Plazma koagulációs faktorok. GPM.1.8.2.0003.15 Véralvadási faktorok aktivitásának meghatározása

VIII-as véralvadási faktor ( Alvadási faktor VIII)

Klinikai és farmakológiai csoport

Faktor előkészítés VIII koaguláció vér

farmakológiai hatás

hemosztatikus gyógyszer. Elősegíti a protrombin trombinná történő átalakulását és a fibrinrög képződését.

Farmakokinetika

A hemofíliás betegeknél az A T 1/2 12 óra A VIII-as véralvadási faktor aktivitása 12 órán belül 15%-kal csökken A VIII-as véralvadási faktor termolabilis, és a hőmérséklet emelkedésével gyorsan elpusztul, ami a T csökkenéséhez vezet. 1/2.

Adagolás

Az oktanátot intravénásan adják be injekcióhoz való vízzel történő hígítás után, amelyet a csomagolás tartalmaz. Oktanát dózis és időtartam helyettesítő terápia függ a VIII-as véralvadási faktor hiányának mértékétől, a vérzés helyétől és időtartamától, klinikai állapot beteg.

A gyógyszer dózisát nemzetközi egységben (NE) adják meg a WHO VIII-as véralvadási faktorra vonatkozó elfogadott szabványai szerint. A VIII-as véralvadási faktor aktivitását a plazmában vagy százalékban (a humán plazma normál faktortartalmához viszonyítva), vagy NE-ben (a faktorhoz viszonyítva) fejezik ki. Nemzetközi szabvány VIII-as véralvadási faktor esetében).

1 NE VIII-as véralvadási faktor 1 ml normál emberi plazmának felel meg. A szükséges dózis kiszámítása empirikusan kapott eredményeken alapul, amelyek szerint 1 NE / kg VIII-as véralvadási faktor a normál tartalom 1,5-2%-ával növeli a plazma faktor szintjét. A beteg számára szükséges dózis kiszámításához meg kell határozni a VIII-as véralvadási faktor kezdeti aktivitási szintjét, és meg kell becsülni, hogy ezt az aktivitást mennyivel kell növelni.

Szükséges adag = testtömeg (kg) × a VIII-as alvadási faktor kívánt növekedése (%) (NE/dl) × 0,5.

A gyógyszer mennyiségének és alkalmazásának gyakoriságának minden esetben meg kell felelnie a klinikai hatékonyságnak minden egyes esetben.

Későbbi vérzés esetén a VIII-as véralvadási faktor aktivitásának szintje nem csökkenhet a kezdeti plazmaszint alá (a normál tartalom %-a) a megfelelő időn belül. Az alábbi táblázat iránymutatásként használható a VIII-as véralvadási faktor dózisának megválasztásához különféle vérzésekés sebészeti beavatkozások.

A betegek egyénileg reagálnak a gyógyszer beadására, miközben van különböző szintű felépülés in vivo, T 1/2 VIII-as véralvadási faktort a változékonyság jellemzi. Ezért a kezelés során a dózis és az adagolás gyakoriságának szabályozása érdekében annak szintjét ellenőrizni kell. A véralvadási faktor VIII-as aktivitását a helyettesítő terápia során ellenőrizni kell, különösen nagy sebészeti beavatkozások során.

A táblázatban feltüntetett adagok tájékoztató jellegűek. Az orvos egyénileg határozza meg a szükséges adagot és a gyógyszer használatának gyakoriságát.

Azzal a céllal hosszú távú megelőzés vérzés súlyos hemofíliában A a gyógyszert 20-40 NE / testtömeg-kg dózisban írják fel 2-3 naponta. Egyes esetekben, különösen fiatal betegeknél, szükség lehet az injekciók közötti intervallum csökkentésére vagy az adag növelésére.

Egyes betegeknél a kezelés után kialakulhat gátló antitestek VIII-as véralvadási faktorra, ami befolyásolhatja a hatékonyságot további kezelés. Ha a folyamatban lévő terápia hátterében a VIII-as faktor aktivitásának várható növekedése nem észlelhető, vagy hiányzik a szükséges hemosztatikus hatás, szakemberrel való konzultáció javasolt. kezelési központ a Bethesda teszt segítségével. Az immuntolerancia-indukciós terápia alkalmazható a VIII-as véralvadási faktor inhibitorának megszüntetésére. Ennek alapja a VIII-as véralvadási faktor napi adagolása az inhibitor blokkoló képességét meghaladó koncentrációban (100-200 NE/kg/nap, az inhibitor titertől függően). Az antigénként működő VIII-as véralvadási faktor az inhibitor titer növekedését váltja ki, amíg a tolerancia kialakul, azaz. az inhibitor csökkenéséig, majd megszűnéséig. A terápia folyamatos, átlagosan 10-18 hónapig tart. Az ilyen kezelést csak az antihemofil terápia területén jártas szakemberek végezhetik.

A liofilizátum feloldása

1. Az oldószert (injekcióhoz való víz) és a liofilizátumot zárt injekciós üvegekben javasolt a szobahőmérséklet. Ha melegítés előtt oldószert használunk vízfürdő, ügyelni kell arra, hogy a víz ne kerüljön érintkezésbe a gumidugókkal vagy az injekciós üveg kupakjaival. A vízfürdő hőmérséklete nem haladhatja meg a 37°C-ot.

2. Távolítsa el a védőkupakokat a liofilizátummal és vízzel ellátott palackokról, fertőtlenítse mindkét palack gumidugóját valamelyik fertőtlenítő kendővel.

3. Oldja ki a kétvégű tű rövid végét a műanyag csomagolásból, szúrja át vele a vizes palack dugóját, és ütközésig nyomja le.

4. Fordítsa meg a vizes palackot a tűvel, engedje el a kétvégű tű hosszú végét, szúrja át vele a liofilizátumot tartalmazó injekciós üveg dugóját, és nyomja le ütközésig. A liofilizátum injekciós üvegében lévő vákuum beszívja a vizet.

5. A tűvel együtt válassza le a vízzel ellátott palackot a liofilizátumot tartalmazó palackról. A gyógyszer gyorsan feloldódik; ehhez az üveget kissé meg kell rázni. Csak színtelen, átlátszó vagy enyhén opálos üledék nélküli oldat használható.

Az oldat elkészítésének és beadásának szabályai

Elővigyázatosságból az Octanate beadása előtt és alatt ellenőrizni kell a pulzusszámot. A pulzus kifejezett gyorsulása esetén lassítsa le vagy hagyja abba a gyógyszer adagolását.

A koncentrátum utasítás szerinti feloldása után távolítsa el a szűrőtűről a védőbevonatot, és helyezze a koncentrátummal együtt a palackba. Távolítsa el a kupakot a szűrőtűről, és rögzítse a fecskendőt. Fordítsa fejjel lefelé az injekciós üveget a fecskendővel, és szívja fel az oldatot a fecskendőbe. Az injekciókat az aszepszis és az antiszepszis szabályai szerint kell végrehajtani. Válassza le a szűrőtűt a fecskendőről, és csatlakoztassa helyette a pillangótűt.

Az oldatot intravénásan, lassan, 2-3 ml/perc sebességgel kell beadni.

Ha egynél több Octanate palackot használ, a fecskendő és a pillangótű újra felhasználható.

A szűrőtű csak egyszeri használatra szolgál. Mindig használjon szűrős tűt, hogy az elkészített oldatot a fecskendőbe szívja.

A gyógyszer fel nem használt oldatát a hatályos előírásoknak megfelelően kell megsemmisíteni.

Túladagolás

Annak ellenére, hogy a VIII-as faktor túladagolásának tüneteit nem figyelték meg, nem javasolt az előírt adag túllépése.

gyógyszerkölcsönhatás

Adatok az Octanate másokkal való kölcsönhatásáról gyógyszerek hiányzó.

Terhesség és szoptatás

A gyógyszer terhesség és szoptatás alatt történő alkalmazása lehetséges olyan esetekben, amikor a terápia várható előnye az anya számára meghaladja a lehetséges kockázat magzatnak vagy csecsemőnek.

Mellékhatások

Allergiás reakciók: ritkán - angioödéma, égő érzés az injekció beadásának területén, hidegrázás, hőhullámok, csalánkiütés (beleértve a generalizált), fejfájás, vérnyomáscsökkenés, letargia, hányinger, hányás, szorongás, tachycardia, nyomásérzés mellkas, légszomj, láz, borzongás érzése. Nagyon ritkán (<1/10 000) эти симптомы могут прогрессировать до развития тяжелой анафилактической реакции, включая шок.

A hemofíliában szenvedő betegeknél antitestek (gátlók) képződhetnek a VIII-as véralvadási faktor ellen.<1/1000). Наличие ингибиторов приводит к неудовлетворительному клиническому ответу на введение препарата. В таких случаях рекомендуется обращаться в специализированные гематологические/гемофильные центры. Неоходимо обследовать пациента на наличие антител с помощью соответствующих методов (тест Бетезда).

Tárolási feltételek

A gyógyszert fénytől védett helyen, gyermekektől elzárva, 2 ° C és 25 ° C közötti hőmérsékleten kell tárolni; ne fagyjon meg. Felhasználhatósági idő - 3 év.

Különleges utasítások

A gyógyszer alkalmazásakor túlérzékenységi reakciók kialakulása lehetséges, akárcsak más fehérje eredetű injekciós gyógyszerek alkalmazásakor.

A VIII-as véralvadási faktoron kívül a gyógyszer nyomokban más vérfehérjéket is tartalmaz. A túlérzékenységi reakciók korai jelei a csalánkiütés, a mellkasi szorító érzés, a légszomj, az alacsony vérnyomás és az anafilaxia (súlyos allergiás reakció). Ha ezek a tünetek jelentkeznek, a gyógyszer alkalmazását azonnal le kell állítani. Sokk kialakulása esetén a sokk elleni terápia korszerű módszereit kell alkalmazni.

Az emberi vérből vagy plazmából származó gyógyszerek esetében nem zárható ki teljesen a fertőző ágensek átvitelének lehetősége. Ez vonatkozik az ismeretlen betegségek kórokozóira is. A fertőző ágensek átvitelének kockázatát azonban a következő intézkedések csökkentik:

- donorok kiválasztása orvosi interjúkkal és vizsgálatokkal, valamint plazmakészletek szűrése hepatitis B vírus (HBV) antigének, HIV és hepatitis C vírus (HCV) elleni antitestek jelenlétére;

— a plazmakészletek elemzése a HCV genetikai anyag jelenlétére vonatkozóan;

— a gyártási folyamatban szereplő inaktiválási/eltávolítási eljárások, amelyeket vírusmodellben validáltak. Ezek az eljárások hatékonyak a HIV, a hepatitis A vírus (HAV), a HBV és a HCV esetében. Az inaktiválási/eltávolítási eljárások korlátozottak lehetnek a burokkal nem rendelkező vírusokkal szemben, amelyek közül az egyik a parvovírus B19. A parvovírus B19 súlyos reakciókat okozhat szeronegatív terhes nőknél (intrauterin fertőzés) és olyan embereknél, akiknek immunhiánya van, vagy akiknél fokozott a vörösvértest-termelés (például hemolitikus vérszegénységben).

