प्लाज्मा जमावट कारक। GPM.1.8.2.0003.15 रक्त जमावट कारकों की गतिविधि का निर्धारण

जमावट कारक आठवीं ( जमावट कारकआठवीं)

नैदानिक ​​और औषधीय समूह

कारक दवा आठवीं जमावटरक्त

औषधीय प्रभाव

हेमोस्टेटिक दवा। प्रोथ्रोम्बिन के थ्रोम्बिन में संक्रमण और एक फाइब्रिन थक्का के गठन को बढ़ावा देता है।

फार्माकोकाइनेटिक्स

हीमोफिलिया के रोगियों में, एटी 1/2 12 घंटे है। रक्त जमावट कारक VIII की गतिविधि 12 घंटे के भीतर 15% कम हो जाती है। रक्त जमावट कारक VIII थर्मोलैबाइल है और तापमान बढ़ने पर तेजी से नष्ट हो जाता है, जिससे टी में कमी आती है 1/2.

मात्रा बनाने की विधि

इंजेक्शन के लिए पानी के साथ कमजोर पड़ने के बाद ऑक्टेनेट को अंतःशिरा रूप से प्रशासित किया जाता है, जो पैकेज में शामिल है। ऑक्टेनेट खुराक और अवधि प्रतिस्थापन चिकित्सारक्त जमावट कारक VIII की कमी की डिग्री पर निर्भर करता है, रक्तस्राव का स्थान और अवधि, नैदानिक ​​स्थितिरोगी।

रक्त जमावट कारक VIII के लिए स्वीकृत WHO मानकों के अनुसार दवा की खुराक अंतर्राष्ट्रीय इकाइयों (IU) में व्यक्त की जाती है। प्लाज्मा में रक्त जमावट कारक VIII की गतिविधि या तो प्रतिशत के रूप में व्यक्त की जाती है (मानव प्लाज्मा में कारक की सामान्य सामग्री के सापेक्ष), या IU (के सापेक्ष) में अंतर्राष्ट्रीय मानकजमावट कारक VIII के लिए)।

जमावट कारक VIII का 1 IU सामान्य मानव प्लाज्मा के 1 मिलीलीटर के बराबर है। आवश्यक खुराक की गणना अनुभवजन्य रूप से प्राप्त परिणामों पर आधारित होती है, जिसके अनुसार 1 IU / किग्रा रक्त जमावट कारक VIII, प्लाज्मा कारक के स्तर को सामान्य सामग्री के 1.5-2% तक बढ़ा देता है। रोगी के लिए आवश्यक खुराक की गणना करने के लिए, रक्त जमावट कारक VIII की गतिविधि का प्रारंभिक स्तर निर्धारित किया जाता है और यह अनुमान लगाया जाता है कि इस गतिविधि को कितना बढ़ाने की आवश्यकता है।

आवश्यक खुराक = शरीर का वजन (किलो) × थक्के कारक VIII में वांछित वृद्धि (%) (आईयू / डीएल) × 0.5।

दवा के उपयोग की मात्रा और आवृत्ति हमेशा प्रत्येक व्यक्तिगत मामले में नैदानिक ​​प्रभावशीलता के अनुरूप होनी चाहिए।

बाद में रक्तस्राव की स्थिति में, रक्त जमावट कारक VIII गतिविधि का स्तर उचित समय अवधि में प्रारंभिक प्लाज्मा स्तर (सामान्य सामग्री का%) से कम नहीं होना चाहिए। निम्न तालिका को के लिए जमावट कारक VIII की खुराक चुनने के लिए एक दिशानिर्देश के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है: विभिन्न रक्तस्रावऔर सर्जिकल हस्तक्षेप।

रोगी व्यक्तिगत रूप से दवा के प्रशासन का जवाब देते हैं, जबकि वहाँ है अलग स्तरविवो में रिकवरी, टी 1/2 जमावट कारक VIII परिवर्तनशीलता की विशेषता है। इसलिए, उपचार के दौरान, प्रशासन की खुराक और आवृत्ति को विनियमित करने के लिए, इसके स्तर की निगरानी की जानी चाहिए। प्रतिस्थापन चिकित्सा के दौरान रक्त जमावट कारक VIII की गतिविधि की निगरानी की जानी चाहिए, विशेष रूप से प्रमुख सर्जिकल हस्तक्षेपों के दौरान।

तालिका में संकेतित खुराक सांकेतिक हैं। डॉक्टर व्यक्तिगत रूप से दवा के उपयोग की आवश्यक खुराक और आवृत्ति निर्धारित करता है।

के उद्देश्य के साथ लंबी अवधि की रोकथामगंभीर हीमोफिलिया ए में रक्तस्रावदवा हर 2-3 दिनों में शरीर के वजन के 20-40 आईयू / किग्रा की खुराक पर निर्धारित की जाती है। कुछ मामलों में, विशेष रूप से युवा रोगियों में, इंजेक्शन के बीच के अंतराल को कम करना या खुराक बढ़ाना आवश्यक हो सकता है।

कुछ रोगी उपचार के बाद विकसित हो सकते हैं निरोधात्मक एंटीबॉडीजमावट कारक VIII, जो प्रभावशीलता को प्रभावित कर सकता है आगे का इलाज. यदि, चल रही चिकित्सा की पृष्ठभूमि के खिलाफ, कारक आठवीं गतिविधि में अपेक्षित वृद्धि नोट नहीं की जाती है या आवश्यक हेमोस्टेटिक प्रभाव अनुपस्थित है, तो एक विशेषज्ञ के साथ परामर्श की सिफारिश की जाती है। उपचार केंद्रबेथेस्डा परीक्षण का उपयोग करना। जमावट कारक VIII के अवरोधक को खत्म करने के लिए इम्यून टॉलरेंस इंडक्शन थेरेपी का इस्तेमाल किया जा सकता है। इसका आधार अवरोधक की अवरुद्ध क्षमता (100-200 आईयू / किग्रा / दिन, अवरोधक टिटर के आधार पर) से अधिक एकाग्रता पर रक्त जमावट कारक VIII का दैनिक प्रशासन है। रक्त जमावट कारक VIII, एक प्रतिजन के रूप में कार्य करते हुए, सहिष्णुता विकसित होने तक अवरोधक अनुमापांक में वृद्धि को भड़काता है, अर्थात। अवरोधक की कमी और बाद में गायब होने तक। थेरेपी निरंतर है और औसतन 10 से 18 महीने तक चलती है। इस तरह के उपचार को केवल एंटीहेमोफिलिक चिकित्सा के क्षेत्र में विशेषज्ञों द्वारा ही किया जाना चाहिए।

लियोफिलिसेट का विघटन

1. बंद शीशियों में विलायक (इंजेक्शन के लिए पानी) और लियोफिलिजेट को लाने की सिफारिश की जाती है कमरे का तापमान. यदि गर्म करने से पहले विलायक का उपयोग किया जाता है पानी का स्नानयह सुनिश्चित करने के लिए ध्यान रखा जाना चाहिए कि पानी रबर स्टॉपर्स या शीशी के ढक्कन के संपर्क में न आए। पानी के स्नान का तापमान 37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं होना चाहिए।

2. लियोफिलिज़ेट और पानी के साथ बोतलों से सुरक्षात्मक कैप निकालें, दोनों बोतलों के रबर स्टॉपर्स को एक कीटाणुनाशक वाइप्स से कीटाणुरहित करें।

3. प्लास्टिक की पैकेजिंग से डबल-एंडेड सुई के छोटे सिरे को छोड़ दें, पानी की बोतल के स्टॉपर को इसके साथ छेदें और इसे तब तक नीचे धकेलें जब तक कि यह बंद न हो जाए।

4. पानी की बोतल को सुई से पलट दें, दो सिरे वाली सुई के लंबे सिरे को छोड़ दें, शीशी के स्टॉपर को लियोफिलिसेट से छेद दें और इसे तब तक दबाएं जब तक कि यह बंद न हो जाए। लियोफिलिसेट शीशी में वैक्यूम पानी में आ जाएगा।

5. लियोफिलिसेट की बोतल से सुई के साथ पानी के साथ बोतल को अलग करें। दवा जल्दी घुल जाएगी; ऐसा करने के लिए, बोतल को थोड़ा हिलना चाहिए। तलछट के बिना केवल एक रंगहीन, पारदर्शी या थोड़ा ओपेलेसेंट घोल का उपयोग करने की अनुमति है।

समाधान की तैयारी और प्रशासन के लिए नियम

एहतियात के तौर पर, ऑक्टेनेट के प्रशासन से पहले और उसके दौरान हृदय गति की निगरानी की जानी चाहिए। नाड़ी के एक स्पष्ट त्वरण के मामले में, दवा के प्रशासन को धीमा या बंद कर दें।

निर्देशों के अनुसार सांद्रण को भंग करने के बाद, फिल्टर सुई से सुरक्षात्मक कोटिंग को हटा दें और इसे ध्यान के साथ बोतल में डालें। फिल्टर सुई से टोपी निकालें और सिरिंज संलग्न करें। सिरिंज के साथ शीशी को उल्टा कर दें और घोल को सिरिंज में खींच लें। इंजेक्शन एसेप्सिस और एंटीसेप्सिस के नियमों के अनुसार किया जाना चाहिए। सिरिंज से फिल्टर सुई को डिस्कनेक्ट करें और इसके बजाय तितली सुई संलग्न करें।

समाधान को 2-3 मिलीलीटर / मिनट की दर से धीरे-धीरे अंतःशिरा में प्रशासित किया जाना चाहिए।

यदि ऑक्टेनेट की एक से अधिक बोतल का उपयोग किया जाता है, तो सिरिंज और तितली सुई का पुन: उपयोग किया जा सकता है।

फिल्टर सुई केवल एकल उपयोग के लिए है। सिरिंज में तैयार घोल को खींचने के लिए हमेशा एक फिल्टर वाली सुई का उपयोग करें।

दवा के किसी भी अप्रयुक्त समाधान को मौजूदा नियमों के अनुसार निपटाया जाना चाहिए।

जरूरत से ज्यादा

इस तथ्य के बावजूद कि कारक आठवीं की अधिक मात्रा के लक्षण नहीं देखे गए थे, यह अनुशंसा की जाती है कि निर्धारित खुराक से अधिक न हो।

दवा बातचीत

ऑक्टेनेट की अन्य लोगों के साथ बातचीत पर डेटा दवाईगुम।

गर्भावस्था और दुद्ध निकालना

गर्भावस्था और दुद्ध निकालना के दौरान दवा का उपयोग उन मामलों में संभव है जहां मां के लिए चिकित्सा का अपेक्षित लाभ अधिक है संभावित जोखिमएक भ्रूण या एक शिशु के लिए।

दुष्प्रभाव

एलर्जी:कभी-कभार - वाहिकाशोफइंजेक्शन क्षेत्र में जलन, ठंड लगना, गर्म चमक, पित्ती (सामान्यीकृत सहित), सरदर्द, रक्तचाप में कमी, सुस्ती, मतली, उल्टी, चिंता, क्षिप्रहृदयता, दबाव की भावना छाती, सांस की तकलीफ, बुखार, कंपकंपी की भावना। बहुत मुश्किल से (<1/10 000) эти симптомы могут прогрессировать до развития тяжелой анафилактической реакции, включая шок.

हीमोफिलिया ए के रोगी रक्त जमावट कारक VIII के प्रति एंटीबॉडी (अवरोधक) विकसित कर सकते हैं (<1/1000). Наличие ингибиторов приводит к неудовлетворительному клиническому ответу на введение препарата. В таких случаях рекомендуется обращаться в специализированные гематологические/гемофильные центры. Неоходимо обследовать пациента на наличие антител с помощью соответствующих методов (тест Бетезда).

भंडारण के नियम और शर्तें

दवा को 2 डिग्री से 25 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर प्रकाश से सुरक्षित और बच्चों की पहुंच से बाहर जगह में संग्रहित किया जाना चाहिए; ठंडा नहीं करते। शेल्फ जीवन - 3 साल।

विशेष निर्देश

दवा का उपयोग करते समय, अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं का विकास संभव है, जैसा कि प्रोटीन मूल की अन्य इंजेक्शन योग्य दवाओं के उपयोग के साथ होता है।

रक्त जमावट कारक VIII के अलावा, दवा में अन्य रक्त प्रोटीन की मात्रा भी होती है। अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं के शुरुआती लक्षण पित्ती, सीने में जकड़न, सांस की तकलीफ, निम्न रक्तचाप और एनाफिलेक्सिस (एक गंभीर एलर्जी प्रतिक्रिया) हैं। यदि ये लक्षण होते हैं, तो दवा का प्रशासन तुरंत बंद कर देना चाहिए। सदमे के विकास के मामले में, सदमे-विरोधी चिकित्सा के आधुनिक तरीकों का इस्तेमाल किया जाना चाहिए।

मानव रक्त या प्लाज्मा से प्राप्त औषधीय उत्पादों के मामले में, संक्रामक एजेंटों के संचरण की संभावना को पूरी तरह से बाहर नहीं किया जा सकता है। यह अज्ञात रोगों के रोगजनकों पर भी लागू होता है। हालांकि, निम्नलिखित उपायों के माध्यम से संक्रामक एजेंटों के संचरण के जोखिम को कम किया जाता है:

- चिकित्सा साक्षात्कार और परीक्षाओं के माध्यम से दाताओं का चयन, साथ ही हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) एंटीजन, एचआईवी और हेपेटाइटिस सी वायरस (एचसीवी) के एंटीबॉडी की उपस्थिति के लिए प्लाज्मा पूल की जांच;

- एचसीवी आनुवंशिक सामग्री की उपस्थिति के लिए प्लाज्मा पूल का विश्लेषण;

- निर्माण प्रक्रिया में शामिल निष्क्रियता/हटाने की प्रक्रियाएं जिन्हें वायरल मॉडल में मान्य किया गया है। ये प्रक्रियाएं एचआईवी, हेपेटाइटिस ए वायरस (एचएवी), एचबीवी और एचसीवी के लिए प्रभावी हैं। निष्क्रियता/निष्कासन प्रक्रियाएं गैर-लिफाफा वायरस के खिलाफ सीमित प्रभावकारी हो सकती हैं, जिनमें से एक parvovirus B19 है। Parvovirus B19 सेरोनिगेटिव गर्भवती महिलाओं (अंतर्गर्भाशयी संक्रमण) और उन लोगों में गंभीर प्रतिक्रियाएं पैदा कर सकता है जो प्रतिरक्षाविहीन हैं या लाल रक्त कोशिकाओं के उत्पादन में वृद्धि हुई है (उदाहरण के लिए, हेमोलिटिक एनीमिया के साथ)।

प्लाज्मा-व्युत्पन्न जमावट कारक VIII ध्यान केंद्रित करते समय, हेपेटाइटिस ए और हेपेटाइटिस बी के खिलाफ टीकाकरण की सिफारिश की जाती है।

