Plasma hüübimisfaktorid. GPM.1.8.2.0003.15 Vere hüübimisfaktorite aktiivsuse määramine

VIII hüübimisfaktor ( Koagulatsioonifaktor VIII)

Kliiniline ja farmakoloogiline rühm

Faktori ettevalmistamine VIII koagulatsioon veri

farmakoloogiline toime

hemostaatiline ravim. Soodustab protrombiini üleminekut trombiiniks ja fibriini trombi moodustumist.

Farmakokineetika

Hemofiiliaga patsientidel on A T 1/2 12 tundi.VIII hüübimisfaktori aktiivsus väheneb 12 tunni jooksul 15% VIII verehüübimisfaktor on termolabiilne ja hävib kiiresti temperatuuri tõustes, mis viib T vähenemiseni. 1/2.

Annustamine

Oktanaati manustatakse intravenoosselt pärast lahjendamist süsteveega, mis on pakendis. Oktanaadi annus ja kestus asendusravi sõltuvad VIII hüübimisfaktori puudulikkuse astmest, verejooksu asukohast ja kestusest, kliiniline seisund patsient.

Ravimi annus väljendatakse rahvusvahelistes ühikutes (RÜ) vastavalt WHO VIII vere hüübimisfaktori standarditele. Vere VIII hüübimisfaktori aktiivsust plasmas väljendatakse kas protsentides (võrreldes faktori normaalse sisalduse suhtes inimese plasmas) või RÜ-des (suhteliselt Rahvusvaheline standard VIII hüübimisfaktori puhul).

1 RÜ VIII hüübimisfaktorit võrdub 1 ml normaalse inimese plasmaga. Vajaliku annuse arvutamine põhineb empiiriliselt saadud tulemustel, mille kohaselt 1 RÜ / kg vere VIII hüübimisfaktorit suurendab plasmafaktori taset 1,5-2% normaalsest sisaldusest. Patsiendile vajaliku annuse arvutamiseks määratakse vere VIII hüübimisfaktori aktiivsuse esialgne tase ja hinnatakse, kui palju seda aktiivsust on vaja suurendada.

Vajalik annus = kehakaal (kg) × VIII hüübimisfaktori soovitud suurenemine (%) (RÜ/dl) × 0,5.

Ravimi kogus ja kasutamise sagedus peavad igal üksikjuhul alati vastama kliinilisele efektiivsusele.

Järgneva verejooksu korral ei tohi VIII hüübimisfaktori aktiivsuse tase langeda alla esialgse plasmataseme (% normaalsest sisaldusest) sobiva aja jooksul. Järgmist tabelit saab kasutada juhisena VIII hüübimisfaktori annuse valimisel mitmesugused verejooksud ja kirurgilised sekkumised.

Patsiendid reageerivad ravimi manustamisele individuaalselt, kuigi see on olemas erineval tasemel taastumine in vivo, T 1/2 VIII hüübimisfaktorit iseloomustab varieeruvus. Seetõttu tuleb ravi ajal annuse ja manustamissageduse reguleerimiseks jälgida selle taset. Asendusravi ajal, eriti suurte kirurgiliste sekkumiste ajal, tuleb jälgida vere hüübimisfaktori VIII aktiivsust.

Tabelis näidatud annused on soovituslikud. Vajaliku annuse ja ravimi kasutamise sageduse määrab arst individuaalselt.

Eesmärgiga pikaajaline ennetamine verejooks raske hemofiilia A korral ravim määratakse annuses 20-40 RÜ / kg kehakaalu kohta iga 2-3 päeva järel. Mõnel juhul, eriti noortel patsientidel, võib osutuda vajalikuks vähendada süstidevahelist intervalli või suurendada annust.

Mõned patsiendid võivad pärast ravi areneda inhibeerivad antikehad VIII hüübimisfaktorile, mis võib tõhusust mõjutada edasine ravi. Kui käimasoleva ravi taustal ei täheldata VIII faktori aktiivsuse eeldatavat suurenemist või vajalik hemostaatiline toime puudub, on soovitatav konsulteerida spetsialistiga. ravikeskus kasutades Bethesda testi. Immuuntolerantsi esilekutsuvat ravi võib kasutada VIII hüübimisfaktori inhibiitori kõrvaldamiseks. Selle aluseks on vere hüübimisfaktori VIII igapäevane manustamine kontsentratsioonis, mis ületab inhibiitori blokeerimisvõimet (100-200 RÜ/kg/päevas, olenevalt inhibiitori tiitrist). Antigeenina toimiv vere hüübimisfaktor VIII kutsub esile inhibiitori tiitri tõusu kuni tolerantsuse väljakujunemiseni, s.o. kuni inhibiitori vähenemiseni ja järgneva kadumiseni. Teraapia on pidev ja kestab keskmiselt 10–18 kuud. Sellist ravi peaksid läbi viima ainult antihemofiilse ravi valdkonna spetsialistid.

Lüofilisaadi lahustamine

1. Suletud viaalides olev lahusti (süstevesi) ja lüofilisaat on soovitatav viia toatemperatuuril. Kui enne soojendamist kasutatakse lahustit veevann, tuleb jälgida, et vesi ei puutuks kokku kummikorkide või viaalikorkidega. Veevanni temperatuur ei tohi ületada 37°C.

2. Eemaldage lüofilisaadi ja veega pudelitelt kaitsekorgid, desinfitseerige mõlema pudeli kummikorgid ühe desinfitseeriva salvrätikuga.

3. Vabastage kahe otsaga nõela lühike ots plastpakendist, torgake sellega veepudeli kork läbi ja suruge seda alla, kuni see peatub.

4. Pöörake veepudel nõelaga ümber, vabastage kahe otsaga nõela pikem ots, torgake sellega lüofilisaadiga viaali kork ja vajutage kuni peatumiseni. Lüofilisaadi viaalis olev vaakum tõmbab vett sisse.

5. Eraldage veega pudel koos nõelaga lüofilisaadiga pudelist. Ravim lahustub kiiresti; selleks tuleb pudelit veidi loksutada. Lubatud on kasutada ainult värvitut, läbipaistvat või kergelt opalestseeruvat seteteta lahust.

Lahuse valmistamise ja manustamise reeglid

Ettevaatusabinõuna tuleb enne Octanate manustamist ja selle ajal jälgida südame löögisagedust. Pulsi märgatava kiirenemise korral aeglustage või lõpetage ravimi manustamine.

Pärast kontsentraadi lahustamist vastavalt juhistele eemaldage filtrinõelalt kaitsekate ja sisestage see koos kontsentraadiga pudelisse. Eemaldage filtrinõelalt kork ja kinnitage süstal. Pöörake viaal süstlaga tagurpidi ja tõmmake lahus süstlasse. Süstid tuleb teha vastavalt aseptika ja antisepsise reeglitele. Ühendage filtrinõel süstla küljest lahti ja kinnitage selle asemel libliknõel.

Lahust tuleb manustada intravenoosselt aeglaselt kiirusega 2-3 ml/min.

Kui kasutatakse rohkem kui ühte Octanate pudelit, saab süstalt ja libliknõela uuesti kasutada.

Filtri nõel on ainult ühekordseks kasutamiseks. Valmistatud lahuse süstlasse tõmbamiseks kasutage alati filtriga nõela.

Kasutamata jäänud ravimilahus tuleb hävitada vastavalt kehtivatele eeskirjadele.

Üleannustamine

Hoolimata asjaolust, et VIII faktori üleannustamise sümptomeid ei täheldatud, ei soovitata ettenähtud annust ületada.

ravimite koostoime

Andmed Octanate interaktsiooni kohta teistega ravimid puudu.

Rasedus ja imetamine

Ravimi kasutamine raseduse ja imetamise ajal on võimalik juhtudel, kui ravi eeldatav kasu emale ületab võimalik risk lootele või imikule.

Kõrvalmõjud

Allergilised reaktsioonid: harva - angioödeem, põletustunne süstepiirkonnas, külmavärinad, kuumahood, urtikaaria (sh generaliseerunud), peavalu, vererõhu langus, letargia, iiveldus, oksendamine, ärevus, tahhükardia, rõhutunne rind, õhupuudus, palavik, külmavärina tunne. Väga harva (<1/10 000) эти симптомы могут прогрессировать до развития тяжелой анафилактической реакции, включая шок.

A-hemofiiliaga patsientidel võivad tekkida antikehad (inhibiitorid) vere hüübimisfaktori VIII (<1/1000). Наличие ингибиторов приводит к неудовлетворительному клиническому ответу на введение препарата. В таких случаях рекомендуется обращаться в специализированные гематологические/гемофильные центры. Неоходимо обследовать пациента на наличие антител с помощью соответствующих методов (тест Бетезда).

Ladustamise tingimused

Ravimit tuleb hoida valguse eest kaitstud ja lastele kättesaamatus kohas temperatuuril 2 ° C kuni 25 ° C; ära külmuta. Kõlblikkusaeg - 3 aastat.

erijuhised

Ravimi kasutamisel on ülitundlikkusreaktsioonide tekkimine võimalik, nagu ka teiste valgu päritolu süstitavate ravimite kasutamisel.

Lisaks VIII verehüübimisfaktorile sisaldab ravim vähesel määral ka teisi verevalke. Ülitundlikkusreaktsioonide varajased nähud on nõgestõbi, pigistustunne rinnus, õhupuudus, madal vererõhk ja anafülaksia (raske allergiline reaktsioon). Nende sümptomite ilmnemisel tuleb ravimi manustamine kohe lõpetada. Šoki tekkimisel tuleks kasutada kaasaegseid šokivastase ravi meetodeid.

Inimverest või -plasmast pärinevate ravimite puhul ei saa nakkusetekitajate edasikandumise võimalust täielikult välistada. See kehtib ka tundmatute haiguste patogeenide kohta. Siiski vähendatakse nakkusetekitajate edasikandumise ohtu järgmiste meetmetega:

- doonorite valimine meditsiiniliste intervjuude ja uuringute kaudu, samuti plasmakogumite skriinimine B-hepatiidi viiruse (HBV) antigeenide, HIV ja C-hepatiidi viiruse (HCV) vastaste antikehade esinemise suhtes;

— plasmakogumite analüüs HCV geneetilise materjali esinemise suhtes;

— tootmisprotsessis sisalduvad inaktiveerimise/eemaldamise protseduurid, mis on valideeritud viirusmudelis. Need protseduurid on tõhusad HIV, A-hepatiidi viiruse (HAV), HBV ja HCV puhul. Inaktiveerimise/eemaldamise protseduurid võivad olla piiratud efektiivsusega ümbriseta viiruste suhtes, millest üks on parvoviirus B19. Parvoviirus B19 võib põhjustada tõsiseid reaktsioone seronegatiivsetel rasedatel (emakasisene infektsioon) ja inimestel, kellel on immuunpuudulikkus või suurenenud punaste vereliblede tootmine (näiteks hemolüütilise aneemia korral).

Plasmast saadud VIII hüübimisfaktori kontsentraadi manustamisel on soovitatav vaktsineerida A- ja B-hepatiidi vastu.

Allergiliste reaktsioonide korral tuleb patsienti kontrollida inhibiitori olemasolu suhtes. Vere VIII hüübimisfaktori inhibiitoritega patsiendid võivad järgneva Octanate-ravi ajal suurendada anafülaktiliste reaktsioonide riski. Seetõttu tuleks nimetatud ravimi esmakordne kasutamine vastavalt raviarsti ettekirjutusele toimuda meditsiinilise järelevalve all tingimustes, mis tagavad allergiliste reaktsioonide korral kvalifitseeritud arstiabi.