Plazma-eredetű VIII-as véralvadási faktor koncentrátum beadásakor ajánlott a hepatitis A és hepatitis B elleni védőoltás.

Allergiás reakciók esetén a beteget meg kell vizsgálni gátlószer jelenlétére. Azoknál a betegeknél, akiknél a VIII-as véralvadási faktor inhibitorai vannak, növelhetik az anafilaxiás reakciók kockázatát az ezt követő Octanate-kezelés során. Ezért a meghatározott gyógyszer első alkalmazását a kezelőorvos felírása szerint orvosi felügyelet mellett kell elvégezni, olyan körülmények között, amelyek biztosítják a szakképzett orvosi ellátást allergiás reakciók esetén.

Ne használjon más gyógyszert az Octanate alkalmazása során.

Az Octanate bevezetéséhez csak a csomagban található injekciós eszközöket szabad használni. Egyes injekciós eszközök belső felületén a VIII-as véralvadási faktor adszorpciója lehetséges, ami a kezelés hatékonyságának csökkenéséhez vezet.

Alkalmazás gyermekkorban

Alkalmazása az adagolási rend szerint lehetséges.

Tanulmányi információk

Különleges utasítások: Ne végezzen vizsgálatot akut betegségi időszakokban és véralvadásgátló gyógyszerek szedése közben (legalább 30 napnak kell eltelnie a lemondás után). A kutatáshoz szükséges bioanyagot éhgyomorra kell bevenni. Az utolsó étkezés és a vérvétel között legalább 8 óra teljen el.

A KUTATÁS ELŐKÉSZÜLÉSÉNEK ÁLTALÁNOS SZABÁLYAI:

1. A legtöbb vizsgálatnál ajánlott a véradás reggel 8 és 11 óra között, éhgyomorra (az utolsó étkezés és a vérvétel között legalább 8 óra teljen el, vizet a szokásos módon ihat) a tanulmány előestéjén egy könnyű vacsora zsíros ételek fogyasztásának korlátozásával. Fertőzési vizsgálatokhoz és sürgősségi vizsgálatokhoz az utolsó étkezés után 4-6 órával megengedett a véradás.

2. FIGYELEM! Számos vizsgálatra való felkészülés speciális szabályai: szigorúan éhgyomorra, 12-14 óra koplalás után vért kell adni gasztrin-17, lipidprofil (összkoleszterin, HDL koleszterin, LDL koleszterin, VLDL koleszterin, trigliceridek, lipoprotein (a), apolipo-protein A1, apolipoprotein B); glükóz tolerancia tesztet végeznek reggel éhgyomorra, 12-16 óra koplalás után.

3. A vizsgálat előestéjén (24 órán belül) zárja ki az alkoholfogyasztást, az intenzív fizikai aktivitást, a gyógyszeres kezelést (az orvossal egyeztetett módon).

4. Véradás előtt 1-2 órával tartózkodjunk a dohányzástól, ne igyunk gyümölcslevet, teát, kávét, ihatunk szénsavmentes vizet. Távolítsa el a fizikai stresszt (futás, gyors lépcsőzés), érzelmi izgalom. Véradás előtt 15 perccel ajánlott pihenni és lenyugodni.

5. Fizikoterápiás eljárások, műszeres vizsgálatok, röntgen- és ultrahangvizsgálatok, masszázs és egyéb gyógyászati ​​beavatkozások után azonnal nem szabad vért adni laboratóriumi vizsgálatra.

6. A laboratóriumi paraméterek dinamikai megfigyelésekor ajánlott ismételt vizsgálatokat végezni azonos körülmények között - ugyanabban a laboratóriumban, a nap azonos szakában adjunk vért stb.

7. A kutatáshoz szükséges vért a gyógyszerszedés megkezdése előtt, vagy legkorábban a leállításuk után 10-14 nappal kell adni. Bármely gyógyszerrel végzett kezelés hatékonyságának ellenőrzése érdekében vizsgálatot kell végezni 7-14 nappal a gyógyszer utolsó adagja után.

Ha gyógyszert szed, feltétlenül tájékoztassa erről kezelőorvosát.

ÁLTALÁNOS GYÓGYSZERÉSZETI ENGEDÉLY

Először mutatták be

Ez a gyógyszerkönyvi monográfia az emberi véralvadási rendszer I., II., VII., VIII., IX., X., XI., von Willebrand faktor, antitrombin III aktivitásának meghatározására szolgáló módszerekre vonatkozik plazmában és vérkészítményekben.

ÁLTALÁNOS RENDELKEZÉSEK

A véralvadási faktorok aktivitásának meghatározása 2 megközelítésen alapul:

1. Egy lépéses módszer. A véralvadási folyamat helyreállítása faktorhiányos plazmában e faktor preparátumának hozzáadása után (alvadási módszer).
2. kétlépcsős módszer. Az első lépésben, egy specifikus kofaktor alkalmazásával, aktiváljuk a II-es vagy X-es faktor proteolitikus aktivitását, így aktivált IIa vagy Xa faktor képződik. A második szakaszban a képződött aktivált faktor mennyiségét egy specifikus kromogén peptid hasítási reakciója határozza meg (kromogén módszer).

A kromogén módszert kétféleképpen lehet végrehajtani: a kromogén képződés kinetikájával aktivált faktor hatására vagy a kromogén felhalmozódásának végpontjával egy bizonyos inkubációs időre.

Mindkét módszer megvalósításához használhatók műanyag kémcsövek, tányérok, optikai-mechanikus, mechanikus félautomata és teljesen automatizált koagulométerek.

Minden módszernél az aktivitást úgy számítják ki, hogy a vizsgálati minta aktivitását összehasonlítják a NIBSC nemzetközi szabvány vagy egy, a nemzetközi aktivitási egységekben (IU) kifejezett nemzetközi standarddal kalibrált másodlagos alvadási faktor standard aktivitásával. A nemzetközi szabvány NE-ben kifejezett egyenértékűségét a WHO állapítja meg. 1 NE-hez (100%) vegyük ki a véralvadási faktor aktivitását 1,0 ml friss normál egyesített vérplazmában 300 donortól. Az aktivitás kifejezhető NE/ml, NE/fiola, NE/mg fehérje mértékegységben és a gyártó által megadott mennyiség százalékában.

TÉNYEZŐK

Tényezőén (fibrinogén)

Alvadási módszer

A fibrinogén aktivitás meghatározása Clauss módszerrel történik.

A módszer elve

Amikor trombint adunk egy fibrinogént tartalmazó mintához, fibrinrögképződés figyelhető meg. Nagy aktivitású trombin (~10 NE/ml) és alacsony fibrinogén koncentrációjú (100 mg/dcl alatti) minták alkalmazásakor lineáris összefüggést kaphatunk.

A fibrinogén meghatározására kereskedelmi tesztrendszereket használnak, amelyek tartalmaznak egy heparin inhibitort tartalmazó trombin reagenst és egy mintahígító puffert vagy egy kereskedelmi trombin reagenst.

A fibrinogén koncentrációt mg/dcl-ben fejezzük ki. A kalibrációs grafikon elkészítéséhez standard fibrinogén mintát vagy nemzetközi szabvány szerint tanúsított plazma kalibrátort használnak. A standard mintát vagy a plazma-kalibrátor mintáját desztillált vízben kell feloldani az utasításoknak megfelelően. Készítsen 5 sorozathígítást a standard mintából, ~100 mg/dcl koncentrációtól kezdve, pH = 7,3 ± 0,1 mintahígító pufferrel. Az analízist 37°C hőmérsékleten végezzük a készletre vonatkozó utasítások szerint. Minden egyes hígításnál háromszor határozzuk meg a vérrögképződés idejét. A logaritmikus koordinátákban kapott eredmények alapján kalibrációs grafikont készítünk a vérrögképződés idejének fibrinogén koncentrációtól való függésére.

Készítsen 2 hígítást a vizsgálati mintából 100 mg/dl alatt. Minden hígításnál háromszor határoztuk meg a vérrögképződés idejét. A fibrinogén mennyiségét az egyes hígításokban a kalibrációs grafikon határozza meg.

TényezőII(trombin)

1. Alvadási módszer

A II-es faktor aktivitásának meghatározását szubsztrátként II-es faktor-hiányos humán plazma felhasználásával végezzük. A véralvadási folyamat aktiválásához tromboplasztint adnak a kalcium keverékhez.

A standard és a készítmények hígításához 7,3 ± 0,1 pH-jú NaCl-imidazol puffert használjon 0,1% marha- vagy humán albumin hozzáadásával. A kalibrációs grafikon felépítéséhez a II. faktor standard sorozathígításait készítjük el a 0,3-1 NE/ml aktivitási tartományban. A gyógyszert 1 NE / ml-nél kisebb koncentrációra hígítjuk. Elemezze a gyógyszer 3 hígítását. Minden mintánál legalább 2 alkalommal meg kell mérni az alvadási időt. A mérést a gyógyszer hígítása után 1 órán belül kell elvégezni.

Az analízist (37±0,5) °C hőmérsékleten végezzük. Adjon 50 µl II-es faktor hiányos plazmát és 50 µl standard vagy készítmény hígítást egy műanyag csőbe. A keveréket (37 ± 0,5) °C-on 120-240 másodpercig inkubáljuk. Az alvadási időt attól a pillanattól számítjuk, amikor 200 μl kalcium-tromboplasztint (37±0,5)°C-ra előmelegített keverékhez adunk. Az elemzés beállításának technikájától függően a reagensek térfogata a megfelelő arányban változhat.

A kalibrációs grafikon féllogaritmikus koordinátákból épül fel. A logaritmikus abszcissza tengelyen a II. faktor aktivitási értékeit, az ordináta tengelyen pedig a standard megfelelő hígításainak alvadási idejét ábrázoljuk. A II. faktor aktivitását a vizsgálati minta minden egyes hígítására a kalibrációs görbe alapján találjuk meg. FII tevékenység ( DE

k

1. Kromogén módszer

A módszer a IIa faktor specifikus aktiválása után képződő IIa faktor enzimatikus aktivitásának összehasonlításán alapul egy specifikus kromogén peptid szubsztráthoz viszonyítva, amely azonos aktivitású standard mintával (nemzetközi vagy hasonló).

A II. faktort a viperaméregből izolált ecarin aktivátor aktiválja. Az aktivált II-es faktor (trombin) szelektíven hasítja a kromogén szubsztrátot (H-D-fenilalanin-L-pipekolil-L-arginin-4-nitroanilid-dihidroklorid, 4-toluolszulfonil-glicil-prolil-L-arginin-4-nitroanilid, H-D-fenilalanin-L-pipekolil-L-arginin-4-nitroanilid - L-arginin-4-nitroanilid, D-ciklohexil-glicil-L-alanil-L-arginin-4-nitroanilid-diacetát) képződik P-nitroanilin. A reakció kinetikáját fotometriai úton vizsgáljuk 405 nm-en. Az optikai sűrűség értéke arányos a II. faktor aktivitásával.

