Плазмени коагулационни фактори. GPM.1.8.2.0003.15 Определяне на активността на факторите на кръвосъсирването

Коагулационен фактор VIII ( Коагулационен фактор VIII)

Клинична и фармакологична група

Факторна подготовка VIII коагулациякръв

фармакологичен ефект

хемостатично лекарство. Насърчава прехода на протромбин към тромбин и образуването на фибринов съсирек.

Фармакокинетика

При пациенти с хемофилия A T 1/2 е 12 часа.Активността на коагулационния фактор VIII на кръвта намалява с 15% в рамките на 12 часа.Кръвният коагулационен фактор VIII е термолабилен и бързо се разрушава при повишаване на температурата, което води до намаляване на T 1/2.

Дозировка

Октанат се прилага интравенозно след разреждане с вода за инжекции, която е включена в опаковката. Октанат доза и продължителност заместителна терапиязависи от степента на дефицит на кръвосъсирващ фактор VIII, местоположението и продължителността на кървенето, клинично състояниетърпелив.

Дозата на лекарството се изразява в международни единици (IU) в съответствие с приетите стандарти на СЗО за коагулационен фактор VIII. Активността на кръвосъсирващия фактор VIII в плазмата се изразява или като процент (спрямо нормалното съдържание на фактора в човешката плазма), или в IU (спрямо Международен стандартза коагулационен фактор VIII).

1 IU коагулационен фактор VIII е еквивалентен на 1 ml нормална човешка плазма. Изчисляването на необходимата доза се основава на емпирично получени резултати, според които 1 IU / kg коагулационен фактор VIII на кръвта повишава нивото на плазмения фактор с 1,5-2% от нормалното съдържание. За да се изчисли дозата, необходима за пациента, се определя първоначалното ниво на активност на фактора на кръвосъсирването VIII и се оценява доколко тази активност трябва да се увеличи.

Необходима доза = телесно тегло (kg) × желаното увеличение на фактор на кръвосъсирването VIII (%) (IU/dl) × 0,5.

Количеството и честотата на употреба на лекарството винаги трябва да съответстват на клиничната ефективност във всеки отделен случай.

В случай на последващо кървене нивото на активността на коагулационния фактор VIII на кръвта не трябва да спада под първоначалното плазмено ниво (% от нормалното съдържание) в подходящия период от време. Следващата таблица може да се използва като насока за избор на доза коагулационен фактор VIII за различни кръвоизливии хирургични интервенции.

Пациентите реагират на прилагането на лекарството индивидуално, докато има различно нивовъзстановяване in vivo, T 1/2 коагулационен фактор VIII се характеризира с променливост. Следователно, по време на лечението, за да се регулира дозата и честотата на приложение, трябва да се следи нивото му. Активността на кръвосъсирващия фактор VIII трябва да се проследява по време на заместителна терапия, особено по време на големи хирургични интервенции.

Посочените в таблицата дози са ориентировъчни. Лекарят определя индивидуално необходимата доза и честотата на употреба на лекарството.

С цел на дългосрочна профилактикакървене при тежка хемофилия Алекарството се предписва в доза от 20-40 IU / kg телесно тегло на всеки 2-3 дни. В някои случаи, особено при млади пациенти, може да се наложи намаляване на интервала между инжекциите или увеличаване на дозата.

Някои пациенти може да развият след лечение инхибиторни антителакъм коагулационен фактор VIII, което може да повлияе на ефективността по-нататъшно лечение. Ако на фона на продължаващата терапия не се наблюдава очакваното повишаване на активността на фактор VIII или липсва необходимият хемостатичен ефект, препоръчва се консултация със специалист. център за лечениеизползвайки теста на Bethesda. Терапията за индуциране на имунен толеранс може да се използва за елиминиране на инхибитора на коагулационния фактор VIII. Основата му е ежедневното приложение на кръвосъсирващ фактор VIII в концентрация, надвишаваща блокиращата способност на инхибитора (100-200 IU/kg/ден, в зависимост от титъра на инхибитора). Факторът на кръвосъсирването VIII, действайки като антиген, провокира повишаване на титъра на инхибитора, докато се развие толерантност, т.е. до намаляване и последващо изчезване на инхибитора. Терапията е непрекъсната и продължава средно от 10 до 18 месеца. Такова лечение трябва да се извършва само от специалисти в областта на антихемофилната терапия.

Разтваряне на лиофилизата

1. Разтворителят (вода за инжекции) и лиофилизатът в затворени флакони се препоръчва да се доставят до стайна температура. Ако преди затопляне разтворителят се използва водна баня, трябва да се внимава водата да не влезе в контакт с гумени запушалки или капачки на флакона. Температурата на водната баня не трябва да надвишава 37°C.

2. Отстранете предпазните капачки от бутилките с лиофилизат и вода, дезинфекцирайте гумените запушалки на двете бутилки с една от дезинфекциращите кърпички.

3. Освободете късия край на двувърхата игла от пластмасовата опаковка, пробийте с нея запушалката на бутилката с вода и я натиснете надолу, докато спре.

4. Обърнете бутилката с вода с иглата, освободете дългия край на двувърхата игла, пробийте с нея запушалката на флакона с лиофилизат и натиснете до упор. Вакуумът във флакона с лиофилизат ще поеме водата.

5. Отделете бутилката с вода заедно с иглата от бутилката с лиофилизат. Лекарството ще се разтвори бързо; за да направите това, бутилката трябва леко да се разклати. Допуска се за употреба само безцветен, прозрачен или леко опалесциращ разтвор без утайка.

Правила за приготвяне и приложение на разтвора

Като предпазна мярка, сърдечната честота трябва да се проследява преди и по време на приложението на Octanate. В случай на изразено ускоряване на пулса, забавете или спрете приложението на лекарството.

След като разтворите концентрата според инструкциите, отстранете защитното покритие от филтърната игла и я поставете в бутилката с концентрата. Отстранете капачката от филтърната игла и прикрепете спринцовката. Обърнете флакона със спринцовката надолу и изтеглете разтвора в спринцовката. Инжекциите трябва да се извършват в съответствие с правилата за асептика и антисептика. Изключете филтърната игла от спринцовката и вместо това прикрепете иглата тип пеперуда.

Разтворът трябва да се прилага интравенозно бавно със скорост 2-3 ml / min.

Ако се използва повече от една бутилка Octanate, спринцовката и иглата тип пеперуда могат да се използват повторно.

Филтърната игла е само за еднократна употреба. Винаги използвайте игла с филтър, за да изтеглите приготвения разтвор в спринцовката.

Всеки неизползван разтвор на лекарството трябва да се изхвърли в съответствие със съществуващите разпоредби.

Предозиране

Въпреки факта, че не са наблюдавани симптоми на предозиране на фактор VIII, не се препоръчва да се превишава предписаната доза.

лекарствено взаимодействие

Данни за взаимодействието на Octanate с др лекарствалипсва.

Бременност и кърмене

Употребата на лекарството по време на бременност и кърмене е възможна в случаите, когато очакваната полза от терапията за майката надвишава потенциален рискза плод или бебе.

Странични ефекти

Алергични реакции:Рядко - ангиоедем, усещане за парене в областта на инжектиране, втрисане, горещи вълни, уртикария (включително генерализирана), главоболие, понижаване на кръвното налягане, летаргия, гадене, повръщане, тревожност, тахикардия, чувство на натиск гръден кош, задух, треска, чувство на треперене. Много рядко (<1/10 000) эти симптомы могут прогрессировать до развития тяжелой анафилактической реакции, включая шок.

Пациентите с хемофилия А могат да развият антитела (инхибитори) срещу коагулационния фактор VIII на кръвта (<1/1000). Наличие ингибиторов приводит к неудовлетворительному клиническому ответу на введение препарата. В таких случаях рекомендуется обращаться в специализированные гематологические/гемофильные центры. Неоходимо обследовать пациента на наличие антител с помощью соответствующих методов (тест Бетезда).

Условия за съхранение

Лекарството трябва да се съхранява на място, защитено от светлина и недостъпно за деца при температура от 2 ° до 25 ° C; не замразявайте. Срок на годност - 3 години.

специални инструкции

При употребата на лекарството е възможно развитието на реакции на свръхчувствителност, както при употребата на други инжекционни лекарства от протеинов произход.

В допълнение към коагулационния фактор VIII, лекарството съдържа и следи от други кръвни протеини. Ранните признаци на реакции на свръхчувствителност са копривна треска, стягане в гърдите, недостиг на въздух, ниско кръвно налягане и анафилаксия (тежка алергична реакция). Ако се появят тези симптоми, приложението на лекарството трябва да се спре незабавно. В случай на развитие на шок трябва да се използват съвременни методи за противошокова терапия.

В случай на лекарствени продукти, получени от човешка кръв или плазма, възможността за предаване на инфекциозни агенти не може да бъде напълно изключена. Това важи и за патогени на неизвестни заболявания. Въпреки това рискът от предаване на инфекциозни агенти се намалява чрез следните мерки:

- подбор на донори чрез медицински интервюта и изследвания, както и скрининг на плазмени пулове за наличие на антигени на вируса на хепатит B (HBV), антитела срещу HIV и вируса на хепатит C (HCV);

— анализ на плазмени пулове за наличие на HCV генетичен материал;

— процедури за дезактивиране/отстраняване, включени в производствения процес, които са валидирани във вирусен модел. Тези процедури са ефективни при HIV, вирусен хепатит А (HAV), HBV и HCV. Процедурите за инактивиране/отстраняване може да са с ограничена ефективност срещу вируси без обвивка, един от които е парвовирус В19. Парвовирус B19 може да причини сериозни реакции при серонегативни бременни жени (вътрематочна инфекция) и при хора, които са имунокомпрометирани или имат повишено производство на червени кръвни клетки (например, с хемолитична анемия).

Когато се прилага концентрат на плазмен коагулационен фактор VIII, се препоръчва ваксинация срещу хепатит А и хепатит В.