एलर्जी की प्रतिक्रिया की स्थिति में, एक अवरोधक की उपस्थिति के लिए रोगी की जांच की जानी चाहिए। रक्त जमावट कारक VIII के अवरोधकों वाले रोगियों में ऑक्टेनेट के साथ बाद के उपचार के दौरान एनाफिलेक्टिक प्रतिक्रियाओं का खतरा बढ़ सकता है। इसलिए, उपस्थित चिकित्सक के पर्चे के अनुसार निर्दिष्ट दवा का पहला उपयोग चिकित्सकीय देखरेख में किया जाना चाहिए, जो एलर्जी प्रतिक्रियाओं के मामले में योग्य चिकित्सा देखभाल के प्रावधान को सुनिश्चित करता है।

ऑक्टेनेट के प्रशासन के दौरान अन्य दवाओं का प्रयोग न करें।

ऑक्टेनेट की शुरूआत के लिए, पैकेज में शामिल इंजेक्शन उपकरणों का ही उपयोग किया जाना चाहिए। कुछ इंजेक्शन उपकरणों की आंतरिक सतह पर, रक्त जमावट कारक VIII का सोखना संभव है, जिससे उपचार की प्रभावशीलता में कमी आती है।

बचपन में आवेदन

खुराक के नियम के अनुसार आवेदन संभव है।

अध्ययन की जानकारी

विशेष निर्देश:बीमारी की तीव्र अवधि के दौरान और थक्कारोधी दवाएं लेते समय अध्ययन न करें (निरस्तीकरण के बाद कम से कम 30 दिन अवश्य बीतने चाहिए)। शोध के लिए बायोमटेरियल को खाली पेट लेना चाहिए। अंतिम भोजन और रक्त के नमूने के बीच कम से कम 8 घंटे का समय व्यतीत होना चाहिए।

अनुसंधान के लिए तैयारी के सामान्य नियम:

1. अधिकांश अध्ययनों के लिए, सुबह 8 बजे से 11 बजे के बीच, खाली पेट रक्तदान करने की सलाह दी जाती है (आखिरी भोजन और रक्त के नमूने के बीच कम से कम 8 घंटे बीत जाने चाहिए, आप हमेशा की तरह पानी पी सकते हैं), अध्ययन की पूर्व संध्या पर, वसायुक्त भोजन खाने पर प्रतिबंध के साथ हल्का भोजन। संक्रमण परीक्षण और आपातकालीन जांच के लिए, अंतिम भोजन के 4-6 घंटे बाद रक्तदान करना स्वीकार्य है।

2. ध्यान!कई परीक्षणों के लिए विशेष तैयारी नियम: खाली पेट पर, 12-14 घंटे के उपवास के बाद, आपको गैस्ट्रिन -17, लिपिड प्रोफाइल (कुल कोलेस्ट्रॉल, एचडीएल कोलेस्ट्रॉल, एलडीएल कोलेस्ट्रॉल, वीएलडीएल कोलेस्ट्रॉल, ट्राइग्लिसराइड्स, लिपोप्रोटीन) के लिए रक्त दान करना चाहिए। (ए), एपोलिपो-प्रोटीन ए 1, एपोलिपोप्रोटीन बी); 12-16 घंटे के उपवास के बाद सुबह खाली पेट ग्लूकोज टॉलरेंस टेस्ट किया जाता है।

3. अध्ययन की पूर्व संध्या पर (24 घंटों के भीतर), शराब, तीव्र शारीरिक गतिविधि, दवा (डॉक्टर के साथ सहमति के अनुसार) को बाहर करें।

4. रक्तदान करने से 1-2 घंटे पहले धूम्रपान से परहेज करें, जूस, चाय, कॉफी का सेवन न करें, आप बिना कार्बोनेटेड पानी पी सकते हैं। शारीरिक तनाव (दौड़ना, तेज सीढ़ियां चढ़ना), भावनात्मक उत्तेजना को दूर करें। रक्तदान करने से 15 मिनट पहले आराम करने और शांत होने की सलाह दी जाती है।

5. आपको भौतिक चिकित्सा प्रक्रियाओं, वाद्य परीक्षाओं, एक्स-रे और अल्ट्रासाउंड परीक्षाओं, मालिश और अन्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के तुरंत बाद प्रयोगशाला परीक्षण के लिए रक्तदान नहीं करना चाहिए।

6. गतिशीलता में प्रयोगशाला मापदंडों की निगरानी करते समय, समान परिस्थितियों में बार-बार अध्ययन करने की सिफारिश की जाती है - एक ही प्रयोगशाला में, दिन के एक ही समय में रक्त दान करें, आदि।

7. शोध के लिए रक्त दवा लेने से पहले या बंद होने के 10-14 दिनों से पहले दान नहीं किया जाना चाहिए। किसी भी दवा के साथ उपचार की प्रभावशीलता के नियंत्रण का मूल्यांकन करने के लिए, दवा की अंतिम खुराक के 7-14 दिनों के बाद एक अध्ययन करना आवश्यक है।

यदि आप दवा ले रहे हैं, तो अपने डॉक्टर को इसके बारे में बताना सुनिश्चित करें।

सामान्य फार्माकोपियन प्राधिकरण

पहली बार पेश किया गया

यह फार्माकोपियल मोनोग्राफ प्लाज्मा और रक्त उत्पादों में मानव रक्त जमावट प्रणाली I, II, VII, VIII, IX, X, XI, वॉन विलेब्रांड कारक, एंटीथ्रॉम्बिन III के कारकों की गतिविधि को निर्धारित करने के तरीकों पर लागू होता है।

सामान्य प्रावधान

जमावट कारकों की गतिविधि का निर्धारण 2 दृष्टिकोणों पर आधारित है:

1. एक कदम विधि। इस कारक (थक्का विधि) की तैयारी को जोड़ने के बाद कारक-कमी वाले प्लाज्मा में रक्त जमावट प्रक्रिया की बहाली।
2. दो चरण विधि। पहले चरण में, एक विशिष्ट कोफ़ेक्टर का उपयोग करते हुए, कारक II या कारक X की प्रोटियोलिटिक गतिविधि को क्रमशः सक्रिय कारक IIa या Xa बनाने के लिए सक्रिय किया जाता है। दूसरे चरण में, गठित सक्रिय कारक की मात्रा एक विशिष्ट क्रोमोजेनिक पेप्टाइड (क्रोमोजेनिक विधि) के इसके दरार की प्रतिक्रिया से निर्धारित होती है।

क्रोमोजेनिक विधि को 2 तरीकों से अंजाम देना संभव है: एक सक्रिय कारक की कार्रवाई के तहत क्रोमोजेन गठन के कैनेटीक्स के अनुसार या एक निश्चित ऊष्मायन समय के लिए क्रोमोजेन संचय के अंतिम बिंदु के अनुसार।

दोनों विधियों को करने के लिए, प्लास्टिक टेस्ट ट्यूब, प्लेट्स, ऑप्टिकल-मैकेनिकल, मैकेनिकल सेमी-ऑटोमैटिक और पूरी तरह से स्वचालित कोगुलोमीटर का उपयोग करना संभव है।

सभी तरीकों में, एनआईबीएससी इंटरनेशनल स्टैंडर्ड की गतिविधि के साथ परीक्षण नमूने की गतिविधि की तुलना करके गतिविधि की गणना की जाती है या गतिविधि की अंतरराष्ट्रीय इकाइयों (आईयू) में अंतरराष्ट्रीय मानक के खिलाफ कैलिब्रेटेड एक माध्यमिक क्लॉटिंग कारक मानक है। IU में अंतर्राष्ट्रीय मानक की तुल्यता WHO द्वारा स्थापित की गई है। 1 आईयू (100%) के लिए 300 दाताओं से ताजा सामान्य जमा रक्त प्लाज्मा के 1.0 मिलीलीटर में जमावट कारक की गतिविधि लें। गतिविधि को आईयू/एमएल, आईयू/वायल, आईयू/मिलीग्राम प्रोटीन में और निर्माता द्वारा घोषित राशि के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया जा सकता है।

कारकों

कारकमैं (फाइब्रिनोजेन)

क्लॉटिंग विधि

क्लॉस विधि द्वारा फाइब्रिनोजेन गतिविधि का निर्धारण किया जाता है।

विधि सिद्धांत

जब थ्रोम्बिन को फाइब्रिनोजेन युक्त नमूने में जोड़ा जाता है, तो फाइब्रिन क्लॉट का गठन देखा जाता है। उच्च गतिविधि (~ 10 आईयू / एमएल) और कम फाइब्रिनोजेन एकाग्रता (100 मिलीग्राम / डीसीएल से नीचे) वाले नमूनों के साथ थ्रोम्बिन का उपयोग करते समय, एक रैखिक संबंध प्राप्त किया जा सकता है।

फाइब्रिनोजेन के निर्धारण के लिए, वाणिज्यिक परीक्षण प्रणालियों का उपयोग किया जाता है, जिसमें एक थ्रोम्बिन अभिकर्मक होता है जिसमें एक हेपरिन अवरोधक होता है और एक नमूना कमजोर पड़ने वाला बफर या एक वाणिज्यिक थ्रोम्बिन अभिकर्मक होता है।

फाइब्रिनोजेन सांद्रता mg/dcl में व्यक्त की जाती है। अंशांकन ग्राफ के निर्माण के लिए, एक मानक फाइब्रिनोजेन नमूना या अंतरराष्ट्रीय मानक के अनुसार प्रमाणित प्लाज्मा अंशशोधक का उपयोग किया जाता है। निर्देशों के अनुसार आसुत जल में एक मानक नमूना या प्लाज्मा-अंशशोधक का नमूना भंग कर दिया जाता है। नमूना कमजोर पड़ने वाले बफर पीएच = 7.3 ± 0.1 का उपयोग करके, ~ 100 मिलीग्राम/डीसीएल की एकाग्रता से शुरू होने वाले मानक नमूने के 5 धारावाहिक कमजोर पड़ने तैयार करें । किट के निर्देशों के अनुसार विश्लेषण 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए, थक्का बनने का समय तीन बार निर्धारित किया जाता है। लॉगरिदमिक निर्देशांक में प्राप्त परिणामों के आधार पर, फाइब्रिनोजेन की एकाग्रता पर थक्का बनने के समय की निर्भरता का एक अंशांकन ग्राफ बनाया जाता है।

100 मिलीग्राम/डीएल से नीचे परीक्षण नमूने के 2 कमजोर पड़ने की तैयारी करें । प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए, थक्का बनने का समय तीन बार निर्धारित किया गया था। प्रत्येक कमजोर पड़ने में फाइब्रिनोजेन की मात्रा अंशांकन ग्राफ द्वारा निर्धारित की जाती है।

कारकद्वितीय(थ्रोम्बिन)

1. क्लॉटिंग विधि

कारक II गतिविधि का निर्धारण एक सब्सट्रेट के रूप में कारक II की कमी वाले मानव प्लाज्मा का उपयोग करके किया जाता है। कैल्शियम मिश्रण में थ्रोम्बोप्लास्टिन जोड़कर जमावट प्रक्रिया सक्रिय होती है।

मानक और तैयारी को पतला करने के लिए, NaCl-imidazole बफर पीएच 7.3 ± 0.1 का उपयोग 0.1% गोजातीय या मानव एल्ब्यूमिन के अतिरिक्त के साथ करें । कैलिब्रेशन ग्राफ बनाने के लिए, 0.3 से 1 IU/ml की गतिविधि रेंज में फैक्टर II मानक के सीरियल कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। दवा को 1 IU / ml से कम की सांद्रता में पतला किया जाता है। दवा के 3 कमजोर पड़ने का विश्लेषण करें। प्रत्येक नमूने के लिए, थक्के के समय की माप कम से कम 2 बार की जाती है। माप दवा के कमजोर पड़ने के 1 घंटे के भीतर किया जाता है।

विश्लेषण (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। कारक द्वितीय की कमी वाले प्लाज्मा के 50 μl और एक प्लास्टिक ट्यूब के लिए मानक या तैयारी कमजोर पड़ने के 50 μl जोड़ें। मिश्रण को 120-240 सेकेंड के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है। थक्के का समय कैल्शियम थ्रोम्बोप्लास्टिन के 200 μl के मिश्रण में जोड़ने के क्षण से निर्धारित किया जाता है (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पहले से गरम किया जाता है। विश्लेषण स्थापित करने की तकनीक के आधार पर, अभिकर्मकों की मात्रा उचित अनुपात में भिन्न हो सकती है।

अंशांकन ग्राफ अर्ध-लघुगणक निर्देशांक में बनाया गया है। लॉगरिदमिक एब्सिस्सा अक्ष पर, कारक II के गतिविधि मूल्यों को प्लॉट किया जाता है; समन्वय अक्ष पर, मानक के संबंधित कमजोर पड़ने के थक्के समय को प्लॉट किया जाता है। परीक्षण नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए कारक II गतिविधि अंशांकन वक्र से पाई जाती है। एफआईआई गतिविधि ( लेकिन

क

1. क्रोमोजेनिक विधि

यह विधि कारक IIa की एंजाइमिक गतिविधि की तुलना पर आधारित है, जो एक मानक नमूने (अंतरराष्ट्रीय या समान) की समान गतिविधि के साथ एक विशिष्ट क्रोमोजेनिक पेप्टाइड सब्सट्रेट के संबंध में कारक II के विशिष्ट सक्रियण के बाद बनाई गई है।

फैक्टर II को वाइपर के जहर से अलग किए गए इकारिन एक्टिवेटर द्वारा सक्रिय किया जाता है। सक्रिय कारक II (थ्रोम्बिन) चुनिंदा रूप से क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट (एच-डी-फेनिलएलनिन-एल-पाइपकोइल-एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड डायहाइड्रोक्लोराइड, 4-टोल्यूनेसल्फोनीलग्लाइसील-प्रोलिल-एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड, एच-डी-साइक्लोहेक्सिलग्लाइसील-α-एमिनोब्यूट्रील को साफ करता है। - एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड, डी-साइक्लोहेक्सिलग्लाइसील-एल-अलनील-एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड डायसेटेट) बनाने के लिए पी-नाइट्रोएनिलिन। प्रतिक्रिया कैनेटीक्स की 405 एनएम पर फोटोमेट्रिक रूप से जांच की जाती है। प्रकाशिक घनत्व का मान कारक II की गतिविधि के समानुपाती होता है।

क्रोमोजेनिक विधि द्वारा कारक II का निर्धारण विशेष परीक्षण किटों का उपयोग करके किया जाता है। विश्लेषण किट के निर्देशों के अनुसार किया जाता है। मानक नमूना और तैयारी ~ 1 आईयू / एमएल (मूल कमजोर पड़ने) की एकाग्रता के लिए कारक II में प्लाज्मा की कमी के साथ पूर्व-पतला है। मुख्य कमजोर पड़ने से, मानक नमूने के 3 कमजोर पड़ने और ट्रिस-सलाइन बफर समाधान पीएच 8.4 के साथ तैयारी के 3 कमजोर पड़ने तैयार किए जाते हैं। मानक नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने को दो बार निर्धारित किया जाता है, प्राप्त मूल्यों का उपयोग अंशांकन ग्राफ बनाने के लिए किया जाता है। परीक्षण के नमूने तीन बार निर्धारित किए जाते हैं।