A II. faktor kromogén módszerrel történő meghatározása speciális tesztkészletek segítségével történik. Az elemzést a készletre vonatkozó utasításoknak megfelelően végezzük. A standard mintát és a készítményt előhígítottuk II. faktor hiányos plazmával ~ 1 NE/ml koncentrációra (alaphígítás). A főhígításból 3 hígítást készítünk a standard mintából és 3 hígítást a készítményből Trisz-só pufferoldattal (pH 8,4). A standard minta minden hígítását kétszer határozzuk meg, a kapott értékeket használják fel a kalibrációs grafikon felépítésére. A vizsgálati mintákat háromszor határozzuk meg.

A vizsgálatokat kézi üzemmódban végezzük mikrolemez és spektrofotométer segítségével, a hőmérsékletet 37 ± 0,5 °C tartományban tartva, vagy automatikus üzemmódban koagulométerrel.

Kézi teszteléshez a vizsgálati készítmény vagy a standard minta minden hígításából 25 µl-t adunk a mikrolemez üregeibe. 125 µl hígítópuffert és 25 µl ecarint adunk minden egyes lyukhoz, és (37±0,5) °C-on 2 percig inkubáljuk. Az inkubációs idő végén 25 µl IIa faktor kromogén szubsztrátot adunk minden egyes mérőhelyhez.

DE/perc).

Ha a folyamatos abszorbanciamérés nem lehetséges, határozza meg az abszorbanciát 405 nm-en egymást követő időközönként (pl. 40 s), és ábrázolja az abszorbanciát az idő függvényében, és számítsa ki a ∆-t DEDE

1. A trombin hiányának vizsgálata

A teszteléshez az utasításoknak megfelelően helyreállított készítmény oldatát készítik. Ha van a készítményben heparin, akkor azt protamin-szulfát hozzáadásával semlegesítik 10 μg protamin-szulfát/1 NE heparin arányban.

Fibrinogén oldat készítése

0,3 g fibrinogént feloldunk 100 ml-ben, összekeverjük és 15-20 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk.

Az oldat eltarthatósága 1 hónap 2-8°C hőmérsékleten.

Trombin oldat készítése

A liofilizátumot a gyártó utasításai szerint feloldjuk, 15-20 percig szobahőmérsékleten tartjuk, és 0,9%-os nátrium-klorid-oldattal 1 NE/ml trombintartalomig hígítjuk.

Az oldat eltarthatósága 6 hónap mínusz 20°C hőmérsékleten. A felolvasztás után az oldatot nem lehet újra lefagyasztani.

Definíció haladás

A feloldott gyógyszerből és a fibrinogén oldatból egyenlő mennyiséget adunk 2 kémcsőbe. A harmadik csőbe (kontrollminta) egyenlő térfogatú trombinoldatot és fibrinogén oldatot adunk, a csövek tartalmát forgó mozdulatokkal összekeverjük. Az egyik kémcsövet a feloldott gyógyszerrel 37 °C-os vízfürdőben 6 órán át, a másik, a feloldott gyógyszert tartalmazó csövet szobahőmérsékleten 24 órán át inkubáljuk.

A kontrollmintát 37 °C-os vízfürdőben inkubáljuk, és feljegyezzük a vérrögképződés idejét.

Az eredmények elfogadhatóságának kritériuma a koaguláció a kontroll mintában 30 másodperc után.

TényezőVII

1. Alvadási módszer

A VII-es faktor aktivitásának meghatározása VII-es faktor hiányos humán plazma felhasználásával történik. A véralvadási folyamat aktiválásához tromboplasztint adnak a kalcium keverékhez.

A standard és a készítmények hígításához NaCl-imidazol puffert (pH 7,3) használunk 0,1%-os humán vagy marha albumin oldat hozzáadásával. A kalibrációs görbe felépítéséhez a VII. faktor mintastandardból sorozathígításokat készítünk 0,3-1 NE/ml tartományban. A gyógyszert 1 NE / ml-nél kisebb koncentrációra hígítjuk. Elemezze a gyógyszer 3 hígítását. Minden mintánál legalább 2 alkalommal meg kell mérni az alvadási időt. A mérést közvetlenül a gyógyszer hígítása után kell elvégezni.

Az analízist (37±0,5) °C hőmérsékleten végezzük. 50 µl VII-es faktor hiányos plazmát és 50 µl standard vagy gyógyszer hígítását adunk egy műanyag csőbe. A keveréket (37±0,5) °C-on 120-240 másodpercig inkubáljuk. Az alvadási időt attól a pillanattól számítjuk, amikor 200 μl kalcium-tromboplasztint (37±0,5)°C-ra előmelegített keverékhez adunk. Az elemzés beállításának technikájától függően a reagensek térfogata a megfelelő arányban változhat.

A kalibrációs grafikon féllogaritmikus koordinátákból épül fel. A logaritmikus abszcissza tengelyen a VII. faktor aktivitási értékeit az ordináta tengely mentén ábrázoljuk, a standard megfelelő hígításainak alvadási idejét. A VII. faktor aktivitását a vizsgálati minta minden egyes hígítására a kalibrációs görbe alapján találjuk meg. FVII tevékenység ( DE) a tesztmintában a következő képlettel számítjuk ki:

- a vizsgálati minta megfelelő hígításának aktivitása a kalibrációs grafikonon;

k- a vizsgálati minta hígítása.

1. Kromogén módszer

A szöveti faktor (TF) és a Ca 2+ -ionok jelenlétében a VII-es faktor aktiválódik (FVIIa képződés). Az FVIIa, TF, Ca 2+ és egy foszfolipid komplexe aktiválja az X faktort. Az aktivált X faktor (FXa) szelektíven hasítja az FXa-1 metoxikarbonil-D-ciklohexilalanil-glicil-L-arginin-kromogén szubsztrátot. n-nitroanilid-acetát képződik P-nitroanilin. A minta vizsgálata fotometriás módszerrel történik 405 nm-en. Az abszorbancia érték (vagy az abszorbancia növekedése) arányos a VII. faktor mennyiségével.

A VII-es faktor kromogén módszerrel történő meghatározása speciális tesztkészletek segítségével történik. Az elemzést a készletre vonatkozó utasításoknak megfelelően végezzük. A standard mintát és a készítményt előhígítjuk VII-es faktor hiányos plazmával ~ 1 NE/ml koncentrációra (alaphígítás). A főhígításból 3 hígítást készítünk a standard mintából és 3 hígítást a trisz-sóoldattal pH 7,3-8,0 pufferrel pufferoldattal, 0,1% humán vagy marha albumin hozzáadásával. A standard minta minden hígítását kétszer határozzuk meg, a kapott értékeket használják fel a kalibrációs grafikon felépítésére. A vizsgálati mintákat háromszor határozzuk meg.

A vizsgálati készítmény vagy a standard minta hígításait hozzáadjuk a mikrolemez üregeihez, hozzáadjuk a kalcium-tromboplasztin keveréket, a X-es faktor oldatot, és (37 ± 0,5) °C hőmérsékleten 2-5 percig inkubáljuk, majd a faktort Xa kromogén szubsztrát oldatot adunk hozzá.

Mérjük meg az optikai sűrűség változását 405 nm hullámhosszon, akár kinetikus módban, vagy szakítsuk meg a hidrolízis reakciót 3-15 perc múlva 20%-os (v/v) jégecet hozzáadásával, és mérjük meg az optikai sűrűséget.

TényezőVIII

1. Alvadási módszer

A VIII-as faktor aktivitásának meghatározása VIII-as faktor hiányos humán plazma felhasználásával történik. A koagulációhoz szükséges foszfolipidek forrása az APTT reagens.

A standard és a készítmények hígításához NaCl-imidazol pufferoldatot (pH (7,3 ± 0,1) használunk, 0,1%-os humán vagy marha albumin oldat hozzáadásával. A kalibrációs grafikon felépítéséhez a standard sorozathígításait készítjük el, 2 NE/ml koncentrációtól kezdve. A gyógyszert ~ 0,5-2 NE / ml koncentrációra hígítjuk. Elemezze a gyógyszer 3 hígítását. Minden mintánál legalább 2 alkalommal meg kell mérni az alvadási időt. A mérést a gyógyszer hígítása után 1 órán belül kell elvégezni.

Az analízist (37±0,5) °C hőmérsékleten végezzük. 100 µl VIII-as faktor-hiányos plazmát, 100 µl standard vagy gyógyszer hígítását és 100 µl APTT reagenst adunk egy műanyag csőbe, és (37±0,5) °C hőmérsékleten 2 percig inkubáljuk. Az alvadási időt attól a pillanattól számítjuk, amikor 100 µl 0,025 M kalcium-klorid oldatot adunk a keverékhez, amelyet (37 ± 0,5) °C-ra előmelegítünk. Az elemzés beállításának technikájától függően a reagensek térfogata a megfelelő arányban változhat.

A kalibrációs grafikon féllogaritmikus koordinátákból épül fel. A VIII-as faktor aktivitásának értékeit a logaritmikus abszcissza tengely mentén, a standard megfelelő hígításainak alvadási idejét pedig az ordináta tengely mentén ábrázoljuk. A VIII. faktor aktivitását a vizsgálati minta minden egyes hígítására a kalibrációs görbe alapján találjuk meg. VIII. aktivitás ( DE) a tesztmintában a következő képlettel számítjuk ki:

- a vizsgált gyógyszer megfelelő hígításának aktivitása a kalibrációs grafikonon;

k- a vizsgálati minta hígítása.

1. Kromogén módszer

A VIII-as faktor mennyiségi meghatározását egy sor reagens segítségével végezzük, amelyben a VIII-as faktor a IXa faktor kofaktora, amikor az X-es faktor aktiválódik és Xa-t képez, amely lehasítja a kromogén szubsztrátot.

A módszer elve

Ca 2+ -ionok és foszfolipidek jelenlétében a X faktort a IXa faktor Xa-vá aktiválja. Az X-es faktor feleslegében és az optimális mennyiségű Ca 2+-ban, foszfolipidekben és IXa-ban a X-es faktor aktiválódási sebessége lineárisan függ a VIII-as faktor mennyiségétől. A Xa faktor hidrolizálja az S-2765 kromogén szubsztrátot (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA), hogy felszabadítsa a pNA kromogén csoportját, amelynek színét spektrofotometriásan rögzítjük 405 nm-en. A képződött Xa faktor mennyisége, és így a festődés intenzitása arányos a mintában lévő VIII-as faktor aktivitásával.

A VIII-as faktor aktivitású reagenskészlet a gyártó által meghatározott ideig stabil 2 és 8 °C közötti tárolási hőmérsékleten.

A reagenskészlet tartalma:

1. 7,7 mg kromogén S-2765 szintetikus I-2581 trombin inhibitorral kiegészítve. A reagenst 6,0 ml steril injekcióhoz való vízben kell feloldani. Az elkészített oldat 2-8°C-on 1 hónapig stabil. Használat előtt 37°C-ra melegítjük.
2. Szarvasmarha-faktor reagens: 0,3 U IX-es faktor, 2,7 IU X-es faktor és 1 NIH U trombin, liofilizálva 40 mmol CaCl 2 és 0,2 mmol foszfolipidek jelenlétében. A reagenst 2,0 ml steril injekcióhoz való vízben kell feloldani. Az elkészített oldat 12 órán át stabil 2-8°C-on, 2 hétig mínusz 30°C-on és 1 hónapig mínusz 80°C-on. Ne tárolja mínusz 20°C-on. Használat előtt melegítse fel 37°C-ra kb.
3. Koncentrátum × 10 Tris puffer. 2-8°C-on 1 hónapig stabil. Használat előtt hígítsa fel steril injekcióhoz való vízzel 1:10 arányban.

