Bioanyag vizsgálata IF módszerrel. ELISA vérvizsgálat - a módszer leírása, előnyei és hátrányai, az eredmények értelmezése. Az elemzés indikációi

Jelenleg az ELISA számos változatát és módosítását használják. Az enzim-linked immunoszorbent assay (ELISA) különféle változatai széles körben elterjedtek.

A szilárd fázisú ELISA-t 1971-ben javasolták. A szilárd fázisú ELISA alapelvei, a módosítástól függetlenül, a következők:

• 1. A reakció 1. szakaszában antigének vagy antitestek adszorbeálódnak a szilárd fázison. Ebben az esetben a szilárd fázishoz nem kötődő reagensek mosással könnyen eltávolíthatók.
• 2. A vizsgálati mintát az érzékenyített üregekben inkubáljuk. A pozitív kontroll lyukak standard reagenseket tartalmaznak. Ebben az esetben a szilárd fázis felületén immunkomplexek képződnek. A meg nem kötött alkatrészeket mosással távolítják el.
• 3. Ha antitest-enzim vagy antigén-enzim konjugátumot adunk hozzá és kötjük az immobilizált immunkomplexhez, az enzim aktív helye elérhető marad a szubsztráttal való későbbi interakcióhoz. A szubsztrát lyukakban immobilizált konjugátummal történő inkubálása színreakció kialakulásához vezet. Ez a reakció a kívánt szakaszban leállítható, a festődés súlyossága vizuálisan vagy optikai sűrűséggel értékelhető. A szilárd fázisú analízis bármely változatának fontos lépése a meg nem kötött reagensek lemosása. Nemcsak a szilárd fázisra rögzített komponensek öblítése fontos, hanem a reagensek eltávolítása a réteg teljes mélységéből. A minták mosógéppel automatikusan vagy manuálisan, többcsatornás pipettával moshatók. Az ELISA elvégzéséhez a következőkre van szüksége:
  • · polisztirol tabletta vagy más szilárd fázisú opciók alkalmazása;
  • mosóoldat;
  • konjugátum (enzimmel jelölt antigének vagy antitestek);
  • a felhasznált hordozók keveréke;
  • stop oldat (Stop reagent – ​​oldat a reakció leállítására);
  • Pozitív és/vagy negatív kontrollhoz használt minták;
  • standard antigén (kalibrációs görbe felépítéséhez);
  • egy- és többcsatornás pipetták;
  • · mosó;
  • egy optikai eszköz a vizsgálati oldat optikai sűrűségének meghatározására (ELISA-leolvasó, amely az összes lyukat szekvenciálisan fotométerezi);
  • · 5-100 µl vizsgált biológiai anyag.

Közvetlen ELISA

1. Az antigének vagy antitestek (tesztanyag) adszorbeálódnak a panelek üregeiben. A direkt ELISA-ban gyakran a szilárd fázisra rögzített antigén sejtek és más szemcsés antigének.

Ellenőrzés. Kontrollként egy adszorbeált pozitív kontrollmintát tartalmazó, amely szükségszerűen tartalmazza a kívánt antigént, és egy negatív kontrollmintát használunk, amely nyilvánvalóan nem tartalmazza a tesztantigént. Tisztított standard antigén jelenlétében a reakciót több hígításban hajtjuk végre, hogy kalibrációs görbét készíthessünk.

• 2. „A szilárd fázison maradó szabad kötőhelyek blokkolása kazein BSA-val stb. (a konjugátum nem specifikus szorpciójának megakadályozására a szilárd fázison).
• 3. Enzimmel jelölt antitesteket vagy antigéneket (konjugátumot) adunk a lyukakba, és inkubáljuk. A konjugátum szilárd fázishoz való kötődése csak akkor következik be, ha a rendszer mindkét komponense komplementer. A konjugátummal való inkubálás után a lyukakat mossuk, így eltávolítjuk a konjugátum nem kötött részét.

• 4. Ezután a használt enzimre specifikus szubsztrátot adjuk a lyukakba, és inkubáljuk. Amikor a pozitív kontroll üregekben elérjük a festődés optimális szintjét, az enzimreakciót leállítjuk.
• 5. A reakció elszámolása. Először is, a reakció eredményeit vizuálisan veszik figyelembe. Az eredmények pontosabb leírása érdekében a festődés intenzitását ELISA-olvasóval, megfelelő fényszűrővel értékeljük. Az elemzés eredményei alapján elkészítjük az optikai sűrűség koncentrációtól való függésének grafikonját. ELISA abszorpciós antitest immobilizálása
• a) antigén kimutatására; b) antitestek kimutatására.

Közvetett ELISA.

Az ELISA ezen változatát általában specifikus antitestek kimutatására használják. A standard antigént a panelek üregeiben adszorbeálják, és a pácienstől kapott szérum- vagy más biológiai anyagmintákkal (cerebrospinális folyadék, nyál stb.) inkubálják. A szilárd fázison lévő antigénhez kötődő specifikus antitesteket antiglobulin konjugátum segítségével mutatjuk ki. Az elemzés céljától függően különböző antiglobulin reagenseket használnak, amelyek kimutatják az összes izotípusú, vagy az immunglobulinok egyes osztályaira és alosztályaira jellemző antitesteket. A módszer fő előnye a konjugátum univerzalitása. Ugyanaz a konjugátum felhasználható bármely mintában számos antigén elleni humán antitestek kimutatására. A reakció módszeresen egyszerű.