В случай на алергични реакции пациентът трябва да бъде изследван за наличие на инхибитор. Пациенти с инхибитори на фактор VIII на кръвосъсирването може да повишат риска от анафилактични реакции по време на последващо лечение с Octanate. Следователно, първата употреба на определеното лекарство по предписание на лекуващия лекар трябва да се извършва под медицинско наблюдение в условия, които осигуряват предоставянето на квалифицирана медицинска помощ в случай на алергични реакции.

Не използвайте други лекарства по време на приема на Октанат.

За въвеждането на Octanate трябва да се използват само инжекционните устройства, включени в опаковката. На вътрешната повърхност на някои инжекционни устройства е възможна адсорбция на фактор VIII на кръвосъсирването, което води до намаляване на ефективността на лечението.

Приложение в детска възраст

Приложението е възможно според режима на дозиране.

Информация за проучване

Специални инструкции:Не провеждайте изследване по време на остри периоди на заболяване и докато приемате антикоагуланти (трябва да изминат поне 30 дни след отмяната). Биоматериалът за изследване трябва да се вземе на празен стомах. Между последното хранене и вземането на кръв трябва да изминат най-малко 8 часа.

ОБЩИ ПРАВИЛА ЗА ПОДГОТОВКА ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ:

1. За повечето изследвания се препоръчва кръводаряване сутрин, между 8 и 11 часа, на празен стомах (трябва да изминат най-малко 8 часа между последното хранене и вземането на кръв, можете да пиете вода, както обикновено), в навечерието на изследването лека вечеря с ограничение на приема на мазни храни. За тестове за инфекции и спешни изследвания е приемливо да се дарява кръв 4-6 часа след последното хранене.

2. ВНИМАНИЕ!Специални правила за подготовка за редица тестове: строго на празен стомах, след 12-14 часа гладуване, трябва да дарите кръв за гастрин-17, липиден профил (общ холестерол, HDL холестерол, LDL холестерол, VLDL холестерол, триглицериди, липопротеин (а), аполипо-протен А1, аполипопротеин В); глюкозотолерантен тест се прави сутрин на гладно след 12-16 часа гладуване.

3. В навечерието на изследването (в рамките на 24 часа) изключете алкохола, интензивната физическа активност, лекарствата (според съгласуването с лекаря).

4. 1-2 часа преди кръводаряване се въздържайте от пушене, не пийте сок, чай, кафе, можете да пиете негазирана вода. Премахване на физически стрес (бягане, бързо изкачване на стълби), емоционална възбуда. Препоръчително е да си починете и да се успокоите 15 минути преди кръводаряване.

5. Не трябва да дарявате кръв за лабораторни изследвания веднага след физиотерапевтични процедури, инструментални изследвания, рентгенови и ултразвукови изследвания, масаж и други медицински процедури.

6. При наблюдение на лабораторните параметри в динамика се препоръчва провеждането на повторни изследвания при едни и същи условия - в една и съща лаборатория, кръводаряване по едно и също време на деня и т.н.

7. Кръвта за изследване трябва да се даде преди началото на приема на лекарства или не по-рано от 10-14 дни след спирането им. За да се оцени контролът на ефективността на лечението с каквито и да е лекарства, е необходимо да се проведе изследване 7-14 дни след последната доза от лекарството.

Ако приемате лекарства, не забравяйте да уведомите Вашия лекар за това.

ОБЩО ФАРМАКОПЕННО РАЗРЕШЕНИЕ

Въвежда се за първи път

Тази фармакопейна монография се отнася за методи за определяне на активността на факторите I, II, VII, VIII, IX, X, XI, фактора на фон Вилебранд, антитромбин III в плазмата и кръвните продукти на човешката кръвосъсирваща система.

ОБЩИ ПОЛОЖЕНИЯ

Определянето на активността на коагулационните фактори се основава на 2 подхода:

1. Едноетапен метод. Възстановяване на процеса на коагулация на кръвта в плазма с дефицит на фактор след добавяне на препарата на този фактор (метод на съсирване).
2. двуетапен метод. В първия етап, използвайки специфичен кофактор, протеолитичната активност на фактор II или фактор X се активира, за да се образува съответно активиран фактор IIa или Xa. На втория етап количеството на образувания активиран фактор се определя чрез реакцията на неговото разцепване на специфичен хромогенен пептид (хромогенен метод).

Възможно е хромогенният метод да се извърши по 2 начина: чрез кинетиката на образуване на хромоген под действието на активиран фактор или чрез крайната точка на натрупване на хромоген за определено време на инкубация.

За провеждане на двата метода е възможно използването на пластмасови епруветки, плаки, оптико-механични, механични полуавтоматични и напълно автоматизирани коагулометри.

При всички методи активността се изчислява чрез сравняване на активността на тестовата проба с активността на международния стандарт на NIBSC или вторичен стандарт за фактор на кръвосъсирването, калибриран спрямо международния стандарт в международни единици за активност (IU). Еквивалентността на международния стандарт в IU се установява от СЗО. За 1 IU (100%) вземете активността на коагулационния фактор в 1,0 ml прясна нормална сборна кръвна плазма от 300 донора. Активността може да бъде изразена в IU/ml, IU/флакон, IU/mg протеин и като процент от количеството, обявено от производителя.

ФАКТОРИ

Фактораз (фибриноген)

Метод на съсирване

Определянето на активността на фибриногена се извършва по метода на Клаус.

Принцип на метода

Когато тромбин се добави към проба, съдържаща фибриноген, се наблюдава образуване на фибринов съсирек. Когато се използва тромбин с висока активност (~10 IU/ml) и проби с ниска концентрация на фибриноген (под 100 mg/dcl), може да се получи линейна зависимост.

За определяне на фибриноген се използват търговски тестови системи, които включват тромбинов реагент, съдържащ хепаринов инхибитор и буфер за разреждане на пробата или търговски тромбинов реагент.

Концентрацията на фибриноген се изразява в mg/dcl. За построяване на калибрационна графика се използва стандартна проба от фибриноген или плазмен калибратор, сертифициран съгласно международния стандарт. Стандартна проба или проба от плазмен калибратор се разтваря в дестилирана вода съгласно инструкциите. Пригответе 5 серийни разреждания на стандартната проба, като започнете от концентрация от ~100 mg/dcl, като използвате буфер за разреждане на пробата pH = 7,3 ± 0,1. Анализът се извършва при температура 37°C съгласно инструкциите за комплекта. За всяко разреждане времето за образуване на съсирек се определя три пъти. Въз основа на резултатите, получени в логаритмични координати, се изгражда калибрираща графика на зависимостта на времето на образуване на съсирек от концентрацията на фибриноген.

Пригответе 2 разреждания на тестовата проба под 100 mg/dl. За всяко разреждане, времето за образуване на съсирек се определя три пъти. Количеството фибриноген във всяко разреждане се определя от калибровъчната графика.

ФакторII(тромбин)

1. Метод на съсирване

Определянето на активността на фактор II се извършва като се използва човешка плазма с дефицит на фактор II като субстрат. Процесът на коагулация се активира чрез добавяне на тромбопластин към калциевата смес.

За разреждане на стандарта и препаратите използвайте NaCl-имидазолов буфер pH 7,3 ± 0,1 с добавяне на 0,1% говежди или човешки албумин. За да се изгради калибровъчна графика, се приготвя серия от серийни разреждания на стандарта на фактор II в диапазона на активност от 0,3 до 1 IU/ml. Лекарството се разрежда до концентрация под 1 IU / ml. Анализирайте 3 разреждания на лекарството. За всяка проба измерването на времето на съсирване се извършва най-малко 2 пъти. Измерването се извършва в рамките на 1 час след разреждането на лекарството.

Анализът се провежда при температура (37±0,5)°C. Добавете 50 µl плазма с дефицит на фактор II и 50 µl от разреждането на стандарта или препарата в пластмасова епруветка. Сместа се инкубира при (37 ± 0,5)°C за 120–240 s. Времето на съсирване се определя от момента на добавяне към сместа на 200 μl калциев тромбопластин, предварително загрят до температура (37±0,5)°C. В зависимост от техниката на настройка на анализа, обемите на реагентите могат да варират в съответната пропорция.

Графиката за калибриране е изградена в полулогаритмични координати. На логаритмичната абсцисна ос са нанесени стойностите на активността на фактор II; на ординатната ос е нанесено времето на съсирване на съответните разреждания на стандарта. Активността на фактор II за всяко разреждане на тестовата проба се намира от кривата на калибриране. FII дейност ( НО

к

1. Хромогенен метод

Методът се основава на сравнение на ензимната активност на фактор IIa, образуван след специфичното активиране на фактор II, по отношение на специфичен хромогенен пептиден субстрат със същата активност на стандартна проба (международна или подобна).

Фактор II се активира от екариновия активатор, изолиран от отровата на усойница. Активираният фактор II (тромбин) селективно разцепва хромогенния субстрат (H-D-фенилаланин-L-пипеколил-L-аргинин-4-нитроанилид дихидрохлорид, 4-толуенсулфонилглицил-пролил-L-аргинин-4-нитроанилид, H-D-циклохексилглицил-α-аминобутирил - L-аргинин-4-нитроанилид, D-циклохексилглицил-L-аланил-L-аргинин-4-нитроанилид диацетат) за образуване П-нитроанилин. Кинетиката на реакцията се изследва фотометрично при 405 nm. Стойността на оптичната плътност е пропорционална на активността на фактор II.

Определянето на фактор II чрез хромогенен метод се извършва с помощта на специални тестови комплекти. Анализът се извършва в съответствие с инструкциите за комплекта. Стандартната проба и препаратът са предварително разредени с плазма с дефицит на фактор II до концентрация от ~ 1 IU / ml (основно разреждане). От основното разреждане се приготвят 3 разреждания на стандартната проба и 3 разреждания на препарата с трис-солен буферен разтвор рН 8,4. Всяко разреждане на стандартната проба се определя два пъти, получените стойности се използват за изграждане на графика за калибриране. Тестовите проби се определят три пъти.