További reagensek:

1. Nemzetközi szabvány – humán VIII-as faktor koncentrátum oldat (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std. BRP H 0920000) vagy a nemzetközi VIII-as faktor szabvány szerint kalibrált plazma.
2. Normál vagy patológiás plazma a nemzetközi VIII-as faktor szabvány szerint kalibrálva.
3. 0,9%-os nátrium-klorid oldat.
4. 20% ecetsav vagy 2% citromsav (a Chromogen Storage Endpoint Method-ban használt).
5. Víz laboratórium ionmentesített

Felszerelés:

1. Műanyag kémcsövek;
2. mikrolemezek;
3. Termosztát 37 o C;
4. Spektrofotométer 405 nm vagy mikrolemez olvasó 405 nm;
5. Kalibrált pipetták;
6. Örvény;
7. Stopperóra.

A vizsgálati mintát a meghatározás előtt a várt 1 NE/ml aktivitásra hígítjuk.

A meghatározás végezhető kinetikus módban és végponton, kémcsövekben (makromódszer) és mikrolemezeken (mikromódszer).

Kalibráció

Minden egyes meghatározás során kalibrációs görbe készül. A standard minta hígítása 2 lépésben történik: előzetes hígítás 1–2 NE/ml aktivitásra, és végső hígítások a 0–2 NE/ml tartományba eső kalibrációs függőség kialakításához. A hígítást követően a meghatározást 30 percen belül el kell végezni.

Definíció haladás

Meghatározás kémcsövekben

200 µl hígított standard, kontroll vagy vizsgálati mintát adunk a kémcsövekbe, 3-4 percig 37 °C-on inkubáljuk, 50 µl előmelegített faktorreagenst adunk hozzá, 2-4 percig inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten és 50 µl kromogén oldatot adunk hozzá.

Meghatározás mikrolemezekben

50 µl hígított standard-, kontroll- vagy tesztmintát adunk a mikrolemez üregeibe, 3-4 percig 37°C-on inkubáljuk, 50 µl előmelegített faktorreagenst adunk hozzá, 2-4 percig inkubáljuk. 37 °C hőmérséklet és 50 µl kromogén oldat.

Kinetikus meghatározási módszer

A kromogén oldat 2-10 perces hozzáadása után az oldat optikai sűrűségének változását 405 nm-en mérjük.

Definíció végpont szerint

A kromogén oldat hozzáadása után az elegyet 37 °C-on 2-10 percig tovább inkubáljuk, majd 50 μl 20%-os ecetsavat vagy 2%-os citromsavat adunk hozzá a reakció leállítására. Mérjük meg az oldat optikai sűrűségét a pufferrel szemben 405 nm-en.

Számítások

Ábrázolja a standardoldat hígításainak percenkénti optikai sűrűségének (a kinetikai módszerhez) vagy optikai sűrűségének (a végpont meghatározásához) változását a VIII-as faktor koncentrációján. A vizsgálati mintában lévő aktivitást a kalibrációs görbéből határozzuk meg, figyelembe véve a minta előzetes hígítását.

TényezőIX

1. Alvadási módszer

A IX-es faktor aktivitásának meghatározása IX-es faktor hiányos humán plazma felhasználásával történik. A koagulációhoz szükséges foszfolipidek forrása az APTT reagens.

A standard és a készítmények hígításához NaCl-imidazol puffert (pH 7,3) használunk 0,1%-os szarvasmarha- vagy humán albumin oldat hozzáadásával. A kalibrációs grafikon felépítéséhez a standard sorozathígításait készítjük el 0,3-1 NE/ml tartományban. A gyógyszert 1 NE / ml-nél kisebb koncentrációra hígítjuk. Elemezze a gyógyszer 3 hígítását. Minden mintánál legalább 2 alkalommal meg kell mérni az alvadási időt. A mérést a gyógyszer hígítása után 1 órán belül kell elvégezni.

Az analízist (37±0,5) °C hőmérsékleten végezzük. 100 µl IX-es faktor-hiányos plazmát, 100 µl standard- vagy gyógyszerhígítást és 100 µl APTT-reagenst adunk egy műanyag csőbe, és (37 ± 0,5) °C-on 2 percig inkubáljuk. Az alvadási időt 100 µl (37 ± 0,5) °C-ra előmelegített 0,025 M kalcium-klorid oldat hozzáadásának pillanatától számítjuk. Az elemzés beállításának technikájától függően a reagensek térfogata a megfelelő arányban változhat.

A kalibrációs grafikon féllogaritmikus koordinátákból épül fel. A logaritmikus abszcissza tengelyen a IX-es faktor aktivitási értékeit, az ordináta tengelyen a standard megfelelő hígításainak alvadási idejét ábrázoljuk. A IX. faktor aktivitását a vizsgálati minta minden egyes hígítására a kalibrációs görbe alapján találjuk meg. FIX tevékenység ( DE) a tesztmintában a következő képlettel számítjuk ki:

- a vizsgálati minta megfelelő hígításának aktivitása a kalibrációs grafikonon;

k- a vizsgálati minta hígítása.

Tényezőx

1. Alvadási módszer

Az X faktor aktivitásának meghatározása X faktor hiányos humán plazmával történik, a koagulációs folyamatot pedig tromboplasztin hozzáadásával aktiválják a kalcium keverékhez.

A standard és a készítmények hígításához használjon NaCl-imidazol pufferoldatot, pH 7,3 0,1%-os humán vagy marha albumin oldat hozzáadásával. Kalibrációs grafikon felépítéséhez készítsen sorozathígításokat az X faktor standardból 0,3-1 NE/ml tartományban. A gyógyszert 1 NE / ml-nél kisebb koncentrációra hígítjuk. Elemezze a gyógyszer 3 hígítását. Minden mintánál legalább 2 alkalommal meg kell mérni az alvadási időt. A mérést közvetlenül a gyógyszer hígítása után kell elvégezni.

Az analízist (37±0,5) °C hőmérsékleten végezzük. Adjon hozzá 50 µl X-es faktor hiányos plazmát és 50 µl standard vagy készítmény hígítást egy műanyag csőbe. A keveréket (37±0,5) °C-on 120-240 másodpercig inkubáljuk. Az alvadási időt attól a pillanattól számítjuk, amikor 200 μl kalcium-tromboplasztint (37±0,5)°C-ra előmelegített keverékhez adunk. Az elemzés beállításának technikájától függően a reagensek térfogata a megfelelő arányban változhat.

A kalibrációs grafikon féllogaritmikus koordinátákból épül fel. A logaritmikus abszcissza tengely az X faktor aktivitási értékeit ábrázolja , az y tengely mentén a standard megfelelő hígításainak alvadási ideje. Az X faktor aktivitását a vizsgálati minta minden egyes hígítására a kalibrációs görbe alapján találjuk meg. X faktor aktivitás ( DE) a tesztmintában a következő képlettel számítjuk ki:

- a vizsgálati minta megfelelő hígításának aktivitása a kalibrációs grafikonon;

k- a vizsgálati minta hígítása.

1. Kromogén módszer

Az X faktort egy kígyóméregből származó FX aktivátor aktiválja. Az aktivált X faktor (FXa) szelektíven hasítja az FXa-1 N-α-benziloxikarbonil-D-arginil-L-glicil-L-arginin-4-nitroanilid-dihidroklorid, N-benzoil-L-izoleucil-L-glutamil-glicil kromogén szubsztrátot. - L-arginin-4-nitroanilid-hidroklorid, metánszulfonil-D-leucil-glicil-L-arginin-4-nitroanilid, metoxikarbonil-D-ciklohexil-alanil-glicil-L-arginin-4-nitroanilid-acetát P-nitroanilin. A mintákat fotometriailag 405 nm-en vizsgáljuk. Az X faktor mennyisége arányos az oldat optikai sűrűségének növekedésével.

Az X faktor kromogén módszerrel történő meghatározása speciális tesztkészletek segítségével történik. Az elemzést a készletre vonatkozó utasításoknak megfelelően végezzük. A standard mintát és a készítményt előhígítjuk X-faktor-hiányos plazmával ~ 1 NE/ml koncentrációra (alaphígítás). A főhígításból pufferoldattal 3 hígítást készítünk a standard mintából (az utasítások szerint) és 3 hígítást a gyógyszerből. A standard minta minden hígítását kétszer határozzuk meg, a kapott értékeket használják fel a kalibrációs grafikon felépítésére. A vizsgálati mintákat háromszor határozzuk meg.

A vizsgálatokat manuálisan, műanyag csövekkel vagy mikrolemezekkel (37±0,5)°C hőmérsékleten, vagy automatikusan, koagulométerrel végezzük.

Kézi teszteléshez a tesztkészítmény vagy a standard minta minden hígításából 12,5 µl-t adunk a mikrolemez üregeibe, 25 µl specifikus X-es faktor aktivátort adunk a Russell-vipera mérgéből, és a hőmérsékleten inkubáljuk ( 37 ± 0,5) °C-on 90 másodpercig, majd minden lyukba 150 µl X-es faktor kromogén szubsztrát munkahígítását adjuk.

Határozza meg az abszorbancia változásának sebességét 405 nm hullámhosszon, folyamatosan 3 percig, és számítsa ki az abszorbancia változásának átlagos sebességét (∆ DE/perc) vagy mérje meg az abszorbanciát 405 nm hullámhosszon egymást követő időintervallumokban (például 30 s után), és ábrázolja az abszorbanciát az idő függvényében, és kiszámítja a ∆ DE/min az egyenes dőlésszögeként. Az értékekből∆ DE A standard minta és a vizsgált gyógyszer minden egyes hígításából /percenként kiszámítjuk a vizsgált hatóanyag aktivitását.

Willebrand-faktor

A von Willebrand faktor aktivitásának meghatározását agglutinációs módszerrel vagy enzim immunoassay módszerrel végezzük.

A von Willebrand faktor aktivitását úgy határozzuk meg, hogy összehasonlítjuk aktivitását egy standard minta aktivitásával.

Agglutinációs módszer

A módszer a von Willebrand faktor koenzimaktivitásának meghatározásán alapul a vérlemezke-szuszpenzió risztocetin A jelenlétében történő agglutinációja során.

A vizsgálat elvégezhető kvantitatívan automatizált berendezéssel, vagy félkvantitatívan az agglutináció vizuális értékelésével egy sor hígításban.

Félkvantitatív módszer

A standard mintából és a gyógyszer feloldott oldatából sorozathígításokat készítünk 0,9%-os nátrium-klorid 1-5%-os humán albumin oldattal a várt von Willebrand-faktor 0,5, 1,0 és 2,0 NE/ml-ig. A standard minta és a vizsgálati készítmény minden hígításából 0,05 ml-t üveglemezre viszünk, 0,1 ml risztocetint tartalmazó vérlemezke-szuszpenziót adunk hozzá, és 1 percig keverjük. A hígítóoldatot negatív kontrollként használjuk. 1 perces szobahőmérsékleten végzett inkubálás után vizuálisan értékeljük a vérlemezke-agglutinációt. A maximális hígítás, amelynél a vérlemezke-agglutináció bekövetkezik, a minta risztocetin-koenzimaktivitásának titere.

mennyiségi módszer

Készítsen legalább 2 sorozathígítási sorozatot a referencia- és vizsgálati mintákból hígítópufferrel a von Willebrand-faktor várható 0,5, 1,0 és 2,0 NE/ml-es szintjére.