Az antitestek kimutatására szolgáló indirekt ELISA fő szakaszai:

• 1. Az antigént adszorbeálják a szilárd fázison, majd lemossák a meg nem kötött komponensekről.
• 2. Ingyenes kötőhelyek blokkolása. Kimosva.

• 3. A vizsgálati anyagot a lyukakba adjuk, inkubáljuk, majd mossuk. Ezzel párhuzamosan pozitív és negatív kontrollokat tartalmazó mintákat helyeznek el.
• 4. Adjunk hozzá antiglobulin konjugátumot munkahígításban, inkubáljuk, mossuk le a meg nem kötött komponenseket.
• 5. A szubsztrátot bevisszük, inkubáljuk. Az optimális festődési szint elérésekor a pozitív kontroll üregekben a reakciót leállító oldat hozzáadásával leállítjuk.
• 6. Mérje meg a reakciótermék mennyiségét az ELISA olvasón.

Optimális vizsgálati körülmények között a módszer nagyon specifikus és érzékeny. Lehetővé teszi nanogramm mennyiségű antitest kimutatását a vizsgált betegek szérumában. A kielégítő eredmények eléréséhez a reagensek és a módszerek szabványosítása szükséges. Ez az ELISA-változat monoklonális antitestek tesztelésére is használható.

"Sandwich" - az ELISA egy változata az antigének kimutatására.

Az ezzel az ELISA-variánssal kimutatott antigéneknek több antitestkötő epitóppal kell rendelkezniük, vagy azonos specifitású ismétlődő, térben elkülönülő epitópokkal kell rendelkezniük.

Az ELISA ezen változatának végrehajtásakor a szilárd fázison adszorbeált, erősen specifikus poli- vagy monoklonális antitesteket inkubálják a tesztmintával. A mosási eljárást követően ugyanahhoz az antigénhez enzimmel jelölt antitesteket (konjugátumot) adunk a lyukakba, majd végrehajtjuk a reakció összes többi lépését. A specifikus komplex képződésének hatékonysága az analízis minden szakaszában az antigén-antitest reakció kötési állandójától függ.

Az elemzés főbb szakaszai:

• 1. Monoklonális antitesteket vagy affinitástisztított poliklonális antitesteket rögzítünk a szilárd fázisra.
• 2. A vizsgálati mintát a panelek üregeibe vezetjük, egy pozitív kontrollmintát és egy negatív kontrollmintát párhuzamosan helyezünk el különböző hígításokban. Inkubáljuk és mossuk.
• 3. Enzimmel jelölt monoklonális vagy poliklonális antitesteket (konjugátumot) adunk a lyukakba. A mosást az inkubáció után végezzük.
• 4. A szubsztrátot bevisszük, inkubáljuk. A reakciót leállítjuk, ha a pozitív kontroll üregekben optimális festődést érünk el.
• 5. Az eredmények elszámolása az ELISA olvasón.

A módszer fő előnye a nagy érzékenység, amely meghaladja más ELISA sémák képességeit.

Versenyképes ELISA.

Ez az elemzési lehetőség a jelölt (konjugált) és a jelöletlen (teszt) antitestek versengésén alapul a szilárd fázison adszorbeált antigénhez való kötődésért. A szilárd fázishoz kötődő enzim mennyisége a keverékben lévő szabad antitestek mennyiségével arányosan csökken. Az antigén meghatározásához ugyanezt a lehetőséget alkalmazzuk, de ebben az esetben a kívánt antigén verseng a jelölt, standard antigénnel a szilárd fázis felületén immobilizált antitestekhez való kötődésért.

A kompetitív módszer minimális számú műveletet, alacsony reagensfogyasztást igényel, és könnyen automatizálható. Ha kompetitív ELISA-t végzünk az antitestek kimutatására, jobb, ha jelölt monoklinális antitesteket használunk, ekkor a konjugátum versengése a vizsgált mintával a szilárd fázison adszorbeált antigén egyetlen epitópjáért megy végbe. Ezt az ELISA-változatot különféle vegyületek, például humán immunglobulinok, rák-embrionális antigén, inzulin stb. meghatározására használják. Lehetővé teszi a fertőző ágensek diagnosztikailag jelentős epitópjai elleni antitestek kimutatását.

Az antigén kimutatására szolgáló elemzés fő szakaszai:

• 1. A kimutatandó antigénre specifikus monoklonális antitesteket rögzítjük a szilárd fázison.
• 2. Adja hozzá az enzimmel jelölt antigént és a tesztmintát ismert koncentrációban a panelek üregeibe. Végezzen inkubálást és mosást. Ezzel párhuzamosan pozitív és negatív kontrollokat helyezünk a szomszédos lyukakba. A kalibráció elkészítése standard jelöletlen antigén felhasználásával különböző hígításokban.
• 3. Adja hozzá a szubsztrátot, inkubálja, állítsa le a reakciót, amikor optimális festődés alakul ki a pozitív kontroll üregekben.
• 4. A reakció elszámolása az ELISA olvasón.

Ebben az esetben a vizsgált mintában lévő antigén mennyisége fordítottan arányos a szilárd fázis enzimaktivitásával.

gátló ELISA.

