läbib doonor põhjaliku uuringu meditsiiniline geneetiline uuring. Kunstlik viljastamine doonorspermaga viiakse läbi alles pärast topeltuuringut 3-kuulise intervalliga.

Paaridel, kus naisel on lapse kandmine vastunäidustatud (näiteks raske südamehaigusega) või füüsiliselt võimatu (emaka puudumise tõttu), kasutatakse IVF-i koos surrogaatemaga.

IVF-i suureks eeliseks on ka see, et embrüote kasvatamise ajal embrüoloogilises laboris on võimalus embrüo implantatsioonieelseks geneetiliseks diagnoosimiseks. See meetod võimaldab teil tuvastada (kui see on olemas) geneetilised haigused, kromosoomianomaaliad, arenguanomaaliad (vääraarengud). Erinevalt paljudest teistest kliinikutest teostab VitroClinic PGD-d kogu inimese kromosoomide komplektis (st kõigil 46 kromosoomil). Pärast sellist analüüsi viiakse emakasse ainult terved embrüod.

Enne mis tahes IVF-programmi läbib paar põhjaliku kontrolli arstlik läbivaatus tuvastada võimalikud vastunäidustused. Selliste uuringute loetelu on reguleeritud tervishoiuministeeriumi korraldusega ja seda järgitakse meie kliinikus rangelt.

Kus teha kunstlikku viljastamist?

Enne viljatuse ülesaamise osas arsti poole pöördumist küsib iga abielupaar küsimuse: "Kus saab teha kunstlikku viljastamist kõrgel professionaalsel tasemel?"

Enne sellise kliiniku valimist järgige järgmisi soovitusi:

• Kliinikus peaksid töötama kitsad spetsiaalselt viljatuse ravi spetsialistid: günekoloogid-reproduktoloogid, uroloogid-androloogid, embrüoloogid ja geneetikud.
• Kunstliku viljastamise keskus peaks oma töös kasutama ainult kvaliteetseid ja originaalseid ravimeid ning kulumaterjalid IVF-i jaoks.
• Tõelised professionaalsed reproduktiivspetsialistid töötavad iga paariga individuaalselt, s.t. meetodi valik, stimulatsiooniskeemid ja tugi varajased kuupäevad raseduse valib spetsialist alles pärast abikaasade anamneesi, varasema IVF kogemuse (kui on), vanuse, tervisliku seisundi põhjalikku uurimist. Sel hetkel ja paljud teised
• Kogenud reproduktoloogid kasutavad säästvaid hormonaalseid stimulatsiooniskeeme, hoolitsedes oma patsientide tervise eest ja vältides hüperstimulatsiooni.
• Mitmikraseduse välistamiseks peaks reproduktoloog üle kandma ainult ühe või kaks embrüot (vastavalt näidustustele). Kolm või enam pole lubatud.
• Teie valitud kliiniku spetsialistid peavad valdama kõiki kõige kaasaegsemaid tehnikaid reproduktiivmeditsiin: ICSI, PICSI, abistatud haudumine, embrüo geneetiline diagnostika jne.
• Sperma analüüse peaksid tegema kliiniku enda laboris spetsialiseerunud embrüoloogid, kes hindavad mitte ainult spermatosoidide morfoloogiat, vaid ka nende viljakust.
• Valige kliinik, mis teeb koostööd vastavalt sertifitseeritud kliinilise diagnostika laboriga rahvusvahelistele standarditele ISO. Tehtud analüüside kvaliteet oluline roll IVF-i ettevalmistamisel.
• Eelnevalt veenduge, et alates esmasest konsultatsioonist kuni kogu IVF programmi lõpuni või kunstlik viljastamine Teid juhendab sama reproduktoloog (v.a vääramatu jõu olukorrad). See näitab arsti ja kliiniku vastutust ja keskendumist positiivsele tulemusele.
• Eelistage neid kliinikuid, kus arstid jätavad oma kontaktid suhtlemiseks patsientidele. Teil on võimalik helistada või kirjutada meili oma arstile, kui vajate selgitusi või teil on küsimusi.
• Hea, kui samas kliinikus, kus IVF-i teed, on võimalus viibida rasedust jälgima. Arstid, teades kõiki teie raseduse nüansse ja omades omavahelist järjepidevust, teevad kõik, et see lõppeks - terve lapse sünd.
• Kunstliku viljastamise programmide hind Moskvas erinevates kliinikutes võib oluliselt erineda. Uurige kindlasti juhilt, kui palju kunstlik viljastamine maksab ja mis täpselt iga teid huvitava programmi sees on, kas sinna on võimalik lisada mingeid lisateenuseid, näiteks ICSI või haudumine, kas on valikuid doonorrakkudega ja embrüod. Lai valik erinevaid programme on kliinikule suureks plussiks. See tähendab, et selles kunstliku viljastamise keskuses valdavad arstid kõiki kaasaegseid ART tehnikaid ja saavad endale lubada valida iga paari jaoks mis tahes programmi.