Ärge kasutage Octanate'i manustamise ajal teisi ravimeid.

Octanate'i kasutuselevõtuks tuleks kasutada ainult pakendis olevaid süstimisseadmeid. Mõne süstitava seadme sisepinnal on võimalik VIII vere hüübimisfaktori adsorptsioon, mis viib ravi efektiivsuse vähenemiseni.

Rakendus lapsepõlves

Kasutamine on võimalik vastavalt annustamisskeemile.

Uuringuteave

Erijuhised:Ärge viige uuringut läbi ägedate haigusperioodide ja antikoagulantide võtmise ajal (pärast tühistamist peab mööduma vähemalt 30 päeva). Uurimiseks mõeldud biomaterjal tuleb võtta tühja kõhuga. Viimase söögikorra ja vereproovi võtmise vahele peab jääma vähemalt 8 tundi.

UURIMISEKS ETTEVALMISTAMISE ÜLDREEGLID:

1. Enamiku uuringute puhul on soovitatav verd loovutada hommikul kella 8-11 tühja kõhuga (viimase söögikorra ja vereproovi võtmise vahele peab jääma vähemalt 8 tundi, vett võib juua nagu tavaliselt), uuringu eelõhtul kerge õhtusöök rasvaste toitude söömise piiranguga. Infektsioonitestide ja erakorraliste uuringute jaoks on vastuvõetav verd loovutada 4-6 tundi pärast viimast söögikorda.

2. TÄHELEPANU! Erilised ettevalmistusreeglid mitmete testide jaoks: rangelt tühja kõhuga, pärast 12-14-tunnist paastumist tuleb verd anda gastriini-17, lipiidide profiili (üldkolesterool, HDL-kolesterool, LDL-kolesterool, VLDL-kolesterool, triglütseriidid, lipoproteiin) jaoks. (a), apolipoproteen A1, apolipoproteiin B); glükoositaluvuse test tehakse hommikul tühja kõhuga pärast 12-16 tundi tühja kõhuga.

3. Uuringu eelõhtul (24 tunni jooksul) välistage alkohol, intensiivne füüsiline aktiivsus, ravimid (kokkuleppel arstiga).

4. 1-2 tundi enne vere loovutamist loobuge suitsetamisest, ärge jooge mahla, teed, kohvi, võite juua gaseerimata vett. Kõrvaldage füüsiline stress (jooksmine, kiire trepist ronimine), emotsionaalne erutus. Enne vereloovutamist on soovitatav puhata ja rahuneda 15 minutit.

5. Verd ei tohi loovutada laboratoorseteks uuringuteks kohe pärast füsioteraapia protseduure, instrumentaaluuringuid, röntgeni- ja ultraheliuuringuid, massaaži ja muid meditsiinilisi protseduure.

6. Laboratoorsete parameetrite jälgimisel dünaamikas on soovitatav teha korduvaid uuringuid samadel tingimustel - samas laboris, anda verd samal kellaajal jne.

7. Veri uuringuteks tuleks loovutada enne ravimite võtmist või mitte varem kui 10-14 päeva pärast nende kasutamise lõpetamist. Mis tahes ravimitega ravi efektiivsuse kontrolli hindamiseks on vaja läbi viia uuring 7-14 päeva pärast ravimi viimast annust.

Kui te võtate ravimeid, rääkige sellest kindlasti oma arstile.

FARMAKOOPIA ÜLDLUBA

Tutvustatakse esimest korda

See farmakopöa monograafia kehtib inimese vere hüübimissüsteemi I, II, VII, VIII, IX, X, XI, von Willebrandi faktori, antitrombiini III aktiivsuse määramise meetodite kohta plasmas ja veretoodetes.

ÜLDSÄTTED

Hüübimisfaktorite aktiivsuse määramine põhineb kahel lähenemisviisil:

1. Üheastmeline meetod. Vere hüübimisprotsessi taastamine faktoripuudulikus plasmas pärast selle faktori preparaadi lisamist (hüübimismeetod).
2. kaheastmeline meetod. Esimeses etapis, kasutades spetsiifilist kofaktorit, aktiveeritakse II või faktori X proteolüütiline aktiivsus, et moodustada vastavalt aktiveeritud faktor IIa või Xa. Teises etapis määratakse moodustunud aktiveeritud faktori kogus selle spetsiifilise kromogeense peptiidi lõhustamise reaktsiooniga (kromogeenne meetod).

Kromogeenset meetodit on võimalik läbi viia kahel viisil: vastavalt kromogeeni moodustumise kineetikale aktiveeritud faktori toimel või kromogeeni akumuleerumise lõpp-punkti järgi teatud inkubatsiooniaja jooksul.

Mõlema meetodi läbiviimiseks on võimalik kasutada plastikust katseklaase, plaate, optilis-mehaanilisi, mehaanilisi poolautomaatseid ja täisautomaatseid koagulomeetreid.

Kõigi meetodite puhul arvutatakse aktiivsus, võrreldes uuritava proovi aktiivsust NIBSC rahvusvahelise standardi või sekundaarse hüübimisfaktori standardi aktiivsusega, mis on kalibreeritud rahvusvahelise standardi järgi rahvusvahelistes aktiivsusühikutes (IU). Rahvusvahelise standardi võrdväärsuse RÜ-des kehtestab WHO. 1 RÜ (100%) jaoks võtke hüübimisfaktori aktiivsus 1,0 ml värskes normaalses vereplasmas 300 doonorilt. Aktiivsust saab väljendada RÜ/ml, RÜ/viaalis, RÜ/mg valgu kohta ja protsendina tootja deklareeritud kogusest.

TEGURID

FaktorI (fibrinogeen)

Hüübimismeetod

Fibrinogeeni aktiivsuse määramine toimub Claussi meetodil.

Meetodi põhimõte

Kui fibrinogeeni sisaldavale proovile lisatakse trombiin, täheldatakse fibriini trombide moodustumist. Kõrge aktiivsusega trombiini (~10 IU/ml) ja madala fibrinogeeni kontsentratsiooniga proove (alla 100 mg/dcl) kasutamisel on võimalik saada lineaarne seos.

Fibrinogeeni määramiseks kasutatakse kaubanduslikke testsüsteeme, mis sisaldavad hepariini inhibiitorit sisaldavat trombiini reaktiivi ja proovi lahjenduspuhvrit või kaubanduslikku trombiini reaktiivi.

Fibrinogeeni kontsentratsiooni väljendatakse mg/dcl. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks kasutatakse standardset fibrinogeeni proovi või rahvusvahelise standardi järgi sertifitseeritud plasmakalibraatorit. Standardproov või plasmakalibraatori proov lahustatakse destilleeritud vees vastavalt juhistele. Valmistage standardproovist 5 seerialahjendust, alustades kontsentratsioonist ~100 mg/dcl, kasutades proovi lahjenduspuhvrit pH = 7,3 ± 0,1. Analüüs viiakse läbi temperatuuril 37°C vastavalt komplekti juhistele. Iga lahjenduse puhul määratakse trombi moodustumise aeg kolm korda. Logaritmilistes koordinaatides saadud tulemuste põhjal koostatakse kalibreerimisgraafik trombi moodustumise aja sõltuvusest fibrinogeeni kontsentratsioonist.

Valmistage uuritavast proovist 2 lahjendust alla 100 mg/dl. Iga lahjenduse jaoks määrati trombi moodustumise aeg kolm korda. Fibrinogeeni kogus igas lahjenduses määratakse kalibreerimisgraafiku abil.

FaktorII(trombiin)

1. Hüübimismeetod

Faktori II aktiivsuse määramiseks kasutatakse substraadina II faktori puudulikkusega inimese plasmat. Koagulatsiooniprotsess aktiveeritakse tromboplastiini lisamisega kaltsiumi segule.

Standardi ja preparaatide lahjendamiseks kasutage NaCl-imidasoolpuhvrit pH 7,3 ± 0,1, millele on lisatud 0,1% veise- või inimese albumiini. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks valmistatakse II faktori standardi seerialahjendused aktiivsusvahemikus 0,3 kuni 1 RÜ/ml. Ravim lahjendatakse kontsentratsioonini alla 1 RÜ / ml. Analüüsige ravimi 3 lahjendust. Iga proovi puhul mõõdetakse hüübimisaega vähemalt 2 korda. Mõõtmine viiakse läbi 1 tunni jooksul pärast ravimi lahjendamist.

Analüüs viiakse läbi temperatuuril (37±0,5) °C. Lisage plasttorusse 50 µl II faktori puudulikkusega plasmat ja 50 µl standard- või preparaadilahjendust. Segu inkubeeritakse temperatuuril (37 ± 0,5) °C 120–240 sekundit. Hüübimisaeg määratakse alates temperatuurini (37±0,5)°C eelkuumutatud 200 μl kaltsiumtromboplastiini segule lisamise hetkest. Sõltuvalt analüüsi seadistamise tehnikast võivad reaktiivide mahud sobivas vahekorras erineda.

Kalibreerimisgraafik on üles ehitatud poollogaritmilistes koordinaatides. Logaritmilisele abstsissteljele kantakse II faktori aktiivsuse väärtused, ordinaatteljel on kantud standardi vastavate lahjenduste hüübimisaeg. II teguri aktiivsus uuritava proovi iga lahjenduse kohta leitakse kalibreerimiskõveralt. FII tegevus ( AGA

k

1. Kromogeenne meetod

Meetod põhineb pärast II faktori spetsiifilist aktiveerimist moodustunud faktori IIa ensümaatilise aktiivsuse võrdlemisel spetsiifilise kromogeense peptiidsubstraadiga, millel on standardprooviga (rahvusvaheline või sarnane) sama aktiivsus.

Faktor II aktiveeritakse rästiku mürgist eraldatud ekariini aktivaatoriga. Aktiveeritud II faktor (trombiin) lõhustab selektiivselt kromogeenset substraati (H-D-fenüülalaniin-L-pipekolüül-L-arginiin-4-nitroaniliiddivesinikkloriid, 4-tolueensulfonüülglütsüül-prolüül-L-arginiin-4-nitroaniliid, H-D-fenüülalaniin-L-pipekolüül-L-arginiin-4-nitroaniliiddivesinikkloriid, 4-tolueensulfonüülglütsüül-prolüül-L-arginiin-4-nitroaniliid, H-D-fenüülalaniin-L-pipekolüül-α-tsükloheksüül). - L-arginiin-4-nitroaniliid, D-tsükloheksüülglütsüül-L-alanüül-L-arginiin-4-nitroaniliiddiatsetaat), moodustamaks P-nitroaniliin. Reaktsiooni kineetikat uuritakse fotomeetriliselt 405 nm juures. Optilise tiheduse väärtus on võrdeline II faktori aktiivsusega.

II faktori määramine kromogeense meetodiga toimub spetsiaalsete testkomplektide abil. Analüüs viiakse läbi vastavalt komplekti juhistele. Standardproov ja preparaat lahjendatakse eelnevalt II faktori puudulikkusega plasmaga kontsentratsioonini ~ 1 RÜ / ml (põhilahjendus). Põhilahjendusest valmistatakse 3 lahjendust standardproovist ja 3 preparaadi lahjendust Tris-soolalahuse puhverlahusega pH 8,4. Standardproovi iga lahjendus määratakse kaks korda, saadud väärtusi kasutatakse kalibreerimisgraafiku koostamiseks. Uuritavad proovid määratakse kolm korda.