Az ELISA ezen változatában a tesztmintában jelenlévő antigén enzimmel jelölt monoklonális antitestekhez kötődik, és gátolja azok kölcsönhatását a szilárd fázison rögzített standard antigénnel. A konjugátumra specifikus antigén akár nyomokban való jelenléte a mintában gátolja a jelölt antitestek kötődését az immobilizált antigénhez. A gátlás mértéke egyenesen arányos az oldat antigéntartalmával. A kvantitatív analízishez a standard antigén sorozathígításainak felhasználásával kalibrációs görbét készítünk. Az antigén kimutatására szolgáló gátló ELISA főbb szakaszai (6. ábra).

• 1. Adszorbeálja a standard antigént a panelek üregeiben. Titrálással válassza ki a jelölt antitestek munkahígítását.
• 2. A konjugátumot a munkahígításban előinkubáljuk a vizsgálati minta, a standard antigén és a pozitív kontrollminták hígításaival.
• 3. A keveréket átvisszük a panelek lyukaiba. A 100%-os kötődés szabályozására csak jelölt antitesteket adunk több mérőhelyhez, gátló antigén nélkül. A paneleket inkubáljuk, majd mossuk.
• 4. Adja hozzá az aljzatot.
• 5. Rögzítse az eredményeket.

A vizsgálandó mintában a meghatározandó antigén koncentrációja fordítottan arányos a szilárd fázis enzimaktivitásával.

Az ELISA nemcsak oldható antigén vagy antitest meghatározására használható, hanem különféle fehérjéket termelő sejteket is.

Enzim immunfestési módszer (ELISPOT).

1983-ban az ELISA technológiát antitesteket vagy antigéneket (pl. citokineket) szekretáló limfoid sejtek in vitro kimutatására adaptálták. A módszer neve ELISPOT (enzymatic immunoassay vagy spot method). A módszer fő elve:

• 1. Egy polisztirol lyuk felületén (24 lyukú sejttenyésztő panelek segítségével) antigének vagy antitestek adszorbeálódnak, amelyek „csapdázó” reagensként szolgálnak.
• 2. A vizsgált limfoid sejteket hozzáadjuk, több órán át 37°C-on tenyésztjük, lehetőséget adva arra, hogy egy bizonyos helyet elfoglaljanak és szekréciós funkciót végezzenek. Az ilyen sejtek által kiválasztott antitesteket vagy antigéneket a szilárd fázison adszorbeált reagensek rögzítik.
• 3. A sejteket sejtlizáló mosószeres mosóoldattal távolítjuk el.
• 4. A szekréciós termékek felhalmozódási helyeit az enzimhez kapcsolódó antitestek (antiglobulin reagens) hozzáadásával mutatjuk be.
• 5. Hozzáadjuk a szubsztrát-agaróz keveréket (a használt szubsztrátumoknak fel kell oldódniuk az agarózban és oldhatatlan reakciótermékeket kell képezniük), a szilárd fázis felületén barna vagy kék foltok képződnek (a felhasznált enzimektől és szubsztrátoktól függően), feltárva azokat a területeket, ahol a sejtek helyezkedtek el.
• * A keletkező foltokat mikroszkóp alatt megszámoljuk, ez lesz a szekretáló sejtek száma.

Szilárd fázisként nitrocellulóz membrán használható, ebben az esetben számos előnye van: az NCM nagy adszorpciós képessége miatt lényegesen kisebb mennyiségű „csapdázó” reagensként használt antigén szükséges, emellett nincs szükség agaróz hozzáadására az aljzatba.

A szekretáló sejtek számának és a szekretált antigén vagy antitest teljes mennyiségének egyidejű meghatározásával a lyukban, ami más szubsztrát használata esetén lehetséges, lehetővé válik egyetlen sejt által szekretált anyag mennyiségének meghatározása.

Ezt a módszert széles körben alkalmazzák az adszorbeált antitestek által befogott antigént szekretáló sejtek számának meghatározására, valamint a citokineket (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IFN-y, TNF-a).

Jelerősítő rendszerek.

A nagy affinitású antitestek alkalmazásakor az egyes ELISA-változatok érzékenysége nagyon magas, és elméletileg lehetővé teszi egyetlen antigén molekulák kimutatását, de a gyakorlatban az érzékenységet számos tényező korlátozza: enzimaktivitás, jelintenzitás és jelelszámolási módszerek. . A jelerősítő rendszerek lehetővé teszik a különböző ELISA-változatok érzékenységének növelését. Tekintsünk néhány ilyen rendszert:

Az avidin-biotin kölcsönhatása alapján.

A biotin koenzim molekulákat (m.m. 244 Da) biotinil-N-hidroxi-szukcimiddel antitestekkel konjugálják. Egy kis biotin molekula könnyebben kötődik immunglobulinhoz vagy más fehérjéhez anélkül, hogy megsértené immun- vagy enzimatikus tulajdonságait. Az enzim ebben az esetben a tojásfehérje-glikoprotein avidinhez kötődik. Az avidin biotinhoz való kötődési affinitása nagyon magas (a komplex disszociációs állandója 10-15 mol), az avidin-enzim konjugátum szilárdan rögzül az antigén-antitest-biotin komplexen. A megfelelő szubsztrát hozzáadása után a reakcióterméket spektrofotometriásan vagy lumineszcencia intenzitás alapján határozzuk meg.

Egy avidin molekula négy azonos alegységből áll, négy biotin molekulával képes kölcsönhatásba lépni, ami lehetővé teszi két biotin tartalmú vegyület összekötő molekulaként való felhasználását. Ebben az esetben az enzim is biotinilálódik, és az avidin hídként működik, összekötve két biotinmaradékot tartalmazó molekulát. A kapott antigén-antitest-biotin komplexhez szabad avidint adnak, majd a biotinilált enzimet. Jegyezze fel a reakciót.