परीक्षण एक माइक्रोप्लेट और एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मैन्युअल मोड में किए जाते हैं जो तापमान (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस या कोगुलोमीटर का उपयोग करके स्वचालित मोड में तापमान बनाए रखते हैं।

मैनुअल परीक्षणों के लिए, परीक्षण की तैयारी या मानक नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के 25 μl को माइक्रोप्लेट के कुओं में जोड़ा जाता है। 125 μl कमजोर पड़ने वाले बफर, 25 μl इकारिन को प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है और 2 मिनट के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। ऊष्मायन समय के अंत में, कारक IIa क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट के 25 μl प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है।

लेकिन/ मिनट)।

यदि निरंतर अवशोषण माप संभव नहीं है, तो क्रमिक समय अंतराल (जैसे 40 एस) पर 405 एनएम पर अवशोषण निर्धारित करें और समय बनाम प्लॉट अवशोषण और गणना करें। लेकिनलेकिन

1. थ्रोम्बिन की अनुपस्थिति के लिए परीक्षण

परीक्षण के लिए, निर्देशों के अनुसार बहाल तैयारी का एक समाधान तैयार किया जाता है। यदि तैयारी में हेपरिन है, तो हेपरिन के 1 आईयू प्रति 10 माइक्रोग्राम प्रोटामाइन सल्फेट की दर से प्रोटामाइन सल्फेट जोड़कर इसे बेअसर कर दिया जाता है।

फाइब्रिनोजेन समाधान की तैयारी

0.3 ग्राम फाइब्रिनोजेन 100 मिलीलीटर में घुल जाता है, मिश्रित और कमरे के तापमान पर 15-20 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है।

समाधान का शेल्फ जीवन 2 से 8 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 महीने है।

थ्रोम्बिन समाधान की तैयारी

लियोफिलिसेट निर्माता के निर्देशों के अनुसार भंग कर दिया जाता है, कमरे के तापमान पर 15-20 मिनट के लिए रखा जाता है और 1 आईयू / एमएल की थ्रोम्बिन सामग्री के 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान से पतला होता है।

समाधान का शेल्फ जीवन शून्य से 20 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 6 महीने है। विगलन के बाद समाधान फिर से जमने के अधीन नहीं है।

परिभाषा प्रगति

पुनर्गठित दवा और फाइब्रिनोजेन घोल की समान मात्रा को 2 परखनली में मिलाया जाता है। थ्रोम्बिन घोल और फाइब्रिनोजेन घोल की समान मात्रा को तीसरी ट्यूब (नियंत्रण नमूना) में जोड़ा जाता है, ट्यूबों की सामग्री को घूर्णी आंदोलनों के साथ मिलाया जाता है। पुनर्गठित दवा के साथ एक ट्यूब 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 6 घंटे के लिए पानी के स्नान में ऊष्मायन किया जाता है, पुनर्गठित दवा के साथ दूसरी ट्यूब 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर होती है। जमावट (थक्का) की उपस्थिति या अनुपस्थिति नोट की जाती है।

नियंत्रण के नमूने को 37 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में इनक्यूबेट किया जाता है और थक्का बनने के समय को नोट करें।

परिणामों की स्वीकार्यता के लिए मानदंड 30 एस के बाद नियंत्रण नमूने में जमावट है।

कारकसातवीं

1. क्लॉटिंग विधि

कारक VII गतिविधि का निर्धारण कारक VII की कमी वाले मानव प्लाज्मा का उपयोग करके किया जाता है। कैल्शियम मिश्रण में थ्रोम्बोप्लास्टिन जोड़कर जमावट प्रक्रिया सक्रिय होती है।

मानक और तैयारी को पतला करने के लिए, NaCl-imidazole बफर पीएच 7.3 का उपयोग मानव या गोजातीय एल्ब्यूमिन के 0.1% समाधान के साथ किया जाता है। अंशांकन वक्र का निर्माण करने के लिए, कारक VII नमूना मानक के सीरियल कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला 0.3 से 1 IU / ml की सीमा में तैयार की जाती है। दवा को 1 IU / ml से कम की सांद्रता में पतला किया जाता है। दवा के 3 कमजोर पड़ने का विश्लेषण करें। प्रत्येक नमूने के लिए, थक्के के समय की माप कम से कम 2 बार की जाती है। माप दवा के कमजोर पड़ने के तुरंत बाद किया जाता है।

विश्लेषण (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। कारक VII-कमी वाले प्लाज्मा के 50 μl और मानक या दवा के कमजोर पड़ने के 50 μl को प्लास्टिक ट्यूब में जोड़ा जाता है। मिश्रण को 120-240 सेकेंड के लिए (37±0.5)°C पर इनक्यूबेट किया जाता है। थक्के का समय कैल्शियम थ्रोम्बोप्लास्टिन के 200 μl के मिश्रण में जोड़ने के क्षण से निर्धारित किया जाता है (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पहले से गरम किया जाता है। विश्लेषण स्थापित करने की तकनीक के आधार पर, अभिकर्मकों की मात्रा उचित अनुपात में भिन्न हो सकती है।

अंशांकन ग्राफ अर्ध-लघुगणक निर्देशांक में बनाया गया है। लॉगरिदमिक एब्सिस्सा अक्ष पर, कारक VII के गतिविधि मूल्यों को प्लॉट किया जाता है; समन्वय अक्ष पर, मानक के संबंधित कमजोर पड़ने के थक्के समय को प्लॉट किया जाता है। परीक्षण नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए कारक VII गतिविधि अंशांकन वक्र से पाई जाती है। एफवीआईआई गतिविधि ( लेकिन) परीक्षण नमूने में सूत्र द्वारा गणना की जाती है:

- अंशांकन ग्राफ से प्राप्त परीक्षण नमूने के संगत कमजोर पड़ने की गतिविधि;

क- परीक्षण नमूने का कमजोर पड़ना।

1. क्रोमोजेनिक विधि

ऊतक कारक (TF) और Ca 2+ आयनों की उपस्थिति में, कारक VII सक्रिय होता है (FVIIa का गठन)। एफवीआईआईए, टीएफ, सीए 2+ और एक फॉस्फोलिपिड सक्रिय कारक एक्स का परिसर। सक्रिय कारक एक्स (एफएक्सए) चुनिंदा रूप से क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट एफएक्सए -1 मेथॉक्सीकार्बोनिल-डी-साइक्लोहेक्साइलैनिल-ग्लाइसील-एल-आर्जिनिन को साफ करता है। एन-नाइट्रोएनिलाइड एसीटेट बनाने के लिए पी-नाइट्रोएनिलिन। नमूने का अध्ययन 405 एनएम पर फोटोमेट्रिक विधि द्वारा किया जाता है। अवशोषण मूल्य (या अवशोषण में वृद्धि) कारक VII की मात्रा के समानुपाती होता है।

क्रोमोजेनिक विधि द्वारा कारक VII का निर्धारण विशेष परीक्षण किट का उपयोग करके किया जाता है। विश्लेषण किट के निर्देशों के अनुसार किया जाता है। मानक नमूना और तैयारी ~ 1 आईयू / एमएल (मूल कमजोर पड़ने) की एकाग्रता के लिए कारक VII में प्लाज्मा की कमी के साथ पूर्व-पतला है। मुख्य कमजोर पड़ने से, मानक नमूने के 3 कमजोर पड़ने और ट्रिस-सलाइन बफर पीएच 7.3 - 8.0 के साथ तैयारी के 3 कमजोर पड़ने को 0.1% मानव या गोजातीय एल्ब्यूमिन के साथ बफर समाधान का उपयोग करके तैयार किया जाता है। मानक नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने को दो बार निर्धारित किया जाता है, प्राप्त मूल्यों का उपयोग अंशांकन ग्राफ बनाने के लिए किया जाता है। परीक्षण के नमूने तीन बार निर्धारित किए जाते हैं।

परीक्षण दवा या मानक नमूने के मिश्रण को माइक्रोप्लेट के कुओं में जोड़ा जाता है, कैल्शियम-थ्रोम्बोप्लास्टिन मिश्रण, कारक एक्स समाधान जोड़ा जाता है और 2 से 5 मिनट के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है, जिसके बाद कारक Xa क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट समाधान जोड़ा जाता है।

405 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर ऑप्टिकल घनत्व में परिवर्तन को मापें, या तो काइनेटिक मोड में, या ग्लेशियल एसिटिक एसिड के 20% (v/v) समाधान जोड़कर 3-15 मिनट के बाद हाइड्रोलिसिस प्रतिक्रिया को बाधित करें और ऑप्टिकल घनत्व को मापें।

कारकआठवीं

1. क्लॉटिंग विधि

कारक VIII गतिविधि का निर्धारण कारक VIII में मानव प्लाज्मा की कमी का उपयोग करके किया जाता है। जमावट के लिए आवश्यक फास्फोलिपिड्स का स्रोत APTT अभिकर्मक है।

मानक और तैयारी को पतला करने के लिए, NaCl-imidazole बफर समाधान पीएच (7.3 ± 0.1) का उपयोग मानव या गोजातीय एल्ब्यूमिन के 0.1% समाधान के साथ किया जाता है। एक अंशांकन ग्राफ बनाने के लिए, मानक के सीरियल कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार की जाती है, जो 2 आईयू / एमएल की एकाग्रता से शुरू होती है। दवा ~ 0.5 - 2 आईयू / एमएल की एकाग्रता से पतला है। दवा के 3 कमजोर पड़ने का विश्लेषण करें। प्रत्येक नमूने के लिए, थक्के के समय की माप कम से कम 2 बार की जाती है। माप दवा के कमजोर पड़ने के 1 घंटे के भीतर किया जाता है।

विश्लेषण (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। कारक VIII की कमी वाले प्लाज्मा के 100 μl, मानक या दवा के कमजोर पड़ने के 100 μl, और APTT अभिकर्मक के 100 μl को एक प्लास्टिक ट्यूब में जोड़ा जाता है और 2 मिनट के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है। थक्के का समय 0.025 एम कैल्शियम क्लोराइड समाधान के 100 μl मिश्रण में जोड़ने के क्षण से तय किया जाता है (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पहले से गरम किया जाता है। विश्लेषण स्थापित करने की तकनीक के आधार पर, अभिकर्मकों की मात्रा उचित अनुपात में भिन्न हो सकती है।

अंशांकन ग्राफ अर्ध-लघुगणक निर्देशांक में बनाया गया है। कारक VIII गतिविधि के मूल्यों को लॉगरिदमिक एब्सिस्सा अक्ष के साथ प्लॉट किया जाता है, और मानक के संबंधित कमजोर पड़ने के थक्के समय को ऑर्डिनेट अक्ष के साथ प्लॉट किया जाता है। परीक्षण नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए कारक VIII गतिविधि अंशांकन वक्र से पाई जाती है। FVIII गतिविधि ( लेकिन) परीक्षण नमूने में सूत्र द्वारा गणना की जाती है:

- अंशांकन ग्राफ से प्राप्त अध्ययन दवा के संगत कमजोर पड़ने की गतिविधि;

क- परीक्षण नमूने का कमजोर पड़ना।

1. क्रोमोजेनिक विधि

कारक VIII का मात्रात्मक निर्धारण अभिकर्मकों के एक सेट का उपयोग करके किया जाता है, जिसमें कारक VIII कारक IXa के लिए एक सहसंयोजक होता है जब कारक X को Xa बनाने के लिए सक्रिय किया जाता है, जो क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट को साफ करता है।

विधि सिद्धांत

Ca 2+ आयनों और फॉस्फोलिपिड्स की उपस्थिति में, कारक IXa द्वारा कारक X को Xa में सक्रिय किया जाता है। कारक X की अधिकता और Ca 2+, फॉस्फोलिपिड्स और कारक IXa की इष्टतम मात्रा के साथ, कारक X सक्रियण की दर कारक VIII की मात्रा पर रैखिक रूप से निर्भर करती है। फैक्टर Xa क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट S-2765 (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA) को pNA के क्रोमोजेनिक समूह को रिलीज करने के लिए हाइड्रोलाइज करता है, जिसका रंग 405 एनएम पर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से दर्ज किया जाता है। गठित कारक Xa की मात्रा, और इसलिए धुंधला होने की तीव्रता, नमूने में कारक VIII गतिविधि के समानुपाती होती है।

कारक VIII गतिविधि अभिकर्मक किट 2 से 8 डिग्री सेल्सियस के भंडारण तापमान पर निर्माता द्वारा निर्दिष्ट अवधि के लिए स्थिर है।

अभिकर्मक किट में शामिल हैं:

1. 7.7 मिलीग्राम क्रोमोजेन S-2765 सिंथेटिक थ्रोम्बिन अवरोधक I-2581 के साथ पूरक। अभिकर्मक को इंजेक्शन के लिए 6.0 मिलीलीटर बाँझ पानी में पुनर्गठित किया जाता है। पुनर्गठित समाधान 1 महीने के लिए 2 से 8 डिग्री सेल्सियस पर स्थिर है। उपयोग करने से पहले, 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गरम किया जाता है।
2. गोजातीय कारक अभिकर्मक: 0.3 U कारक IX, 2.7 IU कारक X और 1 NIH U थ्रोम्बिन 40 mmol CaCl 2 और 0.2 mmol फॉस्फोलिपिड की उपस्थिति में lyophilized। अभिकर्मक को इंजेक्शन के लिए 2.0 मिलीलीटर बाँझ पानी में पुनर्गठित किया जाता है। पुनर्गठित घोल 2 से 8 डिग्री सेल्सियस पर 12 घंटे, शून्य से 30 डिग्री सेल्सियस पर 2 सप्ताह और माइनस 80 डिग्री सेल्सियस पर 1 महीने के लिए स्थिर है। शून्य से 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर न करें। उपयोग करने से पहले, एस के बारे में 37 तक गर्मी।
3. ×10 Tris बफर ध्यान लगाओ। 2 से 8 डिग्री सेल्सियस पर 1 महीने के लिए स्थिर। उपयोग करने से पहले, 1:10 के अनुपात में इंजेक्शन के लिए बाँझ पानी से पतला करें।

अतिरिक्त अभिकर्मक:

1. इंटरनेशनल स्टैंडर्ड - ह्यूमन क्लॉटिंग फैक्टर VIII कॉन्संट्रेट सॉल्यूशन (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std। BRP H 0920000) या प्लाज्मा इंटरनेशनल फैक्टर VIII स्टैंडर्ड के लिए कैलिब्रेटेड।
2. अंतरराष्ट्रीय कारक VIII मानक के लिए कैलिब्रेटेड सामान्य या पैथोलॉजिकल प्लाज्मा को नियंत्रित करें।
3. 0.9% सोडियम क्लोराइड घोल।
4. 20% एसिटिक एसिड या 2% साइट्रिक एसिड (क्रोमोजेन स्टोरेज एंडपॉइंट विधि में प्रयुक्त)।
5. जल प्रयोगशाला विआयनीकृत

उपकरण:

