Vještačka oplodnja. Koliko često se koristi IVF?

Vantjelesna oplodnja (od lat. extra - van, izvan i lat. corpus - tijelo, odnosno oplodnja van tijela, skr. ECO) je potpomognuta reproduktivna tehnologija koja se koristi u slučaju neplodnosti. Sinonimi: “vantjelesna oplodnja”, “vantjelesna oplodnja”, “ vještačka oplodnja", u engleski jezik skraćeno IVF (in vitro fertilizacija).Ova tehnologija omogućava ženama da postanu majke iu najbeznadnijim slučajevima. IVF se provodi u svim razvijenim zemljama svijeta i svake godine se rodi nekoliko hiljada “beba iz epruvete”. Za vjernike, među kojima ima i bezdjetnih, sasvim razumno se postavlja pitanje: da li je ovaj metod prihvatljiv sa stanovišta pravoslavne crkve? Pokušajmo razumjeti kako se IVF događa i do kakvih posljedica to dovodi.

Malo istorije

Tokom vantelesne oplodnje, jajna ćelija se vadi iz tela žene i veštački oplodi u „in vitro“ („in vitro“) uslovima, a nastali embrion se čuva u inkubatoru, gde se razvija 2-5 dana, nakon čega se embrion prenosi u materničnu šupljinu za dalji razvoj.

Po prvi put uspješno medicinska tehnologija je primijenjen u Velikoj Britaniji 1977. godine, što je rezultiralo rođenjem Louise Brown 1978. godine, prvog čovjeka "začetog u epruveti". Prvo dijete (djevojčica) začeto IVF u Sovjetskom Savezu rođeno je u februaru 1986. Zahvat je obavljen u Moskvi, u Centru za zdravlje majke i djeteta, koji se sada zove Naučni centar akušerstvo, ginekologija i perinatologija (SC AGiP). Nešto kasnije, u Lenjingradu, iste 1986. godine, rođen je dječak Kiril. Ovim događajima prethodila su ozbiljna istraživanja koja su se u Sovjetskom Savezu počela svrhovito provoditi od 1965. godine. Tada je stvorena grupa za ranu embriogenezu, koja je 1973. godine prerasla u laboratorij eksperimentalne embriologije (na čelu sa prof. B. Leonovom). Prema podacima iz 1994. godine, u ovoj laboratoriji rođeno je više od 1,5 hiljada djece. Godine 1990. na našoj planeti bilo je preko 20.000 beba iz epruvete. U 2010. godini oko 4 miliona IVF procedura dostiže najveći intenzitet u Izraelu, gde se godišnje obavi 3400 IVF procedura na milion stanovnika.

Indikacije:
Indikacije za IVF proceduru su razne forme muška i ženska neplodnost. Prema naredbi N67 Ministarstva zdravlja Ruske Federacije, indikacija za IVF je „neplodnost koja nije podložna terapiji, ili je vjerovatnoća da se ona prevaziđe IVF-om veća nego kod drugih metoda. U nedostatku kontraindikacija, IVF se može provesti na zahtjev bračnog para (žena koja nije u braku) sa bilo kojim oblikom neplodnosti.

Kontraindikacije: Kontraindikacije za IVF su stanja žene u kojima trudnoća i porođaj ugrožavaju zdravlje majke ili djeteta, i to:

somatski i mentalna bolest, koje su kontraindikacije za nošenje trudnoće i porođaja;
kongenitalne malformacije ili stečene deformacije šupljine maternice, u kojima je nemoguće implantirati embrije ili nositi trudnoću;
tumori jajnika;
benigni tumori maternice koji zahtijevaju kirurško liječenje;
oštar inflamatorne bolesti bilo koja lokalizacija;
maligne neoplazme bilo koje lokalizacije, uključujući anamnezu.

Ne postoje kontraindikacije za IVF kod muškaraca.

Tehnologija

IVF tehnologija se provodi u specijaliziranim medicinske ustanove u uslovima ambulantno liječenje. Za provođenje postupka vantjelesne oplodnje potrebno je nabaviti jajne stanice, dobiti spermatozoide, izvršiti vantjelesnu oplodnju, uzgojiti embrion i umetnuti embrion u materničku šupljinu žene.

U pravilu, za vantjelesnu oplodnju pokušavaju dobiti nekoliko jajnih stanica, jer se time povećava efikasnost liječenja neplodnosti ovom metodom. Pošto je to normalno za ženu za jednu menstrualnog ciklusa Ako sazrije jedno jaje, tada se radi dobivanja nekoliko jajnih stanica provodi postupak takozvane "stimulacije superovulacije". Za to se pacijentu propisuju injekcije hormonskih lijekova.

Sazrevanje oocita ne može se direktno odrediti neinvazivnim metodama. Stoga se o sazrijevanju jajašca prosuđuje indirektno rast folikula jajnika. Uz pomoć ultrazvučnih aparata opaža se rast folikula. Po dolasku dominantni folikul određene veličine (16-20 mm), propisana je procedura vađenja jajne stanice - punkcija folikula jajnika. Punkcija folikula se provodi u općoj (češće) ili lokalnoj (rjeđe) anesteziji, igla se izvodi transvaginalno, tok igle kontrolira ultrazvučni aparat. Svrha punkcije je aspiracija (usisavanje) sadržaja folikula (folikularne tekućine). Dobivena tečnost se ispituje mikroskopom za otkrivanje jaja.

Otkrivene jajne ćelije se ispiru iz folikularne tečnosti i prenose u laboratorijsku posudu sa podlogom za kulturu. Petrijeve posude ili ploče za kulturu koriste se kao laboratorijsko stakleno posuđe. Posude sa jajima stavljaju se u inkubatore, gde se čuvaju do oplodnje.