Тестовете се провеждат в ръчен режим с помощта на микроплака и спектрофотометър, поддържащ температура в диапазона (37 ± 0,5)°C или в автоматичен режим с помощта на коагулометър.

За ръчно тестване, 25 µl от всяко разреждане на тестовия препарат или стандартната проба се добавят към ямките на микроплаката. 125 ul буфер за разреждане, 25 ul екарин се добавят към всяка ямка и се инкубират при (37±0.5)°C за 2 минути. В края на инкубационното време към всяка ямка се добавят 25 µl хромогенен субстрат на фактор IIa.

НО/мин).

Ако непрекъснатото измерване на абсорбцията не е възможно, определете абсорбцията при 405 nm на последователни интервали от време (напр. 40 s) и нанесете графика на абсорбцията спрямо времето и изчислете ∆ НОНО

1. Тест за отсъствие на тромбин

За тестване се приготвя разтвор на препарата, възстановен в съответствие с инструкциите. Ако в препарата има хепарин, той се неутрализира чрез добавяне на протамин сулфат в размер на 10 μg протамин сулфат на 1 IU хепарин.

Приготвяне на разтвор на фибриноген

0,3 g фибриноген се разтварят в 100 ml, смесват се и се инкубират 15-20 минути при стайна температура.

Срокът на годност на разтвора е 1 месец при температура от 2 до 8°C.

Приготвяне на разтвор на тромбин

Лиофилизатът се разтваря в съответствие с инструкциите на производителя, престоява 15-20 минути при стайна температура и се разрежда с 0,9% разтвор на натриев хлорид до съдържание на тромбин 1 IU/ml.

Срокът на годност на разтвора е 6 месеца при температура минус 20°C. Разтворът след размразяване не подлежи на повторно замразяване.

Напредък на дефиницията

Равни обеми от разтвореното лекарство и разтвор на фибриноген се добавят към 2 епруветки. Към третата епруветка (контролна проба) се добавят равни обеми разтвор на тромбин и разтвор на фибриноген, съдържанието на епруветките се смесва с ротационни движения. Едната епруветка с разтвореното лекарство се инкубира във водна баня при 37°С в продължение на 6 часа, другата епруветка с разтвореното лекарство е на стайна температура за 24 часа.Отбелязва се наличието или отсъствието на коагулация (съсирек).

Контролната проба се инкубира във водна баня при 37°C и се отбелязва времето на образуване на съсирек.

Критерият за приемливост на резултатите е коагулацията в контролната проба след 30 s.

ФакторVII

1. Метод на съсирване

Определянето на активността на фактор VII се извършва с помощта на човешка плазма с дефицит на фактор VII. Процесът на коагулация се активира чрез добавяне на тромбопластин към калциевата смес.

За разреждане на стандарта и препаратите се използва NaCl-имидазолов буфер pH 7,3 с добавяне на 0,1% разтвор на човешки или говежди албумин. За да се изгради калибрационна крива, серия от серийни разреждания на стандартната проба на фактор VII се приготвя в диапазона от 0,3 до 1 IU/ml. Лекарството се разрежда до концентрация под 1 IU / ml. Анализирайте 3 разреждания на лекарството. За всяка проба измерването на времето на съсирване се извършва най-малко 2 пъти. Измерването се извършва веднага след разреждането на лекарството.

Анализът се провежда при температура (37±0,5)°C. 50 µl плазма с дефицит на фактор VII и 50 µl от разреждането на стандарта или лекарството се добавят към пластмасова епруветка. Сместа се инкубира при (37±0,5)°C за 120–240 s. Времето на съсирване се определя от момента на добавяне към сместа на 200 μl калциев тромбопластин, предварително загрят до температура (37±0,5)°C. В зависимост от техниката на настройка на анализа, обемите на реагентите могат да варират в съответната пропорция.

Графиката за калибриране е изградена в полулогаритмични координати. На логаритмичната абсцисна ос се нанасят стойностите на активността на фактор VII, по ординатната ос - времето на съсирване на съответните разреждания на стандарта. Активността на фактор VII за всяко разреждане на тестовата проба се намира от кривата на калибриране. FVII дейност ( НО) в тестовата проба се изчислява по формулата:

- активност на съответното разреждане на пробата за изпитване, намерена от калибровъчната графика;

к- разреждане на тестовата проба.

1. Хромогенен метод

В присъствието на тъканен фактор (TF) и Ca 2+ йони се активира фактор VII (образуване на FVIIa). Комплексът от FVIIa, TF, Ca 2+ и фосфолипид активира фактор X. Активираният фактор X (FXa) селективно разцепва хромогенния субстрат FXa-1 метоксикарбонил-D-циклохексилаланил-глицил-L-аргинин- н-нитроанилид ацетат за образуване П-нитроанилин. Изследването на пробата се извършва по фотометричен метод при 405 nm. Стойността на абсорбцията (или увеличението на абсорбцията) е пропорционална на количеството фактор VII.

Определянето на фактор VII чрез хромогенен метод се извършва с помощта на специални тестови комплекти. Анализът се извършва в съответствие с инструкциите за комплекта. Стандартната проба и препаратът са предварително разредени с плазма с дефицит на фактор VII до концентрация от ~ 1 IU / ml (основно разреждане). От основното разреждане се приготвят 3 разреждания на стандартната проба и 3 разреждания на препарата с трис-солен буфер pH 7,3 - 8,0, като се използва буферен разтвор с добавяне на 0,1% човешки или говежди албумин. Всяко разреждане на стандартната проба се определя два пъти, получените стойности се използват за изграждане на графика за калибриране. Тестовите проби се определят три пъти.

Разрежданията на тестовия препарат или стандартната проба се добавят към ямките на микроплаката, добавят се калциево-тромбопластинова смес, разтвор на фактор X и се инкубират при температура (37 ± 0,5) °C за 2 до 5 минути, след което факторът Добавя се Xa хромогенен субстратен разтвор.

Измерете промяната в оптичната плътност при дължина на вълната 405 nm, или в кинетичен режим, или прекъснете реакцията на хидролиза след 3-15 минути, като добавите 20% (v/v) разтвор на ледена оцетна киселина и измерете оптичната плътност.

ФакторVIII

1. Метод на съсирване

Определянето на активността на фактор VIII се извършва с помощта на човешка плазма с дефицит на фактор VIII. Източникът на фосфолипиди, необходими за коагулацията, е реагентът APTT.

За разреждане на стандарта и препаратите се използва буферен разтвор на NaCl-имидазол с pH (7,3 ± 0,1) с добавяне на 0,1% разтвор на човешки или говежди албумин. За да се изгради калибрационна графика, се приготвят серии от серийни разреждания на стандарта, като се започне от концентрация от 2 IU/ml. Лекарството се разрежда до концентрация ~ 0,5 - 2 IU / ml. Анализирайте 3 разреждания на лекарството. За всяка проба измерването на времето на съсирване се извършва най-малко 2 пъти. Измерването се извършва в рамките на 1 час след разреждането на лекарството.

Анализът се провежда при температура (37±0,5)°C. 100 µl плазма с дефицит на фактор VIII, 100 µl от разреждането на стандарта или лекарството и 100 µl от APTT реагента се добавят към пластмасова епруветка и се инкубират при температура (37±0,5)°C за 2 минути. Времето на съсирване се фиксира от момента на добавяне към сместа на 100 µl от 0,025 М разтвор на калциев хлорид, предварително загрят до температура (37 ± 0,5)°C. В зависимост от техниката на настройка на анализа, обемите на реагентите могат да варират в съответната пропорция.

Графиката за калибриране е изградена в полулогаритмични координати. Стойностите на активността на фактор VIII са нанесени по логаритмичната абсцисна ос, а времето на съсирване на съответните разреждания на стандарта е нанесено по ординатната ос. Активността на фактор VIII за всяко разреждане на тестовата проба се намира от кривата на калибриране. FVIII активност ( НО) в тестовата проба се изчислява по формулата:

- активността на съответното разреждане на изследваното лекарство, намерена от калибровъчната графика;

к- разреждане на тестовата проба.

1. Хромогенен метод

Количественото определяне на фактор VIII се извършва с помощта на набор от реагенти, в които фактор VIII е кофактор за фактор IXa, когато фактор X се активира, за да образува Ха, който разцепва хромогенния субстрат.

Принцип на метода

В присъствието на Ca 2+ йони и фосфолипиди, фактор X се активира в Xa от фактор IXa. При излишък на фактор X и оптимални количества Ca 2+, фосфолипиди и фактор IXa, скоростта на активиране на фактор X зависи линейно от количеството на фактор VIII. Фактор Xa хидролизира хромогенния субстрат S-2765 (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA), за да освободи хромогенната група на pNA, чийто цвят се записва спектрофотометрично при 405 nm. Количеството образуван фактор Xa и следователно интензитетът на оцветяване е пропорционално на активността на фактор VIII в пробата.

Комплектът реагент за активност на фактор VIII е стабилен за периода, посочен от производителя, при температура на съхранение от 2 до 8 °C.

Комплектът реактиви съдържа:

1. 7,7 mg хромоген S-2765, допълнен със синтетичен тромбинов инхибитор I-2581. Реагентът се разтваря в 6,0 ml стерилна вода за инжекции. Приготвеният разтвор е стабилен за 1 месец при 2 до 8°C. Преди употреба се загрява до температура 37°C.
2. Реагент за говежди фактори: 0.3 U фактор IX, 2.7 IU фактор X и 1 NIH U тромбин, лиофилизиран в присъствието на 40 mmol CaCl2 и 0.2 mmol фосфолипиди. Реагентът се разтваря в 2,0 ml стерилна вода за инжекции. Приготвеният разтвор е стабилен за 12 часа при 2 до 8 ° C, 2 седмици при минус 30 ° C и 1 месец при минус 80 ° C. Да не се съхранява при минус 20 ° C. Преди употреба се загрява до 37 около S.
3. Концентрат × 10 Tris буфер. Стабилен 1 месец при 2 до 8°C. Преди употреба се разрежда със стерилна вода за инжектиране в съотношение 1:10.

