आईएफ विधि द्वारा जैव सामग्री का अध्ययन। एलिसा रक्त परीक्षण - विधि का विवरण, फायदे और नुकसान, परिणामों की व्याख्या। विश्लेषण के लिए संकेत

वर्तमान में, एलिसा की विभिन्न किस्मों और संशोधनों की एक बड़ी संख्या का उपयोग किया जाता है। एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) के विभिन्न प्रकार व्यापक हो गए हैं।

ठोस चरण एलिसा 1971 में प्रस्तावित किया गया था। ठोस-चरण एलिसा के मूल सिद्धांत, संशोधन की परवाह किए बिना, इस प्रकार हैं:

• 1. प्रतिक्रिया के पहले चरण में, ठोस चरण पर एंटीजन या एंटीबॉडी का विज्ञापन किया जाता है। इस मामले में, ठोस चरण से बंधे हुए अभिकर्मकों को धोने से आसानी से हटा दिया जाता है।
• 2. परीक्षण के नमूने को संवेदनशील कुओं में इनक्यूबेट किया जाता है। सकारात्मक नियंत्रण कुओं में मानक अभिकर्मक होते हैं। इस मामले में, ठोस चरण की सतह पर प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण होता है। अनबाउंड घटकों को धोने से हटा दिया जाता है।
• 3. जब एक एंटीबॉडी-एंजाइम या एंटीजन-एंजाइम संयुग्म जोड़ते हैं और इसे स्थिर प्रतिरक्षा परिसर से बांधते हैं, तो एंजाइम की सक्रिय साइट सब्सट्रेट के साथ बाद की बातचीत के लिए उपलब्ध रहती है। स्थिर संयुग्म के साथ कुओं में सब्सट्रेट के ऊष्मायन से रंग प्रतिक्रिया का विकास होता है। इस प्रतिक्रिया को वांछित स्तर पर रोका जा सकता है, धुंधलापन की गंभीरता का आकलन नेत्रहीन या ऑप्टिकल घनत्व द्वारा किया जा सकता है। ठोस-चरण विश्लेषण के किसी भी प्रकार में एक महत्वपूर्ण कदम अनबाउंड अभिकर्मकों को धोने की प्रक्रिया है। यह न केवल ठोस चरण पर तय घटकों को कुल्ला करने के लिए महत्वपूर्ण है, बल्कि अभिकर्मकों को परत की पूरी गहराई से हटाने के लिए भी महत्वपूर्ण है। नमूने स्वचालित रूप से एक वॉशर के साथ या एक मल्टीचैनल पिपेट के साथ मैन्युअल रूप से धोए जा सकते हैं। एलिसा का संचालन करने के लिए, आपको चाहिए:
  • · पॉलीस्टाइनिन टैबलेट या अन्य ठोस चरण विकल्प का उपयोग किया जाता है;
  • धोने का घोल;
  • संयुग्म (एंजाइम-लेबल एंटीजन या एंटीबॉडी);
  • उपयोग किए गए सबस्ट्रेट्स का मिश्रण;
  • स्टॉप सॉल्यूशन (स्टॉप रिएजेंट - रिएक्शन को रोकने के लिए सॉल्यूशन);
  • सकारात्मक और/या नकारात्मक नियंत्रण के लिए उपयोग किए गए नमूने;
  • मानक प्रतिजन (अंशांकन वक्र बनाने के लिए);
  • सिंगल और मल्टीचैनल पिपेट;
  • वॉशर;
  • परीक्षण समाधान के ऑप्टिकल घनत्व को निर्धारित करने के लिए एक ऑप्टिकल डिवाइस (एलिसा रीडर, एक पाठक जो क्रमिक रूप से सभी कुओं को फोटोमीटर करता है);
  • · अध्ययन की गई जैविक सामग्री के 5-100 μl।

प्रत्यक्ष एलिसा

1. एंटीजन या एंटीबॉडी (परीक्षण सामग्री) पैनलों के कुओं में सोख लिए जाते हैं। अक्सर प्रत्यक्ष एलिसा में, ठोस चरण पर स्थिर प्रतिजन कोशिकाएं और अन्य कण प्रतिजन होते हैं।

नियंत्रण। एक नियंत्रण के रूप में, एक सोखने वाले सकारात्मक नियंत्रण नमूने वाले कुओं का उपयोग किया जाता है, जिसमें आवश्यक रूप से वांछित प्रतिजन होता है, और एक नकारात्मक नियंत्रण नमूना, जिसमें स्पष्ट रूप से परीक्षण प्रतिजन नहीं होता है, का उपयोग किया जाता है। एक शुद्ध मानक प्रतिजन की उपस्थिति में, प्रतिक्रिया कई कमजोर पड़ने पर की जाती है ताकि एक अंशांकन वक्र का निर्माण किया जा सके।

• 2. "ठोस चरण पर शेष मुक्त बाध्यकारी साइटों को कैसिइन बीएसए, आदि के साथ ब्लॉक करें (ठोस चरण पर संयुग्म के गैर-विशिष्ट सोखना को रोकने के लिए)।
• 3. एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी या एंटीजन (संयुग्म) को कुओं में जोड़ा जाता है और इनक्यूबेट किया जाता है। संयुग्म का ठोस चरण से बंधन तभी होगा जब सिस्टम के दोनों घटक पूरक हों। संयुग्म के साथ ऊष्मायन के बाद, कुओं को धोया जाता है, इस प्रकार संयुग्म के अनबाउंड भाग को हटा दिया जाता है।