Obično, upotreba hormonskih lijekova i punkcija folikula ne uzrokuje negativne reakcije kod pacijenta, ali ponekad se mogu pojaviti komplikacije. Komplikacija stimulacije superovulacije je sindrom hiperstimulacije jajnika (OHSS), koji se može razviti nekoliko dana nakon završetka stimulacije. OHSS nastaje kada sazrije veliki broj folikula, koji se transformišu u žuto tijelo, tajiti veliki broj estrogena. At težak tok OHSS može zahtijevati hospitalizaciju pacijenta. Komplikacija punkcije folikula može biti hematom jajnika.

Ako je nemoguće dobiti jajne ćelije od pacijenta (nedostatak jajnika, menopauza itd.), moguće je koristiti jajne ćelije donatora (odnosno jajne ćelije druge žene). Nesebični donator (rođak, prijatelj) ili plaćeni donator može djelovati kao donator jajne stanice. Uslovi za rad sa donorom jajnih ćelija regulisani su naredbom N67 Ministarstva zdravlja Ruske Federacije

Ako je nemoguće koristiti spermu muža (prema medicinske indikacije) ili ako pacijent nema seksualnog partnera, moguće je koristiti donorsku spermu. Upotreba donorske sperme podliježe obaveznoj pismenoj saglasnosti supružnika i regulirana je Naredbom N67 Ministarstva zdravlja Ruske Federacije. Prema ovom nalogu, donorova sperma se koristi najkasnije nakon 6 meseci skladištenja u zamrznutom stanju kako bi se dobili podaci o odsustvu u tom periodu. zarazne bolesti od donatora sperme.

IVF direktno sprovode embriolozi u uslovima embriološke laboratorije. Sama oplodnja se vrši na jedan od dva načina:

1) in vitro inseminacija;

2) intracitoplazmatska injekcija sperme (ICSI, ICSI).

U početku, više lak način jajima koja se nalaze u hranljivom mediju dodaje se suspenzija spermatozoida. Spermatozoidi se dodaju po stopi od 100-200 hiljada po jajetu. U roku od 2-3 sata, jedan od spermatozoida ulazi u jajnu stanicu i na taj način je oplodi. Kod druge metode (ICSI), spermatozoid se unosi u jajnu stanicu "ručno" pomoću mikrohirurških instrumenata. ICSI se koristi kada je kvalitet sperme veoma loš, kada se oplodnja ne može dobiti ni u šoljici.

Nakon prodiranja sperme, jajna ćelija se smatra embrionom. Vjerovatnoća uspješne oplodnje je 60-70%. Embrioni sadrže veštački uslovi 2 do 6 dana

Prenos embriona u matericu vrši se 2-5 dana nakon oplodnje jajne ćelije. Zahvat ne zahtijeva anesteziju (ublažavanje bolova) i izvodi se na ginekološkoj stolici u roku od nekoliko minuta. Embrion se prenosi u matericu prolaskom specijalnog elastičnog katetera kroz cerviks. Prema naredbi N 67 Ministarstva zdravlja Ruske Federacije, ne preporučuje se prijenos više od 4 embrija u šupljinu maternice kako bi se izbjegla višeplodna trudnoća. Moderna praksa IVF u Rusiji je takav da obično prenose 2 embriona.

Efikasnost vantjelesne oplodnje (IVF) općenito je oko 30-35%. Vrijednost može varirati ovisno o dobi, uzrocima neplodnosti, kvalifikacijama ljekara i nivou klinike (zbog činjenice da je materijalno-tehnička opremljenost od velikog značaja). Od 20 trudnoća koliko je nastupilo, porođajem će se završiti u proseku 18. Nakon unošenja embriona jednom u 3 dana, potrebno je kontrolisati nivo hormona u krvi. Nakon 12 dana radi se test trudnoće.

U slučaju višeplodne trudnoće, na zahtjev žene, vrši se redukcija – uklanjanje neželjenih embriona. Smanjenje se vrši u periodu od 5 do 13 sedmica, a najboljim se smatra 8 i 9 sedmica. Po svom značenju, redukcija je isti abortus, samo što se njime ne uništavaju sva začeta djeca, već jedno ili više njih, a jedno, dvoje ili (rijetko troje) ostaje da živi i razvija se.

Do 6 sedmica redukcija se vrši pomoću vakuum aspiratora, koji se unosi u šupljinu materice do "nepotrebnog" embriona i isisava. U periodu od 7-8 nedelja, specijalna igla prodire invaginalno u grudnu šupljinu embrion i napraviti injekciju kalcijum hlorida, nakon čega beba umire i njegovo tijelo se rastvara. U periodima od 9 do 13 nedelja, potpuno ista igla ostaje alat za redukciju, samo što se ubacuje kroz stomak trudnice. Ova metoda se smatra najprikladnijom i najsigurnijom za ostatak fetusa i samu ženu.

porođaj

Porođaj tokom trudnoće nakon IVF-a se ne razlikuje od normalnog. U slučajevima kada je uzrok neplodnosti bolest žene, porođaj se provodi uzimajući u obzir određenu bolest i to nema veze sa načinom oplodnje.

Prema riječima ljekara, djeca začeta u epruveti ne razlikuju se od ostalih. Ipak, postoji mišljenje da takva djeca bolje uče, ali su mnogo impulsivnija i češće obolijevaju. Neki ljekari smatraju da je to možda zbog prevelike zaštite željenog djeteta.

Crkveno mišljenje

U svojoj bijeloj knjizi "Osnove društvenog koncepta" (2000), ru Pravoslavna crkva smatra razne probleme bioetika, koja uključuje pitanja prevladavanja neplodnosti. U moralno prihvatljive metode prevladavanja neplodnosti spadaju „umjetna oplodnja muževljevim reproduktivnim stanicama, jer ne narušava integritet bračne zajednice, suštinski se ne razlikuje od prirodnog začeća i događa se u kontekstu bračnih odnosa“.