Допълнителни реактиви:

1. Международен стандарт - концентриран разтвор на човешки фактор на кръвосъсирването VIII (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std. BRP H 0920000) или плазма, калибрирана спрямо международния стандарт за фактор VIII.
2. Контролирайте нормална или патологична плазма, калибрирана според международния стандарт за фактор VIII.
3. 0,9% разтвор на натриев хлорид.
4. 20% оцетна киселина или 2% лимонена киселина (използвана в метода за крайна точка на съхранение на хромоген).
5. Лабораторно дейонизирана вода

Оборудване:

1. Пластмасови епруветки;
2. микроплаки;
3. Термостат 37 o C;
4. Спектрофотометър 405 nm или четец на микроплаки 405 nm;
5. Калибрирани пипети;
6. Vortex;
7. Хронометър.

Тестовата проба се разрежда до очакваната активност от 1 IU/ml преди определяне.

Определянето може да се извърши в кинетичен режим и в крайната точка, в епруветки (макрометод) и в микроплаки (микрометод).

Калибриране

По време на всяко определяне се изгражда калибровъчна крива. Разреждането на стандартна проба се приготвя на 2 етапа: предварително разреждане до активност 1–2 IU/ml и крайни разреждания за изграждане на калибровъчна зависимост в диапазона 0–2 IU/ml. След разреждане, определянето трябва да се извърши в рамките на 30 минути.

Напредък на дефиницията

Определяне в епруветки

200 µl от разреден стандарт, контролна или тестова проба се добавят към епруветките, инкубират се за 3-4 минути при температура 37 ° C, добавят се 50 µl от предварително загрят факторен реагент, инкубират се 2-4 минути при температура от 37 ° C и 50 ul се добавя хромогенен разтвор.

Определяне в микроплаки

50 µl от разреден стандарт, контролна или тестова проба се добавят към ямките на микроплаката, инкубират се за 3-4 минути при 37°C, добавят се 50 µl предварително затоплен факторен реагент, инкубират се 2-4 минути при температура 37 ° C и 50 µl хромогенен разтвор.

Кинетичен метод за определяне

След добавяне на хромогенния разтвор за 2-10 минути, промяната в оптичната плътност на разтвора се измерва при 405 nm.

Дефиниране чрез крайна точка

След добавяне на хромогенния разтвор, сместа продължава да се инкубира при температура 37 ° C в продължение на 2-10 минути, след което се добавят 50 μl 20% оцетна или 2% лимонена киселина, за да се спре реакцията. Измерете оптичната плътност на разтвора спрямо буфера при 405 nm.

Изчисления

Начертайте промяната в оптичната плътност за минута (за кинетичния метод) или оптичната плътност (за определяне на крайната точка) на разрежданията на стандартния разтвор спрямо концентрацията на фактор VIII в тях. Активността в пробата за изпитване се определя от калибровъчната крива, като се вземе предвид предварителното разреждане на пробата.

ФакторIX

1. Метод на съсирване

Определянето на активността на фактор IX се извършва с помощта на човешка плазма с дефицит на фактор IX. Източникът на фосфолипиди, необходими за коагулацията, е реагентът APTT.

За разреждане на стандарта и препаратите се използва NaCl-имидазолов буфер с pH 7,3 с добавяне на 0,1% разтвор на говежди или човешки албумин. За да се изгради калибровъчна графика, се приготвя серия от серийни разреждания на стандарта в диапазона от 0,3 до 1 IU/ml. Лекарството се разрежда до концентрация под 1 IU / ml. Анализирайте 3 разреждания на лекарството. За всяка проба измерването на времето на съсирване се извършва най-малко 2 пъти. Измерването се извършва в рамките на 1 час след разреждането на лекарството.

Анализът се провежда при температура (37±0,5)°C. 100 µl плазма с дефицит на фактор IX, 100 µl от стандартното или лекарствено разреждане и 100 µl от APTT реагента се добавят към пластмасова епруветка и се инкубират при (37 ± 0,5)°C за 2 минути. Времето на съсирване се фиксира от момента на добавяне на 100 µl от 0,025 М разтвор на калциев хлорид, предварително загрят до температура (37 ± 0,5) °C към сместа. В зависимост от техниката на настройка на анализа, обемите на реагентите могат да варират в съответната пропорция.

Графиката за калибриране е изградена в полулогаритмични координати. На логаритмичната абсцисна ос са нанесени стойностите на активността на фактор IX; на ординатната ос е нанесено времето на съсирване на съответните разреждания на стандарта. Активността на фактор IX за всяко разреждане на тестовата проба се намира от кривата на калибриране. FIX активност ( НО) в тестовата проба се изчислява по формулата:

- активност на съответното разреждане на пробата за изпитване, намерена от калибровъчната графика;

к- разреждане на тестовата проба.

Факторх

1. Метод на съсирване

Определянето на активността на фактор X се извършва с помощта на човешка плазма с дефицит на фактор X. Процесът на коагулация се активира чрез добавяне на тромбопластин към калциевата смес.

За разреждане на стандарта и препаратите използвайте буферен разтвор на NaCl-имидазол pH 7,3 с добавяне на 0,1% разтвор на човешки или говежди албумин. За да изградите калибрационна графика, подгответе серия от серийни разреждания на стандарта на фактор X в диапазона от 0,3 до 1 IU/ml. Лекарството се разрежда до концентрация под 1 IU / ml. Анализирайте 3 разреждания на лекарството. За всяка проба измерването на времето на съсирване се извършва най-малко 2 пъти. Измерването се извършва веднага след разреждането на лекарството.

Анализът се провежда при температура (37±0,5)°C. Добавете 50 µl плазма с дефицит на фактор X и 50 µl от стандарта или разреждането на препарата в пластмасова епруветка. Сместа се инкубира при (37±0,5)°C за 120–240 s. Времето на съсирване се определя от момента на добавяне към сместа на 200 μl калциев тромбопластин, предварително загрят до температура (37±0,5)°C. В зависимост от техниката на настройка на анализа, обемите на реагентите могат да варират в съответната пропорция.

Графиката за калибриране е изградена в полулогаритмични координати. Логаритмичната абсцисна ос нанася стойностите на активността на фактор X , по оста y, времето на съсирване на съответните разреждания на стандарта. Активността на фактор X за всяко разреждане на тестовата проба се намира от кривата на калибриране. Активност на фактор X ( НО) в тестовата проба се изчислява по формулата:

- активност на съответното разреждане на пробата за изпитване, намерена от калибровъчната графика;

к- разреждане на тестовата проба.

1. Хромогенен метод

Фактор X се активира с FX активатор, извлечен от змийска отрова. Активираният фактор X (FXa) селективно разцепва хромогенния субстрат FXa-1 N-α-бензилоксикарбонил-D-аргинил-L-глицил-L-аргинин-4-нитроанилид дихидрохлорид, N-бензоил-L-изолевцил-L-глутамил-глицил - L-аргинин-4-нитроанилид хидрохлорид, метансулфонил-D-левцил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилид, метоксикарбонил-D-циклохексилаланил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилид ацетат за образуване П-нитроанилин. Пробите се изследват фотометрично при 405 nm. Количеството фактор X е пропорционално на нарастването на оптичната плътност на разтвора.

Определянето на фактор X чрез хромогенен метод се извършва с помощта на специални тестови комплекти. Анализът се извършва в съответствие с инструкциите за комплекта. Стандартната проба и препаратът са предварително разредени с плазма с дефицит на фактор X до концентрация от ~ 1 IU/ml (основно разреждане). От основното разреждане се приготвят 3 разреждания на стандартната проба (съгласно инструкциите) и 3 разреждания на лекарството с помощта на буферен разтвор. Всяко разреждане на стандартната проба се определя два пъти, получените стойности се използват за изграждане на графика за калибриране. Тестовите проби се определят три пъти.

Тестовете се извършват ръчно с помощта на пластмасови епруветки или микроплаки при температура (37±0,5)°C или автоматично с помощта на коагулометър.

За ръчно тестване, 12,5 µl от всяко разреждане на тестовия препарат или стандартна проба се добавят към ямките на микроплаката, 25 µl от специфичния активатор на фактор X от отровата на усойницата на Ръсел се добавят към всяка ямка и се инкубират при температура от ( 37 ± 0,5) °C за 90 s, след което към всяка ямка се добавят 150 µl от работното разреждане на хромогенния субстрат на фактор X.

Определете скоростта на промяна на абсорбцията при дължина на вълната 405 nm непрекъснато в продължение на 3 минути и изчислете средната скорост на промяна на абсорбцията (∆ НО/min) или измервайте абсорбцията при дължина на вълната 405 nm на последователни интервали от време (например след 30 s) и начертайте абсорбцията спрямо времето и изчислете ∆ НО/min като ъгъл на наклон на правата линия. От стойностите ∆ НО/min от всяко отделно разреждане на стандартната проба и тестваното лекарство, се изчислява активността на тестваното лекарство.

Фактор на Вилебранд

Определянето на активността на фактора на фон Вилебранд се извършва чрез метода на аглутинация или ензимен имуноанализ.

Активността на фактора на von Willebrand се определя чрез сравняване на активността му с активността на стандартна проба.

Метод на аглутинация

Методът се основава на определянето на коензимната активност на фактора на фон Вилебранд по време на аглутинация на суспензия от тромбоцити в присъствието на ристоцетин А.

Тестът може да се извърши количествено с помощта на автоматизирано оборудване или полуколичествено чрез визуална оценка на аглутинацията в серия от разреждания.