Kunstlik viljastamine ei ole viljatuse ravi, vaid viljatuse ületamise meetod. Seega ületab see raseduse saavutamise takistused. Praegu kasutatakse kunstlikku viljastamist peaaegu kõigi viljatuse põhjuste ületamiseks ja see võimaldab teil paljudest viljastumisega seotud probleemidest mööda minna.

32. Munade viljastamine väljaspool looma keha (in vitro)

Positiivne väärtus – vaatamata madalale ootsüütide saagile, iga ekstraheerimisega looma korduva kasutamise võimalus.

33. Emasloomade munarakkude kehavälise viljastamise tunnused erinevad tüübid s.-x. loomad

Väetamis- ja toitmissüsteemi väljatöötamine varajased staadiumid Imetajate embrüote arendamine väljaspool loomakeha (in vitro) on suure tähtsusega mitmete tõuaretuse efektiivsuse tõstmisele suunatud teaduslike probleemide ja praktiliste küsimuste lahendamisel.

Nendel eesmärkidel on vaja varajases arengujärgus olevaid embrüoid, mida saab ainult ekstraheerida kirurgilised meetodid munajuhadest, mis on töömahukas ja ei anna selle töö tegemiseks piisaval hulgal embrüoid.

Imetajate munarakkude in vitro viljastamine hõlmab järgmisi põhietappe: munarakkude küpsemine, spermatosoidide mahtuvus, viljastumine ja varajaste arengufaaside tagamine.

Munarakkude küpsemine in vitro. Suur number Imetajate, eriti suure geneetilise potentsiaaliga veiste, lammaste ja sigade munasarjades leiduvad sugurakud kujutavad endast tohutut potentsiaali nende loomade paljunemisvõimele geneetilise arengu kiirendamisel võrreldes normaalse ovulatsiooni võimaluste kasutamisega. Nendel loomaliikidel, nagu ka teistel imetajatel, moodustab kuumuse ajal spontaanselt ovuleeruvate munarakkude arv vaid väikese osa tuhandetest munasarjas sünnihetkel leiduvatest munarakkudest. Ülejäänud ootsüüdid taastuvad munasarjas või väidetavalt läbivad nad atreesia. Loomulikult tekkis küsimus, kas munarakke on võimalik sobiva töötlemisega munasarjadest eraldada ja nende edasine viljastamine väljaspool looma keha läbi viia. Praegu ei ole välja töötatud meetodeid kogu ootsüütide varu kasutamiseks loomade munasarjades, kuid õõnsuse folliikulitest on võimalik saada märkimisväärsel hulgal ootsüüte nende edasiseks küpsemiseks ja viljastamiseks väljaspool keha.

Praegu on praktikas rakendust leidnud ainult veise munarakkude in vitro küpsemine. Munarakud saadakse lehmade munasarjadest pärast loomade tapmist ja intravitaalse ekstraheerimise teel 1-2 korda nädalas. Esimesel juhul võetakse munasarjad loomadelt peale tapmist, toimetatakse laborisse termostaadiga anumas 1,5-2,0 tunniks.Laboratooriumis pestakse munasarju kaks korda värske fosfaatpuhvriga. Ootsüüdid ekstraheeritakse 2-6 mm läbimõõduga folliikulitest imemise või munasarja plaatideks lõikamise teel. Ootsüüdid kogutakse TCM 199 söötmesse, millele on lisatud 10% kuumuse käes oleva lehma vereseerumit, seejärel pestakse neid kaks korda ning edasiseks in vitro küpsemiseks valitakse välja ainult kompaktse kummuli ja homogeense tsütoplasmaga munarakud.