Crkva daje neodobravajuću ocenu onim opcijama vantelesne oplodnje koje koriste spermu donora, jajne ćelije ili surogat majku: „Upotreba donorskog materijala podriva temelje porodičnih odnosa, jer podrazumeva da dete, pored „društvenih” , ima i takozvane biološke roditelje. “Surogat majčinstvo”, odnosno nošenje oplođenog jajašca od strane žene koja nakon porođaja vraća dijete “mušterijama”, neprirodno je i moralno neprihvatljivo...”. Crkva se također protivi onim opcijama vantjelesne oplodnje u kojima se mogu nabaviti svjesno velika količina embriona nego što je potrebno za transfer u matericu: „Moralno neprihvatljivo sa Pravoslavna tačka Također se mogu vidjeti sve vrste vantjelesne oplodnje, koje uključuju pripremu, konzervaciju i namjerno uništavanje "prekomernih" embriona. Na priznavanju ljudskog dostojanstva čak i za embrion temelji se moralna ocjena abortusa, koji je osudila Crkva. Procedura redukcije je ta koja vas tjera da kažete “Ne” vantjelesnoj oplodnji, jer se uništavanje živih embriona smatra ubistvom.

Crkva također skreće pažnju na činjenicu da: „Upotreba reproduktivnih metoda izvan konteksta Bogom blagoslovene porodice postaje oblik teomahizma koji se provodi pod krinkom zaštite ljudske autonomije i pogrešno shvaćene slobode pojedinca“.

Vještačka oplodnja

Vještačka oplodnja

Umjetna oplodnja je proces oplodnje koji se provodi unošenjem sperme direktno u matericu (vještačka oplodnja) ili in vitro metodom (van tijela, „in vitro“), tj. ekstrakorporalni (IVF).

Vrste umjetne oplodnje:

1. umjetna oplodnja spermom muža ili donora (IISM/IISD);
2. vantjelesna oplodnja (IVF).

Ovisno o svjedočenju žene, odabire se program umjetne oplodnje.

1. Intrauterina inseminacija je unošenje posebno pripremljene sperme pomoću posebnog katetera direktno u šupljinu maternice.

   Dakle, sperma ne prolazi barijere kiselo okruženje vagine i guste zaštitne sluzi cerviksa, te odmah ulazi u neutralno okruženje šupljine materice.

   Nakon toga, spermatozoidi se samostalno kreću u jajovode i jajna ćelija se oplođuje na isti način kao i prilikom prirodnog seksualnog kontakta.

   Prema literaturi, umjetna oplodnja žene kao liječenje neplodnosti koristi se više od 100 godina. Ova procedura izvode se samo u specijalizovanim medicinskim klinikama pod uslovom kompletan pregled muškarci i žene.

   Obavezno je proučavanje stanja materice i jajovoda - histerosalpingografija ( rendgenski pregled koristeći kontrastno sredstvo) ili laparoskopija (pregled materice pomoću optički instrument- laparoskop) za provjeru prohodnosti reproduktivnog trakta.

   Za oplodnju se može koristiti i nativna („živa“) i kriokonzervirana sperma (prethodno odmrznuta). Sperma prije umjetne oplodnje se čisti i koncentrira.

   Vještačka oplodnja se preporučuje ženama sa povećanim viskozitetom cervikalne sluzi ili kiselošću vaginalnog okruženja. Od strane partnera mogu postojati indikacije kao što su erektilna disfunkcija, smanjenje broja pokretnih spermatozoida ili povećan viskozitet sperma itd.

   Zahvat se izvodi u operacionoj sali klinike, na ginekološkoj stolici sa posebnom štrcaljkom sa kateterom, kroz koji se sperma unosi u šupljinu materice. Nakon ove procedure morate ležati 15-20 minuta. Postupak ne zahtijeva anesteziju.

2. IVF - vantjelesna oplodnja - je metoda umjetne oplodnje, u kojoj se muški spermatozoidi i ženske jajne stanice (prethodno izvađene iz jajnika) kombinuju izvan tijela, in vitro (u "staklu", tj. u laboratorijskoj epruveti).

   Tamo se odvija nezavisna oplodnja, a nastali embrioni (1 ili 2) se nekoliko dana kasnije prenose u materice žene, gdje se jedan ili oba implantiraju u endometrijum (sluznica šupljine materice) i razvijaju se tokom 9 mjeseci.

   Stimulacija ovulacije se provodi 2-3 sedmice kako bi se dobila jajna stanica hormonalni lekovi. Nakon što sazrije nekoliko jajnih stanica odjednom, reproduktor ih vadi iz jajnika (probija folikule) i prenosi ih u embriološki laboratorij.

   Umjetna oplodnja putem ICSI- Ovo je jedna od varijanti vantelesne oplodnje. U ovom slučaju, embriolog, koristeći posebne instrumente pod jakim povećanjem mikroskopa, ubrizgava najplodniji spermatozoid u jaje.

   Embrion dobijen nakon takve oplodnje se ne razlikuje od embriona začetih prirodnim putem, a takođe se nakon nekoliko dana prenosi u matericu žene i razvija se 9 meseci. Ova metoda uspešno se koristi kod pacijenata sa muškim faktorom neplodnosti, kada postoje odstupanja od normalni indikatori sjemena ili nakon TESA biopsije za azoospermiju.

Donatorski programi za umjetnu oplodnju

Ako jedan od supružnika nema svoje zdrave polne ćelije, IVF se može obaviti i sa donorskom spermom, jajnim ćelijama donora. Prije doniranja svojih zametnih stanica, donor se podvrgava temeljnom pregledu medicinski genetski pregled. Umjetna oplodnja donorskom spermom provodi se samo nakon dvostrukog pregleda u razmaku od 3 mjeseca.