Katsed viiakse läbi käsitsi režiimis, kasutades mikroplaati ja spektrofotomeetrit, hoides temperatuuri vahemikus (37 ± 0,5) °C, või automaatrežiimis, kasutades koagulomeetrit.

Käsitsi testimiseks lisatakse mikroplaadi süvenditesse 25 µl igat uuritava preparaadi või standardproovi lahjendust. Igasse süvendisse lisatakse 125 µl lahjenduspuhvrit, 25 µl ekariini ja inkubeeritakse (37±0,5) °C juures 2 minutit. Inkubatsiooniaja lõpus lisatakse igasse süvendisse 25 µl faktori IIa kromogeenset substraati.

AGA/min).

Kui neeldumise pidev mõõtmine ei ole võimalik, määrake neelduvus lainepikkusel 405 nm järjestikuste ajavahemike järel (nt 40 s) ja joonistage neelduvus ajas ja arvutage ∆ AGAAGA

1. Trombiini puudumise test

Katsetamiseks valmistatakse vastavalt juhistele taastatud preparaadi lahus. Kui preparaadis on hepariini, neutraliseeritakse see protamiinsulfaadi lisamisega kiirusega 10 μg protamiinsulfaati 1 RÜ hepariini kohta.

Fibrinogeeni lahuse valmistamine

0,3 g fibrinogeeni lahustatakse 100 ml-s, segatakse ja inkubeeritakse 15-20 minutit toatemperatuuril.

Lahuse säilivusaeg on 1 kuu temperatuuril 2 kuni 8°C.

Trombiini lahuse valmistamine

Lüofilisaat lahustatakse vastavalt tootja juhistele, hoitakse 15-20 minutit toatemperatuuril ja lahjendatakse 0,9% naatriumkloriidi lahusega trombiinisisalduseni 1 IU/ml.

Lahuse säilivusaeg on 6 kuud temperatuuril miinus 20°C. Lahus pärast sulatamist ei kuulu uuesti külmutamisele.

Definitsiooni edenemine

2 katseklaasi lisatakse võrdsed kogused lahustatud ravimit ja fibrinogeeni lahust. Kolmandasse katsutisse (kontrollproov) lisatakse võrdsed kogused trombiini lahust ja fibrinogeeni lahust, katsutite sisu segatakse pöörlevate liigutustega. Ühte lahustatud ravimiga katsutit inkubeeritakse veevannis temperatuuril 37°C 6 tundi, teist lahustatud ravimiga katsutit on toatemperatuuril 24 tundi Märgitakse koagulatsiooni (trombi) olemasolu või puudumine.

Kontrollproovi inkubeeritakse veevannis temperatuuril 37 °C ja märgitakse üles trombi moodustumise aeg.

Tulemuste vastuvõetavuse kriteeriumiks on koagulatsioon kontrollproovis 30 s pärast.

FaktorVII

1. Hüübimismeetod

VII faktori aktiivsuse määramiseks kasutatakse VII faktori puudulikkusega inimese plasmat. Koagulatsiooniprotsess aktiveeritakse tromboplastiini lisamisega kaltsiumi segule.

Standardi ja preparaatide lahjendamiseks kasutatakse NaCl-imidasoolpuhvrit pH 7,3, millele on lisatud inimese või veise albumiini 0,1% lahust. Kalibreerimiskõvera koostamiseks valmistatakse VII faktori proovistandardi seerialahjendused vahemikus 0,3 kuni 1 IU/ml. Ravim lahjendatakse kontsentratsioonini alla 1 RÜ / ml. Analüüsige ravimi 3 lahjendust. Iga proovi puhul mõõdetakse hüübimisaega vähemalt 2 korda. Mõõtmine tehakse kohe pärast ravimi lahjendamist.

Analüüs viiakse läbi temperatuuril (37±0,5) °C. Plasttorusse lisatakse 50 µl VII faktori puudulikkusega plasmat ja 50 µl standardi või ravimi lahjendust. Segu inkubeeritakse temperatuuril (37±0,5) °C 120–240 sekundit. Hüübimisaeg määratakse alates temperatuurini (37±0,5)°C eelkuumutatud 200 μl kaltsiumtromboplastiini segule lisamise hetkest. Sõltuvalt analüüsi seadistamise tehnikast võivad reaktiivide mahud sobivas vahekorras erineda.

Kalibreerimisgraafik on üles ehitatud poollogaritmilistes koordinaatides. Logaritmilisele abstsissteljele kantakse VII faktori aktiivsuse väärtused piki ordinaattelge, standardi vastavate lahjenduste hüübimisaeg. VII teguri aktiivsus uuritava proovi iga lahjenduse kohta leitakse kalibreerimiskõveralt. FVII tegevus ( AGA) arvutatakse proovis järgmise valemiga:

- kalibreerimisgraafikult leitud uuritava proovi vastava lahjenduse aktiivsus;

k- uuritava proovi lahjendamine.

1. Kromogeenne meetod

Koefaktori (TF) ja Ca 2+ ioonide juuresolekul aktiveerub VII faktor (FVIIa moodustumine). FVIIa, TF, Ca 2+ ja fosfolipiidi kompleks aktiveerib faktori X. Aktiveeritud faktor X (FXa) lõhustab selektiivselt kromogeenset substraati FXa-1 metoksükarbonüül-D-tsükloheksüülalanüülglütsüül-L-arginiin- n-nitroanilidatsetaat moodustub P-nitroaniliin. Proovi uurimine toimub fotomeetrilisel meetodil 405 nm juures. Neeldumisväärtus (või neeldumise suurenemine) on võrdeline VII faktori kogusega.

VII faktori määramine kromogeense meetodiga toimub spetsiaalsete testkomplektide abil. Analüüs viiakse läbi vastavalt komplekti juhistele. Standardproov ja preparaat lahjendatakse VII faktori puudulikkusega plasmaga kontsentratsioonini ~ 1 RÜ/ml (põhilahjendus). Põhilahjendusest valmistatakse 3 lahjendust standardproovist ja 3 preparaadi lahjendust tris-soolalahuse puhvriga pH 7,3-8,0 kasutades puhverlahust, millele on lisatud 0,1% inimese või veise albumiini. Standardproovi iga lahjendus määratakse kaks korda, saadud väärtusi kasutatakse kalibreerimisgraafiku koostamiseks. Uuritavad proovid määratakse kolm korda.

Uuritava ravimi või standardproovi lahjendused lisatakse mikroplaadi süvenditesse, lisatakse kaltsiumi-tromboplastiini segu, faktori X lahus ja inkubeeritakse temperatuuril (37 ± 0,5) °C 2–5 minutit, misjärel faktor Lisatakse Xa kromogeense substraadi lahus.

Mõõtke optilise tiheduse muutust lainepikkusel 405 nm kas kineetilises režiimis või katkestage hüdrolüüsireaktsioon 3-15 minuti pärast, lisades jää-äädikhappe 20% (maht/maht) lahust ja mõõtke optiline tihedus.

FaktorVIII

1. Hüübimismeetod

VIII faktori aktiivsuse määramiseks kasutatakse VIII faktori puudulikkusega inimese plasmat. Koagulatsiooniks vajalike fosfolipiidide allikaks on APTT reaktiiv.

Standardi ja preparaatide lahjendamiseks kasutatakse NaCl-imidasooli puhverlahust pH-ga (7,3 ± 0,1), millele on lisatud inimese või veise albumiini 0,1% lahust. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks valmistatakse ette rida standardlahjendusi, alustades kontsentratsioonist 2 IU/ml. Ravim lahjendatakse kontsentratsioonini ~ 0,5-2 RÜ / ml. Analüüsige ravimi 3 lahjendust. Iga proovi puhul mõõdetakse hüübimisaega vähemalt 2 korda. Mõõtmine viiakse läbi 1 tunni jooksul pärast ravimi lahjendamist.

Analüüs viiakse läbi temperatuuril (37±0,5) °C. 100 µl VIII faktori puudulikkusega plasmat, 100 µl standardi või ravimi lahjendust ja 100 µl APTT reaktiivi lisatakse plasttorusse ja inkubeeritakse temperatuuril (37 ± 0,5) °C 2 minutit. Hüübimisaeg fikseeritakse hetkest, mil segule lisatakse 100 µl 0,025 M kaltsiumkloriidi lahust, mis on eelkuumutatud temperatuurini (37 ± 0,5) °C. Sõltuvalt analüüsi seadistamise tehnikast võivad reaktiivide mahud sobivas vahekorras erineda.

Kalibreerimisgraafik on üles ehitatud poollogaritmilistes koordinaatides. VIII faktori aktiivsuse väärtused on kantud piki logaritmilist abstsisstellge ja standardi vastavate lahjenduste hüübimisaeg piki ordinaattelge. VIII faktori aktiivsus uuritava proovi iga lahjenduse kohta leitakse kalibreerimiskõveralt. VIII VIII aktiivsus ( AGA) arvutatakse proovis järgmise valemiga:

- kalibreerimisgraafikult leitud uuritava ravimi vastava lahjenduse aktiivsus;

k- uuritava proovi lahjendamine.

1. Kromogeenne meetod

VIII faktori kvantitatiivne määramine viiakse läbi reaktiivide komplekti kasutades, milles VIII faktor on IXa faktori kofaktor, kui faktor X aktiveeritakse, moodustades Xa, mis lõhustab kromogeenset substraati.

Meetodi põhimõte

Ca 2+ ioonide ja fosfolipiidide juuresolekul aktiveeritakse faktor X faktoriks Xa faktori IXa toimel. Faktori X liia ja Ca 2+, fosfolipiidide ja IXa optimaalsete koguste korral sõltub X faktori aktivatsiooni kiirus lineaarselt VIII faktori kogusest. Faktor Xa hüdrolüüsib kromogeenset substraati S-2765 (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA), et vabastada pNA kromogeenne rühm, mille värvus registreeritakse spektrofotomeetriliselt 405 nm juures. Moodustunud Xa faktori kogus ja seega ka värvumise intensiivsus on võrdeline VIII faktori aktiivsusega proovis.

VIII faktori aktiivsusreaktiivide komplekt on stabiilne tootja määratud perioodi jooksul säilitustemperatuuril 2–8 °C.

Reaktiivikomplekt sisaldab:

1. 7,7 mg kromogeeni S-2765, millele on lisatud sünteetiline trombiini inhibiitor I-2581. Reaktiiv lahustatakse 6,0 ml steriilses süstevees. Valmistatud lahus on stabiilne 1 kuu temperatuuril 2...8°C. Enne kasutamist kuumutada temperatuurini 37°C.
2. Veisefaktorite reaktiiv: 0,3 U IX faktorit, 2,7 RÜ X faktorit ja 1 NIH U trombiini, mis on lüofiliseeritud 40 mmol CaCl2 ja 0,2 mmol fosfolipiidide juuresolekul. Reaktiiv lahustatakse 2,0 ml steriilses süstevees. Valmistatud lahus on stabiilne 12 tundi temperatuuril 2 kuni 8 ° C, 2 nädalat temperatuuril miinus 30 ° C ja 1 kuu temperatuuril miinus 80 ° C. Mitte hoida temperatuuril miinus 20 ° C. Enne kasutamist soojendage temperatuurini 37 umbes S.
3. Kontsentraat × 10 Tris-puhver. Stabiilne 1 kuu temperatuuril 2 kuni 8°C. Enne kasutamist lahjendage steriilse süsteveega vahekorras 1:10.