• 4. उपयोग किए गए एंजाइम के लिए विशिष्ट सब्सट्रेट को फिर कुओं में जोड़ा जाता है और इनक्यूबेट किया जाता है। जब सकारात्मक नियंत्रण कुओं में धुंधलापन का इष्टतम स्तर पहुंच जाता है, तो एंजाइम प्रतिक्रिया बंद हो जाती है।
• 5. प्रतिक्रिया के लिए लेखांकन। सबसे पहले, प्रतिक्रिया के परिणामों को नेत्रहीन रूप से ध्यान में रखा जाता है। परिणामों के अधिक सटीक विवरण के लिए, धुंधला तीव्रता का मूल्यांकन एक उपयुक्त प्रकाश फिल्टर के साथ एलिसा रीडर पर किया जाता है। विश्लेषण के परिणामों के आधार पर, एकाग्रता पर ऑप्टिकल घनत्व की निर्भरता का एक ग्राफ बनाया गया है। एलिसा अवशोषण एंटीबॉडी स्थिरीकरण
• ए) एक एंटीजन का पता लगाने के लिए; बी) एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए।

अप्रत्यक्ष एलिसा।

एलिसा के इस प्रकार का उपयोग आमतौर पर विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है। मानक प्रतिजन पैनलों के कुओं में सोख लिया जाता है और रोगी से प्राप्त सीरम या अन्य जैविक सामग्री (मस्तिष्कमेरु द्रव, लार, आदि) के नमूनों के साथ इनक्यूबेट किया जाता है। एंटीग्लोबुलिन संयुग्म का उपयोग करके ठोस चरण पर एंटीजन से बंधे विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। विश्लेषण के उद्देश्य के आधार पर, विभिन्न एंटीग्लोबुलिन अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है जो सभी आइसोटाइप के एंटीबॉडी का पता लगाते हैं, या अलग-अलग वर्गों और इम्युनोग्लोबुलिन के उपवर्गों के लिए विशिष्ट होते हैं। विधि का मुख्य लाभ संयुग्म की सार्वभौमिकता है। किसी भी नमूने में विभिन्न प्रकार के एंटीजन के लिए मानव एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक ही संयुग्म का उपयोग किया जा सकता है। प्रतिक्रिया व्यवस्थित रूप से सरल है।

एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए अप्रत्यक्ष एलिसा के मुख्य चरण:

• 1. एंटीजन को ठोस चरण पर सोख लिया जाता है, फिर अनबाउंड घटकों से धोया जाता है।
• 2. फ्री बाइंडिंग साइट्स को ब्लॉक करें। धुलाई की गई।

• 3. परीक्षण सामग्री को कुओं में जोड़ा जाता है, ऊष्मायन किया जाता है और फिर धोया जाता है। समानांतर में, सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण वाले नमूने रखे जाते हैं।
• 4. काम करने वाले कमजोर पड़ने में एंटीग्लोबुलिन संयुग्म जोड़ें, इनक्यूबेट करें, अनबाउंड घटकों को धो लें।
• 5. सब्सट्रेट पेश किया गया है, ऊष्मायन किया गया है। सकारात्मक नियंत्रण कुओं में धुंधला होने के इष्टतम स्तर तक पहुंचने पर, स्टॉप सॉल्यूशन जोड़कर प्रतिक्रिया को रोक दिया जाता है।
• 6. एलिसा रीडर पर प्रतिक्रिया उत्पाद की मात्रा को मापें।

इष्टतम परख स्थितियों के तहत, विधि अत्यधिक विशिष्ट और संवेदनशील है। यह आपको अध्ययन किए गए रोगियों के सीरा में एंटीबॉडी की नैनोग्राम मात्रा का पता लगाने की अनुमति देता है। संतोषजनक परिणाम प्राप्त करने के लिए, अभिकर्मकों और कार्यप्रणाली का मानकीकरण आवश्यक है। इस एलिसा संस्करण का उपयोग मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का परीक्षण करने के लिए भी किया जा सकता है।

"सैंडविच" - एंटीजन का पता लगाने के लिए एलिसा का एक प्रकार।

इस एलिसा संस्करण का उपयोग करके पता लगाए गए एंटीजन में कई एंटीबॉडी-बाइंडिंग एपिटोप्स होने चाहिए या एक ही विशिष्टता के दोहराव वाले, स्थानिक रूप से अलग किए गए एपिटोप्स होने चाहिए।

एलिसा के इस प्रकार को करते समय, ठोस चरण पर अधिशोषित अत्यधिक विशिष्ट पॉली- या मोनोक्लोनल एंटीबॉडी परीक्षण नमूने के साथ इनक्यूबेट किए जाते हैं। धोने की प्रक्रिया के बाद, उसी एंटीजन में एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी (संयुग्म) को कुओं में जोड़ा जाता है, और फिर प्रतिक्रिया के अन्य सभी चरणों को अंजाम दिया जाता है। विश्लेषण के प्रत्येक चरण में एक विशिष्ट परिसर के गठन की दक्षता एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के बाध्यकारी स्थिरांक पर निर्भर करती है।