Полуколичествен метод

От стандартната проба и възстановения разтвор на лекарството се приготвят серийни разреждания в 0,9% разтвор на натриев хлорид с 1–5% разтвор на човешки албумин до очакваното съдържание на фактор на von Willebrand 0,5, 1,0 и 2,0 IU/ml. 0,05 ml от всяко разреждане на стандартната проба и тестовия препарат се нанася върху предметно стъкло, добавя се 0,1 ml суспензия на тромбоцитите с ристоцетин и се разбърква за 1 min. Разтворът за разреждане се използва като отрицателна контрола. След 1 минута инкубиране при стайна температура, тромбоцитната аглутинация се оценява визуално. Максималното разреждане, при което настъпва тромбоцитна аглутинация, е титърът на коензимната активност на ристоцетин в пробата.

количествен метод

Пригответе най-малко 2 серии от серийни разреждания на референтните и тестовите проби с буфер за разреждане до очакваните нива на фактора на фон Вилебранд от 0,5, 1,0 и 2,0 IU/mL.

Определянето се извършва в съответствие с инструкциите на производителя на автоматизираното оборудване. Получете стойностите на зависимостта на промяната в оптичната абсорбция (степен на мътност на разтвора) от активността на фактора на фон Вилебранд.

Определянето на съдържанието на фактора на фон Вилебранд в тестовия препарат се извършва с помощта на коефициентите на линейното уравнение на зависимостта на оптичната плътност на разтвора от съдържанието на фактора на фон Вилебранд в стандартната проба.

ELISA метод

Методът се основава на определяне на колаген-свързващата активност на фактора на фон Вилебранд. При специфично свързване на фактора на von Willebrand с колагеновите фибрили и последващото свързване на ензимно-конюгираните поликлонални антитела към фактора на von Willebrand, след добавянето на хромогенен субстрат се образува хромофор, който може да бъде количествено определен чрез спектрофотометричен метод. Съществува линейна връзка между свързването на колаген с фактора на фон Вилебранд и оптичната плътност.

Определянето се извършва с помощта на тест системи, одобрени за използване в здравната практика в Русия в съответствие с инструкциите за употреба.

За тестване пригответе най-малко 3 последователни серии от разреждания на стандартните и тестовите проби, като използвате буфер за разреждане до очакваното съдържание на фактора на фон Вилебранд от 1,0 IU/ml. След това се провеждат тестове в съответствие с инструкциите на производителя за използваната тестова система.

Активирани фактори на кръвосъсирването кръв

Определянето се извършва чрез коагулометричен метод.

За тестване се приготвя разтворен разтвор на лекарството. Ако в препарата има хепарин, той се неутрализира чрез добавяне на протамин сулфат в размер на 10 μg протамин сулфат на 1 IU хепарин. Пригответе разреждания на лекарството 1:10 и 1:100, като използвате Tris буферен разтвор рН 7,5.

0,1 ml стандартна човешка плазма и 0,1 ml разтвор на фосфолипиди се добавят към 3 епруветки, поставени във водна баня с температура (37 ± 0,5) ° C за 60 s, след което 0,1 ml се добавят към първата епруветка Трис буферен разтвор (контролна проба), във втората - 0,1 ml от изследваното лекарство, разредено 1:10, в третата епруветка - 0,1 ml от изследваното лекарство, разредено 1:100. Освен това към съдържанието на всяка епруветка веднага се добавят 0,1 ml от 3,7 g/l разтвор на калциев хлорид, загрят до температура 37 °C. Отбелязва се времето на образуване на съсирек от момента на добавяне на разтвор на калциев хлорид.

Критерият за приемливост на резултатите е времето на коагулация в контролната проба в диапазона от 200 до 350 s.

Конкретна специфична дейност

Специфичната активност на коагулационните фактори се изчислява по формулата:

Определяне на антитромбиновата активностIII

Хромогенен метод

Методът за определяне на активността на ATIII се основава на способността му да неутрализира тромбина в присъствието на хепарин. Към пробата, съдържаща ATIII, се добавят излишни количества хепарин и тромбин. Полученият ATIII-хепаринов комплекс неутрализира количеството тромбин, пропорционално на количеството ATIII. Останалият тромбин селективно разцепва хромогенния субстрат, за да се образува П-нитроанилин, чиято абсорбция се определя при 405 nm. По този начин количеството на ATIII е обратно пропорционално на абсорбцията на свободния П-нитроанилин в пробата.

Определянето на активността на ATIII се извършва с помощта на търговски тестови системи. За да изградите графика за калибриране, използвайте стандартна проба ATIII или плазмен калибратор, сертифициран съгласно международния стандарт. Стандартната проба или плазменият калибратор се разтварят в дестилирана вода според инструкциите в инструкциите. Зависимостта на оптичната плътност от активността на ATIII е линейна в диапазона на активност на ATIII от 0,1 до 1,0 IU/ml. Като използвате хепаринов буфер, пригответе 4 разреждания на стандартна или калибраторна плазма с ATIII активност от 0,1 до 1,0 IU/mL. Анализът се извършва при температура 37°C по схемата, дадена в инструкциите на комплекта. За всяко разреждане, оптичната плътност при 405 nm се определя три пъти и калибровъчната диаграма на абсорбцията спрямо активността на ATIII се нанася в линейни координати.

Пригответе 2 разреждания на тестовата проба с изчислена активност на ATIII по-малка от 1,0 IU/ml. Определянето на активността на ATIII в тестовите проби се извършва при температура 37°C съгласно инструкциите в инструкциите към комплекта. Активността на ATIII в тестваните разреждания се намира от калибровъчната крива. Активността на ATIII в тестовата проба се определя като:

A x– ATIII активност в подходящо разреждане;

к- разреждане на пробата.

Количествено определяне на хепарин

1. Метод на съсирване

Методът се основава на способността на хепарина да удължава времето на съсирване на нормалната плазма поради инхибирането на редица фактори.

За анализа се използва нормална човешка плазма, стандартна проба от хепарин, реагент APTT и разтвор на калциев хлорид 0,025 М. Като разредител за стандартните и тестовите проби се използва 0,9% разтвор на натриев хлорид. Стандартна проба хепарин се разтваря в дестилирана вода съгласно инструкциите в инструкциите. Пригответе 3 разреждания на стандартна проба с активност на хепарин от 0,3, 0,4 и 0,5 IU/ml. Стандартните проби с тези активности трябва да удължат времето на съсирване на нормалната плазма поне 1,5 пъти, в противен случай трябва да се използват разреждания с по-висока активност на хепарин. Успоредно с това се приготвят 3 разреждания на тестовата проба, така че приблизително активността на хепарин в тези разреждания да попада в обхвата на активността на хепарин в разрежданията на стандартната проба.

Анализът се извършва с автоматичен или полуавтоматичен коагулометър в пластмасови епруветки при температура 37°C. 100 µl нормална човешка плазма, 100 µl разреждане на стандартна или тестова проба или 100 µl 0,9% разтвор на натриев хлорид (празен експеримент) се добавят към епруветката, добавят се 100 µl от APTT реагента и сместа се инкубират се 120–240 s при температура ( 37±0.1)°С. След това в епруветката се добавят 100 μl 0,025 М разтвор на калциев хлорид, предварително загрят до температура 37°C, и се записва времето на съсирване на пробата. В зависимост от техниката на настройка на анализа, обемите на реагентите могат да се променят пропорционално. Времето на съсирване на нормалната плазма (празна) трябва да бъде 25–40 s. За всяко разреждане на стандартни и тестови проби времето на съсирване се определя три пъти.

1. Хромогенен метод

Методът се основава на разцепването на хромогенен субстрат, специфичен за активиран фактор X (FXa). Когато прекомерни количества ATIII и FXa се въведат в проба, съдържаща хепарин, количеството FXa, пропорционално на количеството хепарин, се инхибира. Останалият FXa се отцепва от специфичен хромогенен субстрат П-нитроанилин, чиято абсорбция се определя при 405 nm. По този начин количеството на абсорбция е обратно пропорционално на количеството хепарин. Този метод определя съдържанието както на нефракциониран, така и на хепарин с ниско молекулно тегло в анти-Ха единици.

Количеството хепарин се определя чрез хромогенен метод, като се използват търговски тестови системи. За построяване на калибрационна графика се използва стандартна проба хепарин или плазмен калибратор, сертифициран съгласно международния стандарт. Стандартната проба или плазмения калибратор се разрежда в дестилирана вода съгласно инструкциите. Пригответе 4 разреждания на стандарт с концентрация на хепарин по-малка от 1 anti-Xa U/mL, като използвате буфер за разреждане рН 8,4. Анализът се извършва при температура 37°C в съответствие с инструкциите за комплекта. За всяко разреждане абсорбцията при 405 nm се определя три пъти, след което се начертава калибровъчна графика на зависимостта на абсорбцията от концентрацията на хепарин в линейни координати. Зависимостта е линейна в границите на концентрации на хепарин 0 – 1,0 анти-Ха единици/ml.

Пригответе 2 разреждания за тестовата проба с концентрация на хепарин по-малка от 1 anti-Xa U/mL. Анализът се извършва съгласно инструкциите към комплекта при температура 37°C. За всяко разреждане стойността на абсорбцията се определя три пъти.

Определянето се извършва ръчно с пластмасови епруветки, микроплаки или автоматично с помощта на коагулометър.

За тестване в ръчен режим, 20 µl стандартна човешка плазма и 20 µl разтвор на антитромбин III се добавят към ямките на микроплаката. След това към тези ямки се добавят съответно 20, 60, 100 и 140 μl от теста или стандартния препарат и обемът на разтвора във всяка ямка се регулира до 200 μl с буфер (хепариновата активност в крайната реакционна смес е 0,02 - 0,08 IU / ml).