A meghatározást az automata berendezés gyártójának utasításai szerint kell elvégezni. Szerezze meg az optikai abszorpció változásának (az oldat zavarossági fokának) a von Willebrand faktor aktivitásától való függésének értékeit.

A von Willebrand-faktor tartalmának meghatározását a teszt-előkészítésben az oldat optikai sűrűségének a standard mintában lévő von Willebrand-tényező tartalmától való függésének lineáris egyenletének együtthatóival végezzük.

ELISA módszer

A módszer a von Willebrand faktor kollagénkötő aktivitásának meghatározásán alapul. A von Willebrand faktornak a kollagén rostokhoz való specifikus kötődése, majd az enzimekkel konjugált poliklonális antitestek von Willebrand faktorhoz való kötődése után kromofor képződik kromogén szubsztrát hozzáadása után, amely spektrofotometriás módszerrel kvantifikálható. Lineáris kapcsolat van a kollagén von Willebrand faktorhoz való kötődése és az optikai sűrűség között.

A meghatározást az oroszországi egészségügyi gyakorlatban való használatra jóváhagyott tesztrendszerekkel végzik a használati utasításnak megfelelően.

A teszteléshez készítsen legalább 3 egymást követő hígítássorozatot a standardból és a vizsgálati mintákból hígítópufferrel a várt von Willebrand-faktor 1,0 NE/ml értékig. Ezt követően a vizsgálatokat a gyártó által az alkalmazott tesztrendszerre vonatkozó utasítások szerint kell elvégezni.

Aktivált véralvadási faktorok vér

A meghatározást koagulometriás módszerrel végezzük.

A vizsgálathoz a gyógyszer feloldott oldatát készítik. Ha van a készítményben heparin, akkor azt protamin-szulfát hozzáadásával semlegesítik 10 μg protamin-szulfát/1 NE heparin arányban. Készítse elő a gyógyszer 1:10 és 1:100 arányú hígításait Tris pufferoldattal, pH 7,5.

0,1 ml standard humán plazmát és 0,1 ml foszfolipid oldatot adunk 3 kémcsőbe, 60 másodpercre (37 ± 0,5) °C hőmérsékletű vízfürdőbe helyezzük, majd 0,1 ml-t adunk az első kémcsőbe. Tris pufferoldat (kontrollminta), a másodikban - 0,1 ml 1:10 arányban hígított vizsgálati gyógyszer, a harmadik kémcsőben - 0,1 ml 1:100 arányban hígított vizsgálandó gyógyszer. Továbbá minden kémcső tartalmához azonnal hozzáadunk 0,1 ml 3,7 g/l-es kalcium-klorid-oldatot, amelyet 37 °C-ra melegítünk. A vérrögképződés idejét a kalcium-klorid oldat hozzáadásának pillanatától számítjuk fel.

Az eredmények elfogadhatóságának kritériuma a koagulációs idő a kontroll mintában a 200-350 s tartományban.

Konkrét konkrét tevékenység

A véralvadási faktorok fajlagos aktivitását a következő képlettel számítjuk ki:

Az antitrombin aktivitás meghatározásaIII

Kromogén módszer

Az ATIII aktivitás meghatározására szolgáló módszer azon a képességen alapul, hogy képes semlegesíteni a trombint heparin jelenlétében. Fölös mennyiségű heparint és trombint adunk az ATIII-at tartalmazó mintához. A keletkező ATIII-heparin komplex semlegesíti a trombin mennyiségét az ATIII mennyiségével arányosan. A visszamaradó trombin szelektíven hasítja a kromogén szubsztrátot, hogy kialakuljon P-nitroanilin, amelynek abszorpcióját 405 nm-en határozzuk meg. Így az ATIII mennyisége fordítottan arányos a szabad abszorpciójával P-nitroanilin a mintában.

Az ATIII aktivitás meghatározását kereskedelmi tesztrendszerekkel végezzük. Kalibrációs grafikon készítéséhez használjon szabványos ATIII mintát vagy nemzetközi szabvány szerint tanúsított plazma kalibrátort. A standard mintát vagy plazma kalibrátort desztillált vízben kell feloldani a használati utasításban leírtak szerint. Az optikai sűrűség függése az ATIII aktivitásától lineáris az ATIII aktivitás 0,1 és 1,0 NE/ml közötti tartományában. Heparin pufferrel készítsen 4 hígítást egy standard vagy kalibráló plazmából, amelynek ATIII aktivitása 0,1-1,0 NE/ml. Az analízist 37 °C hőmérsékleten végezzük a kit utasításaiban megadott séma szerint. Minden egyes hígításnál háromszor meghatározzuk az optikai sűrűséget 405 nm-en, és az abszorbancia és az ATIII aktivitás kalibrációs görbéjét lineáris koordinátákban ábrázoljuk.

Készítsen 2 hígítást a vizsgálati mintából, amelyek becsült ATIII aktivitása kisebb, mint 1,0 NE/ml. Az ATIII aktivitás meghatározását a vizsgálati mintákban 37 °C hőmérsékleten végezzük a készlethez tartozó utasítások szerint. Az ATIII aktivitása a vizsgált hígításokban a kalibrációs görbéből látható. Az ATIII aktivitását a vizsgált mintában a következőképpen határozzuk meg:

Egy x– ATIII aktivitás a megfelelő hígításban;

k- a minta hígítása.

A heparin mennyiségi meghatározása

1. Alvadási módszer

A módszer azon alapul, hogy a heparin képes meghosszabbítani a normál plazma alvadási idejét, számos tényező gátlása miatt.

Az elemzéshez normál humán plazmát, standard heparin mintát, APTT reagenst és 0,025 M kalcium-klorid oldatot használunk. A standard és a vizsgálati minták hígítószereként 0,9%-os nátrium-klorid-oldatot használunk. A heparin standard mintáját desztillált vízben kell feloldani az utasítások utasításai szerint. Készítsen 3 hígítást egy 0,3, 0,4 és 0,5 NE/ml heparinaktivitású standard mintából. Az ilyen aktivitású standard mintáknak legalább másfélszeresére kell meghosszabbítaniuk a normál plazma alvadási idejét, ellenkező esetben magasabb heparinaktivitású hígításokat kell használni. Ezzel párhuzamosan a vizsgálati mintából 3 hígítást készítünk úgy, hogy ezekben a hígításokban a heparin aktivitása megközelítőleg a standard minta hígításaiban mért heparin aktivitás tartományába essen.

Az analízist automata vagy félautomata koagulométerrel, műanyag kémcsövekben, 37°C hőmérsékleten végezzük. 100 µl normál humán plazmát, 100 µl standard vagy vizsgálati minta hígítását, vagy 100 µl 0,9%-os nátrium-klorid oldatot (vakkísérlet) adunk a csőbe, 100 µl APTT reagenst adunk hozzá, és a keveréket 120-240 másodpercig inkubáltuk (37±0,1)°C hőmérsékleten. Ezután 100 μl 0,025 M 37 °C-ra előmelegített kalcium-klorid oldatot adunk a kémcsőbe, és feljegyezzük a minta alvadási idejét. Az elemzés beállításának technikájától függően a reagensek térfogata arányosan változtatható. A normál plazma (vak) alvadási idejének 25-40 másodpercnek kell lennie. A standard és vizsgálati minták minden hígításánál háromszor kell meghatározni az alvadási időt.

1. Kromogén módszer

A módszer egy, az aktivált X faktorra (FXa) specifikus kromogén szubsztrát hasításán alapul. Ha túlzott mennyiségű ATIII-at és FXa-t viszünk be egy heparint tartalmazó mintába, az FXa heparin mennyiségével arányos mennyisége gátlásra kerül. A fennmaradó FXa egy specifikus kromogén szubsztrátról lehasad P-nitroanilin, amelynek abszorpcióját 405 nm-en határozzuk meg. Így a felszívódás mértéke fordítottan arányos a heparin mennyiségével. Ez a módszer meghatározza mind a frakcionálatlan, mind a kis molekulatömegű heparin tartalmát az anti-Xa egységekben.

A heparin mennyiségét kromogén módszerrel határozzák meg, kereskedelmi tesztrendszerek segítségével. A kalibrációs grafikon elkészítéséhez standard heparin mintát vagy nemzetközi szabvány szerint tanúsított plazma kalibrátort használnak. A standard mintát vagy plazma kalibrátort desztillált vízzel hígítjuk az utasításoknak megfelelően. Készítsen 4 hígítást egy 1 anti-Xa U/ml-nél kisebb heparinkoncentrációjú standardból pH 8,4 hígítópufferrel. Az analízist 37°C hőmérsékleten végezzük a készletre vonatkozó utasításoknak megfelelően. Minden egyes hígításnál háromszor határozzuk meg a 405 nm-en mért abszorbanciát, majd lineáris koordinátákban ábrázoljuk az abszorbancia heparinkoncentrációtól való függésének kalibrációs grafikonját. A 0-1,0 anti-Xa egység/ml heparin koncentráció tartományban a függőség lineáris.

Készítsen 2 hígítást a vizsgálati mintából 1 anti-Xa U/ml-nél kisebb heparinkoncentrációval. Az elemzést a készletre vonatkozó utasítások szerint végezzük 37 °C hőmérsékleten. Minden egyes hígításnál háromszor kell meghatározni az abszorbancia értéket.

A meghatározást manuálisan, műanyag kémcsövekkel, mikrolemezekkel vagy automatikusan koagulométerrel végezzük.

A kézi üzemmódban végzett teszteléshez 20 µl standard humán plazmát és 20 µl antitrombin III oldatot adunk a mikrolemez üregeihez. Ezután 20, 60, 100 és 140 μl teszt- vagy standard készítményt adunk ezekbe a mérőhelyekbe, és az oldat térfogatát mindegyik lyukban 200 µl-re állítjuk be pufferrel (a heparin aktivitása a végső reakcióelegyben 0,02-0,08 NE/ml).

A lemez minden egyes üregéből 40 µl-t viszünk át a második sorozatba, amelybe 20 µl szarvasmarha-Xa faktor oldatot adunk, és 30 másodpercig (37 ± 0,5) °C hőmérsékleten inkubáljuk, majd 40 µl-t. Az oldatból hozzáadjuk a lyukak Xa faktor kromogén szubsztrátját, és ismét inkubáljuk (37 ± 0,5) °C-on 3-15 percig, mérjük a szubsztrát degradáció sebességét az optikai sűrűség folyamatos mérésével 405 nm-es hullámhosszon (kinetikus mód). vagy a reakció leállítása után 20%-os (v/v) jégecet hozzáadásával (a meghatározás végső pontja).

Koagulométerrel végzett automatikus üzemmódban végzett vizsgálatok során megkapják az optikai sűrűség változásának a heparin koncentrációjától való függésének értékeit.