1. प्लास्टिक टेस्ट ट्यूब;
2. माइक्रोप्लेट्स;
3. थर्मोस्टेट 37 ओ सी;
4. स्पेक्ट्रोफोटोमीटर 405 एनएम या माइक्रोप्लेट रीडर 405 एनएम;
5. कैलिब्रेटेड पिपेट;
6. भंवर;
7. स्टॉपवॉच।

परीक्षण नमूना निर्धारण से पहले 1 आईयू/एमएल की अपेक्षित गतिविधि के लिए पतला है।

निर्धारण गतिज मोड में और अंत बिंदु पर, टेस्ट ट्यूब (मैक्रोमेथोड) और माइक्रोप्लेट्स (माइक्रोमेथोड) में किया जा सकता है।

कैलिब्रेशन

प्रत्येक निर्धारण के दौरान, एक अंशांकन वक्र का निर्माण किया जाता है। एक मानक नमूने का पतलापन 2 चरणों में तैयार किया जाता है: 1-2 आईयू/एमएल की गतिविधि के लिए प्रारंभिक कमजोर पड़ने और 0-2 आईयू/एमएल की सीमा में एक अंशांकन निर्भरता बनाने के लिए अंतिम कमजोर पड़ने। कमजोर पड़ने के बाद, निर्धारण 30 मिनट के भीतर किया जाना चाहिए।

परिभाषा प्रगति

टेस्ट ट्यूब में निर्धारण

एक पतला मानक के 200 μl, नियंत्रण या परीक्षण के नमूने को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है, 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 3-4 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है, एक पूर्व-गर्म कारक अभिकर्मक के 50 μl को जोड़ा जाता है, 2-4 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस और 50 μl का तापमान क्रोमोजेन समाधान जोड़ा जाता है।

माइक्रोप्लेट्स में निर्धारण

माइक्रोप्लेट के कुओं में एक पतला मानक, नियंत्रण या परीक्षण नमूना के 50 μl जोड़ें, 37 डिग्री सेल्सियस पर 3-4 मिनट के लिए सेते हैं, पूर्व-गर्म कारक अभिकर्मक के 50 μl जोड़ें, के तापमान पर 2-4 मिनट के लिए सेते हैं। 37 डिग्री सेल्सियस और क्रोमोजेन समाधान के 50 μl जोड़ें।

निर्धारण की गतिज विधि

2-10 मिनट के लिए क्रोमोजेन समाधान जोड़ने के बाद, समाधान के ऑप्टिकल घनत्व में परिवर्तन 405 एनएम पर मापा जाता है।

समापन बिंदु द्वारा परिभाषा

क्रोमोजेन समाधान जोड़ने के बाद, मिश्रण को 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 2-10 मिनट के लिए ऊष्मायन जारी रखा जाता है, जिसके बाद प्रतिक्रिया को रोकने के लिए 20% एसिटिक या 2% साइट्रिक एसिड के 50 μl जोड़े जाते हैं। 405 एनएम पर बफर के खिलाफ समाधान के ऑप्टिकल घनत्व को मापें ।

गणना

उनमें कारक VIII की एकाग्रता पर मानक समाधान के कमजोर पड़ने के ऑप्टिकल घनत्व प्रति मिनट (गतिज विधि के लिए) या ऑप्टिकल घनत्व (अंत बिंदु निर्धारित करने के लिए) में परिवर्तन को प्लॉट करें। परीक्षण नमूने में गतिविधि नमूना के प्रारंभिक कमजोर पड़ने को ध्यान में रखते हुए, अंशांकन वक्र से निर्धारित की जाती है।

कारकनौवीं

1. क्लॉटिंग विधि

कारक IX गतिविधि का निर्धारण कारक IX में मानव प्लाज्मा की कमी का उपयोग करके किया जाता है। जमावट के लिए आवश्यक फास्फोलिपिड्स का स्रोत APTT अभिकर्मक है।

मानक और तैयारी को पतला करने के लिए, NaCl-imidazole बफर पीएच 7.3 का उपयोग गोजातीय या मानव एल्ब्यूमिन के 0.1% घोल के साथ किया जाता है। अंशांकन ग्राफ बनाने के लिए, मानक के सीरियल कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला 0.3 से 1 IU / ml की सीमा में तैयार की जाती है। दवा को 1 IU / ml से कम की सांद्रता में पतला किया जाता है। दवा के 3 कमजोर पड़ने का विश्लेषण करें। प्रत्येक नमूने के लिए, थक्के के समय की माप कम से कम 2 बार की जाती है। माप दवा के कमजोर पड़ने के 1 घंटे के भीतर किया जाता है।

विश्लेषण (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। कारक IX-कमी वाले प्लाज्मा के 100 μl, मानक या दवा कमजोर पड़ने के 100 μl, और APTT अभिकर्मक के 100 μl को एक प्लास्टिक ट्यूब में जोड़ा जाता है और 2 मिनट के लिए (37 ± 0.5) ° C पर ऊष्मायन किया जाता है। थक्के का समय 0.025 एम कैल्शियम क्लोराइड समाधान के 100 μl को मिश्रण में (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पहले से गरम करने के क्षण से तय किया जाता है। विश्लेषण स्थापित करने की तकनीक के आधार पर, अभिकर्मकों की मात्रा उचित अनुपात में भिन्न हो सकती है।

अंशांकन ग्राफ अर्ध-लघुगणक निर्देशांक में बनाया गया है। लॉगरिदमिक एब्सिस्सा अक्ष पर, कारक IX के गतिविधि मूल्यों को प्लॉट किया जाता है; समन्वय अक्ष पर, मानक के संबंधित कमजोर पड़ने के थक्के समय को प्लॉट किया जाता है। परीक्षण नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए कारक IX गतिविधि अंशांकन वक्र से पाई जाती है। फिक्स गतिविधि ( लेकिन) परीक्षण नमूने में सूत्र द्वारा गणना की जाती है:

- अंशांकन ग्राफ से प्राप्त परीक्षण नमूने के संगत कमजोर पड़ने की गतिविधि;

क- परीक्षण नमूने का कमजोर पड़ना।

कारकएक्स

1. क्लॉटिंग विधि

फैक्टर एक्स गतिविधि का निर्धारण कारक एक्स की कमी वाले मानव प्लाज्मा का उपयोग करके किया जाता है। कैल्शियम मिश्रण में थ्रोम्बोप्लास्टिन जोड़कर जमावट प्रक्रिया सक्रिय होती है।

मानक और तैयारी को पतला करने के लिए, मानव या गोजातीय एल्ब्यूमिन के 0.1% समाधान के साथ NaCl-imidazole बफर समाधान पीएच 7.3 का उपयोग करें। एक अंशांकन ग्राफ बनाने के लिए, 0.3 से 1 IU/ml की सीमा में कारक X मानक के सीरियल कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार करें। दवा को 1 IU / ml से कम की सांद्रता में पतला किया जाता है। दवा के 3 कमजोर पड़ने का विश्लेषण करें। प्रत्येक नमूने के लिए, थक्के के समय की माप कम से कम 2 बार की जाती है। माप दवा के कमजोर पड़ने के तुरंत बाद किया जाता है।

विश्लेषण (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। एक प्लास्टिक ट्यूब में फैक्टर एक्स की कमी वाले प्लाज्मा के 50 μl और मानक या तैयारी कमजोर पड़ने के 50 μl जोड़ें। मिश्रण को 120-240 सेकेंड के लिए (37±0.5)°C पर इनक्यूबेट किया जाता है। थक्के का समय कैल्शियम थ्रोम्बोप्लास्टिन के 200 μl के मिश्रण में जोड़ने के क्षण से निर्धारित किया जाता है (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पहले से गरम किया जाता है। विश्लेषण स्थापित करने की तकनीक के आधार पर, अभिकर्मकों की मात्रा उचित अनुपात में भिन्न हो सकती है।

अंशांकन ग्राफ अर्ध-लघुगणक निर्देशांक में बनाया गया है। लॉगरिदमिक एब्सिस्सा अक्ष कारक X . के गतिविधि मूल्यों को प्लॉट करता है , y-अक्ष के साथ, मानक के संगत कमजोर पड़ने के थक्के समय। परीक्षण नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए फैक्टर एक्स गतिविधि अंशांकन वक्र से पाई जाती है। फैक्टर एक्स गतिविधि ( लेकिन) परीक्षण नमूने में सूत्र द्वारा गणना की जाती है:

- अंशांकन ग्राफ से प्राप्त परीक्षण नमूने के संगत कमजोर पड़ने की गतिविधि;

क- परीक्षण नमूने का कमजोर पड़ना।

1. क्रोमोजेनिक विधि

फैक्टर एक्स एक सांप के जहर से व्युत्पन्न एफएक्स एक्टिवेटर के साथ सक्रिय होता है। सक्रिय कारक एक्स (एफएक्सए) क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट एफएक्सए -1 एन-α-बेंजाइलॉक्सीकार्बोनिल-डी-आर्जिनिल-एल-ग्लाइसील-एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड डाइहाइड्रोक्लोराइड, एन-बेंज़ॉयल-एल-आइसोल्यूसिल-एल-ग्लूटामाइल-ग्लाइसील को चुनिंदा रूप से साफ करता है। - एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड हाइड्रोक्लोराइड, मिथेनसल्फोनील-डी-ल्यूसिल-ग्लाइसील-एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड, मेथॉक्सीकार्बोनिल-डी-साइक्लोहेक्साइलैनील-ग्लाइसील-एल-आर्जिनिन-4-नाइट्रोएनिलाइड एसीटेट बनाने के लिए पी-नाइट्रोएनिलिन। 405 एनएम पर नमूनों की फोटोमेट्रिक रूप से जांच की जाती है । कारक X की मात्रा विलयन के प्रकाशिक घनत्व में वृद्धि के समानुपाती होती है।

विशेष परीक्षण किट का उपयोग करके क्रोमोजेनिक विधि द्वारा कारक X का निर्धारण किया जाता है। विश्लेषण किट के निर्देशों के अनुसार किया जाता है। मानक नमूना और तैयारी ~ 1 आईयू / एमएल (मूल कमजोर पड़ने) की एकाग्रता के लिए कारक एक्स-कमी वाले प्लाज्मा के साथ पूर्व-पतला है। मुख्य कमजोर पड़ने से, मानक नमूने के 3 कमजोर पड़ने (निर्देशों के अनुसार) और दवा के 3 कमजोर पड़ने को बफर समाधान का उपयोग करके तैयार किया जाता है। मानक नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने को दो बार निर्धारित किया जाता है, प्राप्त मूल्यों का उपयोग अंशांकन ग्राफ बनाने के लिए किया जाता है। परीक्षण के नमूने तीन बार निर्धारित किए जाते हैं।

परीक्षण मैन्युअल रूप से प्लास्टिक ट्यूब या माइक्रोप्लेट का उपयोग करके (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर या स्वचालित रूप से एक कोगुलोमीटर का उपयोग करके किए जाते हैं।

मैनुअल मोड में परीक्षण के लिए, परीक्षण दवा या मानक नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के 12.5 μl को माइक्रोप्लेट के कुओं में जोड़ा जाता है, रसेल के वाइपर के जहर से विशिष्ट कारक एक्स उत्प्रेरक के 25 μl को प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है और एक तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है। 90 एस के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस, जिसके बाद कारक एक्स क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट के काम करने वाले कमजोर पड़ने के 150 μl को प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है।

3 मिनट के लिए लगातार 405 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण में परिवर्तन की दर निर्धारित करें और अवशोषण में परिवर्तन की औसत दर की गणना करें (∆ लेकिन/ मिनट) या क्रमिक समय अंतराल पर 405 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को मापें (उदाहरण के लिए, 30 एस के बाद) और अवशोषण बनाम समय की साजिश रचें और की गणना करें लेकिन/min सीधी रेखा के झुकाव के कोण के रूप में। मूल्यों से लेकिनमानक नमूने और परीक्षण दवा के प्रत्येक व्यक्तिगत कमजोर पड़ने के / मिनट, परीक्षण दवा की गतिविधि की गणना की जाती है।

विलेब्रांड कारक

वॉन विलेब्रांड कारक की गतिविधि का निर्धारण एग्लूटीनेशन या एंजाइम इम्युनोसे की विधि द्वारा किया जाता है।

वॉन विलेब्रांड कारक की गतिविधि एक मानक नमूने की गतिविधि के साथ इसकी गतिविधि की तुलना करके निर्धारित की जाती है।

एग्लूटीनेशन विधि

विधि रिस्टोसेटिन ए की उपस्थिति में प्लेटलेट निलंबन के एग्लूटीनेशन के दौरान वॉन विलेब्रांड कारक की कोएंजाइम गतिविधि के निर्धारण पर आधारित है।

परीक्षण स्वचालित उपकरणों का उपयोग करके मात्रात्मक रूप से किया जा सकता है या कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला में एग्लूटिनेशन के दृश्य मूल्यांकन द्वारा अर्ध-मात्रात्मक रूप से किया जा सकता है।

अर्ध-मात्रात्मक विधि

1-5% मानव एल्ब्यूमिन समाधान के साथ 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान में सीरियल dilutions एक मानक नमूने से तैयार किया जाता है और 0.5, 1.0 और 2.0 IU / ml के वॉन विलेब्रांड कारक की अपेक्षित सामग्री के लिए दवा का एक पुनर्गठित समाधान तैयार किया जाता है। मानक नमूने के प्रत्येक कमजोर पड़ने के 0.05 मिलीलीटर और परीक्षण की तैयारी को एक ग्लास स्लाइड पर लागू किया जाता है, रिस्टोसेटिन के साथ प्लेटलेट निलंबन के 0.1 मिलीलीटर को जोड़ा जाता है और 1 मिनट के लिए मिलाया जाता है। कमजोर पड़ने वाले घोल का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता है। कमरे के तापमान पर 1 मिनट के ऊष्मायन के बाद, प्लेटलेट एग्लूटिनेशन का नेत्रहीन मूल्यांकन किया जाता है। अधिकतम कमजोर पड़ने पर जिस पर प्लेटलेट एग्लूटीनेशन होता है, वह नमूने के रिस्टोसेटिन कोएंजाइम गतिविधि का अनुमापांक होता है।

मात्रात्मक पद्धति

0.5, 1.0 और 2.0 आईयू/एमएल की अपेक्षित वॉन विलेब्रांड कारक सामग्री के लिए कमजोर पड़ने वाले बफर के साथ संदर्भ और परीक्षण नमूनों के सीरियल कमजोर पड़ने की कम से कम 2 श्रृंखला तैयार करें।

निर्धारण स्वचालित उपकरण के निर्माता के निर्देशों के अनुसार किया जाता है। वॉन विलेब्रांड कारक की गतिविधि से ऑप्टिकल अवशोषण (समाधान की मैलापन की डिग्री) में परिवर्तन की निर्भरता के मूल्यों को प्राप्त करें।

परीक्षण की तैयारी में वॉन विलेब्रांड कारक की सामग्री का निर्धारण मानक नमूने में वॉन विलेब्रांड कारक की सामग्री पर समाधान के ऑप्टिकल घनत्व की निर्भरता के रैखिक समीकरण के गुणांक का उपयोग करके किया जाता है।