विश्लेषण के मुख्य चरण:

• 1. मोनोक्लोनल एंटीबॉडी या आत्मीयता-शुद्ध पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी ठोस चरण पर स्थिर होते हैं।
• 2. परीक्षण नमूना पैनलों के कुओं में पेश किया जाता है, एक सकारात्मक नियंत्रण नमूना और एक नकारात्मक नियंत्रण नमूना विभिन्न कमजोरियों में समानांतर में रखा जाता है। ऊष्मायन और धोया।
• 3. कुओं में एंजाइम-लेबल वाले मोनोक्लोनल या पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (संयुग्म) जोड़े जाते हैं। ऊष्मायन के बाद धुलाई की जाती है।
• 4. सब्सट्रेट पेश किया गया है, ऊष्मायन किया गया है। सकारात्मक नियंत्रण कुओं में इष्टतम धुंधलापन प्राप्त होने पर प्रतिक्रिया रोक दी जाती है।
• 5. एलिसा रीडर पर परिणामों के लिए लेखांकन।

विधि का मुख्य लाभ इसकी उच्च संवेदनशीलता है, जो अन्य एलिसा योजनाओं की क्षमताओं से अधिक है।

प्रतिस्पर्धी एलिसा।

यह विश्लेषण विकल्प ठोस चरण पर अधिशोषित प्रतिजन के लिए बाध्य करने के लिए लेबल (संयुग्म) और गैर-लेबल (परीक्षण) एंटीबॉडी की प्रतिस्पर्धा पर आधारित है। ठोस चरण से जुड़े एंजाइम की मात्रा मिश्रण में मुक्त एंटीबॉडी की सामग्री के अनुपात में घट जाएगी। प्रतिजन का निर्धारण करने के लिए, एक ही विकल्प का उपयोग किया जाता है, लेकिन इस मामले में वांछित प्रतिजन ठोस चरण की सतह पर स्थिर एंटीबॉडी के लिए बाध्य करने के लिए लेबल, मानक प्रतिजन के साथ प्रतिस्पर्धा करता है।

प्रतिस्पर्धी पद्धति के लिए न्यूनतम संख्या में संचालन, अभिकर्मकों की कम खपत की आवश्यकता होती है, और इसे आसानी से स्वचालित किया जा सकता है। एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक प्रतिस्पर्धी एलिसा आयोजित करते समय, लेबल किए गए मोनोक्लिनल एंटीबॉडी का उपयोग करना बेहतर होता है, फिर परीक्षण नमूने के साथ संयुग्म की प्रतियोगिता ठोस चरण पर सोखने वाले एंटीजन के एकल एपिटोप के लिए होती है। इस एलिसा संस्करण का उपयोग विभिन्न यौगिकों, जैसे मानव इम्युनोग्लोबुलिन, कैंसर-भ्रूण प्रतिजन, इंसुलिन आदि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। यह संक्रामक एजेंटों के नैदानिक ​​​​रूप से महत्वपूर्ण एपिटोप्स के लिए एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देता है।

एंटीजन का पता लगाने के लिए विश्लेषण के मुख्य चरण:

• 1. एंटीजन का पता लगाने के लिए विशिष्ट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी ठोस चरण पर स्थिर होते हैं।
• 2. एंजाइम और परीक्षण नमूने के साथ लेबल किए गए एंटीजन को पैनलों के कुओं में एक ज्ञात एकाग्रता में जोड़ें। ऊष्मायन और धुलाई करें। समानांतर में, सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण आसन्न कुओं में रखे जाते हैं। विभिन्न तनुकरणों में एक मानक गैर-लेबल प्रतिजन का उपयोग करके अंशांकन का निर्माण करना।
• 3. सकारात्मक नियंत्रण कुओं में इष्टतम धुंधला विकसित होने पर सब्सट्रेट जोड़ें, इनक्यूबेट करें, प्रतिक्रिया रोकें।
• 4. एलिसा रीडर पर प्रतिक्रिया के लिए लेखांकन।

इस मामले में, परीक्षण नमूने में एंटीजन की मात्रा ठोस चरण पर एंजाइमी गतिविधि के विपरीत आनुपातिक है।

निरोधात्मक एलिसा।

एलिसा के इस प्रकार में, परीक्षण नमूने में मौजूद एंटीजन एंजाइम-लेबल वाले मोनोक्लोनल एंटीबॉडी से बांधता है और ठोस चरण पर स्थिर मानक एंटीजन के साथ उनकी बातचीत को रोकता है। संयुग्म के लिए विशिष्ट एंटीजन की सम ट्रेस मात्रा के नमूने में उपस्थिति स्थिर एंटीजन के लिए लेबल एंटीबॉडी के बंधन को रोक देगी। निषेध की डिग्री समाधान में प्रतिजन की सामग्री के सीधे आनुपातिक है। मात्रात्मक विश्लेषण के लिए, मानक एंटीजन के सीरियल कमजोर पड़ने का उपयोग करके एक अंशांकन वक्र बनाया जाता है। एंटीजन का पता लगाने के लिए निरोधात्मक एलिसा के मुख्य चरण (चित्र 6)।