Täiendavad reaktiivid:

1. International Standard – inimese VIII hüübimisfaktori kontsentraadi lahus (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std. BRP H 0920000) või rahvusvahelise VIII faktori standardi järgi kalibreeritud plasma.
2. Kontrollige normaalset või patoloogilist plasmat, mis on kalibreeritud rahvusvahelise VIII faktori standardi järgi.
3. 0,9% naatriumkloriidi lahus.
4. 20% äädikhapet või 2% sidrunhapet (kasutatakse kromogeeni säilitamise lõpp-punkti meetodis).
5. Veelabor deioniseeritud

Varustus:

1. Plastist katseklaasid;
2. mikroplaadid;
3. Termostaat 37 o C;
4. Spektrofotomeeter 405 nm või mikroplaadi lugeja 405 nm;
5. Kalibreeritud pipetid;
6. Vortex;
7. Stopper.

Uuritav proov lahjendatakse enne määramist eeldatava aktiivsuseni 1 RÜ/ml.

Määramine võib toimuda kineetilises režiimis ja lõpp-punktis katseklaasides (makromeetod) ja mikroplaatidel (mikromeetod).

Kalibreerimine

Iga määramise ajal koostatakse kalibreerimiskõver. Standardproovi lahjendamine valmistatakse ette kahes etapis: eellahjendus aktiivsuseni 1–2 IU/ml ja lõplikud lahjendused kalibreerimise sõltuvuse tekitamiseks vahemikus 0–2 IU/ml. Pärast lahjendamist tuleb määrata 30 minuti jooksul.

Definitsiooni edenemine

Määramine katseklaasides

Katseklaasidesse lisatakse 200 µl lahjendatud standard-, kontroll- või uuritavat proovi, inkubeeritakse 3-4 minutit temperatuuril 37 °C, lisatakse 50 µl eelsoojendatud faktori reaktiivi, inkubeeritakse 2-4 minutit temperatuuril 37 °C. temperatuuril 37 °C ja lisatakse 50 µl kromogeenilahust.

Määramine mikroplaatidel

Lisage mikroplaadi süvenditesse 50 µl lahjendatud standard-, kontroll- või uuritavat proovi, inkubeerige 3-4 minutit 37 °C juures, lisage 50 µl eelsoojendatud faktorireaktiivi, inkubeerige 2-4 minutit temperatuuril 37 °C ja lisage 50 µl kromogeeni lahust.

Kineetiline määramismeetod

Pärast kromogeenilahuse lisamist 2-10 minuti jooksul mõõdetakse lahuse optilise tiheduse muutust 405 nm juures.

Määratlus lõpp-punkti järgi

Pärast kromogeenilahuse lisamist jätkatakse segu inkubeerimist temperatuuril 37 °C 2–10 minutit, seejärel lisatakse reaktsiooni peatamiseks 50 μl 20% äädik- või 2% sidrunhapet. Mõõdetakse lahuse optiline tihedus puhvri suhtes lainepikkusel 405 nm.

Arvutused

Joonistage standardlahuse lahjenduste optilise tiheduse muutus minutis (kineetilise meetodi puhul) või optilise tiheduse (lõpp-punkti määramiseks) graafik VIII faktori kontsentratsioonile. Aktiivsus uuritavas proovis määratakse kalibreerimiskõvera järgi, võttes arvesse proovi eellahjendust.

FaktorIX

1. Hüübimismeetod

IX faktori aktiivsuse määramiseks kasutatakse IX faktori puudulikkusega inimese plasmat. Koagulatsiooniks vajalike fosfolipiidide allikaks on APTT reaktiiv.

Standardi ja preparaatide lahjendamiseks kasutatakse NaCl-imidasoolpuhvrit pH 7,3, millele on lisatud veise või inimese albumiini 0,1% lahust. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks valmistatakse standardi seerialahjendused vahemikus 0,3–1 IU/ml. Ravim lahjendatakse kontsentratsioonini alla 1 RÜ / ml. Analüüsige ravimi 3 lahjendust. Iga proovi puhul mõõdetakse hüübimisaega vähemalt 2 korda. Mõõtmine viiakse läbi 1 tunni jooksul pärast ravimi lahjendamist.

Analüüs viiakse läbi temperatuuril (37±0,5) °C. 100 µl IX faktori puudulikku plasmat, 100 µl standard- või ravimilahjendust ja 100 µl APTT reaktiivi lisatakse plasttorusse ja inkubeeritakse temperatuuril (37 ± 0,5) °C 2 minutit. Hüübimisaeg fikseeritakse hetkest, mil segule lisatakse 100 µl 0,025 M kaltsiumkloriidi lahust, mis on eelkuumutatud temperatuurini (37 ± 0,5) °C. Sõltuvalt analüüsi seadistamise tehnikast võivad reaktiivide mahud sobivas vahekorras erineda.

Kalibreerimisgraafik on üles ehitatud poollogaritmilistes koordinaatides. Logaritmilisele abstsissteljele on kantud IX faktori aktiivsuse väärtused, ordinaatteljel on kantud standardi vastavate lahjenduste hüübimisaeg. IX faktori aktiivsus uuritava proovi iga lahjenduse kohta leitakse kalibreerimiskõveralt. FIX tegevus ( AGA) arvutatakse proovis järgmise valemiga:

- kalibreerimisgraafikult leitud uuritava proovi vastava lahjenduse aktiivsus;

k- uuritava proovi lahjendamine.

FaktorX

1. Hüübimismeetod

Faktori X aktiivsuse määramiseks kasutatakse faktor X puudulikkusega inimese plasmat. Hüübimisprotsess aktiveeritakse tromboplastiini lisamisega kaltsiumi segule.

Standardi ja preparaatide lahjendamiseks kasutage NaCl-imidasooli puhverlahust pH 7,3, millele on lisatud inimese või veise albumiini 0,1% lahust. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks valmistage X-teguri standardi seerialahjendused vahemikus 0,3 kuni 1 RÜ/ml. Ravim lahjendatakse kontsentratsioonini alla 1 RÜ / ml. Analüüsige ravimi 3 lahjendust. Iga proovi puhul mõõdetakse hüübimisaega vähemalt 2 korda. Mõõtmine tehakse kohe pärast ravimi lahjendamist.

Analüüs viiakse läbi temperatuuril (37±0,5) °C. Lisage plasttorusse 50 µl faktor X puudulikkusega plasmat ja 50 µl standard- või preparaadilahjendust. Segu inkubeeritakse temperatuuril (37±0,5) °C 120–240 sekundit. Hüübimisaeg määratakse alates temperatuurini (37±0,5)°C eelkuumutatud 200 μl kaltsiumtromboplastiini segule lisamise hetkest. Sõltuvalt analüüsi seadistamise tehnikast võivad reaktiivide mahud sobivas vahekorras erineda.

Kalibreerimisgraafik on üles ehitatud poollogaritmilistes koordinaatides. Logaritmiline abstsisstelg kujutab teguri X aktiivsuse väärtusi , piki y-telge standardi vastavate lahjenduste hüübimisaeg. Tegur X aktiivsus uuritava proovi iga lahjenduse kohta leitakse kalibreerimiskõveralt. Faktori X aktiivsus ( AGA) arvutatakse proovis järgmise valemiga:

- kalibreerimisgraafikult leitud uuritava proovi vastava lahjenduse aktiivsus;

k- uuritava proovi lahjendamine.

1. Kromogeenne meetod

Faktor X aktiveeritakse maomürgist saadud FX aktivaatoriga. Aktiveeritud faktor X (FXa) lõhustab selektiivselt kromogeenset substraati FXa-1 N-α-bensüüloksükarbonüül-D-arginüül-L-glütsüül-L-arginiin-4-nitroaniliiddivesinikkloriid, N-bensoüül-L-isoleutsüül-L-glutamüülglütsüül - moodustub L-arginiin-4-nitroaniliidvesinikkloriid, metaansulfonüül-D-leutsüülglütsüül-L-arginiin-4-nitroaniliid, metoksükarbonüül-D-tsükloheksüülalanüülglütsüül-L-arginiin-4-nitroaniliidatsetaat P-nitroaniliin. Proove uuritakse fotomeetriliselt 405 nm juures. Faktori X kogus on võrdeline lahuse optilise tiheduse suurenemisega.

Faktori X määramine kromogeense meetodiga toimub spetsiaalsete testkomplektide abil. Analüüs viiakse läbi vastavalt komplekti juhistele. Standardproov ja preparaat lahjendatakse eelnevalt X-faktori puudulikkusega plasmaga kontsentratsioonini ~ 1 IU/ml (põhilahjendus). Põhilahjendusest valmistatakse puhverlahusega 3 lahjendust standardproovist (vastavalt juhistele) ja 3 ravimi lahjendust. Standardproovi iga lahjendus määratakse kaks korda, saadud väärtusi kasutatakse kalibreerimisgraafiku koostamiseks. Uuritavad proovid määratakse kolm korda.

Katsed viiakse läbi käsitsi, kasutades plasttorusid või mikroplaate temperatuuril (37±0,5)°C või automaatselt, kasutades koagulomeetrit.

Manuaalrežiimis testimiseks lisatakse mikroplaadi süvenditesse 12,5 µl igast uuritava ravimi või standardproovi lahjendusest, igasse süvendisse lisatakse 25 µl spetsiifilist X faktori aktivaatorit Russelli rästiku mürgist ja inkubeeritakse temperatuuril. temperatuuril (37 ± 0,5) °C 90 sekundit, misjärel lisatakse igasse süvendisse 150 µl faktori X kromogeense substraadi töölahjendust.

Määrake neeldumise muutumise kiirus lainepikkusel 405 nm pidevalt 3 minuti jooksul ja arvutage neeldumise keskmine muutumise kiirus (∆ AGA/min) või mõõta neelduvus lainepikkusel 405 nm järjestikuste ajavahemike järel (näiteks 30 s pärast) ja joonistada neelduvus ajas ja arvutada ∆ AGA/min sirge kaldenurgana. Väärtustest∆ AGA/min standardproovi ja uuritava ravimi iga üksiku lahjenduse kohta arvutatakse uuritava ravimi aktiivsus.

Willebrandi tegur

Von Willebrandi faktori aktiivsuse määramine toimub aglutinatsioonimeetodi või ensüümi immuunanalüüsi abil.

Von Willebrandi faktori aktiivsus määratakse selle aktiivsuse võrdlemisel standardproovi aktiivsusega.

Aglutinatsiooni meetod

Meetod põhineb von Willebrandi faktori koensüümi aktiivsuse määramisel trombotsüütide suspensiooni aglutinatsioonil ristotsetiin A juuresolekul.

Katse võib läbi viia kvantitatiivselt, kasutades automatiseeritud seadmeid, või poolkvantitatiivselt, hinnates visuaalselt aglutinatsiooni lahjenduste seerias.