AT viimastel aegadel on välja töötatud meetod munarakkude intravitaalseks ekstraheerimiseks lehmade munasarjadest ultraheliseadme või laparoskoopi abil. Sel juhul aspireeritakse munarakke vähemalt 2 mm läbimõõduga folliikulitest 1-2 korda nädalas samalt loomalt. Keskmiselt saadakse üks kord 5-6 munarakku looma kohta. In vitro küpsemiseks sobib vähem kui 50% munarakkudest.

Positiivne väärtus – vaatamata madalale ootsüütide saagile, iga ekstraheerimisega looma korduva kasutamise võimalus. Sperma mahtuvus. Oluline samm imetajate viljastamismeetodi väljatöötamisel oli spermatosoidide mahtuvuse nähtuse avastamine. 1951. aastal M.K. Chang ja samal ajal G.R. Austin leidis, et imetajatel toimub viljastumine vaid siis, kui sperma on mitu tundi enne ovulatsiooni looma munajuhas. Austin võttis kasutusele termini mahtuvus, tuginedes tähelepanekutele roti spermatosoidide tungimise kohta erinevatel aegadel pärast paaritumist. See tähendab, et spermatosoidides peavad toimuma mõned füsioloogilised muutused, enne kui sperma omandab viljastumisvõime.

Koduloomade ejakuleeritud sperma mahutamiseks on välja töötatud mitmeid meetodeid. Kõrge ioontugevusega söödet kasutati spermatosoidide pinnalt valkude eemaldamiseks, mis näivad pärssivat spermatosoidide mahtuvust.

Suurima tunnustuse on aga pälvinud spermatosoidide mahtuvuse suurendamise meetod hepariini abil (J. Parrish et al., 1985). Külmutatud pullisperma kõrsi sulatatakse 39°C veevannis 30–40 s. Ligikaudu 250 µl sulatatud spermat asetatakse 1 ml mahutuskeskkonna alla. Mahtuvuskeskkond koosneb modifitseeritud kilpnäärme keskkonnast, ilma kaltsiumiioonideta. Pärast ühetunnist inkubeerimist ülemine kiht Sööde mahuga 0,5-0,8 ml, mis sisaldab enamikku liikuvatest spermatosoididest, eemaldatakse katseklaasist ja pestakse kaks korda tsentrifuugimisega 500 g juures 7-10 minutit. Pärast 15-minutilist inkubeerimist hepariiniga (200 ug/ml) lahjendatakse suspensioon kontsentratsioonini 50 miljonit spermatosoidi ml kohta.

In vitro viljastamine ja embrüo arengu varajaste staadiumite tagamine. Munade viljastumine imetajatel toimub munajuhades. See muudab teadlase jaoks raskeks uurida keskkonnatingimusi, milles viljastamisprotsess toimub. Seetõttu oleks in vitro viljastamise süsteem väärtuslik analüütiline vahend sugurakkude eduka paaritumisega seotud biokeemiliste ja füsioloogiliste tegurite uurimiseks.

Rakendage järgmist skeemi in vitro viljastamise ja veiste varajaste embrüote kasvatamise kohta. In vitro viljastamine viiakse läbi tilga modifitseeritud kilpnäärme söötmes. Pärast in vitro küpsemist puhastatakse munarakud osaliselt ümbritsevatest paisutatud kummulirakkudest ja kantakse üle viie munaraku mikrotilkadesse. Ootsüütidega söötmele lisatakse sperma suspensioon mahuga 2-5 µl, et saavutada sperma tilkade kontsentratsioon 1-1,5 miljonit/ml. 44-48 tundi pärast viljastamist määratakse munarakkude purustamise olemasolu. Seejärel asetatakse embrüod epiteelirakkude monokihile edasiseks arendamiseks 5 päeva jooksul.

Niisiis, kui lapse kontseptsioon traditsioonilisel viisil(kui viljastumine toimub naise munajuhas seksuaalvahekorra tulemusel sattunud mehe spermaga) on võimatu järgmistel põhjustel:
munajuhade ummistus või puudumine;
endometrioos;
meeste faktori viljatus (sperma motoorika ja spermatosoidide arvu vähenemine, kuni täielik puudumine spermatosoidid ejakulaadis);
viljatuse immunoloogiline tegur -
ja arvestades, et varasemad katsed viljatusest üle saada 12–18 kuu jooksul on olnud ebaefektiivsed, võib olla kasulik kasutada võimalusi, ÖKO.