• 1. पैनलों के कुओं में मानक एंटीजन को सोखें। अनुमापन द्वारा लेबल एंटीबॉडी के एक कार्यशील कमजोर पड़ने का चयन करें।
• 2. संयुग्म परीक्षण नमूने, मानक प्रतिजन और सकारात्मक नियंत्रण नमूनों के कमजोर पड़ने के साथ काम कर रहे कमजोर पड़ने पर पूर्व-ऊष्मायन किया जाता है।
• 3. मिश्रण को पैनलों के कुओं में स्थानांतरित किया जाता है। 100% बंधन को नियंत्रित करने के लिए, केवल लेबल एंटीबॉडी को कई कुओं में जोड़ा जाता है, बिना निरोधात्मक प्रतिजन के। पैनलों को इनक्यूबेट किया जाता है और फिर धोया जाता है।
• 4. सब्सट्रेट जोड़ें।
• 5. परिणाम रिकॉर्ड करें।

परीक्षण नमूने में निर्धारित किए जाने वाले प्रतिजन की सांद्रता ठोस चरण पर एंजाइमी गतिविधि के व्युत्क्रमानुपाती होती है।

एलिसा का उपयोग न केवल घुलनशील एंटीजन या एंटीबॉडी को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है, बल्कि विभिन्न प्रोटीन उत्पन्न करने वाली कोशिकाओं के लिए भी किया जा सकता है।

एंजाइम इम्यूनोस्टेन विधि (ELISPOT)।

1983 में, एलिसा तकनीक को इन विट्रो में एंटीबॉडी या एंटीजन (जैसे, साइटोकिन्स) को स्रावित करने वाली लिम्फोइड कोशिकाओं का पता लगाने के लिए अनुकूलित किया गया था। विधि को ELISPOT (एंजाइमेटिक इम्यूनोसे या स्पॉट मेथड) कहा जाता है। विधि का मुख्य सिद्धांत:

• 1. एक पॉलीस्टायर्न कुएं की सतह पर (24-वेल सेल कल्चर पैनल का उपयोग करके), एंटीजन या एंटीबॉडी को सोख लिया जाता है, जो "ट्रैपिंग" अभिकर्मकों के रूप में काम करते हैं।
• 2. अध्ययन की गई लिम्फोइड कोशिकाओं को जोड़ा जाता है, 37 डिग्री सेल्सियस पर कई घंटों तक सुसंस्कृत किया जाता है, जिससे उन्हें एक निश्चित स्थान पर कब्जा करने और एक स्रावी कार्य करने का अवसर मिलता है। ऐसी कोशिकाओं द्वारा स्रावित प्रतिपिंडों या प्रतिजनों को ठोस चरण पर अधिशोषित अभिकर्मकों द्वारा ग्रहण किया जाता है।
• 3. सेल लाइसिंग डिटर्जेंट के साथ वाशिंग सॉल्यूशन का उपयोग करके कोशिकाओं को हटा दिया जाता है।
• 4. स्रावी उत्पादों के संचय की साइटों को एंजाइम (एंटीग्लोबुलिन अभिकर्मक) से जुड़े एंटीबॉडी जोड़कर दिखाया जाता है।
• 5. सब्सट्रेट-एग्रोसे मिश्रण जोड़ा जाता है (इस्तेमाल किए गए सबस्ट्रेट्स को agarose में घुलना चाहिए और अघुलनशील प्रतिक्रिया उत्पादों का निर्माण करना चाहिए), भूरे या नीले धब्बे ठोस चरण की सतह पर बनते हैं (उपयोग किए गए एंजाइम और सब्सट्रेट के आधार पर), उन क्षेत्रों का खुलासा करते हैं जहां कोशिकाएं हैं स्थित थे।
• * परिणामी धब्बों को एक माइक्रोस्कोप के नीचे गिना जाता है, यह स्रावी कोशिकाओं की संख्या होगी।

एक नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली को एक ठोस चरण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। इस मामले में, कई फायदे हैं: एनसीएम की उच्च सोखना क्षमता के कारण, "ट्रैपिंग" अभिकर्मक के रूप में उपयोग किए जाने वाले एंटीजन की काफी कम मात्रा की आवश्यकता होती है, इसके अलावा, सब्सट्रेट में agarose को शामिल करने की कोई आवश्यकता नहीं है।

एक साथ स्रावित कोशिकाओं की संख्या और कुएं में स्रावित प्रतिजन या एंटीबॉडी की कुल मात्रा का निर्धारण करके, जो एक अलग सब्सट्रेट का उपयोग करते समय संभव है, एक एकल कोशिका द्वारा स्रावित पदार्थ की मात्रा निर्धारित करना संभव है।

इस पद्धति ने उन कोशिकाओं की संख्या का आकलन करने के लिए व्यापक आवेदन पाया है जो adsorbed एंटीबॉडी द्वारा कब्जा किए गए एंटीजन को स्रावित करते हैं, इसका उपयोग साइटोकिन्स (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6) को स्रावित करने वाली कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए किया जाता है। आईएफएन-वाई, टीएनएफ-ए)।