40 µl от всяка ямка на плаката се прехвърлят към втората серия ямки, в които се добавят 20 µl от разтвора на говежди фактор Xa и се инкубират при температура (37 ± 0,5) °C за 30 s, след което 40 µl от разтвора се добавят към ямките фактор Xa хромогенен субстрат и се инкубират отново при (37 ± 0,5)°C за 3-15 минути, като се измерва скоростта на разграждане на субстрата чрез непрекъснато измерване на оптичната плътност при дължина на вълната 405 nm (кинетичен режим) или след спиране на реакцията чрез добавяне на 20% (v/v) разтвор на ледена оцетна киселина (крайна точка на определяне).

При провеждане на изследвания в автоматичен режим с помощта на коагулометър се получават стойностите на зависимостта на промяната на оптичната плътност от концентрацията на хепарин.

Нивото на коагулационен фактор VIII от 0 до 1% причинява изключително тежка форма на заболяването, от 1 до 2% - тежка, от 2 до 5% - умерена, над 5% - лека форма, но с риск от тежка и дори фатално кървене по време на наранявания и хирургични интервенции.

Сред всички възможни прояви на хемофилия, кръвоизливи в големите стави на крайниците (тазобедрени, коленни, глезенни, раменни и лакътни), дълбоки подкожни, междумускулни и интрамускулни кръвоизливи, обилно и продължително кървене при наранявания, поява на кръв в урината. . Други кръвоизливи са малко по-рядко срещани, включително такива тежки и опасни като ретроперитонеални кръвоизливи, кръвоизливи в коремните органи, стомашно-чревни кръвоизливи, вътречерепни кръвоизливи (инсулти).

При хемофилия може доста ясно да се проследи прогресията на всички прояви на болестта, докато детето расте, а по-късно и като възрастен. При раждането могат да се наблюдават повече или по-малко обширни кръвоизливи под периоста на черепните кости, подкожни и интрадермални кръвоизливи, късно кървене от пъпната връв. Понякога заболяването се открива при първата интрамускулна инжекция, която може да причини голям, животозастрашаващ интрамускулен хематом. Никненето на зъби често е придружено от не много силно кървене. През първите години от живота често има кървене от устната лигавица, свързано с нараняване с различни остри предмети. Когато детето се научи да ходи, паданията и натъртванията често са придружени от обилно кървене от носа и хематоми по главата. Кръвоизливите в орбитата, както и посторбиталните хематоми могат да доведат до загуба на зрение. При дете, което е започнало да пълзи, са характерни кръвоизливи в седалището. Тогава на преден план излизат кръвоизливи в големите стави на крайниците. Те се появяват толкова по-рано, колкото по-тежка е хемофилията. Първите кръвоизливи предразполагат към многократни кръвоизливи в същите стави. При всеки отделен човек, болен от хемофилия, са засегнати 1-3 стави с особено упоритост и честота на кръвоизливи. Най-често се засягат коленните стави, следвани от глезенните, лакътните и тазобедрените стави. Кръвоизливите в малките стави на ръцете и краката (по-малко от 1% от всички лезии) и ставите между прешлените са относително редки. При всеки човек, в зависимост от възрастта и тежестта на заболяването, са засегнати от 1-2 до 8-12 стави.

Необходимо е да се прави разлика между остра хемартроза (първична и рецидивираща), хроничен хеморагично-деструктивен остеоартрит (артропатия), вторичен имунен ревматоиден синдром като усложнение на основния процес.

Острата хемартроза се проявява като внезапна поява (често след леко нараняване) или рязко усилване на ставната болка. Ставата често е уголемена, кожата над нея е зачервена, гореща на пипане. След първото преливане на кръвни съставки болката бързо (в рамките на няколко часа) намалява и с едновременното отстраняване на кръвта от ставата изчезва почти веднага.

Различават се IV етапи на увреждане на ставите. В I или ранен стадий обемът на ставата може да се увеличи в резултат на кръвоизлив. В "студения" период функцията на ставата не е нарушена, но рентгеновото изследване определя характерните признаци на лезията. Във II етап се отбелязва прогресията на процеса, която се разкрива според рентгеновите данни. В етап III ставата рязко се увеличава по размер, деформира се, често неравномерна и неравна на допир, определя се изразена хипотрофия на мускулите на засегнатия крак. Подвижността на засегнатите стави е повече или по-малко ограничена, което е свързано както с увреждане на самата става, така и с промени в мускулите и сухожилията. В този стадий се образува изразена остеопороза, лесно възникват фрактури вътре в ставите. В бедрената кост има характерно за хемофилията кратерно или тунелно разрушаване на костната субстанция. Пателата е частично разрушена. Вътреставните хрущяли се разрушават, подвижните фрагменти от тези хрущяли се намират в ставната кухина. Възможни са различни видове сублуксации и измествания на костите. В етап IV функцията на ставата е почти напълно загубена. Възможни са фрактури на ставите. С възрастта тежестта и разпространението на увреждането на ставния апарат прогресира и става по-тежко, когато се появят хематоми около патологично променени стави.

Вторичният ревматоиден синдром (синдром на Barkagan-Egorova) е често срещана форма на увреждане на ставите при пациенти с хемофилия. За първи път този синдром е описан през 1969 г. В много случаи той се разглежда от лекарите, тъй като се появява на фона на вече съществуваща хемартроза и деструктивни процеси, характерни за хемофилия в ставите. Вторичният ревматоиден синдром е придружен от хроничен възпалителен процес (често симетричен) в малките стави на ръцете и краката, които преди това не са били засегнати от кръвоизливи. Впоследствие с напредването на процеса тези стави претърпяват типична деформация. Периодично се появява силна болка в големите стави, може да се отбележи изразена сутрешна скованост в ставите. Независимо от появата на нови кръвоизливи, ставният процес непрекъснато напредва. В този момент кръвният тест разкрива появата или рязкото увеличаване на съществуващите лабораторни признаци на възпалителен процес, включително имунологични.

При повечето хора с хемофилия синдромът се проявява на възраст над 10-14 години. До 20-годишна възраст честотата му достига 5,9%, а до 30 - до 13% от всички случаи на заболяването. С възрастта разпространението и тежестта на всички ставни лезии непрекъснато прогресират, което води до увреждане, налага използването на патерици, инвалидни колички и други устройства. Прогресията на увреждането на ставите зависи от честотата на острите кръвоизливи, навременността и полезността на тяхното лечение (ранното преливане на кръв и нейните компоненти е много важно), качеството на ортопедичните грижи, правилното използване на физиотерапевтични упражнения, физиотерапия и балнеология ефекти, изборът на професия и редица други обстоятелства. Всички тези въпроси в момента са изключително актуални, тъй като продължителността на живота при хемофилия се е увеличила драстично поради успеха на коригиращото лечение.

Обширните и интензивни подкожни, междумускулни, субфасциални и ретроперитонеални хематоми са много трудни и опасни. Постепенно нараствайки, те могат да достигнат огромни размери, да съдържат от 0,5 до 3 литра кръв или повече, да доведат до развитие на анемия, да причинят компресия и разрушаване на околните тъкани и съдовете, които ги хранят, некроза. Така например, ретроперитонеалните хематоми често напълно разрушават големи участъци от тазовите кости (диаметърът на зоната на унищожаване може да достигне 15 cm или повече), хематомите на краката и ръцете разрушават тръбните кости и калтенеуса. Смъртта на костната тъкан води до образуване на кръвоизливи под периоста. Процесът на такова костно разрушаване на рентгенографиите често се бърка с туморен процес. Често калциевите соли се отлагат в хематоми, което понякога води до образуване на нови кости, които могат да затворят ставите и да ги обездвижат напълно.

Много хематоми, оказвайки натиск върху нервните стволове или мускулите, причиняват парализа, сензорни нарушения и бързо прогресираща мускулна атрофия. Особено опасни са обширните кръвоизливи в меките тъкани на субмандибуларната област, шията, фаринкса и фаринкса. Тези кръвоизливи причиняват стесняване на горните дихателни пътища и задушаване.

Сериозен проблем при хемофилията е обилното и постоянно бъбречно кървене, наблюдавано при 14-30% от лицата с това кръвно заболяване. Тези кръвоизливи могат да възникнат както спонтанно, така и във връзка с наранявания на лумбалната област, свързани с пиелонефрит. Освен това може да възникне бъбречно кървене поради повишена екскреция на калций в урината поради разрушаването на костната тъкан при хемофилия. Появата или засилването на такова кървене може да бъде улеснено от употребата на аналгетици (ацетилсалицилова киселина и др.), масивни кръвопреливания и плазмени трансфузии, което води до допълнително увреждане на бъбреците. Бъбречното кървене често се предшества от продължителна екскреция на кръвни частици в урината, които могат да бъдат открити само чрез лабораторни изследвания.

Появата на кръв в урината често е придружена от тежки нарушения на уринирането, както и промяна в количеството отделена урина (може да има както увеличаване на дневния му обем, така и намаляване), пристъпи на бъбречна колика поради образуването на на кръвни съсиреци в пикочните пътища. Тези явления са особено интензивни и изразени по време на лечението, когато нормалното състояние на кръвта временно се възстановява. Прекратяването на отделянето на кръв в урината често се предшества от бъбречна колика и често от временно отсъствие на отделяне на урина с появата на признаци на интоксикация на тялото с токсични метаболитни продукти.

Периодично се повтаря бъбречно кървене, което през годините може да доведе до тежки дистрофично-деструктивни промени в този орган, вторична инфекция и смърт от развитието на бъбречна недостатъчност.

Стомашно-чревното кървене при хемофилия може да бъде спонтанно, но по-често се причинява от приема на ацетилсалицилова киселина (аспирин), бутадион и други лекарства. Вторият източник на кървене са явни или скрити язви на стомаха или дванадесетопръстника, както и ерозивен гастрит от различен произход. Понякога обаче има дифузно капилярно кървене без деструктивни промени в лигавицата. Тези кръвотечения се наричат ​​диапедезни. Когато се появят, чревната стена е наситена с кръв за дълго време, което бързо води до кома в резултат на тежка анемия, припадък поради рязко понижаване на кръвното налягане и смърт. Механизмът на развитие на такова кървене остава неясен до днес.