Vajalikud tingimused jaoks ÖKO:
mõlema partneri nõusolek;
naiste ja meeste suguelundite ägedate ja krooniliste põletikuliste protsesside tunnuste puudumine ravi alustamise ajal;
puudumine patoloogilised muutused emakaõõnes;
puudumine patoloogilised moodustised munasarjades.

Enne protseduuri on vajalik abikaasade põhjalik läbivaatus – et suurendada rasestumise võimalust ja vähendada riski võimalikud tüsistused.

Naise jaoks Uurimuslik uuring sisaldab:
günekoloog-endokrinoloogi konsultatsioon ja läbivaatus;
ultraheli protseduur; terapeudi ja teiste spetsialistide konsultatsioon - vastavalt raviarsti ettekirjutusele;
kolposkoopia (emakakaela uurimine);
infektsioonide uurimine: toksoplasmoos, tsütomegaalia, herpes, klamüüdia, süüfilis, gonorröa, A- ja B-hepatiit, tupe määrdumine puhtuse määramiseks, eritiste bakterioloogiline analüüs emakakaela kanal;
hormonaalne uuring.

Mehe jaoks hõlmab eelkontroll:
androloogi konsultatsioon ja läbivaatus;
ultraheliuuring (vajadusel);
laiendatud spermogramm koos spermatosoidide morfoloogia määramisega, sperma bakterioloogiline analüüs, hormonaalne uuring, biokeemilised uuringud sperma (fruktoos, sidrunhape, tsink).

Kuidas seda tehakse?

1. Superovulatsiooni stimuleerimine. Tsükli esimesel või kolmandal päeval hakkab naine võtma ravimtoode(näiteks menogon), stimuleerides munasarjade aktiivsust. Fakt on see, et tavaliselt küpseb ühe tsükli jooksul üks munarakk. Stimuleerivate ravimite mõjul küpsevad mitmed munarakud ja see suurendab eduvõimalusi ÖKO. Arenevad folliikulid ("vesiikulid", milles munarakk küpseb) on all pidev kontroll: ultraheliandmete põhjal hinnatakse nende suurust, määratakse östrogeenide, progesterooni ja luteiniseeriva hormooni tase veres 2 , hinnatakse emakakaela lima (st emakakaela lima) seisundit. Tavaliselt saavutavad folliikulid vajaliku suuruse 8-10 päeva jooksul, misjärel süstitakse naisele hormooni. kooriongonadotropiin, mis tagab munade lõpliku küpsemise.
2. Munade ekstraheerimine. Tuppe sisestatakse ultrahelisond, mille külge on kinnitatud spetsiaalne torkenõel. Arst torkab hoolikalt läbi suurimad folliikulid ja kogub küpsed munad. Kogu protseduur viiakse läbi ambulatoorselt. Munade kogumise ajal on naine seisundis kerge ravim uni (intravenoosseid ravimeid kasutatakse anesteesiaks, rahustavaks ja lõõgastavaks närvisüsteem).
3. Spermatosoidide saamine. Spermatosoidid kas ekstraheeritakse ejakulaadist või spermatosoidide puudumisel või ebapiisava arvu korral ejakulaadis "ekstraheeritakse" need otse munandist või munandimanusest. Spermatosoidid ei pea kasutama kohe pärast kehast eemaldamist: neid saab külmutada ja säilitada spetsiaalsetes mahutites – samal ajal kui pärast sulatamist taastuvad kõik nende omadused.
4. Munarakkude ja sperma sorteerimine. Mikroskoobi all valitakse välja kõige küpsemad ja kvaliteetsemad munad. Spermatosoidid paigutatakse veekeskkonda ning kõige elujõulisemad ja liikuvamad “tormavad kohe ujuma” (siis nad püütakse kinni), mitteaktiivsed aga jäävad paigale.
5. Munade viljastamine ja embrüote kasvatamine. Pärast seda, kui munad on 4-6 tundi inkubaatoris elanud, istutatakse neile spetsiaalsetesse toitekeskkonnaga kultiveerimisnõudesse ettevalmistatud spermatosoidid (ja munaraku kohta on 50 000 kuni 100 000 spermatosoidi). Spermatosoidid kleepuvad munaraku ümber ja eritavad ensüümi, mis aitab neil sisse pääseda. Kõik pingutavad, kuid ainult üks õnnestub. Niipea, kui üks spermatosoididest on sees, aktiveerub barjäär, blokeerides juurdepääsu ülejäänud "väljaspool". Infiltreerunud spermatosoid (isassuguraat) ja munaraku tuum ühinevad. Viljastumine on toimunud – kaks rakku on üheks sulanud. Rakk hakkab jagunema. 48-72 tunni pärast koosnevad embrüod 4-8 rakust ja on valmis naise kehasse ülekandmiseks.
6. Embrüote ülekandmine emakaõõnde viiakse läbi spetsiaalse kateetri abil. Eduvõimaluste suurendamiseks sisestatakse tavaliselt 2-3 embrüot. See protseduur on valutu. Pärast edukat siirdamist määrab arst ravimid, mis toetavad embrüote arengut (progesteroon, inimese kooriongonadotropiin - hCG). Kaks nädalat hiljem määratakse hCG tase veres. Kolme nädala pärast viljastatud munarakk saab näha ultraheliga.