एलिसा विधि

विधि वॉन विलेब्रांड कारक की कोलेजन-बाध्यकारी गतिविधि के निर्धारण पर आधारित है। कोलेजन तंतुओं के लिए वॉन विलेब्रांड कारक के विशिष्ट बंधन और बाद में वॉन विलेब्रांड कारक के लिए एंजाइम-संयुग्मित पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के बंधन पर, एक क्रोमोफोर एक क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट को जोड़ने के बाद बनता है, जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि द्वारा निर्धारित किया जा सकता है। वॉन विलेब्रांड कारक और ऑप्टिकल घनत्व के लिए कोलेजन बाइंडिंग के बीच एक रैखिक संबंध है।

उपयोग के निर्देशों के अनुसार रूस में स्वास्थ्य सेवा में उपयोग के लिए अनुमोदित परीक्षण प्रणालियों का उपयोग करके निर्धारण किया जाता है।

परीक्षण के लिए, 1.0 आईयू / एमएल के वॉन विलेब्रांड कारक की अपेक्षित सामग्री के लिए कमजोर पड़ने वाले बफर का उपयोग करके मानक और परीक्षण नमूनों के कमजोर पड़ने की कम से कम 3 लगातार श्रृंखला तैयार करें। अगला, उपयोग की गई परीक्षण प्रणाली के लिए निर्माता के निर्देशों के अनुसार परीक्षण किए जाते हैं।

सक्रिय थक्के कारक रक्त

निर्धारण कोगुलोमेट्रिक विधि द्वारा किया जाता है।

परीक्षण के लिए, दवा का एक पुनर्गठित समाधान तैयार किया जाता है। यदि तैयारी में हेपरिन है, तो हेपरिन के 1 आईयू प्रति 10 माइक्रोग्राम प्रोटामाइन सल्फेट की दर से प्रोटामाइन सल्फेट जोड़कर इसे बेअसर कर दिया जाता है। Tris बफर सॉल्यूशन pH 7.5 का उपयोग करके दवा 1:10 और 1:100 के कमजोर पड़ने की तैयारी करें ।

मानक मानव प्लाज्मा के 0.1 मिलीलीटर और फॉस्फोलिपिड समाधान के 0.1 मिलीलीटर को 3 टेस्ट ट्यूबों में जोड़ा जाता है, 60 एस के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान के साथ पानी के स्नान में रखा जाता है, जिसके बाद पहली टेस्ट ट्यूब में 0.1 मिलीलीटर जोड़ा जाता है। ट्रिस बफर सॉल्यूशन (कंट्रोल सैंपल), दूसरे में - 0.1 मिली टेस्ट ड्रग 1:10 के कमजोर पड़ने पर, तीसरी टेस्ट ट्यूब में - 0.1 मिली टेस्ट ड्रग 1:100 के कमजोर पड़ने पर। इसके अलावा, 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गरम किए गए 3.7 ग्राम/ली कैल्शियम क्लोराइड समाधान के 0.1 मिलीलीटर को तुरंत प्रत्येक टेस्ट ट्यूब की सामग्री में जोड़ा जाता है। कैल्शियम क्लोराइड घोल डालने के क्षण से थक्का बनने का समय नोट किया जाता है।

परिणामों की स्वीकार्यता के लिए मानदंड नियंत्रण नमूने में 200 से 350 एस की सीमा में जमावट समय है।

विशिष्ट विशिष्ट गतिविधि

जमावट कारकों की विशिष्ट गतिविधि की गणना सूत्र द्वारा की जाती है:

एंटीथ्रोम्बिन गतिविधि का निर्धारणतृतीय

क्रोमोजेनिक विधि

ATIII गतिविधि का निर्धारण करने की विधि हेपरिन की उपस्थिति में थ्रोम्बिन को बेअसर करने की क्षमता पर आधारित है। हेपरिन और थ्रोम्बिन की अतिरिक्त मात्रा को ATIII युक्त नमूने में जोड़ा जाता है। परिणामी ATIII-हेपरिन कॉम्प्लेक्स ATIII की मात्रा के अनुपात में थ्रोम्बिन की मात्रा को बेअसर करता है। शेष थ्रोम्बिन चुनिंदा रूप से क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट को बनाने के लिए क्लीवेज करता है पी-नाइट्रोएनिलिन, जिसका अवशोषण 405 एनएम पर निर्धारित होता है। इस प्रकार, ATIII की मात्रा मुक्त के अवशोषण के व्युत्क्रमानुपाती होती है पीनमूने में -नाइट्रोएनिलिन।

वाणिज्यिक परीक्षण प्रणालियों का उपयोग करके ATIII गतिविधि का निर्धारण किया जाता है। अंशांकन ग्राफ बनाने के लिए, एक मानक ATIII नमूना या अंतरराष्ट्रीय मानक के अनुसार प्रमाणित प्लाज्मा अंशशोधक का उपयोग करें। मानक नमूना या प्लाज्मा अंशशोधक निर्देशों में दिए गए निर्देशों के अनुसार आसुत जल में भंग कर दिया जाता है। ATIII की गतिविधि पर ऑप्टिकल घनत्व की निर्भरता ATIII गतिविधि की सीमा में 0.1 से 1.0 IU / ml तक रैखिक है। हेपरिन बफर का उपयोग करते हुए, एक मानक या अंशशोधक प्लाज्मा के 4 कमजोर पड़ने को 0.1 से 1.0 आईयू/एमएल की ATIII गतिविधि के साथ तैयार करें । किट निर्देशों में दी गई योजना के अनुसार विश्लेषण 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए, 405 एनएम पर ऑप्टिकल घनत्व मान तीन बार निर्धारित किया जाता है और रेखीय निर्देशांक में अवशोषण बनाम ATIII गतिविधि का एक अंशांकन प्लॉट प्लॉट किया जाता है।

1.0 आईयू/एमएल से कम की अनुमानित ATIII गतिविधि के साथ परीक्षण नमूने के 2 कमजोर पड़ने की तैयारी करें। परीक्षण नमूनों में ATIII गतिविधि का निर्धारण किट के निर्देशों के अनुसार 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। परीक्षण किए गए तनुकरणों में ATIII की गतिविधि अंशांकन वक्र से पाई जाती है। परीक्षण नमूने में ATIII की गतिविधि को इस प्रकार परिभाषित किया गया है:

एक एक्स- उपयुक्त कमजोर पड़ने में ATIII गतिविधि;

क- नमूने का कमजोर पड़ना।

हेपरिन की मात्रा

1. क्लॉटिंग विधि

विधि कई कारकों के निषेध के कारण सामान्य प्लाज्मा के थक्के समय को लम्बा करने के लिए हेपरिन की क्षमता पर आधारित है।

विश्लेषण के लिए, सामान्य मानव प्लाज्मा, हेपरिन का एक मानक नमूना, एक एपीटीटी अभिकर्मक और कैल्शियम क्लोराइड 0.025 एम का समाधान उपयोग किया जाता है। एक 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान का उपयोग मानक और परीक्षण नमूनों के लिए एक मंदक के रूप में किया जाता है। निर्देशों में दिए गए निर्देशों के अनुसार हेपरिन का एक मानक नमूना आसुत जल में भंग कर दिया जाता है। 0.3, 0.4 और 0.5 आईयू/एमएल की हेपरिन गतिविधि के साथ एक मानक नमूने के 3 कमजोर पड़ने की तैयारी करें। इन गतिविधियों के साथ मानक नमूनों को सामान्य प्लाज्मा के थक्के समय को कम से कम 1.5 गुना बढ़ाना चाहिए, अन्यथा उच्च हेपरिन गतिविधि के साथ कमजोर पड़ने का उपयोग किया जाना चाहिए। समानांतर में, परीक्षण नमूने के 3 तनुकरण तैयार किए जाते हैं ताकि इन तनुकरणों में लगभग हेपरिन की गतिविधि मानक नमूने के तनुकरण में हेपरिन गतिविधि की सीमा के भीतर आ जाए।

37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर प्लास्टिक टेस्ट ट्यूब में एक स्वचालित या अर्ध-स्वचालित कोगुलोमीटर का उपयोग करके विश्लेषण किया जाता है। सामान्य मानव प्लाज्मा के 100 μl, एक मानक या परीक्षण नमूने के कमजोर पड़ने के 100 μl, या 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान (रिक्त प्रयोग) के 100 μl को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है, APTT अभिकर्मक के 100 μl जोड़े जाते हैं और मिश्रण एक तापमान (37±0.1)°С पर 120-240 सेकेंड के लिए इनक्यूबेट किया जाता है। फिर, 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पहले से गरम 0.025 एम कैल्शियम क्लोराइड समाधान के 100 μl को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है और नमूने के थक्के का समय दर्ज किया जाता है। विश्लेषण स्थापित करने की तकनीक के आधार पर, अभिकर्मकों की मात्रा को अनुपात में बदला जा सकता है। सामान्य प्लाज्मा (रिक्त) का थक्का बनने का समय 25-40 सेकेंड होना चाहिए। मानक और परीक्षण नमूनों के प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए, थक्के का समय तीन बार निर्धारित किया जाता है।

1. क्रोमोजेनिक विधि

विधि सक्रिय कारक एक्स (एफएक्सए) के लिए विशिष्ट क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट की दरार पर आधारित है। जब अत्यधिक मात्रा में ATIII और FXa को हेपरिन युक्त नमूने में पेश किया जाता है, तो हेपरिन की मात्रा के अनुपात में FXa की मात्रा बाधित हो जाती है। शेष एफएक्सए को एक विशिष्ट क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट से साफ किया जाता है पी-नाइट्रोएनिलिन, जिसका अवशोषण 405 एनएम पर निर्धारित होता है। इस प्रकार, अवशोषण की मात्रा हेपरिन की मात्रा के व्युत्क्रमानुपाती होती है। यह विधि एंटी-एक्सए इकाइयों में अव्यवस्थित और कम आणविक भार हेपरिन दोनों की सामग्री को निर्धारित करती है।

हेपरिन की मात्रा वाणिज्यिक परीक्षण प्रणालियों का उपयोग करके क्रोमोजेनिक विधि द्वारा निर्धारित की जाती है। अंशांकन ग्राफ के निर्माण के लिए, एक मानक हेपरिन नमूना या अंतरराष्ट्रीय मानक के अनुसार प्रमाणित प्लाज्मा अंशशोधक का उपयोग किया जाता है। मानक नमूना या प्लाज्मा अंशशोधक निर्देशों के अनुसार आसुत जल में पतला होता है। कमजोर बफर पीएच 8.4 का उपयोग करके 1 एंटी-एक्सए यू/एमएल से कम के हेपरिन एकाग्रता के साथ एक मानक के 4 कमजोर पड़ने की तैयारी करें । विश्लेषण किट के निर्देशों के अनुसार 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है। प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए, 405 एनएम पर अवशोषण तीन बार निर्धारित किया जाता है, जिसके बाद हेपरिन एकाग्रता पर अवशोषण की निर्भरता का एक अंशांकन ग्राफ रैखिक निर्देशांक में प्लॉट किया जाता है। निर्भरता हेपरिन सांद्रता 0 - 1.0 एंटी-एक्सए इकाइयों / एमएल की सीमा में रैखिक है।

1 एंटी-एक्सए यू/एमएल से कम के हेपरिन एकाग्रता के साथ परीक्षण नमूने के लिए 2 कमजोर पड़ने की तैयारी करें। विश्लेषण 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर सेट के निर्देशों के अनुसार किया जाता है। प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए, अवशोषण मूल्य तीन बार निर्धारित किया जाता है।

निर्धारण मैन्युअल रूप से प्लास्टिक टेस्ट ट्यूब, माइक्रोप्लेट्स या स्वचालित रूप से एक कोगुलोमीटर का उपयोग करके किया जाता है।

मैनुअल मोड में परीक्षण के लिए, मानक मानव प्लाज्मा के 20 μl और एंटीथ्रोम्बिन III समाधान के 20 μl माइक्रोप्लेट कुओं में जोड़े जाते हैं। इसके अलावा, परीक्षण या मानक तैयारी के 20, 60, 100 और 140 μl क्रमशः इन कुओं में जोड़े जाते हैं, और प्रत्येक कुएं में समाधान की मात्रा बफर के साथ 200 μl तक समायोजित की जाती है (अंतिम प्रतिक्रिया मिश्रण में हेपरिन गतिविधि 0.02 - 0.08 है) आईयू / एमएल)।

प्लेट के प्रत्येक कुएं से 40 μl कुओं की दूसरी श्रृंखला में स्थानांतरित किया जाता है, जिसमें गोजातीय कारक Xa समाधान के 20 μl जोड़े जाते हैं और 30 सेकंड के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है, जिसके बाद 40 μl समाधान के कुओं कारक Xa क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट में जोड़ा जाता है और 3-15 मिनट के लिए (37 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस पर फिर से ऊष्मायन किया जाता है, जो 405 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर ऑप्टिकल घनत्व के निरंतर माप द्वारा सब्सट्रेट के क्षरण की दर को मापता है। गतिज मोड) या 20% (v/v) ग्लेशियल एसिटिक एसिड समाधान (निर्धारण का अंतिम बिंदु) जोड़कर प्रतिक्रिया को रोकने के बाद।

एक कोगुलोमीटर का उपयोग करके स्वचालित मोड में अनुसंधान करते समय, हेपरिन की एकाग्रता पर ऑप्टिकल घनत्व में परिवर्तन की निर्भरता के मूल्य प्राप्त होते हैं।

जमावट कारक VIII का स्तर 0 से 1% तक रोग के अत्यंत गंभीर रूप का कारण बनता है, 1 से 2% तक - गंभीर, 2 से 5% तक - मध्यम, 5% से ऊपर - एक हल्का रूप, लेकिन गंभीर जोखिम के साथ और यहां तक ​​कि चोटों और सर्जिकल हस्तक्षेप के दौरान घातक रक्तस्राव भी।

हीमोफिलिया के सभी संभावित अभिव्यक्तियों में, हाथ-पैर (कूल्हे, घुटने, टखने, कंधे और कोहनी) के बड़े जोड़ों में रक्तस्राव, गहरे चमड़े के नीचे, इंटरमस्क्युलर और इंट्रामस्क्युलर रक्तस्राव, चोटों में भारी और लंबे समय तक रक्तस्राव, मूत्र में रक्त की उपस्थिति . अन्य रक्तस्राव कम आम हैं, जिनमें रेट्रोपरिटोनियल हेमोरेज, पेट के अंगों में रक्तस्राव, गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल रक्तस्राव, इंट्राक्रैनील हेमोरेज (स्ट्रोक) जैसे गंभीर और खतरनाक लोग शामिल हैं।