Poolkvantitatiivne meetod

Standardproovist ja ravimi taastatud lahusest valmistatakse seerialahjendused 0,9% naatriumkloriidi lahuses 1–5% inimese albumiini lahusega kuni von Willebrandi faktori eeldatava sisalduseni 0,5, 1,0 ja 2,0 IU/ml. 0,05 ml igast standardproovi ja uuritava preparaadi lahjendusest kantakse alusklaasile, lisatakse 0,1 ml trombotsüütide suspensiooni ristotsetiiniga ja segatakse 1 min. Lahjenduslahust kasutatakse negatiivse kontrollina. Pärast 1-minutilist inkubeerimist toatemperatuuril hinnatakse visuaalselt trombotsüütide aglutinatsiooni. Maksimaalne lahjendus, mille juures trombotsüütide aglutinatsioon toimub, on proovi ristotsetiini koensüümi aktiivsuse tiiter.

kvantitatiivne meetod

Valmistage ette vähemalt 2 seeriat võrdlus- ja uuritavast proovist lahjenduspuhvriga, kuni eeldatav von Willebrandi faktori sisaldus on 0,5, 1,0 ja 2,0 RÜ/ml.

Määramine toimub vastavalt automatiseeritud seadme tootja juhistele. Hankige optilise neeldumise muutuse (lahuse hägususe aste) sõltuvuse väärtused von Willebrandi faktori aktiivsusest.

Von Willebrandi faktori sisalduse määramine katsepreparaadis viiakse läbi, kasutades lahuse optilise tiheduse sõltuvuse lineaarvõrrandi koefitsiente standardproovi von Willebrandi faktori sisaldusest.

ELISA meetod

Meetod põhineb von Willebrandi faktori kollageeni sidumise aktiivsuse määramisel. Von Willebrandi faktori spetsiifilisel seondumisel kollageenfibrillidega ja sellele järgneval ensüümiga konjugeeritud polüklonaalsete antikehade seondumisel von Willebrandi faktoriga moodustub pärast kromogeense substraadi lisamist kromofoor, mida saab kvantifitseerida spektrofotomeetrilise meetodiga. Kollageeni seondumise von Willebrandi faktoriga ja optilise tiheduse vahel on lineaarne seos.

Määramine toimub Venemaal tervishoiupraktikas kasutamiseks heakskiidetud testimissüsteemide abil vastavalt kasutusjuhendile.

Testimiseks valmistage lahjenduspuhvriga ette vähemalt 3 järjestikust lahjendusseeriat standard- ja analüüsiproovidest kuni von Willebrandi faktori eeldatava sisalduseni 1,0 IU/ml. Järgmisena viiakse katsed läbi vastavalt tootja juhistele kasutatava katsesüsteemi kohta.

Aktiveeritud hüübimisfaktorid veri

Määramine toimub koagulomeetrilise meetodiga.

Testimiseks valmistatakse ravimist valmistatud lahus. Kui preparaadis on hepariini, neutraliseeritakse see protamiinsulfaadi lisamisega kiirusega 10 μg protamiinsulfaati 1 RÜ hepariini kohta. Valmistage ravimi lahjendused 1:10 ja 1:100, kasutades Tris puhverlahust pH 7,5.

0,1 ml standardset inimese plasmat ja 0,1 ml fosfolipiidide lahust lisatakse 3 katseklaasi, asetatakse 60 sekundiks veevanni, mille temperatuur on (37 ± 0,5) ° C, seejärel lisatakse esimesse katseklaasi 0,1 ml. Tris puhverlahus (kontrollproov), teises - 0,1 ml uuritavat ravimit lahjendatuna 1:10, kolmandas katseklaasis - 0,1 ml uuritavat ravimit lahjendatuna 1:100. Lisaks lisatakse iga katseklaasi sisule koheselt 0,1 ml 3,7 g/l kaltsiumkloriidi lahust, mis on kuumutatud temperatuurini 37 °C. Märgitakse trombi moodustumise aeg alates kaltsiumkloriidi lahuse lisamise hetkest.

Tulemuste vastuvõetavuse kriteeriumiks on koagulatsiooniaeg kontrollproovis vahemikus 200 kuni 350 s.

Konkreetne spetsiifiline tegevus

Hüübimisfaktorite eriaktiivsus arvutatakse järgmise valemi abil:

Antitrombiini aktiivsuse määramineIII

Kromogeenne meetod

ATIII aktiivsuse määramise meetod põhineb selle võimel neutraliseerida trombiini hepariini juuresolekul. ATIII sisaldavale proovile lisatakse liigne kogus hepariini ja trombiini. Saadud ATIII-hepariini kompleks neutraliseerib trombiini koguse võrdeliselt ATIII kogusega. Ülejäänud trombiin lõhustab selektiivselt kromogeense substraadi, et moodustuks P-nitroaniliin, mille neeldumine määratakse 405 nm juures. Seega on ATIII kogus pöördvõrdeline vaba neeldumisega P-nitroaniliin proovis.

ATIII aktiivsuse määramine toimub kaubanduslike testsüsteemide abil. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks kasutage standardset ATIII proovi või rahvusvahelise standardi järgi sertifitseeritud plasmakalibraatorit. Standardproov või plasmakalibraator lahustatakse destilleeritud vees vastavalt juhendis toodud juhistele. Optilise tiheduse sõltuvus ATIII aktiivsusest on lineaarne ATIII aktiivsuse vahemikus 0,1 kuni 1,0 IU/ml. Valmistage hepariinipuhvriga 4 lahjendust standard- või kalibreerimisplasmast, mille ATIII aktiivsus on 0,1–1,0 IU/mL. Analüüs viiakse läbi temperatuuril 37 °C vastavalt komplekti juhistes toodud skeemile. Iga lahjenduse puhul määratakse kolm korda optilise tiheduse väärtus 405 nm juures ja lineaarsetes koordinaatides kantakse neeldumise ja ATIII aktiivsuse kalibreerimisgraafik.

Valmistage uuritavast proovist 2 lahjendust hinnangulise ATIII aktiivsusega alla 1,0 IU/ml. ATIII aktiivsuse määramine uuritavates proovides viiakse läbi temperatuuril 37 °C vastavalt komplekti juhendis olevatele juhistele. ATIII aktiivsus testitud lahjendustes leitakse kalibreerimiskõveralt. ATIII aktiivsus uuritavas proovis on määratletud järgmiselt:

A x– ATIII aktiivsus sobivas lahjenduses;

k- proovi lahjendamine.

Hepariini kvantifitseerimine

1. Hüübimismeetod

Meetod põhineb hepariini võimel pikendada normaalse plasma hüübimisaega mitmete tegurite pärssimise tõttu.

Analüüsiks kasutatakse normaalset inimese plasmat, hepariini standardproovi, APTT reaktiivi ja kaltsiumkloriidi 0,025 M lahust. Standard- ja analüüsiproovide lahjendina kasutatakse 0,9% naatriumkloriidi lahust. Hepariini standardproov lahustatakse destilleeritud vees vastavalt juhistes toodud juhistele. Valmistage 3 lahjendust standardproovist, mille hepariini aktiivsus on 0,3, 0,4 ja 0,5 IU/ml. Nende aktiivsustega standardproovid peaksid pikendama normaalse plasma hüübimisaega vähemalt 1,5 korda, vastasel juhul tuleks kasutada kõrgema hepariini aktiivsusega lahjendusi. Paralleelselt valmistatakse uuritavast proovist 3 lahjendust, nii et hepariini aktiivsus nendes lahjendustes jääb ligikaudu hepariini aktiivsuse vahemikku standardproovi lahjendustes.

Analüüs viiakse läbi automaatse või poolautomaatse koagulomeetriga plastkatseklaasides temperatuuril 37°C. Katseklaasi lisatakse 100 µl normaalset inimese plasmat, 100 µl standard- või uuritava proovi lahjendust või 100 µl 0,9% naatriumkloriidi lahust (pimekatse), lisatakse 100 µl APTT reaktiivi ja segu inkubeeritakse 120–240 s temperatuuril ( 37±0,1)°С. Seejärel lisatakse katseklaasi 100 μl 0,025 M kaltsiumkloriidi lahust, mis on eelkuumutatud temperatuurini 37 °C, ja registreeritakse proovi hüübimisaeg. Sõltuvalt analüüsi seadistamise tehnikast saab reaktiivide mahtu proportsionaalselt muuta. Normaalse plasma (tühikatse) hüübimisaeg peaks olema 25–40 s. Iga standard- ja uuritava proovi lahjenduse puhul määratakse hüübimisaeg kolm korda.

1. Kromogeenne meetod

Meetod põhineb aktiveeritud X faktorile (FXa) spetsiifilise kromogeense substraadi lõhustamisel. Kui hepariini sisaldavasse proovi sisestatakse liiga palju ATIII ja FXa, inhibeeritakse hepariini kogusega võrdeline FXa kogus. Ülejäänud FXa lõhustatakse spetsiifilisest kromogeensest substraadist P-nitroaniliin, mille neeldumine määratakse 405 nm juures. Seega on imendumise hulk pöördvõrdeline hepariini kogusega. See meetod määrab nii fraktsioneerimata kui ka madala molekulmassiga hepariini sisalduse anti-Xa ühikutes.

Hepariini kogus määratakse kromogeense meetodiga, kasutades kaubanduslikke katsesüsteeme. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks kasutatakse hepariini standardproovi või rahvusvahelise standardi järgi sertifitseeritud plasmakalibraatorit. Standardproov või plasmakalibraator lahjendatakse destilleeritud vees vastavalt juhistele. Valmistage 4 lahjendust standardist, mille hepariini kontsentratsioon on alla 1 anti-Xa U/mL, kasutades lahjenduspuhvrit pH 8,4. Analüüs viiakse läbi temperatuuril 37 °C vastavalt komplekti juhistele. Iga lahjenduse puhul määratakse kolm korda neelduvus lainepikkusel 405 nm, mille järel kantakse lineaarsetes koordinaatides kalibreerimisgraafik neeldumise sõltuvuse kohta hepariini kontsentratsioonist. Sõltuvus on lineaarne hepariini kontsentratsioonide vahemikus 0–1,0 anti-Xa ühikut/ml.

Valmistage uuritava proovi jaoks 2 lahjendust, mille hepariini kontsentratsioon on väiksem kui 1 anti-Xa U/ml. Analüüs viiakse läbi vastavalt komplekti juhistele temperatuuril 37°C. Iga lahjenduse puhul määratakse neelduvusväärtus kolm korda.

Määramine toimub käsitsi, kasutades plastikust katseklaase, mikroplaate või automaatselt, kasutades koagulomeetrit.

Manuaalrežiimis testimiseks lisatakse mikroplaadi süvenditesse 20 µl standardset inimese plasmat ja 20 µl antitrombiin III lahust. Seejärel lisatakse nendesse süvenditesse vastavalt 20, 60, 100 ja 140 μl testi- või standardpreparaati ning igas süvendis reguleeritakse lahuse maht puhvriga 200 μl-ni (hepariini aktiivsus lõplikus reaktsioonisegus on 0,02-0,08 RÜ/ml).

40 µl igast plaadi süvendist kantakse teise süvendite seeriasse, kuhu lisatakse 20 µl veise Xa faktori lahust ja inkubeeritakse temperatuuril (37 ± 0,5) °C 30 sekundit, seejärel 40 µl. lahust lisatakse süvenditesse Xa faktori kromogeenne substraat ja inkubeeritakse uuesti temperatuuril (37 ± 0,5) °C 3–15 minutit, mõõtes substraadi lagunemise kiirust pideva optilise tiheduse mõõtmisega lainepikkusel 405 nm ( kineetiline režiim) või pärast reaktsiooni peatamist 20% (maht/maht) jää-äädikhappe lahuse lisamisega (määramise lõpp-punkt).