Az avidin fehérje nem specifikusan szorbeálható más molekulákon, ezért egyre gyakrabban használnak egy másik biotinkötő fehérjét, a Streptomyces avidinii baktériumban található streptavidint. A sztreptavidin a biotinnal is erős komplexet képez, és négy azonos alegységből áll.

Az avidin-biotin komplex alkalmazása lehetővé teszi az ELISA érzékenységének jelentős növelését, hiszen egy konjugátum szintézise során több tucat biotin molekula kötődhet egy AT molekulához. A konjugátumok (antitestek és enzimek biotinnal) előállítása meglehetősen egyszerű, és minimális változással jár az immunológiai és enzimatikus aktivitásukban. Az enzimek biotinnal alkotott konjugátumai univerzális reagensként használhatók.

Kemilumineszcens reakciók alkalmazása.

A kemilumineszcens reakciók segítségével ELISA-ban jelet nyerhetünk, miközben növeljük a módszer érzékenységét és csökkentjük az elemzés idejét. A torma-peroxidázt széles körben alkalmazzák ELISA-ban jelölésként, kimutatására különféle kemilumineszcens reakciók is használhatók. A kemilumineszcens reakciók azon alapulnak, hogy a luminol hidrogén-peroxiddal oxidálva izzik. Közvetlen analízis során egy enzimreakció hidrogén-peroxidot termel, és oxidálja a luminolt, ezt a reakciót a torma-peroxidáz katalizálja. A jel fokozására különféle vegyületeket használnak, például luciferint, fenolokat, ebben az esetben a lumineszcencia intenzitása 10-100-szoros, esetenként 500-szoros (fokozott kemilumineszcens analízis). A lumineszcens jel nagyon stabil, szintje 30 s alatt éri el a maximumot (összehasonlításképpen: a színreakció OPD-vel mint indikátorral csak 30 perc alatt alakul ki teljesen).

A luminollal vagy származékaival végzett közvetett analízis során az antitestet megjelölik. Az ilyen címke szabad állapotban hidrogén-peroxiddal oxidálható fény felszabadulásával. Ha komplexet képez, elveszti oxidációs képességét.

Kaszkádrendszereken alapul.

Az ELISA érzékenységének növelésére enzimkaszkád rendszerek használhatók. Ebben az esetben az első antitesthez kötött enzim redukálható szubsztrátot eredményez a második enzimrendszer számára. A második enzimrendszer lehet szubsztrát-ciklusos vagy redoxiciklusos. Ebben az esetben a foszfo-glükoizomeráz, az aldoláz, az alkalikus foszfatáz enzim jelölőként szolgálhat. A reakció végtermékét vizuálisan vagy spektrofotometriásan határozzuk meg.

Az ELISA erősítő rendszerek nagy érzékenységet érnek el. Az ilyen ELISA-rendszereket a hormonok szintjének meghatározására használják.

Enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) végeznek a szervezet védő funkcióinak átfogó felmérésére. A vizsgálat során meghatározzák az immunsejtek számát és tulajdonságait, a szükséges antitestek jelenlétét. Az ELISA vérvizsgálatot fertőző, hematológiai, autoimmun betegségek, primer és másodlagos immunhiányos betegségek diagnosztizálására végezzük. Fontolja meg, mi az ELISA-val végzett vérvizsgálat, és milyen jelzések léteznek erre a vizsgálatra.

Ami

Az ELISA vérvizsgálat egy olyan laboratóriumi módszer, amely kimutatja az antitesteket vagy antigéneket a vérmintában. Ez a vizsgálat az immunglobulinok, immunológiai komplexek, hormonok szintjének kimutatására szolgál.

Az elemzés indikációi

Az ELISA vérvizsgálat kijelöléséhez a következő jelzések vannak:

• szexuális úton terjedő fertőzések diagnosztizálása - ureaplasma, mycoplasma, chlamydia, trichomonas, szifilisz;
• vírusos betegségek diagnosztizálása - citomegalovírus, herpesz, hepatitis, Epstein-Barr vírus;
• a hormonok szintjének meghatározása;
• onkológiai betegségek diagnosztizálása;
• az immunhiány meghatározása;
• allergiák diagnosztizálása;
• műtét előtti átfogó vizsgálat szervátültetés előtt;
• a terápia hatékonyságának értékelése.

A módszer elve

Az enzim immunoassay módszer működési elve a vérben lévő specifikus fehérje-antitestek - immunglobulinok - meghatározásán alapul. Az immunglobulinokat az emberi immunrendszer termeli, amikor az antigének (idegen mikroorganizmusok) belépnek a szervezetbe. Ezek az immunmolekulák a szervezetben számos fertőző ágenshez kötődnek, és semlegesítik azokat.

Az immunglobulinoknak van egy fontos jellemzőjük - a specifitás. Ennek köszönhetően kötődni tudnak egy specifikus antigénhez, antigén-antitest komplexet képezve. Az ELISA vérvizsgálat során ezt a komplexet határozzák meg minőségileg és mennyiségileg.

Az immunglobulinoknak öt osztálya van. De általában három osztályt határoznak meg - immunglobulinok A, M, G. Ezek az antitestek a fertőzés pillanatától különböző időpontokban halmozódnak fel a szervezetben.