Za parove kod kojih je kontraindikovano da žena rodi dijete (na primjer, sa teškim srčanim oboljenjima) ili je fizički nemoguće (zbog odsustva materice), IVF se koristi sa surogat majkom.

Još jedna velika prednost IVF-a je što tokom uzgoja embriona u embriološkoj laboratoriji postoji mogućnost preimplantacijske genetske dijagnoze embriona. Ova metoda vam omogućava da identifikujete (ako postoji) genetske bolesti, hromozomske abnormalnosti, razvojne anomalije (malformacije). Za razliku od mnogih drugih klinika, VitroClinic izvodi PGD na cijelom setu ljudskih hromozoma (odnosno na svih 46 hromozoma). Nakon takve analize u matericu će biti prebačeni samo zdravi embriji.

Prije bilo kakvog programa vantjelesne oplodnje, par se podvrgne temeljnom pregledu medicinski pregled identificirati moguće kontraindikacije. Spisak ovakvih pregleda je regulisan Naredbom Ministarstva zdravlja i striktno se poštuje u našoj klinici.

Gdje napraviti umjetnu oplodnju?

Prije konsultacije sa doktorom o prevazilaženju neplodnosti, svaki bračni par postavlja pitanje: „Gdje se može obaviti umjetna oplodnja na visokom profesionalnom nivou?“

Prije nego što odaberete takvu kliniku, pridržavajte se sljedećih preporuka:

• Klinika treba da zapošljava uže specijaliste upravo za lečenje neplodnosti: ginekologe-reproduktivolozi, urolozi-androlozi, embriolozi i genetičari.
• Centar za umjetnu oplodnju treba u svom radu koristiti samo kvalitetne i originalne lijekove i potrošni materijali za IVF.
• Pravi profesionalni reproduktivni specijalisti rade sa svakim parom pojedinačno, tj. izbor metode, šeme stimulacije i podrške ranih datuma trudnoću odabire specijalista tek nakon detaljnog proučavanja anamneze supružnika, prethodnog IVF iskustva (ako ga ima), starosti, zdravstvenog stanja u ovog trenutka i mnogi drugi
• Iskusni reproduktolozi koriste štedljive šeme hormonske stimulacije, vodeći računa o zdravlju svojih pacijenata i izbjegavajući hiperstimulaciju.
• Da bi se isključila višeplodna trudnoća, reproduktor bi trebao prenijeti samo jedan ili dva embrija (prema indikacijama). Tri ili više nije dozvoljeno.
• Specijalisti klinike koju ste odabrali moraju poznavati sve najsavremenije tehnike reproduktivnu medicinu: ICSI, PICSI, potpomognuto izleganje, genetska dijagnostika embriona, itd.
• Analize sperme treba da urade u laboratoriji same klinike specijalisti embriolozi koji procenjuju ne samo morfologiju spermatozoida, već i njihovu plodnost.
• Odaberite kliniku koja sarađuje sa kliničko dijagnostičkom laboratorijom certificiranom prema međunarodnim standardima ISO. Kvalitet izvršenih analiza suštinsku ulogu u pripremi za IVF.
• Unaprijed se pobrinite da od inicijalnih konsultacija do kraja cjelokupnog IVF programa odn vještačka oplodnja Vodit će vas isti reproduktor (osim u situacijama više sile). To ukazuje na odgovornost i usmjerenost liječnika i klinike na pozitivan rezultat.
• Dajte prednost onim klinikama u kojima doktori ostavljaju svoje kontakte pacijentima radi komunikacije. Moći ćete zvati ili pisati email svog doktora ako trebate bilo kakvo pojašnjenje ili imate pitanja.
• Dobro je ako u istoj klinici u kojoj ćete raditi vantelesnu oplodnju postoji mogućnost da ostanete i posmatrate trudnoću. Doktori, poznavajući sve nijanse vaše trudnoće i imaju kontinuitet među sobom, učinit će sve da je dovedu do kraja - rođenja zdravog djeteta.
• Cijena u Moskvi za programe umjetne oplodnje u različitim klinikama može značajno varirati. Obavezno provjerite kod menadžera koliko košta umjetna oplodnja i šta je tačno uključeno u svaki program koji vas zanima, da li je tu moguće dodati neke dodatne usluge, na primjer, ICSI ili izleganje, da li postoje opcije sa donorskim ćelijama i embrione. Širok izbor različitih programa je veliki plus za kliniku. To znači da u ovom centru za umjetnu oplodnju ljekari poznaju sve moderne ART tehnike i mogu sebi priuštiti da izaberu bilo koji program za svaki par.

Umjetna oplodnja nije metoda liječenja neplodnosti, već metoda prevladavanja neplodnosti. Na taj način prevazilazi prepreke za postizanje trudnoće. Trenutno se umjetna oplodnja koristi za prevladavanje gotovo svakog uzroka neplodnosti i omogućava vam da zaobiđete mnoge probleme sa začećem.

32. Oplodnja jaja izvan tijela životinje (in vitro)

Pozitivna vrijednost - unatoč niskom prinosu oocita, sa svakom ekstrakcijom mogućnost ponovljene upotrebe životinje.

33. Osobine vantjelesne oplodnje jajnih stanica kod ženki različite vrste s.-x. životinje

Razvoj sistema gnojidbe i opskrbe ranim fazama Razvoj embriona sisara izvan životinjskog tijela (in vitro) od velikog je značaja u rješavanju niza naučnih problema i praktičnih pitanja u cilju povećanja efikasnosti uzgoja životinja.

Za ove svrhe potrebni su embriji u ranim fazama razvoja, koji se mogu samo ekstrahirati hirurške metode iz jajovoda, što je naporno i ne daje dovoljan broj embriona za obavljanje ovog posla.