Koagulomeetriga automaatrežiimis uuringute läbiviimisel saadakse optilise tiheduse muutuse sõltuvuse väärtused hepariini kontsentratsioonist.

VIII hüübimisfaktori tase 0 kuni 1% põhjustab haiguse äärmiselt rasket vormi, 1 kuni 2% - rasket, 2 kuni 5% - mõõdukat, üle 5% - kerget vormi, kuid raskekujulise riskiga. ja isegi surmaga lõppenud verejooks vigastuste ja kirurgiliste sekkumiste ajal.

Kõigi hemofiilia võimalike ilmingute hulgas on jäsemete suurte liigeste (puusa-, põlve-, pahkluu-, õla- ja küünarliigeste) hemorraagiad, sügavad nahaalused, lihastevahelised ja intramuskulaarsed hemorraagid, raske ja pikaajaline verejooks vigastuste korral, vere ilmumine uriinis. . Muud verejooksud on vähem levinud, sealhulgas sellised rasked ja ohtlikud nagu retroperitoneaalsed verejooksud, kõhuõõne verejooksud, seedetrakti verejooks, intrakraniaalsed hemorraagid (insuldid).

Hemofiilia puhul saab üsna selgelt jälgida haiguse kõigi ilmingute progresseerumist lapse kasvades ja hiljem täiskasvanuna. Sündides võib täheldada suuremal või vähemal määral ulatuslikke verejookse koljuluude periosti all, nahaaluseid ja intradermaalseid hemorraagiaid, hilist verejooksu nabanöörist. Mõnikord avastatakse haigus juba esimesel intramuskulaarsel süstil, mis võib põhjustada suure, eluohtliku intramuskulaarse hematoomi. Hammaste tulekuga kaasneb sageli mitte väga tugev verejooks. Esimestel eluaastatel esineb sageli verejooksu suu limaskestast, mis on seotud erinevate teravate esemete traumaga. Kui laps õpib kõndima, kaasneb kukkumiste ja sinikatega sageli tugev ninaverejooks ja hematoomid peas. Hemorraagia orbiidil, samuti postorbitaalsed hematoomid võivad põhjustada nägemise kaotust. Roomama hakanud lapsel on tüüpilised verejooksud tuhara piirkonnas. Seejärel tulevad esile hemorraagiad jäsemete suurtes liigestes. Mida varem need ilmnevad, seda raskem on hemofiilia. Esimesed hemorraagiad soodustavad korduvat verevalamist samades liigestes. Igal hemofiiliat põdeval inimesel on kahjustatud 1-3 liigest, mis on eriti püsivad ja sagedusega hemorraagiad. Kõige sagedamini on kahjustatud põlveliigesed, seejärel pahkluu-, küünar- ja puusaliigesed. Verevalumid käte ja jalgade väikestes liigestes (vähem kui 1% kõigist kahjustustest) ja selgroolülidevahelistes liigestes on suhteliselt haruldased. Igal inimesel on olenevalt haiguse vanusest ja raskusastmest kahjustatud 1-2 kuni 8-12 liigest.

Põhiprotsessi tüsistusena tuleb eristada ägedat hemartroosi (esmane ja korduv), kroonilist hemorraagilist-destruktiivset osteoartriiti (artropaatia), sekundaarset immuunreumatoidsündroomi.

Äge hemartroos avaldub äkilise algusena (sageli pärast väiksemat vigastust) või liigesevalu järsu suurenemisena. Liiges on sageli laienenud, nahk selle kohal on punane, katsudes kuum. Pärast esimest verekomponentide ülekannet väheneb valu kiiresti (mõne tunni jooksul) ja samaaegse vere eemaldamisega liigesest kaob see peaaegu kohe.

Eristatakse liigesekahjustuse IV etappi. I ehk varajases staadiumis võib hemorraagia tagajärjel liigese maht suureneda. "Külmal" perioodil liigese funktsioon ei riku, kuid röntgenuuring määrab kahjustusele iseloomulikud tunnused. II etapis märgitakse protsessi progresseerumine, mis selgub röntgeniandmete põhjal. III etapis suureneb liiges järsult, deformeerub, puudutades sageli ebaühtlane ja konarlik, määratakse kahjustatud jala lihaste väljendunud hüpotroofia. Mõjutatud liigeste liikuvus on enam-vähem piiratud, mis on seotud nii liigese enda kahjustusega kui ka muutustega lihastes ja kõõlustes. Selles etapis moodustub väljendunud osteoporoos, liigeste sees tekivad kergesti luumurrud. Reieluus toimub hemofiiliale omase luuaine kraatri- või tunnelilaadne hävimine. Patella on osaliselt hävinud. Intraartikulaarsed kõhred hävivad, liigeseõõnes leitakse nende kõhrede liikuvad killud. Võimalikud on mitmesugused luude subluksatsioonid ja nihked. IV etapis on liigese funktsioon peaaegu täielikult kadunud. Võimalikud on liigesemurrud. Vanuse kasvades liigesaparaadi kahjustuse raskusaste ja levimus süveneb ja muutub raskemaks, kui patoloogiliselt muutunud liigeste ümber tekivad hematoomid.

Sekundaarne reumatoidsündroom (Barkagan-Egorova sündroom) on hemofiiliahaigete liigesekahjustuse tavaline vorm. Esimest korda kirjeldati seda sündroomi 1969. aastal. Paljudel juhtudel vaatavad seda arstid, kuna see esineb juba olemasoleva hemartroosi ja liigeste hemofiiliale iseloomulike destruktiivsete protsesside taustal. Sekundaarse reumatoidsündroomiga kaasneb krooniline põletikuline protsess (sageli sümmeetriline) käte ja jalgade väikestes liigestes, mida varem hemorraagiad ei mõjutanud. Seejärel, protsessi edenedes, läbivad need liigendid tüüpilise deformatsiooni. Suurtes liigestes ilmneb perioodiliselt tugev valu, võib täheldada liigeste tugevat hommikust jäikust. Sõltumata uute hemorraagiate ilmnemisest areneb liigeseprotsess pidevalt. Sel hetkel näitab vereanalüüs põletikulise protsessi, sealhulgas immunoloogiliste, laboratoorsete tunnuste ilmnemist või järsu suurenemist.

Enamikul hemofiiliaga inimestel ilmneb sündroom vanuses 10–14 aastat. 20-aastaselt ulatub selle esinemissagedus 5,9% -ni ja 30-aastaselt - kuni 13% kõigist haigusjuhtudest. Vanusega suureneb kõigi liigeskahjustuste levimus ja raskusaste pidevalt, mis viib puudeni, sunnib kasutama karkusid, ratastooli ja muid seadmeid. Liigesekahjustuse progresseerumine sõltub ägedate hemorraagiate sagedusest, nende ravi õigeaegsusest ja kasulikkusest (väga oluline on läbi viia varajane vere ja selle komponentide ülekanne), ortopeedilise abi kvaliteedist, füsioteraapia harjutuste õigest kasutamisest, füsioteraapia ja balneoloogilised mõjud, elukutse valik ja mitmed muud asjaolud. Kõik need küsimused on praegu äärmiselt olulised, kuna hemofiilia eeldatav eluiga on korrigeeriva ravi edukuse tõttu dramaatiliselt pikenenud.

Ulatuslikud ja intensiivsed subkutaansed, intermuskulaarsed, subfastsiaalsed ja retroperitoneaalsed hematoomid on väga rasked ja ohtlikud. Järk-järgult suurenedes võivad need ulatuda tohutu suuruseni, sisaldada 0,5–3 liitrit või rohkem verd, põhjustada aneemia arengut, põhjustada ümbritsevate kudede ja neid toitavate veresoonte kokkusurumist ja hävimist, nekroosi. Nii näiteks hävitavad retroperitoneaalsed hematoomid sageli täielikult vaagnaluude suured alad (hävitamistsooni läbimõõt võib ulatuda 15 cm-ni või rohkem), jalgade ja käte hematoomid hävitavad torukujulisi luid ja kalkaani. Luukoe surm põhjustab hemorraagiate teket periosti all. Sellise luude hävitamise protsessi radiograafidel peetakse sageli ekslikult kasvajaprotsessiks. Sageli ladestuvad hematoomidesse kaltsiumisoolad, mis mõnikord põhjustab uute luude moodustumist, mis võib liigesed sulgeda ja täielikult immobiliseerida.

Paljud hematoomid, mis avaldavad survet närvitüvedele või lihastele, põhjustavad halvatust, sensoorseid häireid ja kiiresti progresseeruvat lihaste atroofiat. Eriti ohtlikud on ulatuslikud hemorraagiad submandibulaarse piirkonna, kaela, neelu ja neelu pehmetes kudedes. Need hemorraagiad põhjustavad ülemiste hingamisteede ahenemist ja lämbumist.

Tõsine hemofiilia probleem on rikkalik ja püsiv neeruverejooks, mida täheldatakse 14–30% selle verehaigusega inimestest. Need verejooksud võivad tekkida nii spontaanselt kui ka seoses püelonefriidiga seotud nimmepiirkonna vigastustega. Lisaks võib hemofiilia korral luukoe hävimise tõttu tekkida kaltsiumi suurenenud eritumine uriiniga neerude verejooks. Sellise verejooksu ilmnemist või intensiivistumist saab hõlbustada valuvaigistite (atsetüülsalitsüülhape jne) võtmisega, massilise vere- ja plasmaülekandega, mis põhjustab neerude täiendavat kahjustust. Neeruverejooksule eelneb sageli vereosakeste pikaajaline eritumine uriiniga, mida saab tuvastada ainult laboratoorsete uuringute abil.

Vere ilmumisega uriinis kaasnevad sageli rasked urineerimishäired, samuti eritunud uriini koguse muutus (võib esineda nii selle päevamahu suurenemist kui ka vähenemist), neerukoolikute tekkega. verehüüvete esinemine kuseteedes. Need nähtused on eriti intensiivsed ja väljendunud ravi ajal, kui vere normaalne seisund ajutiselt taastub. Vere uriiniga eritumise lakkamisele eelneb sageli neerukoolikud ja sageli uriinierituse ajutine puudumine koos keha mürgistusnähtude ilmnemisega toksiliste ainevahetusproduktidega.

Perioodiliselt kordub neerude verejooks, mis võib aastate jooksul põhjustada tõsiseid düstroofilisi-destruktiivseid muutusi selles organis, sekundaarset infektsiooni ja surma neerupuudulikkuse tekkest.

Seedetrakti verejooks hemofiilia korral võib olla spontaanne, kuid sagedamini on see põhjustatud atsetüülsalitsüülhappe (aspiriini), butadiooni ja teiste ravimite võtmisest. Teiseks verejooksu allikaks on ilmsed või varjatud mao- või kaksteistsõrmiksoole haavandid, samuti erineva päritoluga erosioonne gastriit. Mõnikord esineb aga difuusset kapillaarverejooksu ilma limaskesta hävitavate muutusteta. Neid verejookse nimetatakse diapedeetiliseks. Nende ilmnemisel on sooleseinad pikka aega verega küllastunud, mis viib kiiresti raske aneemia tagajärjel kooma, vererõhu järsu languse tõttu minestamise ja surma. Sellise verejooksu tekkemehhanism on siiani ebaselge.