सिग्नल प्रवर्धन प्रणाली।

उच्च-आत्मीयता एंटीबॉडी का उपयोग करते समय, व्यक्तिगत एलिसा वेरिएंट की संवेदनशीलता बहुत अधिक होती है और सैद्धांतिक रूप से एकल एंटीजन अणुओं का पता लगाना संभव हो जाता है, लेकिन व्यवहार में संवेदनशीलता कई कारकों द्वारा सीमित होती है: एंजाइम गतिविधि, सिग्नल तीव्रता और सिग्नल लेखांकन विधियां . सिग्नल एम्प्लीफिकेशन सिस्टम विभिन्न एलिसा वेरिएंट की संवेदनशीलता को बढ़ाना संभव बनाता है। इनमें से कुछ प्रणालियों पर विचार करें:

एविडिन-बायोटिन की परस्पर क्रिया के आधार पर।

बायोटिन कोएंजाइम अणु (मिमी 244 दा) बायोटिनिल-एन-हाइड्रॉक्सीसुसीमाइड का उपयोग करके एंटीबॉडी के साथ संयुग्मित होते हैं। एक छोटा बायोटिन अणु अपनी प्रतिरक्षा या एंजाइमी गुणों का उल्लंघन किए बिना एक इम्युनोग्लोबुलिन या अन्य प्रोटीन से जुड़ना आसान होता है। इस मामले में एंजाइम अंडे के सफेद ग्लाइकोप्रोटीन एविडिन से बंधा होता है। बायोटिन के लिए एविडिन की बाध्यकारी आत्मीयता बहुत अधिक है (कॉम्प्लेक्स का पृथक्करण स्थिरांक 10-15 mol है), एविडिन-एंजाइम संयुग्म एंटीजन-एंटीबॉडी-बायोटिन कॉम्प्लेक्स पर मजबूती से तय होता है। उपयुक्त सब्सट्रेट जोड़ने के बाद, प्रतिक्रिया उत्पाद स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से या ल्यूमिनेसेंस तीव्रता द्वारा निर्धारित किया जाता है।

एक एविडिन अणु में चार समान सबयूनिट होते हैं, जो चार बायोटिन अणुओं के साथ बातचीत करने में सक्षम होते हैं, जो इसे दो बायोटिन युक्त यौगिकों के बीच एक लिंकिंग अणु के रूप में उपयोग करने की अनुमति देता है। इस मामले में, एंजाइम भी बायोटिनाइलेटेड होता है, और एविडिन एक सेतु के रूप में कार्य करता है, जो बायोटिन अवशेषों वाले दो अणुओं को जोड़ता है। मुक्त एविडिन को परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी-बायोटिन कॉम्प्लेक्स में जोड़ा जाता है, इसके बाद बायोटिनाइलेटेड एंजाइम होता है। प्रतिक्रिया रिकॉर्ड करें।

एविडिन प्रोटीन को अन्य अणुओं पर गैर-विशिष्ट रूप से अवशोषित किया जा सकता है; इसलिए, एक अन्य बायोटिन-बाध्यकारी प्रोटीन, स्ट्रेप्टाविडिन, जीवाणु स्ट्रेप्टोमाइसेस एविडिनी में पाया जाता है, का तेजी से उपयोग किया जा रहा है। स्ट्रेप्टाविडिन भी बायोटिन के साथ एक मजबूत परिसर बनाता है और इसमें चार समान सबयूनिट होते हैं।

एविडिन-बायोटिन कॉम्प्लेक्स के उपयोग से एलिसा की संवेदनशीलता में उल्लेखनीय वृद्धि संभव हो जाती है, क्योंकि संयुग्म के संश्लेषण के दौरान दर्जनों बायोटिन अणु एक एटी अणु से बंधे हो सकते हैं। संयुग्म (बायोटिन के साथ एंटीबॉडी और एंजाइम) प्राप्त करना काफी आसान है और इसके साथ उनकी प्रतिरक्षात्मक और एंजाइमेटिक गतिविधि में न्यूनतम परिवर्तन होते हैं। बायोटिन के साथ एंजाइमों के संयुग्मों का उपयोग सार्वभौमिक अभिकर्मकों के रूप में किया जा सकता है।

रसायनयुक्त प्रतिक्रियाओं का उपयोग।

विधि की संवेदनशीलता को बढ़ाने और विश्लेषण के समय को कम करते हुए, एलिसा में एक संकेत प्राप्त करने के लिए केमिलुमिनसेंट प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जा सकता है। हॉर्सरैडिश पेरोक्साइड का व्यापक रूप से एलिसा में एक लेबल के रूप में उपयोग किया जाता है, और इसका पता लगाने के लिए विभिन्न रसायनयुक्त प्रतिक्रियाओं का भी उपयोग किया जा सकता है। हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ ऑक्सीकृत होने पर केमिलुमिनसेंट प्रतिक्रियाएं ल्यूमिनॉल की चमक की क्षमता पर आधारित होती हैं। प्रत्यक्ष विश्लेषण में, एक एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया हाइड्रोजन पेरोक्साइड का उत्पादन करती है और ल्यूमिनॉल का ऑक्सीकरण करती है; यह प्रतिक्रिया हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज द्वारा उत्प्रेरित होती है। संकेत को बढ़ाने के लिए, विभिन्न यौगिकों का उपयोग किया जाता है, उदाहरण के लिए, ल्यूसिफरिन, फिनोल, इस मामले में, ल्यूमिनेसेंस की तीव्रता 10-100 गुना बढ़ जाती है, कुछ मामलों में 500 गुना (बढ़ी हुई रसायनयुक्त विश्लेषण)। ल्यूमिनसेंट सिग्नल बहुत स्थिर है, इसका स्तर अधिकतम 30 एस में पहुंच जाता है (तुलना के लिए: ओपीडी के साथ एक संकेतक के रूप में रंग प्रतिक्रिया पूरी तरह से केवल 30 मिनट में विकसित होती है)।