हीमोफिलिया के साथ, बच्चे के बड़े होने पर और बाद में एक वयस्क के रूप में रोग के सभी अभिव्यक्तियों की प्रगति का स्पष्ट रूप से पता लगाया जा सकता है। जन्म के समय, खोपड़ी की हड्डियों के पेरीओस्टेम के नीचे अधिक या कम व्यापक रक्तस्राव, चमड़े के नीचे और अंतःस्रावी रक्तस्राव, गर्भनाल से देर से रक्तस्राव देखा जा सकता है। कभी-कभी पहले इंट्रामस्क्यूलर इंजेक्शन में बीमारी का पता लगाया जाता है, जो एक बड़े, जीवन-धमकी देने वाले इंट्रामस्क्यूलर हेमेटोमा का कारण बन सकता है। दांत निकलने के साथ अक्सर बहुत भारी रक्तस्राव नहीं होता है। जीवन के पहले वर्षों में, आघात से जुड़े मौखिक श्लेष्म से विभिन्न नुकीली वस्तुओं से अक्सर रक्तस्राव होता है। जब कोई बच्चा चलना सीखता है, तो गिर जाता है और चोट के निशान अक्सर सिर पर प्रचुर मात्रा में नकसीर और रक्तगुल्म के साथ होते हैं। कक्षा में रक्तस्राव, साथ ही पोस्टोर्बिटल हेमेटोमास, दृष्टि की हानि का कारण बन सकता है। एक बच्चे में जो रेंगना शुरू कर देता है, नितंबों में रक्तस्राव विशिष्ट होता है। फिर, अंगों के बड़े जोड़ों में रक्तस्राव सामने आता है। वे पहले दिखाई देते हैं, हीमोफिलिया जितना गंभीर होता है। पहला रक्तस्राव एक ही जोड़ में बार-बार रक्त के बहिर्वाह का पूर्वाभास देता है। हीमोफिलिया से पीड़ित प्रत्येक व्यक्ति में, 1-3 जोड़ विशेष रूप से दृढ़ता और रक्तस्राव की आवृत्ति से प्रभावित होते हैं। घुटने के जोड़ सबसे अधिक प्रभावित होते हैं, इसके बाद टखने, कोहनी और कूल्हे के जोड़ होते हैं। हाथों और पैरों के छोटे जोड़ों में रक्तस्राव (सभी घावों के 1% से कम) और कशेरुकाओं के बीच के जोड़ अपेक्षाकृत दुर्लभ हैं। प्रत्येक व्यक्ति में, उम्र और रोग की गंभीरता के आधार पर, 1-2 से 8-12 जोड़ प्रभावित होते हैं।

अंतर्निहित प्रक्रिया की जटिलता के रूप में तीव्र हेमर्थ्रोसिस (प्राथमिक और आवर्तक), पुरानी रक्तस्रावी-विनाशकारी ऑस्टियोआर्थराइटिस (आर्थ्रोपैथी), माध्यमिक प्रतिरक्षा संधिशोथ सिंड्रोम के बीच अंतर करना आवश्यक है।

तीव्र हेमर्थ्रोसिस अचानक शुरुआत (अक्सर मामूली चोट के बाद) या जोड़ों के दर्द में तेज वृद्धि के रूप में प्रकट होता है। जोड़ अक्सर बड़ा हो जाता है, इसके ऊपर की त्वचा लाल, स्पर्श करने के लिए गर्म होती है। रक्त घटकों के पहले आधान के बाद, दर्द जल्दी (कुछ घंटों के भीतर) कम हो जाता है, और एक साथ संयुक्त से रक्त निकालने के साथ, यह लगभग तुरंत गायब हो जाता है।

संयुक्त क्षति के IV चरणों को प्रतिष्ठित किया जाता है। I, या प्रारंभिक अवस्था में, रक्तस्राव के परिणामस्वरूप जोड़ का आयतन बढ़ाया जा सकता है। "ठंड" अवधि में, संयुक्त का कार्य खराब नहीं होता है, लेकिन एक्स-रे परीक्षा घाव के विशिष्ट लक्षणों को निर्धारित करती है। चरण II में, प्रक्रिया की प्रगति नोट की जाती है, जो एक्स-रे डेटा के अनुसार प्रकट होती है। चरण III में, संयुक्त आकार में तेजी से बढ़ता है, विकृत होता है, अक्सर असमान और स्पर्श करने के लिए ऊबड़, प्रभावित पैर की मांसपेशियों का स्पष्ट हाइपोट्रॉफी निर्धारित होता है। प्रभावित जोड़ों की गतिशीलता कमोबेश सीमित होती है, जो कि जोड़ को नुकसान और मांसपेशियों और टेंडन में बदलाव दोनों से जुड़ी होती है। इस चरण में, स्पष्ट ऑस्टियोपोरोसिस बनता है, जोड़ों के अंदर फ्रैक्चर आसानी से हो जाते हैं। फीमर में, हीमोफिलिया के विशिष्ट अस्थि पदार्थ का एक गड्ढा या सुरंग जैसा विनाश होता है। पटेला आंशिक रूप से नष्ट हो गया है। इंट्रा-आर्टिकुलर कार्टिलेज नष्ट हो जाते हैं, इन कार्टिलेज के मोबाइल टुकड़े संयुक्त गुहा में पाए जाते हैं। हड्डियों के विभिन्न प्रकार के उदात्तीकरण और विस्थापन संभव हैं। चरण IV में, जोड़ का कार्य लगभग पूरी तरह से समाप्त हो जाता है। जोड़ों का फ्रैक्चर संभव है। उम्र के साथ, आर्टिकुलर उपकरण को नुकसान की गंभीरता और व्यापकता बढ़ती है और अधिक गंभीर हो जाती है जब हेमेटोमा पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित जोड़ों के आसपास होता है।

माध्यमिक संधिशोथ सिंड्रोम (बरकागन-एगोरोवा सिंड्रोम) हीमोफिलिया के रोगियों में संयुक्त क्षति का एक सामान्य रूप है। पहली बार, इस सिंड्रोम का वर्णन 1969 में किया गया था। कई मामलों में, इसे डॉक्टरों द्वारा देखा जाता है, क्योंकि यह पहले से मौजूद हेमर्थ्रोसिस और जोड़ों में हीमोफिलिया की विनाशकारी प्रक्रियाओं की पृष्ठभूमि के खिलाफ होता है। माध्यमिक रुमेटीड सिंड्रोम हाथों और पैरों के छोटे जोड़ों में एक पुरानी सूजन प्रक्रिया (अक्सर सममित) के साथ होता है, जो पहले रक्तस्राव से प्रभावित नहीं थे। इसके बाद, जैसे-जैसे प्रक्रिया आगे बढ़ती है, ये जोड़ एक विशिष्ट विकृति से गुजरते हैं। गंभीर दर्द समय-समय पर बड़े जोड़ों में प्रकट होता है, जोड़ों में सुबह की कठोरता का उच्चारण किया जा सकता है। नए रक्तस्रावों की उपस्थिति के बावजूद, कलात्मक प्रक्रिया लगातार प्रगति कर रही है। इस समय, एक रक्त परीक्षण से प्रतिरक्षाविज्ञानी सहित एक भड़काऊ प्रक्रिया के मौजूदा प्रयोगशाला संकेतों में उपस्थिति या तेज वृद्धि का पता चलता है।

हीमोफीलिया से ग्रसित अधिकांश लोगों में यह सिंड्रोम 10-14 वर्ष की आयु में प्रकट होता है। 20 वर्ष की आयु तक, इसकी आवृत्ति 5.9% तक पहुंच जाती है, और 30 तक - रोग के सभी मामलों में 13% तक। उम्र के साथ, सभी संयुक्त घावों की व्यापकता और गंभीरता लगातार बढ़ रही है, जो विकलांगता की ओर ले जाती है, बैसाखी, व्हीलचेयर और अन्य उपकरणों के उपयोग के लिए मजबूर करती है। संयुक्त क्षति की प्रगति तीव्र रक्तस्राव की आवृत्ति, उनके उपचार की समयबद्धता और उपयोगिता पर निर्भर करती है (रक्त और उसके घटकों का प्रारंभिक आधान करना बहुत महत्वपूर्ण है), आर्थोपेडिक देखभाल की गुणवत्ता, फिजियोथेरेपी अभ्यासों का सही उपयोग, फिजियोथेरेपी और बालनोलॉजिकल प्रभाव, पेशे की पसंद और कई अन्य परिस्थितियां। ये सभी मुद्दे वर्तमान में अत्यंत प्रासंगिक हैं, क्योंकि हीमोफिलिया में जीवन प्रत्याशा में सुधारात्मक उपचार की सफलता के कारण नाटकीय रूप से वृद्धि हुई है।

व्यापक और तीव्र चमड़े के नीचे, इंटरमस्क्युलर, सबफेशियल और रेट्रोपरिटोनियल हेमटॉमस बहुत कठिन और खतरनाक हैं। धीरे-धीरे बढ़ते हुए, वे एक विशाल आकार तक पहुंच सकते हैं, जिसमें 0.5 से 3 लीटर या अधिक रक्त होता है, जिससे एनीमिया का विकास होता है, आसपास के ऊतकों और उन्हें खिलाने वाले जहाजों के संपीड़न और विनाश का कारण बनता है, परिगलन। इसलिए, उदाहरण के लिए, रेट्रोपरिटोनियल हेमटॉमस अक्सर श्रोणि की हड्डियों के बड़े क्षेत्रों को पूरी तरह से नष्ट कर देते हैं (विनाश क्षेत्र का व्यास 15 सेमी या अधिक तक पहुंच सकता है), पैरों और बाहों पर हेमटॉमस ट्यूबलर हड्डियों और कैल्केनस को नष्ट कर देते हैं। हड्डी के ऊतकों की मृत्यु से पेरीओस्टेम के तहत रक्तस्राव का निर्माण होता है। रेडियोग्राफ़ पर इस तरह की हड्डी के विनाश की प्रक्रिया को अक्सर ट्यूमर प्रक्रिया के लिए गलत माना जाता है। अक्सर, हेमटॉमस में कैल्शियम लवण जमा हो जाते हैं, जो कभी-कभी नई हड्डियों के निर्माण की ओर ले जाते हैं, जो जोड़ों को बंद कर सकते हैं और उन्हें पूरी तरह से स्थिर कर सकते हैं।

कई हेमटॉमस, तंत्रिका चड्डी या मांसपेशियों पर दबाव डालते हैं, पक्षाघात, संवेदी गड़बड़ी और तेजी से प्रगतिशील मांसपेशी शोष का कारण बनते हैं। सबमांडिबुलर क्षेत्र, गर्दन, ग्रसनी और ग्रसनी के कोमल ऊतकों में व्यापक रक्तस्राव विशेष रूप से खतरनाक हैं। ये रक्तस्राव ऊपरी श्वसन पथ के संकुचन और घुटन का कारण बनते हैं।

हीमोफिलिया में एक गंभीर समस्या विपुल और लगातार गुर्दे से रक्तस्राव है, जो इस रक्त रोग वाले 14-30% व्यक्तियों में देखा गया है। ये रक्तस्राव अनायास और पाइलोनफ्राइटिस से जुड़े काठ का क्षेत्र की चोटों के संबंध में हो सकता है। इसके अलावा, हेमोफिलिया में हड्डी के ऊतकों के विनाश के कारण मूत्र में कैल्शियम के बढ़ते उत्सर्जन के कारण गुर्दे से रक्तस्राव हो सकता है। इस तरह के रक्तस्राव की उपस्थिति या तीव्रता को एनाल्जेसिक (एसिटाइलसैलिसिलिक एसिड, आदि), बड़े पैमाने पर रक्त और प्लाज्मा आधान के उपयोग से सुगम बनाया जा सकता है, जिससे गुर्दे को अतिरिक्त नुकसान होता है। गुर्दे से रक्तस्राव अक्सर मूत्र में रक्त कणों के लंबे समय तक उत्सर्जन से पहले होता है, जिसे केवल प्रयोगशाला परीक्षण द्वारा ही पता लगाया जा सकता है।

मूत्र में रक्त की उपस्थिति अक्सर गंभीर पेशाब विकारों के साथ-साथ उत्सर्जित मूत्र की मात्रा में परिवर्तन (इसकी दैनिक मात्रा में वृद्धि और कमी दोनों हो सकती है), गठन के कारण गुर्दे की शूल के हमलों के साथ होती है। मूत्र पथ में रक्त के थक्कों के कारण। उपचार के दौरान ये घटनाएं विशेष रूप से तीव्र और स्पष्ट होती हैं, जब रक्त की सामान्य स्थिति अस्थायी रूप से बहाल हो जाती है। मूत्र में रक्त के उत्सर्जन की समाप्ति अक्सर वृक्क शूल से पहले होती है, और अक्सर विषाक्त चयापचय उत्पादों के साथ शरीर के नशा के संकेतों की उपस्थिति के साथ मूत्र उत्सर्जन की अस्थायी अनुपस्थिति से होती है।

गुर्दे से रक्तस्राव समय-समय पर होता है, जो वर्षों से इस अंग में गंभीर डिस्ट्रोफिक-विनाशकारी परिवर्तन, माध्यमिक संक्रमण और गुर्दे की विफलता के विकास से मृत्यु का कारण बन सकता है।

हीमोफिलिया में गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल रक्तस्राव सहज हो सकता है, लेकिन अधिक बार वे एसिटाइलसैलिसिलिक एसिड (एस्पिरिन), ब्यूटाडियोन और अन्य दवाओं के सेवन के कारण होते हैं। रक्तस्राव का दूसरा स्रोत पेट या ग्रहणी के स्पष्ट या छिपे हुए अल्सर हैं, साथ ही विभिन्न मूल के इरोसिव गैस्ट्रिटिस भी हैं। हालांकि, कभी-कभी श्लेष्म झिल्ली में किसी भी विनाशकारी परिवर्तन के बिना फैलाना केशिका रक्तस्राव होता है। इन रक्तस्रावों को डायपेडेटिक कहा जाता है। जब वे दिखाई देते हैं, तो आंतों की दीवार लंबे समय तक रक्त से संतृप्त होती है, जो गंभीर एनीमिया के परिणामस्वरूप जल्दी से कोमा की ओर ले जाती है, रक्तचाप में तेज कमी और मृत्यु के कारण बेहोशी। इस तरह के रक्तस्राव के विकास का तंत्र आज तक स्पष्ट नहीं है।

पेट के अंगों में रक्तस्राव विभिन्न तीव्र सर्जिकल रोगों की नकल करता है - तीव्र एपेंडिसाइटिस, आंतों में रुकावट, आदि।

मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी में रक्तस्राव और हीमोफिलिया में उनकी झिल्ली लगभग हमेशा या तो चोटों से जुड़ी होती है या दवाओं के उपयोग से होती है जो प्लेटलेट्स के कार्य को बाधित करती हैं, जो सीधे रक्त के थक्के में शामिल होती हैं। चोट के क्षण और रक्तस्राव के विकास के बीच 1-2 घंटे से लेकर एक दिन तक का हल्का अंतराल हो सकता है।

हीमोफिलिया की एक विशिष्ट विशेषता चोटों और ऑपरेशन के दौरान लंबे समय तक रक्तस्राव है। टूटना घाव रैखिक टूटने की तुलना में बहुत अधिक खतरनाक होते हैं। रक्तस्राव अक्सर चोट के तुरंत बाद नहीं होता है, लेकिन 1-5 घंटे के बाद होता है।