Kõhuõõne organite verejooksud jäljendavad erinevaid ägedaid kirurgilisi haigusi - äge pimesoolepõletik, soolesulgus jne.

Aju- ja seljaaju ning nende membraanide hemorraagiad hemofiilia korral on peaaegu alati seotud kas vigastustega või ravimite kasutamisega, mis häirivad trombotsüütide funktsiooni, mis on otseselt seotud vere hüübimisega. Vigastuse hetke ja hemorraagia tekke vahel võib olla kerge intervall, mis kestab 1-2 tundi kuni päevani.

Hemofiilia iseloomulik tunnus on pikaajaline verejooks vigastuste ja operatsioonide ajal. Rebendhaavad on palju ohtlikumad kui lineaarsed rebendid. Sageli ei teki verejooksu kohe pärast vigastust, vaid 1-5 tunni pärast.

Mandlite eemaldamine hemofiilia korral on palju ohtlikum kui kõhuõõneoperatsioon.

Hammaste, eriti purihammaste väljatõmbamisega kaasneb sageli mitmepäevane veritsus mitte ainult hambapesadest, vaid ka novokaiiniga kudede infiltratsiooni kohas moodustunud hematoomidest, mis viib aneemia tekkeni. Need hematoomid põhjustavad lõualuu hävimist. Hemofiilia korral eemaldatakse hambad antihemofiilsete ravimite toime taustal üldnarkoosis. Mitme hamba väljatõmbamine on kõige parem teha korraga.

Osa hemofiilia tüsistustest on tingitud verekaotusest, kudede kokkupressimisest ja hävitamisest hematoomide poolt, hematoomide nakatumisest. Suur hulk tüsistusi on seotud ka immuunhäiretega. Neist kõige ohtlikum on VIII (või IX) hüübimisfaktori paljude immuuninhibiitorite (blokaatorite) ilmumine veres, muutes hemofiilia nn inhibeerivaks vormiks, mille puhul on peamine ravimeetod. on transfusioonravi (vere või selle komponentide ülekanne) - kaotab peaaegu täielikult oma efektiivsuse. Veelgi enam, antihemofiilsete ravimite korduv manustamine põhjustab sageli veres inhibiitori hulga kiiret tõusu, mille tagajärjel muutub algselt mingit mõju avaldanud vere ja selle komponentide ülekanne peagi kasutuks. Hemofiilia inhibeeriva vormi esinemissagedus on erinevate autorite andmetel vahemikus 1 kuni 20%, sagedamini 5 kuni 15%. Inhibeerivate vormide korral on trombotsüütide funktsioon märgatavalt halvenenud, verejooksud liigestes ja vere eritumine uriiniga sagenevad, liigesekahjustused on oluliselt suuremad.

Peamine hemofiilia lokaliseerimise ja päritoluga verejooksu ja hemorraagia ravi ja ennetamise meetod on VIII faktorit sisaldavate verepreparaatide piisavate annuste intravenoosne manustamine. VIII faktor on muutuv ja praktiliselt ei säili verekonservides, looduslikus ja kuivas plasmas. Asendusraviks sobivad ainult doonori otsene vereülekanne ja säilinud VIII hüübimisfaktoriga veretooted. Otsest vereülekannet doonorilt kasutatakse ainult siis, kui arstil ei ole muid antihemofiilseid ravimeid. Ema vereülekanne on tõsine viga, kuna ta on haiguse kandja ja VIII faktori tase tema veres on järsult langenud. Kuna VIII faktori eluiga retsipiendi veres on lühike (umbes 6-8 tundi), tuleb vereülekannet, aga ka antihemofiilse plasma ülekandeid korrata vähemalt 3 korda päevas. Sellised vere- ja plasmaülekanded ei sobi massilise verejooksu peatamiseks ja usaldusväärseks katteks erinevateks kirurgilisteks sekkumisteks.

Võrdne kogus antihemofiilset plasmat on ligikaudu 3-4 korda efektiivsem kui värske veri. Antihemofiilse plasma ööpäevane annus 30–50 ml / kg kehakaalu kohta võimaldab mõnda aega säilitada 10–15% VIII faktori taset. Sellise ravi peamine oht on vereringe ülekoormus mahu järgi, mis võib viia kopsuturse tekkeni. Antihemofiilse plasma kasutamine kontsentreeritud kujul olukorda ei muuda, kuna süstitud valgu kõrge kontsentratsioon põhjustab vedeliku intensiivse liikumise kudedest verre, mille tulemusena suureneb ringleva vere maht samas. nii nagu plasma infundeerimisel tavalises lahjenduses. Kontsentreeritud kuival antihemofiilsel plasmal on ainult see eelis, et see sisaldab kontsentreeritumalt VIII hüübimisfaktorit ja väikeses koguses jõuab see kiiremini vereringesse. Kuiv antihemofiilne plasma lahjendatakse enne kasutamist destilleeritud veega. Ravi antihemofiilse plasmaga on piisav enamiku ägedate hemorraagiate peatamiseks liigestes (välja arvatud kõige raskemad), samuti väiksemate verejooksude ennetamiseks ja raviks.

Kõige usaldusväärsemad ja tõhusamad vere hüübimisfaktori VIII hemofiilia kontsentraadid. Kõige kättesaadavam neist on krüosade. Tegemist on plasmast jahutamise (krüosadestamise) teel eraldatud valgukontsentraadiga, mis sisaldab küllaldaselt vere hüübimisfaktoreid, kuid vähe valke. Madal valgusisaldus võimaldab süstida ravimit vereringesse väga suurtes kogustes ja tõsta VIII faktori kontsentratsiooni 100%-ni või rohkemgi, kartmata vereringe ülekoormamist ja kopsuturset. Krüosadet tuleb hoida -20°C juures, mis raskendab selle transportimist. Sulatamisel kaotab ravim kiiresti oma aktiivsuse. Kuiv krüopretsipitaat ja VIII hüübimisfaktori kaasaegsed kontsentraadid on ilma nendest puudustest. Neid saab hoida tavalises külmikus. Krüopretsipitaadi liigne manustamine on ebasoovitav, kuna see tekitab veres kõrge hüübimisfaktorite kontsentratsiooni, mille tagajärjel on häiritud mikrotsirkulatsioon elundites ning tekib verehüüvete ja DIC tekke oht.

Kõiki antihemofiilseid ravimeid manustatakse intravenoosselt ainult joana, kõige kontsentreeritumal kujul ja niipea kui võimalik pärast nende taasavamist, segamata neid teiste intravenoosseks manustamiseks mõeldud lahustega. Üks peamisi asendusravi ebaõnnestumise põhjuseid on veretoodete tilkumine, mis ei too kaasa VIII faktori taseme tõusu plasmas. Kuni verejooksu stabiilse peatumiseni ei saa te kasutada vereasendajaid ja veretooteid, mis ei sisalda antihemofiilseid tegureid, kuna see põhjustab VIII faktori lahjenemist ja selle kontsentratsiooni vähenemist seerumis.

Liigeste ägedate hemorraagiate korral on vajalik kahjustatud jäseme ajutine (mitte rohkem kui 3-5 päeva) immobiliseerimine (immobiliseerimine) füsioloogilises asendis, kahjustatud liigese soojendamine (kompressid), kuid mitte jahutamine. Liigesesse voolanud vere varajane eemaldamine mitte ainult ei kõrvalda koheselt valu, hoiab ära vere edasise hüübimise liigeses, vaid vähendab ka osteoartriidi tekke ja kiire progresseerumise ohtu. Sekundaarsete põletikuliste muutuste ennetamiseks ja raviks pärast vere eemaldamist süstitakse liigeseõõnde 40-60 mg hüdrokortisooni. Toetav vereülekanne, mida tehakse esimese 3-6 päeva jooksul, hoiab ära edasise verejooksu ja võimaldab varakult alustada füsioteraapia harjutustega, mis aitab kaasa kahjustatud jäseme funktsiooni kiiremale ja täielikumale taastumisele ning hoiab ära lihaste atroofia. Parem on kahjustatud liigese liigutused arendada etapiviisiliselt. Esimese 5-7 päeva jooksul pärast sideme eemaldamist tehakse aktiivseid liigutusi nii kahjustatud liigeses kui ka teistes jäseme liigestes, suurendades järk-järgult harjutuste sagedust ja kestust. Alates 6.-9. päevast minnakse üle "koormus" harjutustele, kasutades veloergomeetreid, pedaalväravaid kätele, elastset veojõudu. Alates 11.-13. päevast tehakse passiivse koormuse harjutusi ettevaatusega, et kõrvaldada jääkjäikus ja piirata maksimaalset paindumist või sirutust. Samaaegselt 5-7 päevaga on ette nähtud füsioteraapia - hüdrokortisooni elektroforees, anoodiline galvaniseerimine.

Pehmete kudede hemorraagiate korral viiakse antihemofiilsete ravimitega läbi intensiivsem ravi kui liigeste hemorraagia korral. Aneemia tekkega on lisaks ette nähtud erütrotsüütide massi intravenoossed infusioonid. Kui ilmnevad hematoomi infektsiooni tunnused, määratakse koheselt laia toimespektriga antibiootikumid. Kõik hemofiilia intramuskulaarsed süstid on vastunäidustatud, kuna need võivad põhjustada ulatuslikke hematoome ja pseudotoome. Penitsilliin ja selle poolsünteetilised analoogid on samuti ebasoovitavad, kuna suurtes annustes suurendavad nad verejooksu.

Varajane ja intensiivne ravi antihemofiilsete ravimitega aitab kaasa hematoomide kiirele taandumisele. Kapseldatud hematoomid eemaldatakse võimalusel koos kapsliga kirurgiliselt.

Kahjustatud naha välist verejooksu, ninaverejooksu ja verejooksu suuõõne haavadest peatatakse nii transfusioonravi kui ka lokaalsete mõjude abil - ravides veritsevat piirkonda vere hüübimist soodustavate ravimitega. Lisaks võib neid ravimeid võtta suu kaudu. Haavadele asetatakse survesidemed või -õmblused. Samamoodi peatage verejooks pärast hamba eemaldamist. Närimishammaste eemaldamisel viiakse läbi veidi intensiivsem transfusioonravi ja mitme hamba (3-5 või enama) üheaegne eemaldamine eeldab antihemofiilsete ravimite kasutuselevõttu esimese 3 päeva jooksul.

Ninaverejooksu korral tuleks vältida tihedat pakkimist, kuna pärast tampoonide eemaldamist taastub veritsus sageli veelgi suurema jõuga. Ninaverejooksu peatavad tavaliselt antihemofiilsed plasma- ja antihemofiilsed ravimid ning samaaegne nina limaskesta niisutamine vere hüübimist soodustavate lahustega.

Tõsine oht on neerude verejooks, mille korral antihemofiilse plasma ja krüopretsipitaadi intravenoossed infusioonid on ebaefektiivsed.

Seedetrakti verejooksu kontrollitakse suurte annuste hüübimisfaktori kontsentraatidega. Tuleb meeles pidada, et maoverejooksu provotseerib sageli aspiriini, brufeeni, indometatsiini võtmine seoses liigesevalu, hamba- või peavaluga. Hemofiiliaga patsientidel võib isegi ühekordne aspiriini annus põhjustada maoverejooksu.