ल्यूमिनॉल या इसके डेरिवेटिव के साथ अप्रत्यक्ष विश्लेषण में, एंटीबॉडी को लेबल किया जाता है। मुक्त अवस्था में ऐसा लेबल प्रकाश की रिहाई के साथ हाइड्रोजन पेरोक्साइड द्वारा ऑक्सीकृत होने में सक्षम है। यदि यह एक जटिल बना है, तो यह ऑक्सीकरण करने की क्षमता खो देता है।

कैस्केड सिस्टम के आधार पर।

एलिसा की संवेदनशीलता को बढ़ाने के लिए एंजाइम कैस्केड सिस्टम का उपयोग किया जा सकता है। इस मामले में, पहले एंटीबॉडी-बाध्य एंजाइम का परिणाम दूसरे एंजाइम प्रणाली के लिए एक कम करने योग्य सब्सट्रेट में होता है। दूसरा एंजाइम सिस्टम सब्सट्रेट-साइक्लिक या रेडॉक्सीसाइक्लिक हो सकता है। इस मामले में, फॉस्फो-ग्लूकोइसोमेरेज़, एल्डोलेज़, क्षारीय फॉस्फेट एंजाइम लेबल के रूप में काम कर सकते हैं। अंतिम प्रतिक्रिया उत्पाद नेत्रहीन या स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से निर्धारित किया जाता है।

एलिसा प्रवर्धन प्रणाली उच्च संवेदनशीलता प्राप्त करती है। इस तरह के एलिसा सिस्टम का उपयोग हार्मोन के स्तर को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

शरीर के सुरक्षात्मक कार्यों के व्यापक मूल्यांकन के लिए एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) किया जाता है। अध्ययन के दौरान, प्रतिरक्षा कोशिकाओं की संख्या और गुण, आवश्यक एंटीबॉडी की उपस्थिति निर्धारित की जाती है। एलिसा रक्त परीक्षण संक्रामक, हेमटोलॉजिकल, ऑटोइम्यून बीमारियों, प्राथमिक और माध्यमिक इम्युनोडेफिशिएंसी के निदान के लिए किया जाता है। विचार करें कि एलिसा द्वारा रक्त परीक्षण क्या है, और इस अध्ययन के लिए कौन से संकेत मौजूद हैं।

यह क्या है

एलिसा रक्त परीक्षण एक प्रयोगशाला विधि है जो रक्त के नमूने में एंटीबॉडी या एंटीजन का पता लगाती है। इस अध्ययन का उपयोग इम्युनोग्लोबुलिन, इम्यूनोलॉजिकल कॉम्प्लेक्स, हार्मोन के स्तर का पता लगाने के लिए किया जाता है।

विश्लेषण के लिए संकेत

एलिसा रक्त परीक्षण की नियुक्ति के लिए, निम्नलिखित संकेत हैं:

• यौन संचारित संक्रमणों का निदान - यूरियाप्लाज्मा, माइकोप्लाज्मा, क्लैमाइडिया, ट्राइकोमोनास, सिफलिस;
• वायरल रोगों का निदान - साइटोमेगालोवायरस, दाद, हेपेटाइटिस, एपस्टीन-बार वायरस;
• हार्मोन के स्तर का निर्धारण;
• ऑन्कोलॉजिकल रोगों का निदान;
• इम्युनोडेफिशिएंसी का निर्धारण;
• एलर्जी का निदान;
• अंग प्रत्यारोपण से पहले प्रीऑपरेटिव व्यापक परीक्षा;
• चिकित्सा की प्रभावशीलता का आकलन।

विधि सिद्धांत

एंजाइम इम्युनोसे विधि के संचालन का सिद्धांत रक्त में विशिष्ट प्रोटीन-एंटीबॉडी - इम्युनोग्लोबुलिन के निर्धारण पर आधारित है। इम्युनोग्लोबुलिन मानव प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा निर्मित होते हैं जब एंटीजन (विदेशी सूक्ष्मजीव) शरीर में प्रवेश करते हैं। ये प्रतिरक्षा अणु शरीर में विभिन्न प्रकार के संक्रामक एजेंटों से बंधते हैं और उन्हें बेअसर करते हैं।

इम्युनोग्लोबुलिन की एक महत्वपूर्ण विशेषता है - विशिष्टता। इसके कारण, वे एक विशिष्ट एंटीजन से बंध सकते हैं, जिससे एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बन सकता है। एलिसा रक्त परीक्षण के दौरान, यह जटिल है जिसे गुणात्मक और मात्रात्मक रूप से निर्धारित किया जाता है।