हीमोफीलिया में टॉन्सिल को हटाना पेट की सर्जरी से कहीं ज्यादा खतरनाक है।

दांतों का निष्कर्षण, विशेष रूप से दाढ़, अक्सर न केवल दंत सॉकेट से रक्तस्राव के कई दिनों के साथ होता है, बल्कि नोवोकेन के साथ ऊतक घुसपैठ के स्थल पर बनने वाले हेमटॉमस से भी होता है, जिससे एनीमिया का विकास होता है। ये हेमेटोमा जबड़े के विनाश का कारण बनते हैं। हीमोफिलिया के साथ, सामान्य संज्ञाहरण के तहत एंटीहेमोफिलिक दवाओं की कार्रवाई की पृष्ठभूमि के खिलाफ दांतों को हटा दिया जाता है। एक साथ कई दांतों को निकालना सबसे अच्छा होता है।

हीमोफिलिया में जटिलताओं का एक हिस्सा रक्त की कमी, हेमटॉमस द्वारा ऊतकों के संपीड़न और विनाश, हेमटॉमस के संक्रमण के कारण होता है। जटिलताओं का एक बड़ा समूह प्रतिरक्षा विकारों से भी जुड़ा हुआ है। उनमें से सबसे खतरनाक रक्त जमावट कारक VIII (या IX) की बड़ी संख्या में प्रतिरक्षा अवरोधकों ("ब्लॉकर्स") में रक्त में उपस्थिति है, हीमोफिलिया को तथाकथित निरोधात्मक रूप में बदलना, जिसमें उपचार की मुख्य विधि है आधान चिकित्सा है (रक्त या उसके घटकों का आधान) - लगभग पूरी तरह से इसकी प्रभावशीलता खो देता है। इसके अलावा, हेमोफिलिक दवाओं के बार-बार प्रशासन से अक्सर रक्त में अवरोधक की मात्रा में तेजी से वृद्धि होती है, जिसके परिणामस्वरूप रक्त और उसके घटकों का आधान, जिसका शुरू में कुछ प्रभाव था, जल्द ही बेकार हो जाता है। हीमोफिलिया के निरोधात्मक रूप की आवृत्ति, विभिन्न लेखकों के अनुसार, 1 से 20% तक होती है, अधिक बार 5 से 15% तक। निरोधात्मक रूपों के साथ, प्लेटलेट फ़ंक्शन काफ़ी बिगड़ा हुआ है, जोड़ों में रक्तस्राव और मूत्र में रक्त का उत्सर्जन अधिक बार होता है, संयुक्त क्षति काफी अधिक होती है।

किसी भी स्थानीयकरण और हीमोफिलिया में किसी भी उत्पत्ति के रक्तस्राव और रक्तस्राव के उपचार और रोकथाम की मुख्य विधि कारक VIII युक्त रक्त उत्पादों की पर्याप्त खुराक का अंतःशिरा प्रशासन है। फैक्टर VIII परिवर्तनशील है और व्यावहारिक रूप से डिब्बाबंद रक्त, प्राकृतिक और शुष्क प्लाज्मा में संरक्षित नहीं है। प्रतिस्थापन उपचार के लिए, केवल दाता से सीधे रक्त आधान और संरक्षित थक्के कारक VIII वाले रक्त उत्पाद उपयुक्त हैं। दाता से सीधे रक्त आधान का सहारा तभी लिया जाता है जब डॉक्टर के पास कोई अन्य एंटीहेमोफिलिक दवाएं न हों। माँ से रक्त चढ़ाना एक गंभीर गलती है, क्योंकि वह बीमारी की वाहक है, और उसके रक्त में कारक VIII का स्तर तेजी से कम हो जाता है। प्राप्तकर्ता के रक्त में कारक VIII की छोटी अवधि (लगभग 6-8 घंटे) के कारण, रक्त आधान, साथ ही एंटीहेमोफिलिक प्लाज्मा के आधान को दिन में कम से कम 3 बार दोहराया जाना चाहिए। इस तरह के रक्त और प्लाज्मा आधान बड़े पैमाने पर रक्तस्राव को रोकने और विभिन्न सर्जिकल हस्तक्षेपों के लिए विश्वसनीय कवर के लिए अनुपयुक्त हैं।

एंथेमोफिलिक प्लाज्मा की एक समान मात्रा ताजा बैंक्ड रक्त की तुलना में लगभग 3-4 गुना अधिक प्रभावी होती है। एंटीहेमोफिलिक प्लाज्मा के शरीर के वजन के 30-50 मिलीलीटर / किग्रा की दैनिक खुराक कुछ समय के लिए कारक VIII के 10-15% स्तर को बनाए रखने की अनुमति देती है। इस तरह के उपचार का मुख्य खतरा मात्रा से रक्त परिसंचरण का अधिभार है, जिससे फुफ्फुसीय एडिमा का विकास हो सकता है। एक केंद्रित रूप में एंथोमोफिलिक प्लाज्मा का उपयोग स्थिति को नहीं बदलता है, क्योंकि इंजेक्शन वाले प्रोटीन की उच्च सांद्रता ऊतकों से रक्त में तरल पदार्थ की एक गहन गति का कारण बनती है, जिसके परिणामस्वरूप रक्त के परिसंचारी की मात्रा उसी में बढ़ जाती है। जिस तरह से प्लाज्मा को सामान्य तनुकरण में डाला जाता है। सांद्रित शुष्क एंथेमोफिलिक प्लाज्मा का केवल यह लाभ है कि इसमें रक्त जमावट का अधिक केंद्रित कारक VIII होता है, और थोड़ी मात्रा में यह रक्तप्रवाह में अधिक तेज़ी से प्रवेश करता है। शुष्क एंथोमोफिलिक प्लाज्मा उपयोग करने से पहले आसुत जल से पतला होता है। एंथोमोफिलिक प्लाज्मा के साथ उपचार जोड़ों में सबसे तीव्र रक्तस्राव को रोकने के लिए पर्याप्त है (सबसे गंभीर को छोड़कर), साथ ही साथ मामूली रक्तस्राव को रोकने और उसका इलाज करने के लिए।

हीमोफिलिया में सबसे विश्वसनीय और प्रभावी रक्त जमावट के कारक VIII का ध्यान केंद्रित करता है। उनमें से सबसे सुलभ क्रायोप्रेसिपेट है। यह ठंडा (क्रायोप्रेजर्वेशन) द्वारा प्लाज्मा से पृथक एक प्रोटीन सांद्रण है, जिसमें पर्याप्त मात्रा में रक्त के थक्के जमने वाले कारक होते हैं, लेकिन कुछ प्रोटीन होते हैं। कम प्रोटीन सामग्री दवा को बहुत बड़ी मात्रा में रक्तप्रवाह में इंजेक्ट करने और रक्त परिसंचरण और फुफ्फुसीय एडिमा के अधिभार के डर के बिना कारक VIII की एकाग्रता को 100% या उससे अधिक तक बढ़ाने की अनुमति देती है। क्रायोप्रेसिपेट को -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जाना चाहिए, जिससे परिवहन करना मुश्किल हो जाता है। जब पिघलाया जाता है, तो दवा जल्दी से अपनी गतिविधि खो देती है। रक्त जमावट के कारक VIII के शुष्क क्रायोप्रेसीपिटेट और आधुनिक सांद्रण इन कमियों से वंचित हैं। उन्हें एक नियमित रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जा सकता है। क्रायोप्रीसिपिटेट का अत्यधिक प्रशासन अवांछनीय है, क्योंकि यह रक्त में जमावट कारकों की एक उच्च सांद्रता बनाता है, जिसके परिणामस्वरूप अंगों में माइक्रोकिरकुलेशन गड़बड़ा जाता है और रक्त के थक्कों और डीआईसी के विकास का खतरा होता है।

सभी एंटीहेमोफिलिक दवाओं को केवल एक धारा में, सबसे अधिक केंद्रित रूप में और अंतःशिरा प्रशासन के लिए अन्य समाधानों के साथ मिश्रण किए बिना फिर से खोलने के बाद जितनी जल्दी हो सके प्रशासित किया जाता है। रिप्लेसमेंट थेरेपी की विफलता का एक मुख्य कारण रक्त उत्पादों का टपकना है, जिससे प्लाज्मा में फैक्टर VIII के स्तर में वृद्धि नहीं होती है। रक्तस्राव के एक स्थिर रोक तक, आप किसी भी रक्त विकल्प और रक्त उत्पादों का उपयोग नहीं कर सकते हैं जिनमें एंटीहेमोफिलिक कारक नहीं होते हैं, क्योंकि इससे कारक VIII का कमजोर पड़ना और सीरम में इसकी एकाग्रता में कमी आती है।

जोड़ों में तीव्र रक्तस्राव के मामले में, एक शारीरिक स्थिति में प्रभावित अंग का अस्थायी (3-5 दिनों से अधिक नहीं) स्थिरीकरण (स्थिरीकरण), प्रभावित जोड़ का ताप (संपीड़ित), लेकिन ठंडा नहीं करना आवश्यक है। जोड़ में बहने वाले रक्त को जल्दी हटाने से न केवल दर्द तुरंत समाप्त हो जाता है, जोड़ों में और रक्त का थक्का बनने से रोकता है, बल्कि पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस के विकास और तेजी से बढ़ने के जोखिम को भी कम करता है। रक्त निकालने के बाद होने वाले द्वितीयक भड़काऊ परिवर्तनों को रोकने और उनका इलाज करने के लिए, 40-60 मिलीग्राम हाइड्रोकार्टिसोन को संयुक्त गुहा में इंजेक्ट किया जाता है। सहायक आधान चिकित्सा, जो पहले 3-6 दिनों के दौरान की जाती है, आगे के रक्तस्राव को रोकती है और आपको फिजियोथेरेपी अभ्यास जल्दी शुरू करने की अनुमति देती है, जो प्रभावित अंग के कार्य की तेजी से और अधिक पूर्ण वसूली में योगदान देता है, और मांसपेशियों के शोष को रोकता है। प्रभावित जोड़ में चरणों में आंदोलनों को विकसित करना बेहतर है। पट्टी को हटाने के बाद पहले 5-7 दिनों में, प्रभावित जोड़ और अंग के अन्य जोड़ों में सक्रिय आंदोलनों का प्रदर्शन किया जाता है, धीरे-धीरे व्यायाम की आवृत्ति और अवधि में वृद्धि होती है। 6-9 वें दिन से, वे साइकिल एर्गोमीटर, हाथों के लिए पैडल गेट, लोचदार कर्षण का उपयोग करके "लोड" अभ्यास पर स्विच करते हैं। 11-13वें दिन से, अवशिष्ट कठोरता को खत्म करने और अधिकतम लचीलेपन या विस्तार को सीमित करने के लिए, निष्क्रिय भार अभ्यास सावधानी के साथ किया जाता है। इसके साथ ही 5-7 वें दिन, फिजियोथेरेपी निर्धारित है - हाइड्रोकार्टिसोन वैद्युतकणसंचलन, एनोड गैल्वनीकरण।

नरम ऊतकों में रक्तस्राव के साथ, जोड़ों में रक्तस्राव की तुलना में एंटीहेमोफिलिक दवाओं के साथ अधिक गहन उपचार किया जाता है। एनीमिया के विकास के साथ, एरिथ्रोसाइट द्रव्यमान के अंतःशिरा संक्रमण अतिरिक्त रूप से निर्धारित होते हैं। यदि हेमेटोमा के संक्रमण के संकेत हैं, तो ब्रॉड-स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक्स तुरंत निर्धारित किए जाते हैं। हीमोफिलिया के लिए किसी भी इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन को contraindicated है, क्योंकि वे व्यापक हेमटॉमस और स्यूडोट्यूमर पैदा कर सकते हैं। पेनिसिलिन और इसके अर्ध-सिंथेटिक एनालॉग भी अवांछनीय हैं, क्योंकि बड़ी खुराक में वे रक्तस्राव को बढ़ाते हैं।

हेमोफिलिक दवाओं के साथ प्रारंभिक और गहन उपचार हेमटॉमस के तेजी से प्रतिगमन में योगदान देता है। कैप्सूल के साथ, यदि संभव हो तो, शल्य चिकित्सा द्वारा, इनकैप्सुलेटेड हेमटॉमस को हटा दिया जाता है।

क्षतिग्रस्त त्वचा से बाहरी रक्तस्राव, नकसीर और मौखिक गुहा में घावों से रक्तस्राव दोनों को आधान चिकित्सा और स्थानीय प्रभावों द्वारा रोका जाता है - रक्त के थक्के को बढ़ावा देने वाली दवाओं के साथ रक्तस्राव क्षेत्र का इलाज करके। इसके अलावा, इन दवाओं को मौखिक रूप से लिया जा सकता है। घावों पर दबाव पट्टियां या टांके लगाए जाते हैं। इसी तरह दांत निकालने के बाद खून बहना बंद कर दें। चबाने वाले दांतों को हटाते समय, थोड़ा अधिक गहन आधान चिकित्सा की जाती है, और एक साथ कई दांतों (3-5 या अधिक) को हटाने के लिए पहले 3 दिनों में एंटीहेमोफिलिक दवाओं की शुरूआत की आवश्यकता होती है।

नकसीर के मामले में, तंग पैकिंग से बचना चाहिए, क्योंकि टैम्पोन को हटाने के बाद, रक्तस्राव अक्सर और भी अधिक बल के साथ फिर से शुरू हो जाता है। नकसीर का एक त्वरित रोक आमतौर पर एंटीहेमोफिलिक प्लाज्मा और एंथेमोफिलिक दवाओं द्वारा प्रदान किया जाता है और साथ ही साथ नाक के म्यूकोसा की सिंचाई द्वारा रक्त के थक्के को बढ़ावा देने वाले समाधानों के साथ प्रदान किया जाता है।

एक गंभीर खतरा गुर्दे से खून बह रहा है, जिसमें एंटीहेमोफिलिक प्लाज्मा और क्रायोप्रिसिपिटेट के अंतःशिरा संक्रमण अप्रभावी हैं।

क्लॉटिंग फैक्टर कॉन्संट्रेट की बड़ी खुराक से गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ब्लीडिंग को नियंत्रित किया जाता है। यह याद रखना चाहिए कि जोड़ों में दर्द, दांत दर्द या सिरदर्द के संबंध में एस्पिरिन, ब्रुफेन, इंडोमेथेसिन लेने से अक्सर गैस्ट्रिक रक्तस्राव होता है। हीमोफीलिया के रोगियों में एस्पिरिन की एक खुराक भी पेट से खून बहने का कारण बन सकती है।

पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस और मस्कुलोस्केलेटल सिस्टम के अन्य घावों की रोकथाम और उपचार में, जोड़ों की सुरक्षा और अंगों की चोटों को रोकने के लिए विभिन्न तरीके प्रदान करना आवश्यक है। ऐसा करने के लिए, फोम पैड को घुटने, टखने और कोहनी के जोड़ों के आसपास के कपड़ों में सिल दिया जाता है, और उन खेलों से बचा जाता है जो कूदने, गिरने और चोट लगने (साइकिल चलाने और मोटरसाइकिल की सवारी सहित) से जुड़े होते हैं। जोड़ों और मांसपेशियों में तीव्र रक्तस्राव के जल्द से जल्द और पूर्ण उपचार के लिए महत्व दिया जाता है, गहन भौतिक चिकित्सा अभ्यास। ऐसा करने के लिए, नरम मैट और लोड डिवाइस - साइकिल एर्गोमीटर, मैनुअल गेट्स पर पानी में एट्रूमैटिक एक्सरसाइज के विशेष कॉम्प्लेक्स हैं। कक्षाएं पूर्वस्कूली या प्राथमिक स्कूल की उम्र में शुरू होनी चाहिए, यानी मस्कुलोस्केलेटल सिस्टम के गंभीर विकारों के विकसित होने से पहले। जटिल चिकित्सा को फिजियोथेरेपी (उच्च आवृत्ति धाराओं, ग्लूकोकार्टिकोस्टेरॉइड्स के वैद्युतकणसंचलन) और उपचार के बालनोलॉजिकल तरीकों, मुख्य रूप से मिट्टी चिकित्सा, नमकीन और रेडॉन स्नान के साथ पूरक किया जाता है। एक ही जोड़ में बार-बार और लगातार बार-बार होने वाले रक्तस्राव के साथ, एक्स-रे थेरेपी और सर्जिकल उपचार किया जाता है।

रक्तस्राव की रोकथाम में बचपन से ही चोट और कटने के जोखिम को कम करना महत्वपूर्ण है। आसानी से टूटने वाले खिलौने (धातु और प्लास्टिक वाले सहित), साथ ही अस्थिर और भारी वस्तुओं को रोजमर्रा की जिंदगी से बाहर रखा गया है। फर्नीचर गोल किनारों के साथ होना चाहिए, उभरे हुए किनारों को रूई या फोम रबर से लपेटा जाता है, फर्श ढेर कालीन से ढका होता है। लड़कियों के साथ रोगियों का संचार और खेल बेहतर है, लेकिन लड़कों के साथ नहीं। रोगी के लिए, पेशे का सही चुनाव और काम करने का स्थान महत्वपूर्ण है।

हीमोफिलिया की रोकथाम अभी तक विकसित नहीं हुई है। एमनियोटिक द्रव से प्राप्त कोशिकाओं के आनुवंशिक परीक्षण द्वारा अजन्मे बच्चे के लिंग का निर्धारण आपको गर्भावस्था को समय पर समाप्त करने की अनुमति देता है, लेकिन यह नहीं दिखाता है कि भ्रूण हीमोफिलिया जीन का वाहक है या नहीं। यदि भ्रूण पुरुष है तो गर्भावस्था को संरक्षित किया जाता है, क्योंकि बीमारों के सभी बेटे स्वस्थ पैदा होते हैं। यदि भ्रूण महिला है तो गर्भावस्था को समाप्त कर दें, क्योंकि हीमोफिलिया रोगियों की सभी बेटियां रोग की वाहक होती हैं।

हीमोफिलिया की महिला संवाहकों में, जिनके पास प्रभावित बच्चे को जन्म देने की 50% संभावना है (यदि भ्रूण पुरुष है), या जो हीमोफिलिया के ट्रांसमीटर हैं (यदि भ्रूण महिला है), केवल लड़कियों के जन्म से होने का जोखिम होता है हीमोफीलिया के मरीजों के परिवार में पहली पीढ़ी से दूसरी पीढ़ी तक, साथ ही साथ बीमारी के वाहकों की कुल संख्या में वृद्धि होती है।

क्रोमैटोग्राफिक रूप से शुद्ध lyophilized मानव प्लाज्मा अंश जिसमें जमावट कारक VIII होता है। एंटीहेमोफिलिक ग्लोब्युलिन, जमावट कारक VIII की कमी के लिए क्षतिपूर्ति करता है, हीमोफिलिया ए के रोगियों में जमावट दोष के लिए अस्थायी रूप से क्षतिपूर्ति करता है। यह कारक VIII, वॉन विलेब्रांड कारक के प्रोटीन सी के साथ प्राकृतिक संयोजन में पाया जाता है। यह रक्त जमावट की प्रक्रियाओं में शामिल है, प्रोथ्रोम्बिन के थ्रोम्बिन में संक्रमण और एक फाइब्रिन थक्का के गठन को बढ़ावा देता है। प्रशासन के तुरंत बाद, यह रक्त की जमावट क्षमता को बढ़ाता है। एंटीहेमोफिलिक कारक की गतिविधि में कमी का दो-चरण चरित्र है: प्रारंभिक चरण गतिविधि में तेजी से कमी है, अतिरिक्त स्थान के साथ संतुलन के समय की विशेषता है, दूसरा चरण धीमा है, जैविक आधा जीवन को दर्शाता है प्रशासित एंटीहेमोफिलिक कारक और 9-14 घंटे है। विशिष्ट गतिविधि (मानव एल्ब्यूमिन को जोड़ने के बाद) - प्रोटीन का 9-22 आईयू। 1 आईयू (जैसा कि डब्ल्यूएचओ रक्त जमावट कारक VIII मानक द्वारा परिभाषित किया गया है) लगभग 1 मिलीलीटर ताजा मानव दाता प्लाज्मा में मौजूद एंटीहेमोफिलिक कारक के स्तर के बराबर है।
अंतःशिरा प्रशासन के बाद रक्त प्लाज्मा में अधिकतम एकाग्रता तक पहुंचने का समय 10 मिनट से 2 घंटे तक है। आधा जीवन 8.4-19.3 घंटे है। जमावट कारक VIII की गतिविधि धीरे-धीरे कम हो जाती है - 12 घंटे के भीतर 15%। अतिताप के साथ, जमावट कारक VIII के आधे जीवन की अवधि घट सकती है।

दवा जमावट कारक VIII के उपयोग के लिए संकेत

हेमोफिलिया ए, वॉन विलेब्रांड रोग (सर्जिकल हस्तक्षेप के दौरान रक्तस्राव का उपचार और रोकथाम); कारक VIII की अधिग्रहित कमी, कारक VIII के एंटीबॉडी के गठन के साथ होने वाली बीमारियां।

जमावट कारक VIII का उपयोग कैसे करें

में / में। सहज रक्तस्राव या हल्के रक्तस्राव की रोकथाम के लिए - 10 आईयू / किग्रा (कारक VIII की सामग्री, सहज रक्तस्राव को रोकने के लिए आवश्यक - सामान्य स्तर का 5%); मध्यम रक्तस्राव और एक छोटे से सर्जिकल हस्तक्षेप के साथ (उदाहरण के लिए, दांत निकालना) - 15-25 आईयू / किग्रा (कारक VIII सामग्री - मानक का 30-80%) इसके बाद 10-15 आईयू / किग्रा की रखरखाव खुराक हर 12- 3 दिनों के लिए 24 घंटे या पर्याप्त नैदानिक ​​​​प्रभाव प्राप्त होने तक; तीव्र जीवन-धमकी रक्तस्राव में - 40-50 आईयू / किग्रा (कारक VIII सामग्री - 60-100% आदर्श) इसके बाद हर 8-24 घंटों में 20-25 आईयू / किग्रा की रखरखाव खुराक होती है; व्यापक सर्जिकल हस्तक्षेप के साथ - प्रक्रिया से 1 घंटे पहले 40-50 आईयू / किग्रा और 20-25 आईयू / किग्रा - पहली खुराक के 5 घंटे बाद (यानी सर्जरी से पहले और बाद में मानक का 80-100%), फिर हर दोहराएं पर्याप्त नैदानिक ​​​​प्रभाव प्राप्त होने तक 8-24 घंटे। गंभीर हीमोफिलिया ए में रक्तस्राव की लंबी अवधि की रोकथाम के लिए - हर 2-3 दिनों में 12-25 आईयू / किग्रा।
क्रायोप्रेसिपिटेट का उपयोग AB0 रक्त समूहों के लिए अनुकूलता को ध्यान में रखते हुए किया जाता है। जमे हुए क्रायोप्रिसिपेट के साथ एक कंटेनर को 35-37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं के तापमान पर पानी के स्नान में विगलन और पूर्ण विघटन के लिए रखा जाता है और 7 मिनट से अधिक नहीं के लिए ऊष्मायन किया जाता है। परिणामस्वरूप पारदर्शी पीले रंग का घोल, जिसमें गुच्छे नहीं होने चाहिए, तैयारी के तुरंत बाद उपयोग किया जाता है। एक डिस्पोजेबल फिल्टर के साथ एक सिरिंज या आधान प्रणाली के साथ अंतःशिरा में प्रशासित। खुराक हीमोफिलिया वाले रोगी के रक्त में कारक VIII की प्रारंभिक सामग्री पर निर्भर करता है, रक्तस्राव की प्रकृति और स्थानीयकरण, सर्जिकल हस्तक्षेप के जोखिम की डिग्री, रोगी के रक्त में एक विशिष्ट अवरोधक की उपस्थिति जो की गतिविधि को बेअसर कर सकती है कारक VIII (कारक VIII गतिविधि की इकाइयों में व्यक्त)। हीमोफिलिया (हेमर्थ्रोसिस, रीनल, जिंजिवल और नाक से रक्तस्राव) की सबसे आम जटिलताओं में प्रभावी हेमोस्टेसिस सुनिश्चित करने के लिए, साथ ही दांत निकालने के लिए, प्लाज्मा में फैक्टर VIII की सामग्री कम से कम 20% होनी चाहिए; इंटरमस्क्यूलर हेमेटोमा, गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल रक्तस्राव, फ्रैक्चर और अन्य चोटों के साथ - 40% से कम नहीं; अधिकांश सर्जिकल हस्तक्षेपों में - कम से कम 70%। शरीर के वजन के 1 यूनिट प्रति 1 किलोग्राम की दर से कारक VIII की शुरूआत के साथ, रक्त में इसकी सामग्री औसतन 1% बढ़ जाती है। इसके आधार पर, रक्त में कारक VIII की एकाग्रता को किसी दिए गए स्तर तक बढ़ाने के लिए आवश्यक खुराक की संख्या की गणना सूत्र द्वारा की जाती है: रोगी के शरीर के वजन (किलो में) को रोगी के रक्त में कारक VIII की आवश्यक सामग्री से गुणा किया जाता है और 200 से विभाजित (क्रायोप्रिसिपिटेट की 1 खुराक में गतिविधि की इकाइयों में कारक VIII की न्यूनतम सामग्री)। रक्तस्राव के पूर्ण विराम के बाद, हीमोफिलिया के रोगियों को कारक VIII की शुरूआत 12-24 घंटे के अंतराल पर एक खुराक पर की जाती है जो कारक VIII की सामग्री में कम से कम 20% की वृद्धि प्रदान करती है। उपचार कई दिनों तक जारी रहता है - जब तक कि हेमेटोमा के आकार में कमी न दिखाई दे। सर्जिकल हस्तक्षेप में, सर्जरी से 30 मिनट पहले एक हेमोस्टेटिक खुराक दी जाती है। बड़े पैमाने पर रक्तस्राव के मामले में, रक्त की कमी को फिर से भर दिया जाता है, ऑपरेशन के अंत में, क्रायोप्रिसिपिटेट को फिर से पेश किया जाता है (मूल से 1/2 खुराक)। ऑपरेशन के 3-5 दिनों के बाद, रोगी के रक्त में कारक VIII की एकाग्रता को ऑपरेशन के दौरान उसी सीमा के भीतर बनाए रखना आवश्यक है। भविष्य में पश्चात की अवधि में, हेमोस्टेसिस को बनाए रखने के लिए, कारक VIII की सामग्री को 20% तक बढ़ाने के लिए पर्याप्त है। हेमोस्टैटिक थेरेपी की अवधि 7-14 दिन है और प्रकृति, रक्तस्राव के स्थान, पुनरावर्ती ऊतक विशेषताओं पर निर्भर करती है। हीमोफिलिया के साथ क्रायोप्रिसिपिटेट के साथ एक रोगी के उपचार को रोगनिरोधी और मध्यम चिकित्सीय खुराक में एंटीफिब्रिनोलिटिक एजेंटों और कॉर्टिकोस्टेरॉइड्स के एक साथ प्रशासन के साथ जोड़ा जाना चाहिए।

दवा जमावट फैक्टर VIII के उपयोग के लिए मतभेद

संवेदनशीलता में वृद्धि।

क्लॉटिंग फैक्टर VIII के साइड इफेक्ट

एलर्जी और आधान प्रतिक्रियाएं (पित्ती, दाने, सांस लेने में तकलीफ, रक्तचाप में कमी, ठंड लगना, अतिताप, एनाफिलेक्सिस), मौखिक श्लेष्मा के क्षणिक पारेषण, मतली, उल्टी, सिरदर्द।

दवा जमावट कारक VIII के उपयोग के लिए विशेष निर्देश

गर्भावस्था और स्तनपान के दौरान सावधानी के साथ प्रयोग करें।
चिकित्सा से पहले और दौरान हृदय गति को नियंत्रित करना आवश्यक है: हृदय गति में उल्लेखनीय वृद्धि के साथ, जलसेक दर धीमा हो जाती है या प्रशासन बंद हो जाता है। उपचार के दौरान और बाद में, रक्त में कारक VIII की सामग्री को नियंत्रित करना आवश्यक है। प्रगतिशील हेमोलिटिक एनीमिया के लक्षणों की पहचान करने के लिए, हेमटोक्रिट की निगरानी करना और कॉम्ब्स प्रतिक्रिया को निर्देशित करना आवश्यक है। स्पर्शोन्मुख हीमोफिलिया वाले रोगियों में प्रतिरक्षा स्थिति में परिवर्तन वायरल रोगजनकों के बार-बार संपर्क और / या कारक VIII की तैयारी (उदाहरण के लिए, IgG) में अशुद्धियों की संभावित उपस्थिति के कारण होता है। संतोषजनक नैदानिक ​​​​परिणाम प्राप्त करने के लिए, प्रारंभिक गणना की गई खुराक के अतिरिक्त एक अतिरिक्त खुराक प्रशासित की जा सकती है। नैदानिक ​​​​प्रभाव की अनुपस्थिति में, अवरोधक की पहचान करने और प्रति 1 मिलीलीटर या कुल प्लाज्मा मात्रा में बेअसर एंटीहेमोफिलिक इकाइयों में इसकी मात्रा निर्धारित करने के लिए एक परीक्षण करना आवश्यक है। साइड इफेक्ट के जोखिम को कम करने के लिए, कमजोर पड़ने के बाद 1 घंटे से अधिक समय तक उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, कम से कम 3 घंटे (10 मिलीलीटर / मिनट की दर से) के लिए केवल अंतःशिरा प्रशासन करें, समाधान को फ्रीज न करें और पुन: उपयोग न करें . जमावट कारक VIII के लिए एंटीबॉडी विकसित करना संभव है, ऐसे मामलों में, चिकित्सा की प्रभावशीलता आमतौर पर कम हो जाती है, जिसके लिए जमावट कारक VIII की खुराक में वृद्धि की आवश्यकता हो सकती है। हीमोफिलिया के एचआईवी-सेरोपोसिटिव रोगियों में सीडी 4 सेल की संख्या में गिरावट की दर में वृद्धि संभव है।