Oplodnja jajašca sisara in vitro uključuje sljedeće glavne faze: sazrijevanje oocita, kapacitaciju spermatozoida, oplodnju i obezbjeđivanje ranih faza razvoja.

Sazrevanje oocita in vitro. Veliki broj Zametne stanice u jajnicima sisara, posebno kod goveda, ovaca i svinja sa visokim genetskim potencijalom, predstavlja izvor ogromnog potencijala za reproduktivnu sposobnost ovih životinja u ubrzavanju genetskog napretka u odnosu na korištenje mogućnosti normalne ovulacije. Kod ovih životinjskih vrsta, kao i kod drugih sisara, broj jajnih ćelija koje spontano ovuliraju tokom toplote je samo mali deo hiljada oocita prisutnih u jajniku pri rođenju. Ostatak oocita se regenerira unutar jajnika ili se obično kaže da podliježe atreziji. Naravno, postavilo se pitanje da li je moguće izolovati oocite iz jajnika odgovarajućom obradom i izvršiti njihovu dalju oplodnju izvan tijela životinje. Trenutno nisu razvijene metode za korištenje cjelokupnog fonda oocita u jajnicima životinja, ali se značajan broj oocita može dobiti iz šupljinskih folikula za njihovo dalje sazrijevanje i oplodnju izvan tijela.

Trenutno je samo in vitro sazrevanje goveđih oocita našlo primenu u praksi. Oociti se dobijaju iz jajnika krava nakon klanja životinja i intravitalnom ekstrakcijom, 1-2 puta nedeljno. U prvom slučaju, jajnici se uzimaju od životinja nakon klanja, dostavljaju u laboratoriju u termostatiranoj posudi na 1,5-2,0 sata.U laboratoriji se jajnici dva puta ispiru svježim fosfatnim puferom. Oociti se izvlače iz folikula prečnika 2-6 mm usisavanjem ili rezanjem jajnika na ploče. Jajne ćelije se sakupljaju u medijumu TCM 199 uz dodatak 10% krvnog seruma krave u toploti, zatim se dva puta isperu i odabiru se samo oocite sa kompaktnim kumulusom i homogenom citoplazmom za dalje sazrevanje in vitro.

AT novije vrijeme razvijena je metoda za intravitalno vađenje oocita iz jajnika krava ultrazvučnim uređajem ili laparoskopom. U ovom slučaju, jajne ćelije se aspiriraju iz folikula prečnika najmanje 2 mm, 1-2 puta nedeljno od iste životinje. U prosjeku se jednom dobije 5-6 oocita po životinji. Manje od 50% oocita je pogodno za in vitro sazrijevanje.

Pozitivna vrijednost - unatoč niskom prinosu oocita, sa svakom ekstrakcijom mogućnost ponovljene upotrebe životinje. Kapacitet sperme. Važan korak u razvoju metode oplodnje kod sisara bilo je otkriće fenomena kapacitacije spermatozoida. Godine 1951. M.K. Chang i u isto vrijeme G.R. Austin je otkrio da do oplodnje kod sisara dolazi samo ako se sperma nalazi u jajovodu životinje nekoliko sati prije ovulacije. Austin je skovao termin kapacitacija na osnovu zapažanja o prodiranju spermatozoida pacova u različito vrijeme nakon parenja. To znači da se u spermatozoidima moraju dogoditi neke fiziološke promjene prije nego što spermatozoid stekne sposobnost da se oplodi.

Razvijeno je nekoliko metoda za kapacitaciju ejakulirane sperme domaćih životinja. Za uklanjanje proteina s površine spermatozoida korišten je medij visoke jonske snage koji inhibiraju spermatokapacitaciju.

Međutim, metoda kapacitacije spermatozoida pomoću heparina dobila je najveće priznanje (J. Parrish et al., 1985). Slamke sa smrznutim sjemenom bikova se odmrzavaju u vodenom kupatilu na 39°C 30-40 s. Približno 250 µl odmrznute sperme nanese se u slojeve ispod 1 ml kapacitacionog medija. Kapacitaciona podloga se sastoji od modifikovane tiroidne sredine, bez jona kalcijuma. Nakon inkubacije jedan sat gornji sloj medij zapremine 0,5-0,8 ml, koji sadrži većinu pokretnih spermatozoida, uklanja se iz epruvete i ispere dva puta centrifugiranjem na 500 g tokom 7-10 minuta. Nakon 15 minuta inkubacije sa heparinom (200 µg/ml), suspenzija se razblaži do koncentracije od 50 miliona spermatozoida po ml.

Oplodnja in vitro i osiguranje ranih faza razvoja embrija. Oplodnja jaja kod sisara odvija se u jajovodima. Ovo otežava istraživaču proučavanje uslova okoline u kojima se odvija proces oplodnje. Stoga bi sistem in vitro oplodnje bio vrijedan analitički alat za proučavanje biohemijskih i fizioloških faktora koji su uključeni u uspješno parenje gameta.

Primijeniti sljedeću shemu vantjelesne oplodnje i uzgoja ranih embriona goveda. Oplodnja in vitro se vrši u kapi modifikovanog tiroidnog medijuma. Nakon in vitro sazrijevanja, oocite se djelimično čiste od okolnih proširenih kumulusnih ćelija i prenose u mikrokapljici od po pet oocita. Suspenzija sperme od 2-5 µl dodaje se mediju sa oocitima da bi se postigla koncentracija kapi sperme od 1-1,5 miliona/ml. 44-48 sati nakon inseminacije utvrđuje se prisustvo drobljenja oocita. Zatim se embrioni postavljaju na monosloj epitelnih ćelija za dalji razvoj u roku od 5 dana.