A VIII-as véralvadási faktor szintje 0-1% a betegség rendkívül súlyos formáját okozza, 1-2% - súlyos, 2-5% - közepes, 5% felett - enyhe formát, de súlyos kockázattal. és akár halálos vérzések sérülések és sebészeti beavatkozások során.

A hemofília összes lehetséges megnyilvánulása közül a végtagok nagy ízületeinek (csípő, térd, boka, váll és könyök) vérzése, mély szubkután, intermuszkuláris és intramuszkuláris vérzések, súlyos és hosszan tartó vérzések sérüléseknél, vér megjelenése a vizeletben . Más vérzések valamivel ritkábban fordulnak elő, beleértve az olyan súlyos és veszélyeseket, mint a retroperitoneális vérzések, a hasi szervek vérzései, a gyomor-bélrendszeri vérzések, az intracranialis vérzések (stroke).

A hemofíliával egészen egyértelműen nyomon követhető a betegség minden megnyilvánulása előrehaladása a gyermek növekedésével, majd később felnőtté válásával. Születéskor kisebb-nagyobb kiterjedésű vérzések a koponyacsontok periosteuma alatt, subcutan és intradermális vérzések, késői köldökzsinórvérzések figyelhetők meg. Néha a betegséget az első intramuszkuláris injekciónál észlelik, ami nagy, életveszélyes intramuszkuláris hematómát okozhat. A fogzást gyakran nem túl erős vérzés kíséri. Az élet első éveiben gyakran előfordul a szájnyálkahártya vérzése, amely különféle éles tárgyak traumájával jár. Amikor a gyermek megtanul járni, az eséseket és a zúzódásokat gyakran erős orrvérzés és hematómák kísérik a fején. A szemüreg vérzései, valamint a posztorbitális hematómák látásvesztéshez vezethetnek. Kúszni kezdett gyermeknél a fenékben a vérzések jellemzőek. Ezután a végtagok nagy ízületeiben jelentkező vérzések kerülnek előtérbe. Minél korábban jelennek meg, annál súlyosabb a hemofília. Az első vérzések hajlamosak arra, hogy ugyanazon ízületekben ismétlődő vér ömljön ki. Minden egyes hemofíliában szenvedő személynél 1-3 ízület érintett, különösen tartós és gyakori a vérzés. Leggyakrabban a térdízületek érintettek, ezt követi a boka-, könyök- és csípőízület. Viszonylag ritka a vérzés a kéz és a láb kis ízületeiben (az összes elváltozás kevesebb, mint 1%-a) és a csigolyák közötti ízületekben. Minden emberben, a betegség korától és súlyosságától függően, 1-2-8-12 ízület érintett.

Különbséget kell tenni az akut hemarthrosis (elsődleges és visszatérő), a krónikus hemorrhagiás-destruktív osteoarthritis (arthropathia), a másodlagos immunreumás szindróma, mint az alapfolyamat szövődménye között.

Az akut hemarthrosis hirtelen fellépő (gyakran kisebb sérülés után) vagy az ízületi fájdalom éles növekedéseként nyilvánul meg. Az ízület gyakran megnagyobbodott, a bőr felette vörös, forró tapintású. A vérkomponensek első transzfúziója után a fájdalom gyorsan (néhány órán belül) csökken, és a vér egyidejű eltávolításával az ízületből szinte azonnal megszűnik.

Az ízületi károsodás IV szakaszát különböztetjük meg. I. vagy korai stádiumban a vérzés következtében megnőhet az ízület térfogata. A „hideg” időszakban az ízület működése nem károsodik, de röntgenvizsgálattal megállapítják az elváltozás jellegzetes jeleit. A II. szakaszban a folyamat előrehaladását figyelik meg, amely a röntgen adatok alapján derül ki. A III. stádiumban az ízület meredeken megnövekszik, deformálódik, tapintásra gyakran egyenetlen és göröngyös, az érintett láb izmainak kifejezett hypotrophiáját határozzák meg. Az érintett ízületek mobilitása többé-kevésbé korlátozott, ami mind magának az ízületnek a károsodásával, mind az izmok és inak változásaival jár. Ebben a szakaszban kifejezett csontritkulás alakul ki, az ízületek belsejében könnyen előfordulhatnak törések. A combcsontban a hemofíliára jellemző csontanyag kráter- vagy alagútszerű pusztulása van. A térdkalács részben elpusztult. Az intraartikuláris porcok elpusztulnak, ezeknek a porcoknak a mozgékony töredékei találhatók az ízületi üregben. A csontok különböző szubluxációi és elmozdulásai lehetségesek. A IV. szakaszban az ízület funkciója szinte teljesen megszűnik. Ízületi törések lehetségesek. Az életkor előrehaladtával az ízületi apparátus károsodásának súlyossága és gyakorisága előrehalad, és súlyosabbá válik, ha a kórosan megváltozott ízületek körül hematómák lépnek fel.

A másodlagos rheumatoid szindróma (Barkagan-Egorova szindróma) a hemofíliás betegek ízületi károsodásának gyakori formája. Ezt a szindrómát először 1969-ben írták le. Sok esetben az orvosok is megvizsgálják, mivel a már meglévő hemarthrosis és az ízületi hemofíliára jellemző destruktív folyamatok hátterében fordul elő. A másodlagos rheumatoid szindrómát krónikus gyulladásos folyamat (gyakran szimmetrikus) kíséri a kéz és a láb kis ízületeiben, amelyeket korábban nem érintettek vérzések. Ezt követően a folyamat előrehaladtával ezek az ízületek tipikus deformáción mennek keresztül. A nagy ízületekben időszakosan súlyos fájdalom jelentkezik, az ízületekben kifejezett reggeli merevség figyelhető meg. Az új vérzések megjelenésétől függetlenül az ízületi folyamat folyamatosan halad. Ebben a pillanatban a vérvizsgálat feltárja a gyulladásos folyamat meglévő laboratóriumi jeleinek megjelenését vagy éles növekedését, beleértve az immunológiaiakat is.

A legtöbb hemofíliás embernél a szindróma 10-14 éves kor felett jelentkezik. 20 éves korig gyakorisága eléri az 5,9% -át, 30 éves korára pedig az összes betegség 13% -át. Az életkor előrehaladtával az összes ízületi elváltozás gyakorisága és súlyossága folyamatosan növekszik, ami rokkantsághoz vezet, mankók, tolószékek és egyéb eszközök használatára kényszerít. Az ízületi károsodás előrehaladása függ az akut vérzések gyakoriságától, kezelésük időszerűségétől és hasznosságától (a vér és összetevőinek korai transzfúziója nagyon fontos), az ortopédiai ellátás minőségétől, a fizioterápiás gyakorlatok helyes alkalmazásától, a gyógytornától és a balneológiai kezeléstől. hatások, a szakmaválasztás és számos egyéb körülmény. Mindezek a kérdések jelenleg rendkívül aktuálisak, mivel a hemofíliában a várható élettartam drámaian megnőtt a korrekciós kezelés sikerének köszönhetően.

A kiterjedt és intenzív subcutan, intermuscularis, subfascialis és retroperitonealis hematómák nagyon nehéz és veszélyesek. Fokozatosan növekedve hatalmas méretet érhetnek el, 0,5-3 liter vagy több vért tartalmazhatnak, vérszegénység kialakulásához vezethetnek, a környező szövetek és az őket tápláló erek összenyomódását és pusztulását, nekrózist okozhatnak. Így például a retroperitoneális hematómák gyakran teljesen elpusztítják a medencecsontok nagy területeit (a pusztítási zóna átmérője elérheti a 15 cm-t vagy többet), a lábakon és a karokon lévő hematómák pedig a csőcsontokat és a calcaneust. A csontszövet halála vérzések kialakulásához vezet a periosteum alatt. A röntgenfelvételeken az ilyen csontpusztulás folyamatát gyakran összetévesztik daganatos folyamattal. Gyakran kalcium-sók rakódnak le a hematómákban, ami néha új csontok kialakulásához vezet, amelyek lezárhatják az ízületeket és teljesen immobilizálhatják azokat.

Számos hematóma, amely nyomást gyakorol az idegtörzsekre vagy az izmokra, bénulást, érzékszervi zavarokat és gyorsan progresszív izomsorvadást okoz. Különösen veszélyesek a kiterjedt vérzések a submandibularis régió lágy szöveteiben, a nyakban, a garatban és a garatban. Ezek a vérzések a felső légutak szűkületét és fulladást okoznak.

A hemofília súlyos problémája a bőséges és tartós vesevérzés, amelyet az ebben a vérbetegségben szenvedő egyének 14-30%-ánál figyeltek meg. Ezek a vérzések spontán módon és a pyelonephritishez kapcsolódó ágyéki sérülésekkel összefüggésben is előfordulhatnak. Ezenkívül vesevérzés léphet fel a kalcium vizelettel való fokozott kiválasztódása miatt, a hemofíliában a csontszövet pusztulása miatt. Az ilyen vérzések megjelenését vagy felerősödését fájdalomcsillapítók (acetilszalicilsav stb.) alkalmazásával, masszív vér- és plazmatranszfúzióval lehet elősegíteni, ami további vesekárosodáshoz vezet. A vesevérzést gyakran megelőzi a vérszemcsék elhúzódó vizelettel történő kiválasztása, amely csak laboratóriumi vizsgálattal mutatható ki.

A vér megjelenése a vizeletben gyakran súlyos vizeletürítési zavarokkal, valamint a kiürült vizelet mennyiségének megváltozásával (egyszerre előfordulhat napi mennyiség növekedése és csökkenése), vesekólikás rohamok kialakulása miatt. vérrögképződés a húgyúti rendszerben. Ezek a jelenségek különösen intenzívek és hangsúlyosak a kezelés során, amikor a vér normális állapota átmenetileg helyreáll. A vér vizelettel történő kiválasztásának megszűnését gyakran vesekólika előzi meg, és gyakran a vizeletkiválasztás átmeneti hiánya a szervezet mérgező anyagcseretermékekkel való mérgezésének jeleinek megjelenésével.

A vesevérzés időszakosan megismétlődik, ami az évek során súlyos disztrófiás-destruktív változásokhoz vezethet ebben a szervben, másodlagos fertőzéshez és a veseelégtelenség kialakulásából eredő halálhoz.

A hemofília gyomor-bélrendszeri vérzése spontán lehet, de gyakrabban az acetilszalicilsav (aszpirin), butadion és más gyógyszerek szedése okozza. A második vérzésforrás a gyomor- vagy nyombélfekélyek nyilvánvaló vagy rejtett fekélyei, valamint a különböző eredetű erozív gyomorhurut. Néha azonban diffúz kapilláris vérzés lép fel, anélkül, hogy a nyálkahártyában romboló elváltozások jelentkeznének. Ezeket a vérzéseket diapedetikusnak nevezik. Megjelenésükkor a bélfal hosszú ideig vérrel telítődik, ami súlyos vérszegénység következtében gyorsan kómához, a vérnyomás éles csökkenése miatti ájuláshoz és halálhoz vezet. Az ilyen vérzés kialakulásának mechanizmusa a mai napig tisztázatlan.

A hasi szervek vérzései különféle akut sebészeti betegségeket utánoznak - akut vakbélgyulladás, bélelzáródás stb.