Pärast mitme embrüo siirdamist emakaõõnde on võimalik allesjäänud külmutada ja hilisemaks kasutamiseks pikemaks ajaks säilitada, kui päästa pole võimalik see rasedus. Külmutatud embrüote kasutamine võimaldab naisel vältida korduvat munasarjade hormonaalset stimuleerimist, samuti munasarjade punktsiooniprotseduure.

Protseduuri tõhusus ÖKO oleneb laborist, kus seda tehakse. Maailmas on see keskmiselt 20–40%. Siiski, rasedus ÖKO on oma eripärad. Esiteks, sageli siis, kui naiste viljatus naiste reproduktiivsüsteemi hormonaalsed mehhanismid ei suuda rasedust korralikult toetada ja enamiku, kui mitte kogu raseduse ajal on vajalik välja kirjutada sobiv asendus. hormoonravi. Siiski jääb suurenenud tõenäosus spontaanne abort. Teiseks, pärast ÖKO tavalisest sagedamini esineb mitmikrasedusi. See on tingitud asjaolust, et emakaõõnde viiakse mitu embrüot, et suurendada implantatsiooni tõenäosust. Mitmikrasedusüsna sageli (kuni 50% juhtudest) on keeruline spontaansed raseduse katkemised ja enneaegsed sünnitused. Raseduse katkemise tõenäosuse vähendamiseks võib pärast 10-nädalast rasedusperioodi läbi viia "ekstra" loodete arvu vähendamine (loote arengu peatamine lootekoti punktsiooniga ultraheli kontrolli all).

Nagu sa näed ÖKO on keeruline mitmeetapiline protsess, mille edu sõltub paljudest teguritest.

Louise Browni ajalugu

Abikaasad Brown (Suurbritannia) soovisid alati lapsi saada. Poiss ja tüdruk. Kuid vaatamata nende pingutustele ei suutnud proua Brown rasestuda. Just sel ajal teatasid Briti arstid revolutsioonilise meetodi loomisest viljatuse ületamiseks. Proua Brown otsustas, et see on tema viimane lootus. Arstid võtsid tema munasarjast munaraku ja viljastasid selle katseklaasis härra Brownilt saadud spermaga. Olles veendunud, et viljastatud munarakuga on kõik korras ja ta hakkas jagunema, viisid arstid ta proua Browni emakasse. Üheksa kuud hiljem sünnitas proua Brown tütre, kes sai nimeks Louise.
Enne Louise Browni sündi (1978. aastal) olid ummistunud munajuhadega naised ja ebapiisava spermatosoidide arvuga mehed määratud viljatusele. "Katseklaasi eostamise" meetod on andnud võimaluse paljudele paaridele, kellel varem polnud lootustki last saada.
In vitro viljastamise meetodi väljatöötamine algas kunstlik viljastamine, mille esimene edukas juhtum pärineb 1799. aastast, mil mehe spermat süstiti naisele sooja süstlaga. Paljude jaoks oli Louise Browni sünd märk sellest, et teadlased on läinud liiga kaugele, otsustanud end Jumalaga võrdsustada, sekkuda loomisprotsessi.