Кръвоизливите в коремните органи имитират различни остри хирургични заболявания - остър апендицит, чревна непроходимост и др.

Кръвоизливите в мозъка и гръбначния мозък и техните мембрани при хемофилия почти винаги са свързани или с наранявания, или с употребата на лекарства, които нарушават функцията на тромбоцитите, които участват пряко в съсирването на кръвта. Между момента на нараняване и развитието на кръвоизлив може да има лек интервал с продължителност от 1-2 часа до един ден.

Характерна особеност на хемофилията е продължителното кървене по време на наранявания и операции. Разкъсваните рани са много по-опасни от линейните разкъсвания. Кървенето често не се появява веднага след нараняване, а след 1-5 часа.

Отстраняването на сливиците при хемофилия е много по-опасно от коремната хирургия.

Екстракцията на зъби, особено молари, често е придружена от многодневно кървене не само от зъбни гнезда, но и от хематоми, образувани на мястото на тъканна инфилтрация с новокаин, което води до развитие на анемия. Тези хематоми причиняват разрушаване на челюстта. При хемофилия зъбите се отстраняват на фона на действието на антихемофилни лекарства под обща анестезия. Ваденето на няколко зъба е най-добре наведнъж.

Част от усложненията при хемофилия се дължат на кръвозагуба, компресия и разрушаване на тъканите от хематоми, инфекция на хематоми. Голяма група усложнения са свързани и с имунни нарушения. Най-опасният от тях е появата в кръвта на голям брой имунни инхибитори („блокери“) на коагулационния фактор VIII (или IX), превръщайки хемофилията в така наречената инхибиторна форма, при която основният метод на лечение е трансфузионна терапия (преливане на кръв или нейни компоненти) - почти напълно губи своята ефективност. Освен това многократното приложение на антихемофилни лекарства често води до бързо увеличаване на количеството на инхибитора в кръвта, в резултат на което кръвопреливането на кръвта и нейните компоненти, което първоначално е имало някакъв ефект, скоро става безполезно. Честотата на инхибиторната форма на хемофилия, според различни автори, варира от 1 до 20%, по-често от 5 до 15%. При инхибиторните форми функцията на тромбоцитите е значително нарушена, кръвоизливите в ставите и отделянето на кръв в урината стават по-чести, увреждането на ставите е значително по-високо.

Основният метод за лечение и профилактика на кървене и кръвоизлив от всякаква локализация и произход при хемофилия е интравенозното приложение на достатъчни дози кръвни продукти, съдържащи фактор VIII. Фактор VIII е променлив и практически не се запазва в консервирана кръв, естествена и суха плазма. За заместващо лечение са подходящи само директни кръвопреливания от донор и кръвни продукти със запазен фактор на кръвосъсирването VIII. Директно кръвопреливане от донор се прибягва само когато лекарят не разполага с други антихемофилни лекарства. Груба грешка е да се прелива кръв от майката, тъй като тя е носител на болестта и нивото на фактор VIII в кръвта й е рязко намалено. Поради краткия живот на фактор VIII в кръвта на реципиента (около 6-8 часа), кръвопреливанията, както и трансфузиите на антихемофилна плазма, трябва да се повтарят поне 3 пъти на ден. Такива трансфузии на кръв и плазма са неподходящи за спиране на масивно кървене и надеждно покритие за различни хирургични интервенции.

Равен обем антихемофилна плазма е приблизително 3-4 пъти по-ефективен от прясно събрана кръв. Дневна доза от 30-50 ml / kg телесно тегло антихемофилна плазма позволява известно време да се поддържа 10-15% ниво на фактор VIII. Основната опасност от такова лечение е претоварването на кръвообращението по обем, което може да доведе до развитие на белодробен оток. Използването на антихемофилна плазма в концентрирана форма не променя ситуацията, тъй като високата концентрация на инжектирания протеин предизвиква интензивно движение на течност от тъканите в кръвта, в резултат на което обемът на циркулиращата кръв се увеличава в същото време. начин, както когато плазмата се влива в нормално разреждане. Концентрираната суха антихемофилна плазма има само предимството, че съдържа по-концентриран фактор VIII на кръвосъсирването и в малък обем се въвежда по-бързо в кръвния поток. Сухата антихемофилна плазма се разрежда с дестилирана вода преди употреба. Лечението с антихемофилна плазма е достатъчно за спиране на повечето остри кръвоизливи в ставите (с изключение на най-тежките), както и за предотвратяване и лечение на леки кръвоизливи.

Най-надеждните и ефективни при хемофилия концентрати на фактор VIII на кръвосъсирването. Най-достъпният от тях е криопреципитатът. Това е протеинов концентрат, изолиран от плазмата чрез охлаждане (криопреципитация), който съдържа достатъчно количество фактори на кръвосъсирването, но малко протеини. Ниското съдържание на протеин позволява да се инжектира лекарството в кръвта в много големи количества и да се повиши концентрацията на фактор VIII до 100% или повече, без страх от претоварване на кръвообращението и белодробен оток. Криопреципитатът трябва да се съхранява при -20°C, което затруднява транспортирането му. При размразяване лекарството бързо губи своята активност. Сухият криопреципитат и съвременните концентрати на фактор VIII на кръвосъсирването са лишени от тези недостатъци. Те могат да се съхраняват в обикновен хладилник. Прекомерното приложение на криопреципитат е нежелателно, тъй като създава висока концентрация на коагулационни фактори в кръвта, в резултат на което се нарушава микроциркулацията в органите и съществува риск от образуване на кръвни съсиреци и развитие на DIC.

Всички антихемофилни лекарства се прилагат интравенозно само струйно, в най-концентрирана форма и възможно най-скоро след повторното им отваряне, без да се смесват с други разтвори за интравенозно приложение. Една от основните причини за неуспеха на заместителната терапия е вливането на кръвни продукти, което не води до повишаване на нивото на фактор VIII в плазмата. До стабилно спиране на кървенето не можете да използвате никакви кръвни заместители и кръвни продукти, които не съдържат антихемофилни фактори, тъй като това води до разреждане на фактор VIII и намаляване на концентрацията му в серума.

При остри кръвоизливи в ставите е необходимо временно (не повече от 3-5 дни) обездвижване (обездвижване) на засегнатия крайник във физиологично положение, нагряване на засегнатата става (компреси), но не и охлаждане. Ранното отстраняване на кръвта, която е потекла в ставата, не само незабавно премахва болката, предотвратява по-нататъшното съсирване на кръвта в ставата, но също така намалява риска от развитие и бързо прогресиране на артроза. За предотвратяване и лечение на вторични възпалителни промени след отстраняване на кръвта се инжектират 40-60 mg хидрокортизон в ставната кухина. Поддържащата трансфузионна терапия, която се провежда през първите 3-6 дни, предотвратява по-нататъшно кървене и ви позволява да започнете рано тренировъчната терапия, което допринася за по-бързото и по-пълно възстановяване на функцията на засегнатия крайник и предотвратява мускулната атрофия. По-добре е движенията в засегнатата става да се развиват на етапи. През първите 5-7 дни след отстраняване на превръзката се извършват активни движения както в засегнатата става, така и в други стави на крайника, като постепенно се увеличава честотата и продължителността на упражненията. От 6-9-ия ден те преминават към упражнения "натоварване", като използват велоергометри, педали за ръце, еластична тяга. От 11-13-ия ден, за да се елиминира остатъчната скованост и да се ограничи максималната флексия или екстензия, упражненията с пасивно натоварване се извършват с повишено внимание. Едновременно с 5-7-ия ден се предписва физиотерапия - електрофореза с хидрокортизон, анодна галванизация.

При кръвоизливи в меките тъкани се провежда по-интензивно лечение с антихемофилни лекарства, отколкото при кръвоизливи в ставите. С развитието на анемия допълнително се предписват интравенозни инфузии на еритроцитна маса. Ако има признаци на инфекция на хематома, незабавно се предписват антибиотици с широк спектър на действие. Всякакви интрамускулни инжекции при хемофилия са противопоказани, тъй като могат да причинят обширни хематоми и псевдотумори. Пеницилинът и неговите полусинтетични аналози също са нежелателни, тъй като в големи дози те увеличават кървенето.

Ранното и интензивно лечение с антихемофилни лекарства допринася за бързата регресия на хематомите. Капсулираните хематоми се отстраняват, ако е възможно, оперативно заедно с капсулата.

Външно кървене от увредена кожа, кървене от носа и кървене от рани в устната кухина се спират както чрез трансфузионна терапия, така и чрез локално въздействие - чрез лечение на кървящата област с лекарства, които насърчават съсирването на кръвта. В допълнение, тези лекарства могат да се приемат през устата. Върху раните се прилагат притискащи превръзки или конци. По същия начин спрете кървенето след изваждане на зъб. При отстраняване на дъвкателни зъби се провежда малко по-интензивна трансфузионна терапия, а едновременното отстраняване на няколко зъба (3-5 или повече) изисква въвеждането на антихемофилни лекарства през първите 3 дни.

В случай на кървене от носа трябва да се избягва плътното уплътняване, тъй като след отстраняване на тампоните кървенето често се възобновява с още по-голяма сила. Бързото спиране на кървенето от носа обикновено се осигурява от антихемофилна плазма и антихемофилни лекарства и едновременно напояване на носната лигавица с разтвори, които насърчават съсирването на кръвта.

Сериозна опасност представлява бъбречното кървене, при което интравенозните инфузии на антихемофилна плазма и криопреципитат са неефективни.

Стомашно-чревното кървене се контролира с големи дози концентрати на фактора на кръвосъсирването. Трябва да се помни, че стомашно кървене често се провокира от приема на аспирин, бруфен, индометацин във връзка с болки в ставите, зъбобол или главоболие. При пациенти с хемофилия дори една доза аспирин може да причини стомашен кръвоизлив.