A hemofíliában az agyban és a gerincvelőben, illetve ezek membránjában fellépő vérzések szinte mindig sérülésekkel vagy a véralvadásban közvetlenül részt vevő vérlemezkék működését megzavaró gyógyszerek szedésével járnak. A sérülés pillanata és a vérzés kialakulása között 1-2 órától egy napig tartó enyhe intervallum lehet.

A hemofília jellegzetes vonása a sérülések és műtétek során elhúzódó vérzés. A szakadási sebek sokkal veszélyesebbek, mint a lineáris szakadások. A vérzés gyakran nem közvetlenül a sérülés után, hanem 1-5 óra elteltével jelentkezik.

A mandulák eltávolítása hemofíliában sokkal veszélyesebb, mint a hasi műtét.

A fogak, különösen az őrlőfogak kihúzását gyakran nem csak a fogüregekből, hanem a novokainnal történő szöveti beszivárgás helyén képződött vérömlenyekből is soknapos vérzés kíséri, ami vérszegénység kialakulásához vezet. Ezek a hematómák az állkapocs pusztulását okozzák. Hemofíliával a fogakat eltávolítják az antihemofil gyógyszerek hatásának hátterében, általános érzéstelenítésben. A legjobb, ha egyszerre több fogat húzunk ki.

A hemofília szövődményeinek egy része a vérveszteség, a szövetek összenyomódása és hematómák általi elpusztítása, a hematómák fertőzése. A szövődmények nagy csoportja az immunrendszer zavaraihoz is kapcsolódik. Közülük a legveszélyesebb a VIII-as (vagy IX-es) véralvadási faktor nagyszámú immuninhibitorban ("blokkolóban") való megjelenése a vérben, ami a hemofíliát úgynevezett gátló formává alakítja, amelyben a fő kezelési módszer. transzfúziós terápia (vér vagy annak összetevőinek transzfúziója) - szinte teljesen elveszíti hatékonyságát. Sőt, az antihemofil szerek ismételt beadása gyakran a vérben lévő inhibitor mennyiségének rohamos növekedését okozza, aminek következtében a kezdetben valamilyen hatást kifejtett vér és komponenseinek transzfúziója hamar használhatatlanná válik. A hemofília gátló formájának gyakorisága különböző szerzők szerint 1-20%, gyakrabban 5-15%. A gátló formáknál a vérlemezkék működése észrevehetően romlik, gyakoribbá válnak az ízületi bevérzések és a vér vizelettel történő kiválasztása, az ízületi károsodás lényegesen nagyobb.

A hemofíliában bármely lokalizációjú és eredetű vérzés és vérzés kezelésének és megelőzésének fő módszere a VIII-as faktort tartalmazó vérkészítmények megfelelő dózisának intravénás beadása. A VIII-as faktor változó, és gyakorlatilag nem őrződik meg dobozos vérben, természetes és száraz plazmában. Pótló kezelésre csak donor közvetlen vérátömlesztése és megőrzött VIII-as véralvadási faktort tartalmazó vérkészítmények alkalmasak. A donor közvetlen vérátömlesztése csak akkor történik, ha az orvosnak nincs más antihemofil gyógyszere. Súlyos hiba az anyától való vérátömlesztés, mivel ő a betegség hordozója, és vérében a VIII-as faktor szintje erősen lecsökken. A VIII-as faktor rövid élettartama miatt a recipiens vérében (körülbelül 6-8 óra), a vérátömlesztést, valamint az antihemofil plazma transzfúzióját naponta legalább háromszor meg kell ismételni. Az ilyen vér- és plazmatranszfúziók alkalmatlanok nagymértékű vérzés megállítására, és megbízható fedezet a különféle sebészeti beavatkozásokhoz.

Azonos térfogatú antihemofil plazma hozzávetőleg 3-4-szer hatékonyabb, mint a frissen gyűjtött vér. Az antihemofil plazma napi 30-50 ml/ttkg dózisa lehetővé teszi a VIII-as faktor 10-15%-os szintjének fenntartását egy ideig. Az ilyen kezelés fő veszélye a vérkeringés térfogat szerinti túlterhelése, ami tüdőödéma kialakulásához vezethet. Az antihemofil plazma koncentrált formában történő alkalmazása nem változtat a helyzeten, mivel a befecskendezett fehérje magas koncentrációja intenzív folyadékmozgást idéz elő a szövetekből a vérbe, aminek következtében a keringő vér térfogata megnő olyan módon, mint amikor a plazmát normál hígításban adják be. A koncentrált száraz antihemofil plazmának csak az az előnye, hogy koncentráltabb VIII-as véralvadási faktort tartalmaz, és kis mennyiségben gyorsabban bejut a véráramba. A száraz antihemofil plazmát felhasználás előtt desztillált vízzel hígítjuk. Az antihemofil plazma kezelés elegendő az ízületi heveny vérzések többségének megállítására (a legsúlyosabbak kivételével), valamint a kisebb vérzések megelőzésére és kezelésére.

A legmegbízhatóbb és leghatékonyabb a hemofíliában a VIII-as véralvadási faktor koncentrátumai. Közülük a leginkább hozzáférhető a krioprecipitátum. A plazmából hűtéssel (krioprecipitációval) izolált fehérjekoncentrátum, amely elegendő mennyiségű véralvadási faktort, de kevés fehérjét tartalmaz. Az alacsony fehérjetartalom lehetővé teszi a gyógyszer nagyon nagy mennyiségben történő befecskendezését a véráramba, és a VIII-as faktor koncentrációjának 100%-ra vagy még magasabbra emelését anélkül, hogy félnének a vérkeringés túlterhelésétől és tüdőödémától. A krioprecipitátumot -20°C-on kell tárolni, ami megnehezíti a szállítását. Felolvasztáskor a gyógyszer gyorsan elveszíti aktivitását. A száraz krioprecipitátum és a véralvadási VIII-as faktor modern koncentrátumai megfosztják ezeket a hiányosságokat. Normál hűtőszekrényben tárolhatók. A krioprecipitátum túlzott adagolása nem kívánatos, mivel a véralvadási faktorok magas koncentrációját hozza létre a vérben, aminek következtében a szervekben a mikrocirkuláció megzavarodik, és fennáll a vérrögképződés és a DIC kialakulásának veszélye.

Az összes antihemofil gyógyszert intravénásan, csak áramban, a legtöményebb formában adják be, és a lehető leghamarabb az újranyitás után, anélkül, hogy más intravénás beadásra szánt oldatokkal kevernék össze. A helyettesítő terápia sikertelenségének egyik fő oka a vérkészítmények csepegtetése, amely nem vezet a plazma VIII-as faktor szintjének növekedéséhez. A vérzés stabil megállításáig nem használhat olyan vérpótló szereket és vérkészítményeket, amelyek nem tartalmaznak antihemofil faktorokat, mivel ez a VIII-as faktor felhígulásához és szérumkoncentrációjának csökkenéséhez vezet.

Akut ízületi vérzések esetén az érintett végtag fiziológiás helyzetben történő ideiglenes (legfeljebb 3-5 napos) immobilizálása (immobilizálása), az érintett ízület felmelegítése (kompressziók), de nem hűtés szükséges. Az ízületbe befolyt vér korai eltávolítása nemcsak azonnal megszünteti a fájdalmat, megakadályozza a további véralvadást az ízületben, hanem csökkenti az osteoarthritis kialakulásának és gyors progressziójának kockázatát is. A vér eltávolítását követő másodlagos gyulladásos elváltozások megelőzésére és kezelésére 40-60 mg hidrokortizont fecskendeznek az ízületi üregbe. Az első 3-6 napban végzett szupportív transzfúziós terápia megakadályozza a további vérzést és lehetővé teszi a mozgásterápia korai megkezdését, amely hozzájárul az érintett végtag funkcióinak gyorsabb és teljesebb helyreállításához, valamint megelőzi az izomsorvadást. Jobb, ha az érintett ízületben szakaszosan fejlesztjük a mozgásokat. A kötés eltávolítása utáni első 5-7 napban aktív mozgásokat végeznek mind az érintett ízületben, mind a végtag többi ízületében, fokozatosan növelve a gyakorlatok gyakoriságát és időtartamát. A 6-9. naptól áttérnek a "terheléses" gyakorlatokra, kerékpár ergométerrel, kézi pedálkapuk, rugalmas tapadás. A 11-13. naptól a maradék merevség megszüntetése és a maximális hajlítás vagy nyújtás korlátozása érdekében a passzív terhelésű gyakorlatokat óvatosan végezzük. Az 5-7. nappal egyidejűleg fizioterápiát írnak elő - hidrokortizon elektroforézis, anódos galvanizálás.

Lágy szövetek vérzése esetén az antihemofil gyógyszerekkel intenzívebb kezelést végeznek, mint az ízületi vérzéseknél. A vérszegénység kialakulásával az eritrocitatömeg intravénás infúzióját is előírják. Ha a hematóma fertőzésének jelei vannak, azonnal széles spektrumú antibiotikumokat írnak fel. Bármilyen intramuszkuláris injekció hemofília esetén ellenjavallt, mivel kiterjedt vérömlenyeket és pszeudotumot okozhat. A penicillin és félszintetikus analógjai szintén nemkívánatosak, mivel nagy dózisokban növelik a vérzést.

Az antihemofil gyógyszerekkel végzett korai és intenzív kezelés hozzájárul a hematómák gyors regressziójához. A kapszulázott hematómákat lehetőség szerint sebészi úton távolítják el a kapszulával együtt.

A bőrsérült külső vérzést, az orrvérzést és a szájüregi sebek vérzését mind transzfúziós terápiával, mind helyi hatásokkal - a vérző terület véralvadást elősegítő gyógyszerekkel történő kezelésével - megállítjuk. Ezenkívül ezek a gyógyszerek szájon át is bevehetők. Nyomókötést vagy varratokat helyeznek a sebekre. Hasonlóképpen állítsa le a vérzést a foghúzás után. A rágófogak eltávolításakor kissé intenzívebb transzfúziós terápiát végeznek, és több fog egyidejű eltávolítása (3-5 vagy több) antihemofil gyógyszerek bevezetését igényli az első 3 napban.

Orrvérzés esetén kerülni kell a szoros pakolást, hiszen a tamponok eltávolítása után gyakran még nagyobb erővel újraindul a vérzés. Az orrvérzés gyors leállítását általában antihemofil plazma és antihemofil szerek, valamint az orrnyálkahártya egyidejű, véralvadást elősegítő oldatokkal történő öblítése biztosítják.

Komoly veszélyt jelent a vesevérzés, amelyben az antihemofil plazma és a krioprecipitátum intravénás infúziója hatástalan.

Az emésztőrendszeri vérzést nagy dózisú véralvadási faktor koncentrátumokkal szabályozzák. Emlékeztetni kell arra, hogy ízületi fájdalom, fogfájás vagy fejfájás esetén gyakran aszpirin, brufen, indometacin szedése vált ki gyomorvérzést. A hemofíliás betegeknél már egyetlen adag aszpirin is gyomorvérzést okozhat.