• Immunglobulinok M osztály (IgM) a fertőzés pillanatától számított ötödik napon jelennek meg a vérben. 5-6 hétig vannak a szervezetben, majd eltűnnek a véráramból. Az IgM antitestek a betegség akut periódusát vagy a betegség súlyosbodását jelzik krónikus lefolyásában.
• Körülbelül 3-4 héttel a fertőzés után immunglobulinok jelennek meg a vérben G osztály (IgG). Az emberi vérben több hónapig vagy akár évekig is létezhetnek. Az ELISA vérvizsgálat dekódolása szerint, ha két, két héttel később egymás után vett vérmintában az IgG immunglobulinok mennyisége megemelkedik, az aktuális fertőzésről vagy újrafertőződésről beszél - ugyanazzal a fertőzéssel való újrafertőződésről.
• Immunglobulinok A osztály (IgA) fertőzést vagy fertőző betegség súlyosbodását követően 2-4 héttel kimutatható ezzel a kutatási módszerrel. Ezeknek mindössze 20%-a kering a vérben, a többit a nyálkahártyák választják ki. Az IgA antitestek a fertőző ágensek elpusztulása után 2-8 héttel eltűnnek a véráramból. Ezen immunglobulinok eltűnése a fertőzés gyógyulását jelenti. Ha a betegség vége után meghatározzák az IgA antitestek jelenlétét a vérben, akkor a betegség krónikus stádiumba került.

Felkészülés az elemzésre

Az emberi vért leggyakrabban ELISA vérvizsgálat elvégzésére használják. De meg lehet vizsgálni az üvegtest tartalmát, agy-gerincvelői folyadékot, magzatvizet is.

Kubitális vénából vérmintát vesznek a pácienstől kutatás céljából. Javasoljuk, hogy éhgyomorra adjon vért (legalább 12 órának kell eltelnie az utolsó étkezéstől számítva). Szükséges tájékoztatni az orvost, ha a beteg gyógyszereket szed, mivel ezek egy része megváltoztathatja az elemzés eredményét. A vizsgálat eredményeinek megbízhatóságát befolyásolja az alkohol- és drogfogyasztás.

Dekódolás

Ennek az analízisnek az eredmény formája pozitív (+) vagy negatív (-) eredményt jelez az immunglobulinok minden osztályára vonatkozóan.

Fontolja meg az ELISA vérvizsgálat lehetséges dekódolásának értelmezését.

• Az IgM, IgG, IgA negatív eredménye - a fertőzésekkel szembeni immunitás hiánya.
• Negatív IgM, IgA és pozitív IgG eredmény - fertőzés utáni vagy vakcinázás utáni immunitás.
• A negatív vagy pozitív IgG, IgA és pozitív IgM akut fertőzés.
• Az IgM, IgG, IgA pozitív eredménye egy krónikus fertőző betegség súlyosbodása.
• A negatív IgM eredmény és a negatív vagy pozitív IgG, IgA eredmény krónikus fertőzés.
• Negatív IgM eredmény és nincs IgG, IgA - felépülés.

A módszer előnyei

Az ELISA vérvizsgálatnak számos előnye van. A főbbek megkülönböztethetők:

• viszonylag nagy pontosság (érzékenység);
• a korai diagnózis lehetősége;
• a fertőző folyamat dinamikájának nyomon követésének képessége;
• magas szintű egységesítés, amely lehetővé teszi a tömeges felméréseket;
• az elemzés eredményének megszerzéséhez szükséges rövid idő;
• kényelem a munkában;
• az elemzés minden szakaszának automatizálása;
• viszonylag alacsony költséggel.

Hibák

Az ELISA módszer hátránya, hogy néha álnegatív vagy álpozitív eredményeket ad. A vizsgálat során fellépő technikai hibákon túlmenően a hamis eredmények oka lehet a páciens reumás faktora, krónikus betegségek jelenléte (amelyben antitestek termelődnek), anyagcserezavarok és bizonyos gyógyszerek szedése.

• ascariasis;
• trichinosis - az elemzést többször elvégzik, az antitestek maximális szintjét a fertőzés után 4-12 héttel határozzák meg;
• cysticercosis;
• taeniasis;
• fascioliasis - az antitesteket a betegség akut szakaszában határozzák meg;
• opisthorchiasis - differenciáldiagnózis elvégzése a betegség krónikus és akut formái között;
• giardiasis;
• zsigeri és bőr leishmaniasis;
• amőbiasis;
• toxoplazmózis.

4.2 4,20 az 5-ből (5 szavazat)

A fertőző betegségekre használt standard diagnosztikai intézkedések listája tartalmazza az enzim immunoassay-t. Ha a szifilisz ELISA-vizsgálata pozitív, ne essen azonnal pánikba.

Tekintsük részletesebben ennek a kutatási technikának a jellemzőit és a betegek különböző kategóriáiban kapott eredmények megfejtésének elveit.

Az enzimes immunoassay az egyik leggyakoribb módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására. A treponemális tesztek kategóriájába tartozik, azaz segítségével megállapítható a szifilisz kórokozója - halvány treponema - a beteg szervezetében.

ELISA-val a szifiliszt a treponema elleni antitestek kimutatása miatt mutatják ki. A páciens vérében találhatók, típusuk és mennyiségük a betegség stádiumától és formájától függ, ami lehetővé teszi, hogy fontos információkhoz jusson az emberi egészség aktuális állapotáról.