Väetamise "pudelikaelad".
Raseduse kontseptsiooni ja edasise arengu õnnestumiseks on vaja, et paljudest "kaartidest" koosnev "pasjanss" läheks kokku. Näiteks:
ajus peaksid munaraku arengut stimuleerivad hormoonid moodustuma ja õigeaegselt vabanema;
saadud muna peab olema "kvaliteetne" ja sellel ei tohi olla kromosomaalseid defekte;
muna peab küpsema;
peab moodustuma ajus piisav luteiniseeriv hormoon, mis stimuleerib munaraku lõplikku küpsemist;
munarakk peab folliikulist edukalt väljuma (ovulatsiooni hetk);
munajuha peab "püüdma" munarakku;
sperma peab sisenema tuppe elusalt, läbima selle kiiresti, ületama emakakaela limaskesta barjääri, jõudma munajuhasse ja leidma sealt munaraku;
spermatosoidid peavad saama läbi munaraku membraanide;
spermatosoidid peavad läbima mitmeid biokeemilisi transformatsioone ja "tooma" oma DNA (23 kromosoomi) munarakku;
viljastatud munarakk peab olema jagunemisvõimega;
äsja moodustunud embrüo peaks normaalselt jagunema ja arenema;
kolme päeva pärast pärast viljastamist peab embrüo jõudma emakasse;
embrüo peaks muutuma kahekihiliseks embrüoks;
see embrüo peab "kooruma" oma kestadest;
endomeetrium – emaka seina limaskest – peab olema valmis embrüo vastuvõtmiseks;
embrüo peab "kleepuma" emaka seina külge ja "sisestama" sellesse ...
Seejärel järgneb rida salapäraseid ja tähtsaid sündmusi seotud lapse edasise arenguga.

Munade annetamine
Doonormunaraku kasutamine on tõhus meetod viljatuse ravis kõigil naistel, välja arvatud neil, kelle viljatus on põhjustatud tõsine haigus emakas. ÖKO koos munarakudoonoriga võib soovitada naistele, kelle enda munarakud on halva kvaliteediga või neid ei ole võimalik saada munasarjade stimulatsiooni teel.
Menetlus:
1. Naissoost munarakudoonor, kelle valib välja viljatu paar, läbib põhjaliku põhjaliku läbivaatuse nakkus- ja geneetiliste haiguste tuvastamiseks.
2. Kõigi asjaosaliste vahel sõlmitakse leping.
3. Viljatu naissoost retsipient võtab ravimeid, mis valmistavad endomeetriumi ette loote vastuvõtmiseks.
4. Küpsed doonorrakud võetakse munasarjast välja ja laboratoorsed tingimused viljastatud viljatu naise partnerilt saadud spermaga.
5. Kolme päeva jooksul arenevad embrüod "in vitro" ja seejärel viiakse need emakasse.

ICSI – ICSI – sperma introtsütoplasmaatiline süstimine – sperma süstimine munaraku tsütoplasmasse
ICSI hõlmab ühe sperma viimist otse munarakku (selle asemel, et asetada munad ja seemnerakud toitainekeskkonnaga samasse kultiveerimisnõusse). Alustuseks, nagu alati ÖKO, naise munasarju stimuleeritakse ravimitega, seejärel eemaldatakse neist munarakud. Spermatosoidide sissetoomiseks kasutatakse spetsiaalseid mikroskoope, nõelu ja mikromanipulatsiooniseadmeid. Spermatosoidid ekstraheeritakse ejakulaadist. Spermatosoidide puudumisel ejakulaadis kasutavad nad ICSI meetodi variatsiooni, "ekstraktides" spermatosoidid otse munandist (TESA) või munandimanusest (MESA).
Kellele näidatakse ÖKO ICSI-ga?
Kõik raske meeste viljatusega paarid, kes keelduvad doonorsperma viljastamisest.
ICSI protseduur:
1. Küpset muna hoitakse spetsiaalse pipetiga.
2. Üksik spermatosoid hoitakse kinni ja immobiliseeritakse õhukese ja terava õõnsa nõelaga.
3. Sama nõelaga augustatakse ettevaatlikult munaraku membraan ja süstitakse see munaraku tsütoplasmasse.
4. Spermatosoon süstitakse tsütoplasmasse ja nõel eemaldatakse ettevaatlikult.
ICSI pakub pigem viljastumine ja mõnede andmete kohaselt ka raseduse algus kui üldiselt ÖKO. See on tingitud eelkõige asjaolust, et meeste viljatusega paarid kasutavad tavaliselt ICSI-d, samal ajal kui munarakud on kvaliteetsed ja naise keha on raseduseks valmis. Siiski tuleb meeles pidada, et meeste viljatus on sageli seotud Y-kromosoomi geneetiliste defektidega, mis loomulikult kanduvad edasi järglastele. meessoost. Seda tuleks arvestada ICSI valimisel kunstliku viljastamise meetodiks, võimalusel viia läbi vastavaid geneetilisi uuringuid.
Meetodiga välja töötatud raskete väärarengutega laste sündimise sagedus ÖKO ja ICSI, mitte kõrgem kui tavapärase kontseptsiooni korral.