Dakle, ako je začeće djeteta tradicionalan način(kada dođe do oplodnje u jajovodima žene sa spermom muškarca koja je tamo dospjela kao rezultat spolnog odnosa) je nemoguća zbog:
opstrukcija ili odsustvo jajovoda;
endometrioza;
muški faktor neplodnosti (smanjenje pokretljivosti spermatozoida i broja spermatozoida, do totalno odsustvo spermatozoida u ejakulatu);
imunološki faktor neplodnosti -
a s obzirom na to da su prethodni pokušaji prevazilaženja neplodnosti u roku od 12-18 mjeseci bili neučinkoviti, možda bi bilo vrijedno pribjeći mogućnostima koje ECO.

Potrebni uslovi za ECO:
saglasnost oba partnera;
odsutnost u vrijeme početka liječenja znakova akutnih i kroničnih upalnih procesa u genitalnim organima žena i muškaraca;
odsustvo patoloških promjena u šupljini materice;
odsustvo patološke formacije u jajnicima.

Prije zahvata neophodan je temeljit pregled supružnika - kako bi se povećale šanse za trudnoću i smanjio rizik moguće komplikacije.

Za ženu Istraživačka anketa uključuje:
konsultacije i pregled kod ginekologa-endokrinologa;
ultrazvučni postupak; konsultacije terapeuta i drugih specijalista - po preporuci ljekara;
kolposkopija (pregled grlića materice);
pregled na infekcije: toksoplazmoza, citomegalija, herpes, klamidija, sifilis, gonoreja, hepatitis A i B, vaginalni bris na čistoću, bakteriološka analiza iscjetka cervikalni kanal;
hormonalni pregled.

Za muškarca preliminarni pregled uključuje:
konsultacije i pregled kod androloga;
ultrazvučni pregled (ako je potrebno);
produženi spermogram sa određivanjem morfologije spermatozoida, bakteriološkom analizom sperme, hormonskim pregledom, biohemijsko istraživanje sperma (fruktoza, limunska kiselina, cink).

Kako se to radi?

1. Stimulacija superovulacije. Prvog ili trećeg dana ciklusa žena počinje da uzima medicinski proizvod(na primjer, menogon), stimulirajući aktivnost jajnika. Činjenica je da obično jedno jaje sazrijeva u jednom ciklusu. Pod uticajem stimulansa, nekoliko jajnih ćelija sazrijeva, a to povećava šanse za uspjeh ECO. Folikuli u razvoju ("vezikule" u kojima sazrijeva jajna stanica) su ispod stalna kontrola: na osnovu ultrazvučnih podataka procjenjuje se njihova veličina, utvrđuje se nivo estrogena, progesterona i luteinizirajućeg hormona u krvi 2 , procjenjuje se stanje cervikalne sluzi (tj. sluzi u grliću materice). Obično folikuli dostignu potrebnu veličinu u roku od 8-10 dana, nakon čega se ženi ubrizgava hormon korionski gonadotropin, što osigurava konačno sazrijevanje jajašca.
2. Vađenje jaja. U vaginu se ubacuje ultrazvučna sonda sa posebnom iglom za ubijanje. Doktor pažljivo buši najveće folikule i sakuplja zrela jajašca. Cijeli zahvat se izvodi ambulantno. Tokom uzimanja jaja, žena je u stanju blagi lekovi spavanje (intravenozni lijekovi se koriste za anesteziju, umiruju i opuštaju nervni sistem).
3. Dobivanje spermatozoida. Spermatozoidi se ili izvlače iz ejakulata, ili se, u nedostatku ili nedovoljnom broju spermatozoida u ejakulatu, „izvlače“ direktno iz testisa ili iz epididimisa. Spermatozoidi se ne moraju koristiti odmah nakon uklanjanja iz organizma: mogu se zamrznuti i čuvati u posebnim rezervoarima – dok se nakon odmrzavanja vraćaju sva svojstva.
4. Razvrstavanje jajnih ćelija i sperme. Najzrelija i najkvalitetnija jaja se odabiru pod mikroskopom. Spermatozoidi se stavljaju u vodenu sredinu, a oni najživlji i pokretljiviji odmah "jure u plivanje" (onda bivaju uhvaćeni), dok neaktivni ostaju na mjestu.
5. Oplodnja jaja i uzgoj embriona. Nakon što jaja prežive 4-6 sati u inkubatoru, u posebne posude za kulturu sa hranljivim podlogom, na njih se sade pripremljeni spermatozoidi (štaviše, na jedno jaje padne od 50.000 do 100.000 spermatozoida). Spermatozoidi se lijepe oko jajeta i luče enzim koji im pomaže da uđu unutra. Svi se trude, ali samo jedan uspijeva. Čim se jedan od spermatozoida nađe unutra, aktivira se barijera, blokirajući pristup preostalim "spolja". Infiltrirani spermatozoid (muška gameta) i jezgro jajne ćelije se spajaju. Došlo je do oplodnje - dvije ćelije su se spojile u jednu. Ćelija počinje da se deli. Nakon 48-72 sata, embrioni se sastoje od 4-8 ćelija i spremni su za prenos u telo žene.
6. Transfer embriona u šupljinu materice provodi se posebnim kateterom. Da bi se povećale šanse za uspjeh, obično se unose 2-3 embrija. Ovaj postupak je bezbolan. Nakon uspešnog transfera, lekar propisuje lekove koji podržavaju razvoj embriona (progesteron, humani korionski gonadotropin - hCG). Dvije sedmice kasnije utvrđuje se nivo hCG u krvi. Za tri nedelje oplođeno jaje može se vidjeti ultrazvukom.

Nakon prijenosa nekoliko embrija u šupljinu maternice, preostale je moguće zamrznuti i pohraniti na duže vrijeme za kasniju upotrebu ako nije moguće sačuvati ovu trudnoću. Upotreba zamrznutih embrija omogućava ženi da izbjegne ponovljene hormonske stimulacije jajnika, kao i procedure punkcije jajnika.