Előnyök és hátrányok

Az ELISA-t nagyon gyakran szifilisz vagy más fertőző betegségek gyanúja esetén írják fel. Ez annak köszönhető, hogy az elemzés lehetővé teszi a betegség pontos típusának és stádiumának azonosítását, megbízhatósága magas szinten marad - a hiba valószínűsége több vizsgálat eredményei alapján mindössze 1%, az elsődleges ELISA. körülbelül 90%-os pontossággal rendelkezik.

A kiváló minőségű reagensek és a modern berendezések használata lehetővé teszi a mutatók pontosságának maximalizálását.

Általánosságban elmondható, hogy a módszer előnyei a következők:

1. Az eredmény nagy pontossága. A hamis adatok fogadásának valószínűsége nagyon kicsi.
2. Az emberi befolyásoló tényező minimalizálása. A modern ELISA-berendezések a folyamat automatizálása miatt kizárják az emberi befolyást a vizsgálat eredményeire.
3. Specifikus antitestek kimutatása. Az egyik típusú antigéneket nem lehet összetéveszteni másokkal, ezért az elemzés pontos eredményt mutat egy adott diagnózishoz.
4. A normától való legkisebb eltérések rögzítése. A kóros ágensek legkisebb koncentrációja sem marad észrevétlen.

Ne felejtse el ennek a módszernek a gyengeségeit. Az ELISA-nak a következő hátrányai vannak:

1. Magas ár. A magas költség számos tényezőnek köszönhető, különösen a jó felszerelés, a jó minőségű reagensek és a megfelelő képzettségű szakemberek iránti igény.
2. Az előzetes diagnózis szükségessége. Tudnia kell, hogy mely antigéneket kell keresni, mivel további adatok nélkül lehetetlen pontos diagnózist felállítani.
3. A hamis pozitív eredmény valószínűsége. Egyes testállapotok és egyéb tényezők torzíthatják a végső adatokat.

A végrehajtás jelzései

Az orvos enzim immunoassay-t írhat elő nemcsak a szifilisz, hanem számos más fertőző betegség diagnosztizálására is.

Ha közvetlenül figyelembe vesszük a helyzetet a treponema fertőzéssel, a vizsgálat oka lehet:

• a betegség külső tüneteinek megjelenése (kankrék, szifilitikus kiütések, gumik stb.);
• az immunitás jelentős csökkenése;
• szifilisz azonosítása vagy gyanúja szexuális partnernél, rokonoknál és családtagoknál;
• pozitív reakció más tesztek során;
• a szifiliszhez társuló egyéb betegségek azonosítása;
• egy személy személyes vágya, hogy megvizsgálják.

Végrehajtási módszerek

Az ELISA többféleképpen is elvégezhető. Minden esetben a legmegfelelőbb opció kerül kiválasztásra.

Először is, a módszerek a következőkre oszthatók:

1. Minőségi. A páciens testében fertőzés vagy vírus jelenlétét észlelik.
2. Mennyiségi. Meghatározza a patogén ágens elleni antitestek koncentrációját az emberi szervezetben, ami jelzi a betegség kialakulásának stádiumát és intenzitását.

Létezik az ELISA elvégzésének módszereinek osztályozása is a szükséges reakció reprodukálásának elve szerint.

3 lehetőség van:

1. Egyenes. A jelölt antitesteket a mellékelt vérmintákba fecskendezik.
2. Közvetett antigénekkel. Az adszorbeált antigéneket előzetesen egy ELISA vizsgálatra szánt polisztirol lemez sejtjeibe helyezzük. Ezután vírusok antitesteit adják hozzájuk, ami az eredmények további értékeléséhez szükséges immunkomplexek képződését provokálja.
3. Közvetett antitestekkel. A szexuális úton terjedő betegségek esetében ezt a módszert gyakran használják. Ez magában foglalja az antitestek előzetes szorpcióját, csak ezután kerül az antigén a lemezre.

Anyagmintavételi szabályok

A hamis eredmények megszerzésének kockázatának csökkentése érdekében helyesen kell vért adni az elemzéshez.

Az ELISA-vizsgálat előtt bizonyos korlátozásokat be kell tartani:

• kerülje az intenzív fizikai és érzelmi stresszt;
• hagyja abba a dohányzást és az alkoholfogyasztást legalább 1-3 nappal korábban;
• néhány napig át kell állnia a megfelelő táplálkozásra;
• kívánatos, hogy a nők ellenőrizzék a menstruációs ciklus fázisát, mivel a hormonok torzíthatják az eredményeket;
• az utolsó étkezésnek 8-10 órával a véradás előtt kell lennie;
• 10 napig kizárják azokat a gyógyszereket, amelyek befolyásolhatják a vizsgálat eredményeit.

Az ELISA-hoz a vénás vért a cubitalis vénából veszik, reggel éhgyomorra. Általában a vénás vérvételre való felkészülés standard szabályai érvényesek. Attól függően, hogy melyik betegséget vizsgálják, további követelményeket is bevezethetnek a beteg előzetes felkészítésére vonatkozóan.

Módszertan

Az ELISA elvégzésére vonatkozó utasítások meglehetősen egyszerűek:

1. A beteg vért vesz egy vénából.
2. A kivett anyagot speciális finomhálós palettán készítik elő és mintákra osztják.
3. Az antigéneket a választott módszer szerint összekeverik az antitestekkel.
4. A reakciót értékeljük. A mintákat összehasonlítják a kontroll mintákkal, az eredmények minőségi és mennyiségi értékelését végzik.
5. Az adatok egy speciális táblázatba kerülnek rögzítésre kvantitatív mutatók (összes antitest) alkalmazásával.
6. A kezelőorvos megfejti az eredményeket. Szükség esetén megfelelő kezelést írnak elő.