Kroonilise osteoartriidi ja muude luu- ja lihaskonna kahjustuste ennetamisel ja ravimisel on vaja ette näha mitmesugused võimalused liigeste kaitsmiseks ja jäsemete vigastuste vältimiseks. Selleks õmmeldakse põlve-, pahkluu- ja küünarliigeste ümber riietesse vahtpolstreid ning välditakse neid spordialasid, mis on seotud hüpete, kukkumiste ja sinikatega (sh ratta- ja mootorrattasõit). Tähtsaks peetakse liigeste ja lihaste ägedate hemorraagiate võimalikult varajast ja täielikku ravi, intensiivset aastaringset füsioteraapiat. Selleks on spetsiaalsed atraumaatiliste harjutuste kompleksid vees, pehmetel mattidel ja koormusseadmetel - veloergomeetrid, manuaalsed väravad. Tunnid peaksid algama koolieelses või algkoolieas, st enne luu-lihassüsteemi tõsiste häirete tekkimist. Kompleksteraapiat täiendavad füsioteraapia (kõrgsagedusvoolud, glükokortikosteroidide elektroforees) ja balneoloogilised ravimeetodid, eelkõige mudaravi, soolvee- ja radoonivannid. Sagedaste ja kangekaelselt korduvate hemorraagiate korral samades liigestes tehakse röntgenteraapiat ja kirurgilist ravi.

Hemorraagia ennetamisel on oluline vigastuste ja lõikehaavade riski minimeerimine varasest lapsepõlvest alates. Kergesti purunevad mänguasjad (sh metallist ja plastikust), samuti ebastabiilsed ja rasked esemed on igapäevaelust välja jäetud. Mööbel peaks olema ümarate servadega, väljaulatuvad servad mähitud vati või porolooniga, põrand kaetud kuhjava vaibaga. Eelistatav on patsientide suhtlemine ja mängud tüdrukutega, kuid mitte poistega. Patsiendi jaoks on oluline õige elukutse ja töökoha valik.

Hemofiilia ennetamist ei ole veel välja töötatud. Looteveest saadud rakkude geneetilise testimisega sündimata lapse soo määramine võimaldab küll õigel ajal raseduse katkestada, kuid ei näita, kas loode on hemofiilia geeni kandja. Rasedus säilib, kui loode on meessoost, kuna kõik haigete pojad sünnivad tervetena. Katkestage rasedus, kui loode on emane, kuna kõik hemofiiliahaigete tütred on selle haiguse kandjad.

Naissoost hemofiiliajuhte, kellel on 50% tõenäosus sünnitada haige laps (kui loode on mees) või kes on hemofiilia edasikandja (kui loode on naine), kannab ainult tüdrukute sünd üle riski haigestuda. hemofiiliahaiged perekonnas esimesest põlvkonnast teise, suurendades samal ajal haiguse kandjate koguarvu.

Kromatograafiliselt puhastatud lüofiliseeritud inimese plasmafraktsioon, mis sisaldab VIII hüübimisfaktorit. Antihemofiilne globuliin, kompenseerib VIII hüübimisfaktori puudulikkust, ajutiselt kompenseerib A-hemofiiliaga patsientidel hüübimisdefekti. Seda leidub looduslikus kombinatsioonis VIII faktori valgu C-ga, von Willebrandi faktoriga. See osaleb vere hüübimisprotsessides, soodustab protrombiini üleminekut trombiiniks ja fibriini trombi moodustumist. Vahetult pärast manustamist suurendab see vere hüübimisvõimet. Antihemofiilse faktori aktiivsuse vähenemine on kahefaasiline: varajane faas on aktiivsuse kiire langus, iseloomustab ekstravaskulaarse ruumiga tasakaalustumise aega, teine ​​faas on aeglane, peegeldab rakkude bioloogilist poolestusaega. manustatakse antihemofiilset faktorit ja on 9-14 tundi Spetsiifiline aktiivsus (peale inimese albumiini lisamist) - 9-22 RÜ valku. 1 RÜ (vastavalt WHO VIII verehüübimisfaktori standardile) on ligikaudu võrdne antihemofiilse faktori tasemega 1 ml värskes inimdoonori plasmas.
Maksimaalse plasmakontsentratsiooni saavutamise aeg pärast intravenoosset manustamist on 10 minutit kuni 2 tundi Poolväärtusaeg 8,4-19,3 tundi VIII hüübimisfaktori aktiivsus väheneb järk-järgult - 15% 12 tunni jooksul. Hüpertermiaga VIII hüübimisfaktori poolväärtusaeg võib väheneda.

Ravimi VIII hüübimisfaktori kasutamise näidustused

Hemofiilia A, von Willebrandi tõbi (verejooksu ravi ja ennetamine, sealhulgas kirurgiliste sekkumiste ajal); omandatud VIII faktori puudulikkus, haigused, millega kaasneb VIII faktori vastaste antikehade moodustumine.

Kuidas VIII hüübimisfaktorit kasutada

Sisse / sisse. Spontaanse või kerge verejooksu ennetamiseks - 10 RÜ / kg (spontaanse verejooksu vältimiseks vajalik VIII faktori sisaldus - 5% normaalsest tasemest); mõõduka verejooksu ja väikese kirurgilise sekkumisega (näiteks hamba väljatõmbamine) - 15-25 RÜ / kg (VIII faktori sisaldus - 30-80% normist), millele järgneb säilitusannus 10-15 RÜ / kg iga 12. 24 tundi 3 päeva jooksul või kuni piisava kliinilise toime saavutamiseni; ägeda eluohtliku verejooksu korral - 40-50 RÜ / kg (VIII faktori sisaldus - 60-100% normist), millele järgneb säilitusannus 20-25 RÜ / kg iga 8-24 tunni järel; ulatuslike kirurgiliste sekkumistega - 40-50 RÜ / kg 1 tund enne protseduuri ja 20-25 RÜ / kg - 5 tundi pärast esimest annust (st 80-100% normist enne ja pärast operatsiooni), seejärel korrake iga kord. 8-24 tundi, kuni saavutatakse piisav kliiniline toime. Verejooksu pikaajaliseks ennetamiseks raske hemofiilia A korral - 12-25 RÜ / kg iga 2-3 päeva järel.
Krüopretsipitaadi kasutamisel võetakse arvesse sobivust AB0 veregruppidega. Külmutatud krüopretsipitaadiga anum asetatakse sulatamiseks ja täielikuks lahustamiseks veevannis temperatuuril mitte üle 35–37 ° C ja inkubeeritakse mitte rohkem kui 7 minutit. Saadud läbipaistev kollakas lahus, mis ei tohiks sisaldada helbeid, kasutatakse kohe pärast valmistamist. Manustatakse intravenoosselt süstla või ühekordselt kasutatava filtriga vereülekandesüsteemiga. Annus sõltub VIII faktori esialgsest sisaldusest hemofiiliaga patsiendi veres, verejooksu olemusest ja lokaliseerimisest, kirurgilise sekkumise riski astmest, spetsiifilise inhibiitori olemasolust patsiendi veres, mis võib neutraliseerida hemofiilia aktiivsust. faktor VIII (väljendatud VIII faktori aktiivsuse ühikutes). Tõhusa hemostaasi tagamiseks hemofiilia sagedasemate tüsistuste (hemartroos, neeru-, igeme- ja ninaverejooks), samuti hamba väljatõmbamise korral peaks VIII faktori sisaldus plasmas olema vähemalt 20%; intermuskulaarsete hematoomide, seedetrakti verejooksu, luumurdude ja muude vigastustega - mitte vähem kui 40%; enamikus kirurgilistes sekkumistes - vähemalt 70%. VIII faktori kasutuselevõtuga kiirusega 1 ühik 1 kg kehakaalu kohta suureneb selle sisaldus veres keskmiselt 1%. Selle põhjal arvutatakse annuste arv, mis on vajalik VIII faktori kontsentratsiooni tõstmiseks veres antud tasemeni, valemiga: patsiendi kehamass (kg) korrutatakse vajaliku VIII faktori sisaldusega patsiendi veres ja jagatud 200-ga (VIII faktori minimaalne sisaldus aktiivsusühikutes 1 krüopretsipitaadi annuses). Pärast verejooksu täielikku peatamist manustatakse hemofiiliahaigetele VIII faktorit 12–24-tunniste intervallidega annuses, mis suurendab VIII faktori sisaldust vähemalt 20%. Ravi jätkatakse mitu päeva - kuni hematoomi suuruse nähtava vähenemiseni. Kirurgiliste sekkumiste korral manustatakse hemostaatiline annus 30 minutit enne operatsiooni. Massiivse verejooksu korral täiendatakse verekaotust, operatsiooni lõpus lisatakse uuesti krüopretsipitaat (1/2 doosi originaalist). 3-5 päeva pärast operatsiooni on vajalik VIII faktori kontsentratsioon patsiendi veres hoida samades piirides kui operatsiooni ajal. Tulevikus operatsioonijärgsel perioodil piisab hemostaasi säilitamiseks VIII faktori sisalduse suurendamisest 20% -ni. Hemostaatilise ravi kestus on 7-14 päeva ja sõltub verejooksu iseloomust, asukohast, reparatiivse koe omadustest. Hemofiiliaga patsiendi ravi krüopretsipitaadiga tuleb kombineerida antifibrinolüütiliste ainete ja kortikosteroidide samaaegse manustamisega profülaktilistes ja keskmistes terapeutilistes annustes.

Ravimi VIII hüübimisfaktori kasutamise vastunäidustused

Suurenenud tundlikkus.

VIII hüübimisfaktori kõrvaltoimed

Allergilised ja transfusioonireaktsioonid (urtikaaria, lööve, stridori hingamine, vererõhu langus, külmavärinad, hüpertermia, anafülaksia), suu limaskesta mööduv paresteesia, iiveldus, oksendamine, peavalu.

Erijuhised ravimi VIII hüübimisfaktori kasutamiseks

Raseduse ja imetamise ajal kasutada ettevaatusega.
Enne ravi ja ravi ajal on vaja kontrollida pulssi: südame löögisageduse olulise tõusuga aeglustatakse infusioonikiirust või manustamine peatatakse. Ravikuuri ajal ja pärast selle lõppu on vaja kontrollida VIII faktori sisaldust veres. Progresseeruva hemolüütilise aneemia tunnuste tuvastamiseks on vaja jälgida hematokriti ja suunata Coombsi reaktsiooni. Asümptomaatilise hemofiiliaga patsientide immuunseisundi muutused on tingitud korduvast kokkupuutest viiruslike patogeenidega ja/või võimalikust lisandite olemasolust VIII faktori preparaatides (näiteks IgG). Rahuldavate kliiniliste tulemuste saavutamiseks võib lisaks algselt arvutatud annusele manustada täiendava annuse. Kliinilise toime puudumisel on vaja läbi viia test, et tuvastada inhibiitor ja määrata selle kogus neutraliseeritud antihemofiilsetes ühikutes 1 ml või kogu plasmamahu kohta. Kõrvaltoimete riski vähendamiseks on soovitatav kasutada hiljemalt 1 tund pärast lahjendamist, manustada ainult intravenoosselt, vähemalt 3 tundi (kiirusega 10 ml/min), mitte külmutada lahust ega uuesti kasutada. . VIII hüübimisfaktori vastased antikehad on võimalikud, sellistel juhtudel väheneb tavaliselt ravi efektiivsus, mistõttu võib olla vajalik VIII hüübimisfaktori annuse suurendamine. HIV-seropositiivsetel hemofiiliaga patsientidel on võimalik suurendada CD4 rakkude arvu languse kiirust.