Efikasnost postupka ECO zavisi od laboratorije u kojoj se izvodi. U prosjeku u svijetu iznosi od 20 do 40%. Međutim, trudnoća ECO ima svoje karakteristike. Prvo, često kada ženska neplodnost hormonalni mehanizmi ženskog reproduktivnog sistema nisu u stanju da pravilno podrže trudnoću, te je neophodno propisati odgovarajuću zamjenu tokom većine, ako ne i cijele trudnoće hormonska terapija. Međutim, ostaje povećana vjerovatnoća spontani pobačaj. Drugo, posle ECOčešće nego inače dolazi do višeplodne trudnoće. To je zbog činjenice da se nekoliko embrija prenosi u šupljinu maternice kako bi se povećala vjerojatnost implantacije. Višeplodna trudnoća prilično često (do 50% slučajeva) je komplikovano spontani pobačaji i prijevremenih porođaja. Kako bi se smanjila vjerovatnoća pobačaja, nakon perioda od 10 sedmica trudnoće može se izvršiti redukcija "ekstra" fetusa (zaustavljanje razvoja fetusa punkcijom fetalne vrećice pod kontrolom ultrazvuka).

Kao što možete vidjeti ECO je složen proces u više faza, čiji uspjeh zavisi od mnogih faktora.

Istorija Louise Brown

Supružnici Brown (Velika Britanija) oduvijek su željeli imati djecu. Dečak i devojčica. Ali uprkos svim njihovim naporima, gospođa Brown nije mogla zatrudnjeti. Upravo u to vrijeme britanski ljekari su najavili stvaranje revolucionarne metode za prevazilaženje neplodnosti. Gospođa Brown je odlučila da je to njena posljednja nada. Doktori su uzeli jajnu stanicu iz njenog jajnika i oplodili je u epruveti sa spermom dobijenom od gospodina Browna. Nakon što su se uverili da je sve u redu sa oplođenim jajetom i počela da se deli, lekari su je premestili u matericu gospođe Braun. Devet mjeseci kasnije, gospođa Brown je rodila kćer, koja je dobila ime Louise.
Prije rođenja Louise Brown (1978.), žene sa začepljenim jajovodima i muškarci s nedovoljnim brojem spermatozoida bili su osuđeni na neplodnost. Metoda "začeća iz epruvete" dala je šansu mnogim parovima koji ranije nisu imali nade da će imati bebu.
Razvoj metode vantjelesne oplodnje započeo je s vještačka oplodnja, čiji prvi uspješan slučaj datira iz 1799. godine, kada je muževljeva sperma ubrizgana u njegovu ženu toplim špricem. Za mnoge je rođenje Luiz Braun bio znak da su naučnici otišli predaleko, da su odlučili da se izjednače sa Bogom, da se mešaju u sam proces stvaranja.

"Uska grla" gnojidbe
Da bi začeće i kasniji razvoj trudnoće bili uspješni, potrebno je da se "pasijans" sastavljen od mnogo "karta" spoji. Na primjer:
u mozgu bi se trebali na vrijeme formirati i osloboditi hormoni koji potiču razvoj jajne stanice;
dobiveno jaje mora biti "visokokvalitetno" i bez hromozomskih defekata;
jaje mora sazreti;
moraju se formirati u mozgu dosta luteinizirajući hormon, koji stimulira konačno sazrijevanje jajeta;
jajna ćelija mora uspješno izaći iz folikula (trenutak ovulacije);
jajovod mora "uhvatiti" jaje;
sperma mora ući živa u vaginu, brzo proći kroz nju, savladati mukoznu barijeru cerviksa, doći do jajovoda i tamo pronaći jajnu stanicu;
spermatozoidi moraju moći da prođu kroz membrane jajne ćelije;
spermatozoid mora proći niz biohemijskih transformacija i "uvesti" svoju DNK (23 hromozoma) u jaje;
oplođeno jaje mora imati sposobnost podjele;
novoformirani embrion bi se trebao normalno dijeliti i razvijati;
nakon tri dana nakon oplodnje, embrion mora stići do materice;
embrion treba da se pretvori u dvoslojni embrion;
ovaj embrion se mora "izleći" iz svojih ljuski;
endometrijum - sluznica zida materice - mora biti spremna da primi embrion;
embrion se mora "zalijepiti" za zid materice i "uvesti" u nju...
Zatim slijedi niz tajanstvenih i važnih događaja povezano sa kasnijim razvojem djeteta.

Donacija jaja
Upotreba donorske jajne ćelije je efikasan metod lečenja neplodnosti kod svih žena, osim onih čija je neplodnost uzrokovana ozbiljna bolest materice. ECO sa donorom jajnih ćelija može se preporučiti ženama čije su sopstvene jajne ćelije lošeg kvaliteta ili se ne mogu dobiti stimulacijom jajnika.
Procedura:
1. Donator jajne ćelije, koju odabere neplodni par, podvrgava se temeljnom sveobuhvatnom pregledu kako bi se identifikovale zarazne i genetske bolesti.
2. Ugovor se potpisuje između svih uključenih strana.
3. Neplodna primateljica uzima lijekove koji pripremaju endometrijum da primi fetus.
4. Zrele jajne ćelije donora se izvlače iz jajnika i laboratorijskim uslovima oplođena spermom dobijenom od partnera neplodne žene.
5. U roku od tri dana, embrioni se razvijaju "in vitro", a zatim se prenose u matericu.