A vizsgálat után a betegnek egy dokumentumot adnak át az eredményekről. Táblázat formájú, a megfelelő jelölésekkel az egyes immunglobulintípusokkal szemben, a fertőző betegségek nevének metszéspontjában.

Dekódolás

Csak egy szakember tudja helyesen megfejteni az elemzések eredményeit. Önállóan nehéz kitalálni, hogy mit jelent például az ELISA eredménye k = 1 4. A szifilisz is előfordulhat különböző formában, ami szintén befolyásolja a végső adatokat.

Az eredmények háromféle immunglobulinra utalnak:

1. IgM. Hagyja meghatározni a szifilisz fertőzésének időszakát. A pozitív eredmény a betegség súlyosbodását jelzi. Hiányuk krónikus patológiák remisszióját vagy a betegség látens formáit jelezheti.
2. IgA. Olyan betegséget jelez, amely a fertőzés óta több mint egy hónapja. Ez a betegség akut fázisának jele is, mind a szokásos, mind az előrehaladott krónikus patológiákban.
3. IgG. A betegség csúcsidőszakának, vagyis súlyosbodásának a jele. Szifilisz esetén a kezelés után egy idő után pozitív reakció jelentkezik. Bizonyos típusú betegségek esetén a kialakult immunitás jele lehet.

Ezeket az anyagokat a szervezet bizonyos sorrendben állítja elő, ami a betegség további jele. Kvalitatív vizsgálatokkal csak az immunglobulinok jelenlétét állapítják meg az egyes típusok vérében.

Ez az elemzésben részt vevő anyagok színének változásában fejeződik ki. A mennyiségi mutatók kisegítő jellegűek, pontosabban írják le a helyzetet. Az antigének és antitestek aránya a betegség súlyosságát és a szervezet válaszreakciójának intenzitását jelzi.

Mit kell tenni

Ha a beteg valóban szifiliszben szenved, abszolút mindig pozitív ELISA-t észlelnek, lehetetlen nem észrevenni a treponemák jelenlétét egy ilyen vizsgálatban. Ne essen kétségbe, a betegség jól reagál a kezelésre, különösen a kezdeti szakaszban.

Mi a teendő, ha a teszt eredménye pozitív:

• az orvos jelzése szerint további vizsgálatokat kell végezni;
• vegyen egy antibiotikumot a kiválasztott séma szerint;
• összpontosítson az immunrendszer erősítésére;
• tájékoztassa szexuális partnerét a betegségről;
• a jövőben rendszeresen végezzen megelőző diagnosztikát a rendelőben történő regisztrációig (pozitív teszteredmény hiányában 5 év elteltével).

Nem kell elhalasztani a betegszabadságot és félni az eredmények nyilvánosságra hozatalától. A diagnózis titkosított és titokban marad, csak abban az esetben, ha fennáll a fertőzés veszélye más személyek számára, a rokonokat és a szexuális partnert kell tájékoztatni a problémáról, hogy átessék a szükséges vizsgálatokat.

Hamis pozitív eredmény és okai

Néha más tesztek eredményét rögzítik, és az ELISA hamis pozitív szifiliszre mutat. Ezért ajánlatos 2-3 segédmódszert elvégezni, és egy idő után megismételni az enzim immunoassayt.

Az ilyen pontatlanságok ritkán fordulnak elő, elsősorban az alábbi tényezők miatt:

• terhesség;
• krónikus betegségek;
• legutóbbi oltás;
• sérülés.

A hamis pozitív eredményeket akut és krónikusra osztják, az azokat kiváltó tényező természetétől függően.

A főbbeket a táblázat tartalmazza:

Ilyen egészségügyi problémák fennállása esetén a szifilisz vizsgálata pozitív eredményt mutathat, de ez csak annak a következménye, hogy a szervezet fehérjéket termel a betegség leküzdésére. Az ELISA azonban antigénként ismeri fel őket.

Egy egészséges gyermek másfél éves koráig hamis pozitív ELISA-eredményt kaphat, ha egy nő szifiliszben fertőződött meg a terhesség alatt. E kor előtt a vérnek még nincs ideje teljesen megújulni, így az anya ellenanyagai jelen lehetnek benne. Kivételt képez az IgM immunglobulinok kimutatása.

A cikkben található videó megtekintésével többet megtudhat az enzim immunoassay jellemzőiről és módszertanáról.

Az ELISA vagy enzim immunoassay egy modern módszer számos patológia meghatározására, beleértve a fertőző természetűeket is. A vizsgálatot a laboratóriumban végzik. A technika fő célja az antitestek kimutatása, jelenlétük jelzi a kórokozók behatolását a szervezetbe. A modern orvostudomány ELISA-elemzést használ számos betegség diagnosztizálására és harmadik felek vegyületeinek azonosítására.

ELISA elemzés: mikor és hogyan kell elvégezni

Az ELISA módszerrel a szakemberek kimutathatják a specifikus antitestek (immunglobulinok) jelenlétét a vérszérumban, és meghatározhatják az antigéneket. Az immunglobulinok a szervezet védekező funkciói által végrehajtott összetett idegi folyamatok eredményeként keletkeznek. Ezek az immunrendszer természetes reakciója az idegen anyagok behatolására. A kórokozó minden típusára specifikus antitestek termelődnek.