इम्युनोग्लोबुलिन के पांच वर्ग हैं। लेकिन आमतौर पर तीन वर्गों को परिभाषित किया जाता है - इम्युनोग्लोबुलिन ए, एम, जी। ये एंटीबॉडी संक्रमण के क्षण से अलग-अलग समय पर शरीर में जमा होते हैं।

• इम्युनोग्लोबुलिन कक्षा एम (आईजीएम)संक्रमण के क्षण से पांचवें दिन सबसे पहले रक्त में दिखाई देते हैं। वे 5-6 सप्ताह तक शरीर में रहते हैं, फिर रक्तप्रवाह से गायब हो जाते हैं। आईजीएम एंटीबॉडी रोग की तीव्र अवधि या इसके पुराने पाठ्यक्रम में रोग के तेज होने का संकेत देते हैं।
• संक्रमण के लगभग 3-4 सप्ताह बाद, रक्त में इम्युनोग्लोबुलिन दिखाई देते हैं कक्षा जी (आईजीजी). वे मानव रक्त में कई महीनों या वर्षों तक मौजूद रह सकते हैं। एलिसा रक्त परीक्षण के डिकोडिंग के अनुसार, यदि दो सप्ताह बाद लगातार लिए गए दो रक्त नमूनों में, आईजीजी इम्युनोग्लोबुलिन की मात्रा बढ़ जाती है, तो वे एक मौजूदा संक्रमण या पुन: संक्रमण की बात करते हैं - उसी संक्रमण के साथ पुन: संक्रमण।
• इम्युनोग्लोबुलिन कक्षा ए (आईजीए)इस शोध पद्धति से संक्रमण या संक्रामक रोग के बढ़ने के 2-4 सप्ताह बाद पता लगाया जा सकता है। इनमें से केवल 20% रक्त में परिचालित होते हैं, शेष श्लेष्मा झिल्ली द्वारा स्रावित होते हैं। संक्रामक एजेंटों के विनाश के 2-8 सप्ताह बाद IgA एंटीबॉडी रक्तप्रवाह से गायब हो जाते हैं। इन इम्युनोग्लोबुलिन के गायब होने का मतलब संक्रमण का इलाज है। यदि, रोग की समाप्ति के बाद, रक्त में IgA एंटीबॉडी की उपस्थिति निर्धारित की जाती है, तो रोग जीर्ण अवस्था में चला गया है।

विश्लेषण की तैयारी

मानव रक्त का उपयोग अक्सर एलिसा रक्त परीक्षण करने के लिए किया जाता है। लेकिन आप कांच के शरीर, मस्तिष्कमेरु द्रव, एमनियोटिक द्रव की सामग्री की भी जांच कर सकते हैं।

अनुसंधान के लिए रोगी से क्यूबिटल नस से रक्त का नमूना लिया जाता है। खाली पेट रक्तदान करने की सिफारिश की जाती है (अंतिम भोजन के क्षण से कम से कम 12 घंटे बीतने चाहिए)। डॉक्टर को यह बताना आवश्यक है कि क्या रोगी दवाएँ ले रहा है, क्योंकि उनमें से कुछ विश्लेषण के परिणाम को बदल सकते हैं। अध्ययन के परिणामों की विश्वसनीयता शराब और नशीली दवाओं के उपयोग से प्रभावित होती है।

डिक्रिप्शन

इस विश्लेषण का परिणाम रूप इम्युनोग्लोबुलिन के प्रत्येक वर्ग के लिए सकारात्मक (+) या नकारात्मक (-) परिणाम दर्शाता है।

एलिसा रक्त परीक्षण के संभावित डिकोडिंग की व्याख्या पर विचार करें।

• आईजीएम, आईजीजी, आईजीए के नकारात्मक परिणाम - संक्रमण के प्रति प्रतिरोधक क्षमता की कमी।
• नकारात्मक आईजीएम, आईजीए और सकारात्मक आईजीजी परिणाम - संक्रमण के बाद या टीकाकरण के बाद प्रतिरक्षा।
• नकारात्मक या सकारात्मक IgG, IgA और धनात्मक IgM एक तीव्र संक्रमण है।
• IgM, IgG, IgA का सकारात्मक परिणाम एक पुरानी संक्रामक बीमारी का गहरा होना है।
• एक नकारात्मक आईजीएम परिणाम और एक नकारात्मक या सकारात्मक आईजीजी, आईजीए परिणाम एक पुराना संक्रमण है।
• नकारात्मक IgM परिणाम और कोई IgG, IgA - पुनर्प्राप्ति नहीं।

विधि के लाभ

एलिसा रक्त परीक्षण के कई फायदे हैं। मुख्य को प्रतिष्ठित किया जा सकता है:

• अपेक्षाकृत उच्च सटीकता (संवेदनशीलता);
• शीघ्र निदान की संभावना;
• संक्रामक प्रक्रिया की गतिशीलता को ट्रैक करने की क्षमता;
• एकीकरण का एक उच्च स्तर, जो बड़े पैमाने पर सर्वेक्षण की अनुमति देता है;
• विश्लेषण के परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक समय की एक छोटी अवधि;
• काम में सुविधा;
• विश्लेषण के सभी चरणों का स्वचालन;
• अपेक्षाकृत कम लागत।