A krónikus osteoarthritis és a mozgásszervi rendszer egyéb elváltozásainak megelőzésében és kezelésében különféle módokat kell biztosítani az ízületek védelmére és a végtagok sérüléseinek megelőzésére. Ehhez a térd-, boka- és könyökízületek környékén habszivacs betétet varrnak a ruhákba, és kerülik azokat a sportágakat, amelyek ugrásokkal, eséssel és zúzódásokkal járnak (beleértve a kerékpározást és a motorozást is). Fontosnak tartják az ízületi és izomzati akut vérzések mielőbbi és teljes körű kezelését, intenzív egész éves gyógytornát. Ehhez speciális atraumatikus gyakorlatok komplexumai vannak vízben, puha szőnyegeken és terhelési eszközökön - kerékpár-ergométerek, kézi kapuk. Az órákat óvodáskorban vagy általános iskolás korban kell elkezdeni, vagyis még mielőtt a mozgásszervi rendszer súlyos rendellenességei kialakulnának. A komplex terápiát fizioterápia (nagyfrekvenciás áramok, glükokortikoszteroidok elektroforézise) és balneológiai kezelési módszerekkel, elsősorban iszapterápiával, sóoldat- és radonfürdőkkel egészíti ki. Ugyanazon ízületekben gyakori és makacsul visszatérő vérzések esetén röntgenterápiát és műtéti kezelést végeznek.

A sérülések és vágások kockázatának minimalizálása a korai gyermekkortól kezdve fontos a vérzés megelőzésében. A könnyen törhető játékok (beleértve a fémet és műanyagot is), valamint az instabil és nehéz tárgyak ki vannak zárva a mindennapi életből. A bútornak lekerekített élűnek kell lennie, a kiálló éleket vattával vagy habszivaccsal kell beburkolni, a padlót bolyhos szőnyeg borítja. Előnyösebb a betegek kommunikációja és játéka a lányokkal, de nem a fiúkkal. A beteg számára fontos a szakma és a munkahely megfelelő megválasztása.

A hemofília megelőzése még nem alakult ki. A magzatvízből nyert sejtek genetikai vizsgálatával a születendő gyermek nemének meghatározása lehetővé teszi a terhesség időben történő megszakítását, de nem mutatja meg, hogy a magzat a hemofília gén hordozója-e. A terhesség megőrződik, ha a magzat hím, mivel a betegek minden fia egészségesen születik. Ha a magzat nő, szakítsa meg a terhességet, mivel a hemofíliás betegek minden lánya a betegség hordozója.

Azoknál a hemofíliás női vezetőknél, akiknek 50%-os esélyük van megszületni egy érintett gyermeket (ha a magzat férfi), vagy akik hemofília terjesztői (ha a magzat nő), csak a lányok születése hordozza azt a kockázatot, hemofíliás betegek a családban az első generációtól a másodikig, ezzel egyidejűleg növelve a betegség hordozóinak teljes számát.

VIII-as véralvadási faktort tartalmazó kromatográfiásan tisztított liofilizált humán plazmafrakció. Antihemofil globulin, kompenzálja a VIII-as véralvadási faktor hiányát, átmenetileg kompenzálja a véralvadási zavart A hemofíliában szenvedő betegeknél. Természetes kombinációban található meg a VIII-as faktor C proteinjével, a von Willebrand faktorral. Részt vesz a véralvadási folyamatokban, elősegíti a protrombin trombinná történő átalakulását és a fibrinrög képződését. Közvetlenül a beadás után növeli a vér koagulációs potenciálját. Az antihemofil faktor aktivitásának csökkenése kétfázisú: a korai fázis az aktivitás gyors csökkenése, az extravaszkuláris térrel való egyensúlyozás idejét jellemzi, a második fázis lassú, tükrözi a vérkeringés biológiai felezési idejét. beadott antihemofil faktor és 9-14 óra Specifikus aktivitás (humán albumin hozzáadása után) - 9-22 NE fehérje. 1 NE (a WHO VIII-as véralvadási faktor szabványa szerint) megközelítőleg megegyezik az 1 ml friss humán donorplazmában lévő antihemofil faktor szintjével.
A maximális plazmakoncentráció eléréséhez szükséges idő intravénás beadás után 10 perc és 2 óra között van A felezési idő 8,4-19,3 óra A VIII-as véralvadási faktor aktivitása fokozatosan - 12 órán belül 15%-kal - csökken Hipertermia esetén a periódus a VIII-as véralvadási faktor felezési ideje csökkenhet.

A VIII. véralvadási faktor gyógyszer alkalmazására vonatkozó javallatok

Hemophilia A, von Willebrand-kór (vérzés kezelése és megelőzése, beleértve a sebészeti beavatkozásokat is); a VIII-as faktor szerzett hiánya, a VIII-as faktor elleni antitestek képződésével járó betegségek.

Hogyan kell alkalmazni a VIII. véralvadási faktort?

Be/be. A spontán vagy enyhe vérzés megelőzésére - 10 NE / kg (a spontán vérzés megelőzéséhez szükséges VIII-as faktor tartalma - a normál szint 5% -a); mérsékelt vérzéssel és kisebb sebészeti beavatkozással (például foghúzás) - 15-25 NE / kg (VIII-as faktor tartalom - a norma 30-80% -a), majd 10-15 NE / kg fenntartó dózis minden 12. 24 órán keresztül 3 napig, vagy amíg megfelelő klinikai hatást nem érnek el; akut életveszélyes vérzés esetén - 40-50 NE / kg (VIII-as faktor tartalom - a norma 60-100% -a), majd 20-25 NE / kg fenntartó dózis 8-24 óránként; kiterjedt sebészeti beavatkozásokkal - 40-50 NE / kg 1 órával a beavatkozás előtt és 20-25 NE / kg - 5 órával az első adag után (vagyis a műtét előtt és után a norma 80-100%-a), majd ismételje meg minden alkalommal 8-24 óráig kellő klinikai hatás eléréséig. A vérzés hosszú távú megelőzésére súlyos hemofília A esetén - 12-25 NE / kg 2-3 naponta.
A krioprecipitátot az AB0 vércsoportokkal való kompatibilitás figyelembevételével használják. A fagyasztott krioprecipitátumot tartalmazó tartályt felengedés és teljes feloldódás céljából vízfürdőben, legfeljebb 35-37 ° C hőmérsékleten helyezzük el, és legfeljebb 7 percig inkubáljuk. A kapott átlátszó sárgás oldatot, amely nem tartalmazhat pelyheket, az elkészítést követően azonnal felhasználandó. Intravénásan beadva fecskendővel vagy eldobható szűrővel ellátott transzfúziós rendszerrel. Az adag függ a hemofíliában szenvedő betegek vérének kezdeti VIII-as faktor tartalmától, a vérzés természetétől és lokalizációjától, a sebészeti beavatkozás kockázatának mértékétől, a beteg vérében olyan specifikus inhibitor jelenlététől, amely képes semlegesíteni a vérzés aktivitását. faktor (a VIII-as faktor aktivitásának egységeiben kifejezve). A hemofília leggyakoribb szövődményei (hemarthrosis, vese-, íny- és orrvérzés), valamint a foghúzás esetén a hatékony vérzéscsillapítás biztosítása érdekében a plazma VIII-as faktor tartalmának legalább 20%-nak kell lennie; intermuszkuláris hematómákkal, gyomor-bélrendszeri vérzéssel, törésekkel és egyéb sérülésekkel - legalább 40%; a legtöbb sebészeti beavatkozásnál - legalább 70%. A VIII-as faktor 1 testtömeg-kilogrammonként 1 egységnyi mennyiségben történő bevezetésével a vér tartalma átlagosan 1% -kal nő. Ennek alapján a vér VIII-as faktor koncentrációjának adott szintre emeléséhez szükséges adagok számát a következő képlettel számítjuk ki: a beteg testtömege (kg-ban) megszorozva a beteg vérének szükséges VIII-as faktor tartalmával, ill. osztva 200-zal (a VIII-as faktor minimális tartalma aktivitási egységekben 1 adag krioprecipitátumban). A vérzés teljes leállítása után a VIII-as faktor hemofíliás betegekbe történő bevezetését 12-24 órás időközönként kell elvégezni olyan dózisban, amely legalább 20% -kal növeli a VIII-as faktor tartalmát. A kezelést több napig folytatják - a hematóma méretének látható csökkenéséig. Sebészeti beavatkozások esetén a vérzéscsillapító adagot 30 perccel a műtét előtt adják be. Tömeges vérzés esetén a vérveszteség pótlása, a műtét végén a krioprecipitátum ismételt bevezetése (1/2 adag az eredetiből). A műtét után 3-5 nappal a beteg vérében a VIII-as faktor koncentrációját a műtét alatti határértékeken belül kell tartani. A jövőben a posztoperatív időszakban a hemosztázis fenntartásához elegendő a VIII-as faktor tartalmát 20% -ra növelni. A vérzéscsillapító terápia időtartama 7-14 nap, és a vérzés jellegétől, helyétől, a reparatív szövet jellemzőitől függ. A hemofíliás beteg krioprecipitátummal történő kezelését célszerű kombinálni antifibrinolitikus szerek és kortikoszteroidok profilaktikus és közepes terápiás dózisú egyidejű adásával.

A VIII. véralvadási faktor gyógyszer alkalmazásának ellenjavallatai

Fokozott érzékenység.

A VIII-as alvadási faktor mellékhatásai

Allergiás és transzfúziós reakciók (urticaria, bőrkiütés, stridor légzés, vérnyomáscsökkenés, hidegrázás, hipertermia, anafilaxia), a szájnyálkahártya átmeneti paresztéziája, hányinger, hányás, fejfájás.

Különleges utasítások a VIII. véralvadási faktor gyógyszer alkalmazásához

Óvatosan alkalmazza terhesség és szoptatás alatt.
A pulzusszám szabályozása a terápia előtt és alatt szükséges: a szívfrekvencia jelentős emelkedése esetén az infúzió sebessége lelassul vagy az adagolás leáll. A terápia során és után a vér VIII-as faktor tartalmát ellenőrizni kell. A progresszív hemolitikus anémia jeleinek azonosításához szükséges a hematokrit és a közvetlen Coombs-reakció monitorozása. A tünetmentes hemofíliában szenvedő betegek immunstátuszában bekövetkezett változások a vírusos kórokozóknak való ismételt expozíciónak és/vagy a VIII-as faktor készítményekben előforduló szennyeződéseknek (például IgG) következményei. A kielégítő klinikai eredmények elérése érdekében az eredetileg számított dózison felül további adag is beadható. Klinikai hatás hiányában vizsgálatot kell végezni az inhibitor azonosítására és mennyiségének meghatározására semlegesített antihemofil egységekben 1 ml-re vagy teljes plazmatérfogatra vonatkoztatva. A mellékhatások kockázatának csökkentése érdekében a hígítás után legkésőbb 1 órával ajánlott felhasználni, csak intravénásan, legalább 3 órán keresztül (10 ml/perc sebességgel), ne fagyassza le az oldatot és ne használja fel újra. . Lehetséges a VIII-as véralvadási faktor elleni antitestek kialakulása, ilyen esetekben általában csökken a terápia hatékonysága, amihez szükség lehet a VIII-as véralvadási faktor adagjának emelésére. Növelhető a CD4 sejtszám csökkenésének üteme HIV-szeropozitív hemofíliában szenvedő betegeknél.