ICSI - ICSI - Introcitoplazmatska injekcija sperme - injekcija sperme u citoplazmu jajne ćelije
ICSI uključuje uvođenje jednog spermatozoida direktno u jaje (umjesto stavljanja jaja i sperme u istu posudu za kulturu sa hranljivim podlogom). Za početak, kao i uvijek ECO, jajnici žene su podvrgnuti stimulaciji lijekovima, a zatim se iz njih uklanjaju jajne stanice. Za uvođenje spermatozoida koriste se posebni mikroskopi, igle i oprema za mikromanipulaciju. Spermatozoidi se izvlače iz ejakulata. U nedostatku spermatozoida u ejakulatu, pribjegavaju varijaciji ICSI metode, „izvlačeći“ spermatozoide direktno iz testisa (TESA) ili iz epididimisa (MESA).
Ko je prikazan ECO sa ICSI?
Svi parovi sa teškom muškom neplodnošću koji odbijaju oplodnju donorskom spermom.
ICSI procedura:
1. Zrelo jaje drži se posebnom pipetom.
2. Jedan spermatozoid se drži i imobilizira tankom i oštrom šupljom iglom.
3. Istom iglom pažljivo se probuši membrana jajne ćelije i ubrizgava u citoplazmu jajne ćelije.
4. Spermatozoid se ubrizgava u citoplazmu i igla se pažljivo uklanja.
ICSI pruža vjerovatnije oplodnje i, prema nekim izvještajima, početak trudnoće nego općenito s ECO. To je posebno zbog činjenice da parovi s muškom neplodnošću najčešće pribjegavaju ICSI, dok su jajašca dobrog kvaliteta, a žensko tijelo spremno za trudnoću. Međutim, treba imati na umu da je muška neplodnost često povezana s genetskim defektima Y kromosoma, koji se, naravno, prenose na potomstvo. muško. Ovo treba uzeti u obzir pri odabiru ICSI kao metode potpomognute oplodnje, ako je moguće, provodeći odgovarajuće genetske studije.
Učestalost rađanja djece s teškim malformacijama, koncipirana metodom ECO i ICSI, ne više nego kod konvencionalnog začeća.

Donacija sperme
Inseminacija donorskom spermom je efikasan metod lečenja muška neplodnost(treba napomenuti, međutim, da nedavno razvijena ICSI metoda omogućava, čak i sa vrlo malim brojem spermatozoida, tj. u slučajevima kada je prethodno bila potrebna sperma donora, da se ipak postigne oplodnja muževim spermatozoidima) ili rješenje problema za slobodna žena koja planira trudnoću.
Procedura:
1. Banka sperme pažljivo pregleda sve donatore na zarazne bolesti kao što su AIDS, hepatitis i druge infekcije. Sperma se zamrzava i čuva 6 mjeseci, nakon čega se ponovo pregleda.
2. Donator se bira prema željenim eksternim karakteristikama: nacionalna pripadnost, boja očiju, boja kose, visina, težina, krvna grupa itd.
3. Zamrznuta sperma donora se vadi iz banke sperme i dostavlja u poseban kontejner u medicinska klinika gdje se planira koristiti.
4. Žena određuje trenutak ovulacije (postoji mnogo metoda za određivanje ovulacije - veliki broj).
5. Na dan ovulacije, obrađena sperma koja sadrži pročišćenu frakciju pokretnih spermatozoida uvodi se u šupljinu materice pomoću tankog i mekog katetera. Ova operacija je potpuno bezbolna.
6. Uspjeh donorske oplodnje zavisi od starosti žene i nje reproduktivno zdravlje.

Kako procijeniti "kvalitet" embrija
Nažalost, u svijetu ne postoji jedinstven prihvaćen sistem procjene "kvaliteta" embriona. U pravilu se uzimaju u obzir sljedeći pokazatelji: broj ćelija, urednost njihovog rasporeda, stupanj fragmentacije, debljina membrana oko embrija itd.
Obično se kvalitet embrija procjenjuje ne prije 48 sati nakon uzimanja jajne stanice. Do tog vremena (do kraja drugog dana) trebale bi biti najmanje dvije ćelije, bolje je da se embrij sastoji od 3-4 ćelije. Nakon 72 sata (do kraja trećeg dana) embrion treba da se sastoji od najmanje od 6 ćelija, a poželjno od 7 ili više. Općenito, vjerojatnije je da će preživjeti embriji s više ćelija, u urednom rasporedu i bez fragmentacije. Kvalitet embriona se procjenjuje pod mikroskopom ECO-laboratorija, koja omogućava predviđanje vjerovatnoće trudnoće nakon transfera embrija. Međutim, u ovaj proces interveniše još mnogo faktora, koji se na sadašnjem nivou razvoja nauke ne mogu uzeti u obzir, pa se dobijene prognoze ne ostvaruju uvek.

Surogatno majčinstvo
Surogat majčinstvo je način da se prevaziđe neplodnost žene koja sama ne može da podnese i rodi dete (zbog odsustva materice, uobičajenog pobačaja).
U ovom slučaju, jajna ćelija neplodne žene, oplođena spermom njenog muža, unosi se u matericu žene koja je sposobna da podnese i rodi dete. Biološkim roditeljima djeteta smatra se par koji je dao jaje i spermu za formiranje embrija, a žena koja je nosila njihovo dijete nazivala se surogat („pomoćna“, „zamjenska“ majka).
U početku su surogat majke najčešće bile rođaci para bez djece, ali je nedavno surogat majčinstvo postalo profesija - biološki roditelji plaćaju novac zdrava zena, u skladu sa implantacijom i nošenjem tuđeg embriona.
Surogat majčinstvo je najsloženiji (i shodno tome i skup) program u svijetu ECO. Privlačenje treće osobe na rođenje djeteta, omogućeno je kao rezultat gotovo fantastičnog napretka medicinska nauka, omogućio je da osete radost majčinstva za žene čija je neplodnost ranije bila nepremostiva, ali je istovremeno za doktore i pacijente postavila niz novih etičkih i pravnih problema.