Sperma annetamine
Seemendamine doonorspermaga on tõhus ravimeetod meeste viljatus(tuleb aga märkida, et hiljuti välja töötatud ICSI meetod võimaldab ka väga madala spermatosoidide arvu korral, s.t. juhtudel, kui doonorsperma oli varem vajalik, saavutada siiski mehe spermatosoididega viljastumine) või probleemile lahenduse üksikule. naine, kes plaanib rasestuda.
Menetlus:
1. Spermapank kontrollib kõiki doonoreid hoolikalt nakkushaiguste, nagu AIDS, hepatiit ja muud infektsioonid, suhtes. Sperma külmutatakse ja säilitatakse 6 kuud, seejärel uuritakse uuesti.
2. Doonor valitakse soovitud väliste tunnuste järgi: rahvus, silmavärv, juuksevärv, pikkus, kaal, veregrupp jne.
3. Külmutatud doonori sperma eemaldatakse spermapangast ja toimetatakse spetsiaalsesse konteinerisse meditsiinikliinik kus seda plaanitakse kasutada.
4. Naine määrab ovulatsiooni hetke (ovulatsiooni määramiseks on palju meetodeid - väga erinevaid).
5. Ovulatsiooni päeval viiakse õhukese ja pehme kateetri abil emakaõõnde liikuvate spermatosoidide puhastatud fraktsiooni sisaldav töödeldud sperma. See operatsioon on täiesti valutu.
6. Doonori viljastamise edukus sõltub naise ja tema vanusest reproduktiivtervis.

Kuidas hinnata embrüote "kvaliteeti".
Kahjuks ei ole maailmas ühtset aktsepteeritud süsteemi embrüo "kvaliteedi" hindamiseks. Reeglina võetakse arvesse järgmisi näitajaid: rakkude arv, nende paigutuse korrastatus, killustatuse aste, embrüot ümbritsevate membraanide paksus jne.
Tavaliselt hinnatakse embrüo kvaliteeti mitte varem kui 48 tundi pärast munaraku väljavõtmist. Selleks ajaks (teise päeva lõpuks) peaks olema vähemalt kaks rakku, parem on, kui embrüo koosneb 3-4 rakust. 72 tunni pärast (kolmanda päeva lõpuks) peaks embrüo koosnema vähemalt alates 6 rakust ja eelistatavalt alates 7 või enamast rakust. Üldiselt jäävad suurema tõenäosusega ellu embrüod, millel on rohkem rakke, korrapäraselt ja ilma killustatuseta. Embrüo kvaliteeti hinnatakse mikroskoobi all ÖKO-labor, mis võimaldab ennustada raseduse tõenäosust pärast embrüo siirdamist. Siiski sisse seda protsessi sekkub palju rohkem tegureid, millega teaduse praegusel arengutasemel arvestada ei saa, mistõttu saadud prognoosid ei täitu alati.

Surrogaatlus
Surrogaatemadus on viis, kuidas saada üle naise viljatusest, kes ise ei suuda last kanda ja sünnitada (emaka puudumise, harjumuspärase raseduse katkemise tõttu).
Sel juhul viiakse viljatu naise munarakk, mis on viljastatud tema abikaasa spermaga, naise emakasse, kes on võimeline kandma ja sünnitama last. Lapse bioloogilisteks vanemateks loetakse paari, kes andis embrüo moodustamiseks munaraku ja sperma ning nende last kandnud naist kutsuti surrogaatemaks (“abi-”, “asendus-” ema).
Kui algselt olid surrogaatemad enamasti lastetu paari sugulased, siis viimasel ajal on surrogaatemadusest saanud elukutse – bioloogilised vanemad maksavad raha. terve naine, kaashäälik kellegi teise embrüo siirdamisele ja kandmisele.
Surrogaat on kõige keerulisem (ja seega ka kallim) programm riigis ÖKO. Kolmanda inimese meelitamine lapse sünni juurde sai võimalikuks peaaegu fantastilise edu tulemusena arstiteadus, võimaldas tunda rõõmu emadusest naistel, kelle viljatus oli varem ületamatu, kuid samas tekitas arstidele ja patsientidele mitmeid uusi eetilisi ja juriidilisi probleeme.