При профилактиката и лечението на хроничен остеоартрит и други лезии на опорно-двигателния апарат е необходимо да се предвидят различни начини за защита на ставите и предотвратяване на наранявания на крайниците. За целта в дрехите около коленните, глезенните и лакътните стави се пришиват дунапренени подложки, като се избягват онези спортове, които са свързани със скокове, падания и натъртвания (включително колоездене и мотоциклет). Отдава се значение на възможно най-ранното и пълно лечение на острите кръвоизливи в ставите и мускулите, интензивна целогодишна лечебна физкултура. За това има специални комплекси от атравматични упражнения във вода, върху меки постелки и натоварващи устройства - велоергометри, ръчни врати. Занятията трябва да започнат в предучилищна или начална училищна възраст, тоест преди да са се развили тежки нарушения на опорно-двигателния апарат. Комплексната терапия се допълва от физиотерапия (високочестотни токове, електрофореза на глюкокортикостероиди) и балнеологични методи на лечение, предимно калолечение, саламура и радонови бани. При чести и упорито повтарящи се кръвоизливи в едни и същи стави се провежда рентгенова терапия и оперативно лечение.

Минимизирането на риска от наранявания и порязвания от ранна детска възраст е важно за предотвратяването на кръвоизливи. Лесно чупещите се играчки (включително метални и пластмасови), както и нестабилните и тежки предмети са изключени от ежедневието. Мебелите трябва да са със заоблени ръбове, изпъкналите ръбове са увити с памучна вата или гума от пяна, подът е покрит с килим. Комуникацията и игрите на пациентите с момичета са за предпочитане, но не и с момчета. За пациента е важен правилният избор на професия и място на работа.

Превенцията на хемофилията все още не е разработена. Определянето на пола на нероденото дете чрез генетично изследване на клетки, получени от амниотична течност, ви позволява да прекратите бременността своевременно, но не показва дали плодът е носител на гена на хемофилията. Бременността се запазва, ако плодът е мъжки, тъй като всички синове на болните се раждат здрави. Прекратете бременността, ако плодът е женски, тъй като всички дъщери на пациенти с хемофилия са носители на болестта.

При жените проводници на хемофилия, които имат 50% шанс да родят засегнато дете (ако плодът е мъжки) или които са предаватели на хемофилия (ако плодът е женски), раждането само на момичета прехвърля риска от пациенти с хемофилия в семейството от първо поколение до второ, като в същото време се увеличава общият брой на носителите на болестта.

Хроматографски пречистена лиофилизирана човешка плазмена фракция, съдържаща коагулационен фактор VIII. Антихемофилен глобулин, компенсира дефицита на коагулационен фактор VIII, временно компенсира коагулационния дефект при пациенти с хемофилия А. Намира се в естествена комбинация с протеин С на фактор VIII, фактор на фон Вилебранд. Той участва в процесите на коагулация на кръвта, насърчава прехода на протромбин към тромбин и образуването на фибринов съсирек. Веднага след прилагане повишава коагулационния потенциал на кръвта. Намаляването на активността на антихемофилния фактор има двуфазен характер: ранната фаза е бързо намаляване на активността, характеризира времето на равновесие с екстраваскуларното пространство, втората фаза е бавна, отразява биологичния полуживот на приложен антихемофилен фактор и е 9-14 ч. Специфична активност (след добавяне на човешки албумин) - 9-22 IU протеин. 1 IU (както е дефинирано от стандарта за коагулационен фактор VIII на СЗО) е приблизително равно на нивото на антихемофилния фактор, наличен в 1 ml свежа човешка донорска плазма.
Времето за достигане на максимална плазмена концентрация след интравенозно приложение е от 10 минути до 2 часа Полуживотът е 8,4-19,3 часа Активността на коагулационния фактор VIII намалява постепенно - с 15% в рамките на 12 часа При хипертермия периодът полуживотът на коагулационния фактор VIII може да намалее.

Показания за употреба на лекарството Коагулационен фактор VIII

Хемофилия А, болест на фон Вилебранд (лечение и профилактика на кървене, включително по време на хирургични интервенции); придобит дефицит на фактор VIII, заболявания, придружени от образуване на антитела срещу фактор VIII.

Как да използвате коагулационен фактор VIII

В/в. За предотвратяване на спонтанно кървене или с леко кървене - 10 IU / kg (съдържанието на фактор VIII, необходимо за предотвратяване на спонтанно кървене - 5% от нормалното ниво); с умерено кървене и малка хирургична интервенция (например екстракция на зъб) - 15-25 IU / kg (съдържание на фактор VIII - 30-80% от нормата), последвано от поддържаща доза от 10-15 IU / kg на всеки 12- 24 часа в продължение на 3 дни или до получаване на достатъчен клиничен ефект; при остро животозастрашаващо кървене - 40-50 IU / kg (съдържание на фактор VIII - 60-100% от нормата), последвано от поддържаща доза от 20-25 IU / kg на всеки 8-24 часа; при обширни хирургични интервенции - 40-50 IU / kg 1 час преди процедурата и 20-25 IU / kg - 5 часа след първата доза (т.е. 80-100% от нормата преди и след операцията), след това повторете на всеки 8-24 часа до постигане на достатъчен клиничен ефект. За дългосрочна профилактика на кървене при тежка хемофилия А - 12-25 IU / kg на всеки 2-3 дни.
Криопреципитатът се използва, като се вземе предвид съвместимостта за кръвни групи AB0. Контейнер със замразен криопреципитат се поставя за размразяване и пълно разтваряне във водна баня при температура не по-висока от 35-37 ° C и се инкубира за не повече от 7 минути. Полученият прозрачен жълтеникав разтвор, който не трябва да съдържа люспи, се използва веднага след приготвянето. Прилага се интравенозно със спринцовка или трансфузионна система с филтър за еднократна употреба. Дозата зависи от първоначалното съдържание на фактор VIII в кръвта на пациент с хемофилия, естеството и локализацията на кървенето, степента на риск от хирургична интервенция, наличието в кръвта на пациента на специфичен инхибитор, който може да неутрализира активността на фактор VIII (изразен в единици активност на фактор VIII). За да се осигури ефективна хемостаза при най-честите усложнения на хемофилия (хемартроза, бъбречно, гингивално и назално кървене), както и екстракция на зъби, съдържанието на фактор VIII в плазмата трябва да бъде най-малко 20%; с междумускулни хематоми, стомашно-чревни кръвоизливи, фрактури и други наранявания - не по-малко от 40%; при повечето хирургични интервенции - поне 70%. С въвеждането на фактор VIII в размер на 1 единица на 1 kg телесно тегло, съдържанието му в кръвта се увеличава средно с 1%. Въз основа на това броят на дозите, необходими за повишаване на концентрацията на фактор VIII в кръвта до дадено ниво, се изчислява по формулата: телесното тегло на пациента (в kg), умножено по необходимото съдържание на фактор VIII в кръвта на пациента и разделено на 200 (минималното съдържание на фактор VIII в единици активност в 1 доза криопреципитат). След пълно спиране на кървенето, въвеждането на фактор VIII при пациенти с хемофилия се извършва на интервали от 12-24 часа в доза, която осигурява повишаване на съдържанието на фактор VIII с най-малко 20%. Лечението продължава няколко дни - до видимо намаляване на размера на хематома. При оперативни интервенции се прилага хемостатична доза 30 минути преди операцията. В случай на масивно кървене загубата на кръв се попълва, в края на операцията се въвежда отново криопреципитат (1/2 доза от оригинала). 3-5 дни след операцията е необходимо да се поддържа концентрацията на фактор VIII в кръвта на пациента в същите граници, както по време на операцията. В следоперативния период в бъдеще, за да се поддържа хемостазата, е достатъчно да се увеличи съдържанието на фактор VIII до 20%. Продължителността на хемостатичната терапия е 7-14 дни и зависи от естеството, местоположението на кървенето, характеристиките на репаративната тъкан. Препоръчително е да се комбинира лечението на пациент с хемофилия с криопреципитат с едновременното приложение на антифибринолитични средства и кортикостероиди в профилактични и средни терапевтични дози.

Противопоказания за употребата на лекарството Коагулационен фактор VIII

Повишена чувствителност.

Странични ефекти на фактор на кръвосъсирването VIII

Алергични и трансфузионни реакции (уртикария, обрив, стридорно дишане, понижено кръвно налягане, втрисане, хипертермия, анафилаксия), преходна парестезия на устната лигавица, гадене, повръщане, главоболие.

Специални указания за употреба на лекарството Коагулационен фактор VIII

Използвайте с повишено внимание по време на бременност и кърмене.
Необходимо е да се контролира сърдечната честота преди и по време на терапията: при значително повишаване на сърдечната честота скоростта на инфузията се забавя или приложението се спира. По време и след края на курса на лечение е необходимо да се контролира съдържанието на фактор VIII в кръвта. За да се идентифицират признаци на прогресивна хемолитична анемия, е необходимо да се наблюдава хематокрит и директна реакция на Coombs. Промените в имунния статус при пациенти с асимптоматична хемофилия се дължат на многократно излагане на вирусни патогени и / или възможното наличие на примеси в препарати с фактор VIII (например IgG). За постигане на задоволителни клинични резултати може да се приложи допълнителна доза в допълнение към първоначално изчислената доза. При липса на клиничен ефект е необходимо да се проведе тест за идентифициране на инхибитора и определяне на неговото количество в неутрализирани антихемофилни единици на 1 ml или общ обем на плазмата. За да се намали рискът от нежелани реакции, се препоръчва да се използва не по-късно от 1 час след разреждането, да се прилага само интравенозно, в продължение на най-малко 3 часа (със скорост 10 ml / min), не замразявайте разтвора и не го използвайте повторно . Възможно е да се развият антитела срещу коагулационен фактор VIII, в такива случаи ефективността на терапията обикновено е намалена, което може да наложи увеличаване на дозата на коагулационния фактор VIII. Възможно е да се увеличи скоростта на намаляване на броя на CD4 клетките при HIV-серопозитивни пациенти с хемофилия.