Fontos: bizonyos komplexek jelenlétével az enzim immunoassay módszer lehetővé teszi az emberi szervezetben lévő kórokozó típusának azonosítását.

Az ELISA-diagnosztika a következő betegségek kimutatására szolgál:

• herpesz;
• vírusos típusú hepatitis;
• Epstein-Barr vírus (4-es típusú herpesz);
• citomegalovírus.

A vérvizsgálat felfedi a fő patogén baktériumokat, amelyek a szifilisz, az ureaplasmosis és a trichomoniasis kialakulását provokálják. Az elemzések révén a szakértők 600 típusú allergén elleni antitesteket határoznak meg. Az enzimes immunoassay végrehajtása megfelelő a szervátültetés előkészítéséhez.

Fontos: bizonyos esetekben az ELISA egy további módszer az onkológia meghatározására az emberi szervezetben.

Az elemzést kizárólag a laboratóriumban végzik. A kutatáshoz vénás vért vesznek a cubitalis vénából. Az elemzés eredménye másnap lesz elérhető. A megbízható információk megszerzése érdekében a szakértők azt javasolják, hogy kövesse az ELISA-ra való felkészülés szabályait:

• egy nappal a vizsgálat előtt el kell hagyni a fűszeres és füstölt ételek használatát;
• az alkohol tilos;
• véradás reggel éhgyomorra;
• a vizsgálat előtt ki kell zárni minden fizikai és érzelmi stresszt;
• célszerű leszokni a dohányzásról.

Milyen patológiákat mutatnak ki az enzim immunoassay

Az enzim immunoassay segítségével a szakember meghatározza az immunglobulinok különböző osztályait, amelyek jelenléte a szervezetben kóros folyamatok kialakulását jelzi. Tehát az ELISA fő mutatói az IgM és az IgG. Az IgM immunglobulin jelenléte akut patológiás folyamat kialakulását jelzi. Az IgG mutatója a vérben jellemző a gyógyulási szakaszra.

Az ELISA elemzésével a szakemberek számos veszélyes betegséget azonosítanak. Ezek tartalmazzák:

Fontos: ELISA-tesztet írnak elő a szifilisz megerősítésére, ha pozitív eredményt kapnak véradás RV-hez.

Az időben történő diagnózis lehetővé teszi a terápia hatékonyságának nyomon követését, és szükség esetén annak beállítását.

Az elemzés megfejtése: pozitív és negatív válasz

Az ELISA eredményeinek értelmezését szakember végzi a kapott adatok alapján. A válasz lehet pozitív vagy negatív.

Pozitív ELISA

Az eredmény akkor tekinthető pozitívnak, ha a vizsgálat során IgG és IgM osztályú immunglobulinokat mutattak ki a vérben. A bemutatott komponensek jelenléte a következő betegségek kialakulását jelzi:

• szifilisz;
• vírusos típusú hepatitis;
• CMVI (citomegalovírus);
• herpesz;
• bárányhimlő;
• staphylococcusok és streptococcusok által kiváltott betegségek;
• chlamydia.

A szifilisz kialakulásával a fertőzés után 14 nappal specifikus antitestek találhatók a vérben. Számuk szerint a szakember meghatározza a betegség lefolyásának súlyosságát. Az aktív szifiliszterápia 6 hónap elteltével minden baktériumot eltávolít. Ha nincs kezelés, legalább 1,5 évnek kell eltelnie ahhoz, hogy a szervezet teljesen felépüljön.

Az ELISA elemzés a vírusos típusú hepatitist még az inkubációs időszakban, az első tünetek megjelenése előtt észleli.

A CMVI gyakori patológia, amely minden harmadik személynél előfordul. A lakosság számára nem jelent veszélyt, a fertőzés az anyaméhben történik.

Normális esetben az emberi szervezetben nincsenek antitestek a herpeszvírus ellen. Amikor észlelik, szokás diagnosztizálni a betegség akut fázisát.

A bárányhimlő kialakulásával specifikus IgM immunglobulinok találhatók az emberi vérben. A patológia teljes megszüntetése után 2 évig képesek a szervezetben maradni.

A streptococcusok és staphylococcusok által okozott betegségek meghatározásához az ELISA kettős tesztje lehetővé teszi. Újbóli vizsgálatkor a specifikus antitestek szintje gyorsan megemelkedik.

A chlamydia kialakulását az immunglobulin magas szintje jelzi - 1:8 és magasabb. A mutató a betegség progressziójától függően változhat.

Figyelem: egy bizonyos kóros folyamat kialakulásának megerősítése érdekében a szakember további laboratóriumi és műszeres vizsgálatokat ír elő. Egy átfogó vizsgálat lehetővé teszi, hogy hatékony kezelési rendet írjon elő.

Negatív ELISA

Negatív eredménnyel az IgM osztályba tartozó specifikus immunglobulinok nem mutathatók ki az emberi vérben. Talán az IgG jelenléte, az antitestek képesek maradni a szervezetben betegségek, bakteriális és vírusos típusú betegségek után. Egyes esetekben jelenlétük a vérszérumban évtizedekig fennáll.

Figyelem: csak egy tapasztalt szakember tudja helyesen megfejteni az elemzés eredményeit.

A válaszok öntanulmányozása a legtöbb esetben a diagnózis és a helytelen kezelés előírásának megkísérléséhez vezet, orvos részvétele nélkül. Az ilyen hatás ideálisnak tekinthető a kóros folyamat további előrehaladásához.