कमियां

एलिसा पद्धति का नुकसान यह है कि यह कभी-कभी गलत नकारात्मक या गलत सकारात्मक परिणाम देती है। अध्ययन के दौरान तकनीकी त्रुटियों के अलावा, झूठे परिणामों का कारण रोगी में रुमेटी कारक, पुरानी बीमारियों की उपस्थिति (जिसमें एंटीबॉडी का उत्पादन होता है), चयापचय संबंधी विकार और कुछ दवाएं लेना हो सकता है।

• एस्कारियासिस;
• ट्राइकिनोसिस - विश्लेषण कई बार किया जाता है, संक्रमण के 4-12 सप्ताह बाद एंटीबॉडी का अधिकतम स्तर निर्धारित किया जाता है;
• सिस्टीसर्कोसिस;
• टेनिआसिस;
• फासीओलियासिस - रोग के तीव्र चरण में एंटीबॉडी निर्धारित किए जाते हैं;
• opisthorchiasis - रोग के पुराने और तीव्र रूपों के बीच विभेदक निदान करना;
• गियार्डियासिस;
• आंत और त्वचीय लीशमैनियासिस;
• अमीबियासिस;
• टोक्सोप्लाज्मोसिस।

4.2 5 में से 4.20 (5 वोट)

संक्रामक रोगों के लिए उपयोग किए जाने वाले मानक नैदानिक ​​​​उपायों की सूची में एंजाइम इम्यूनोसे शामिल हैं। यदि उपदंश के लिए एलिसा सकारात्मक है, तो तुरंत घबराएं नहीं।

आइए हम इस शोध तकनीक की विशेषताओं और विभिन्न श्रेणियों के रोगियों में प्राप्त परिणामों को समझने के सिद्धांतों पर अधिक विस्तार से विचार करें।

एंजाइम इम्युनोसे संक्रामक रोगों के निदान के लिए सबसे आम तरीकों में से एक है। यह ट्रेपोनेमल परीक्षणों की श्रेणी से संबंधित है, अर्थात, इसका उपयोग रोगी के शरीर में उपदंश के प्रेरक एजेंट - पेल ट्रेपोनिमा की उपस्थिति को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।

एलिसा द्वारा, ट्रेपोनिमा के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के कारण सिफलिस का पता लगाया जाता है। वे रोगी के रक्त में निहित हैं, और उनका प्रकार और मात्रा रोग के चरण और रूप पर निर्भर करती है, जो आपको मानव स्वास्थ्य की वर्तमान स्थिति के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्राप्त करने की अनुमति देती है।

फायदे और नुकसान

एलिसा को अक्सर संदिग्ध उपदंश या अन्य संक्रामक रोगों के लिए निर्धारित किया जाता है। यह इस तथ्य के कारण है कि विश्लेषण आपको बीमारी के सटीक प्रकार और चरण की पहचान करने की अनुमति देता है, और इसकी विश्वसनीयता उच्च स्तर पर बनी हुई है - कई अध्ययनों के परिणामों के आधार पर त्रुटि की संभावना केवल 1% है, प्राथमिक एलिसा लगभग 90% की सटीकता है।

उच्च गुणवत्ता वाले अभिकर्मकों और आधुनिक उपकरणों का उपयोग हमें संकेतकों की सटीकता को अधिकतम करने की अनुमति देता है।

सामान्य तौर पर, विधि के फायदे हैं:

1. परिणाम की उच्च सटीकता. गलत डेटा प्राप्त करने की संभावना बहुत कम है।
2. प्रभाव के मानव कारक का न्यूनतमकरण।एलिसा के संचालन के लिए आधुनिक उपकरण प्रक्रिया के स्वचालन के कारण अध्ययन के परिणामों पर मानव प्रभाव को बाहर करता है।
3. विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाना. एक प्रकार के एंटीजन को दूसरों के साथ भ्रमित करना असंभव है, इसलिए विश्लेषण एक विशिष्ट निदान के लिए एक सटीक परिणाम दिखाता है।
4. आदर्श से मामूली विचलन को ठीक करना. यहां तक ​​​​कि पैथोलॉजिकल एजेंटों की सबसे छोटी एकाग्रता पर किसी का ध्यान नहीं जाएगा।

इस पद्धति की कमजोरियों के बारे में मत भूलना। एलिसा के निम्नलिखित नुकसान हैं:

1. उच्च कीमत। उच्च लागत कई कारकों के कारण होती है, विशेष रूप से, अच्छे उपकरण, उच्च गुणवत्ता वाले अभिकर्मकों और पर्याप्त स्तर के प्रशिक्षण वाले विशेषज्ञों की आवश्यकता।
2. प्रारंभिक निदान की आवश्यकता। आपको यह जानने की जरूरत है कि कौन से एंटीजन को देखना है, क्योंकि अतिरिक्त डेटा के बिना सटीक निदान करना असंभव होगा।
3. एक गलत सकारात्मक परिणाम की संभावना। शरीर की कुछ स्थितियां और अन्य कारक अंतिम डेटा को विकृत कर सकते हैं।

करने के लिए संकेत

डॉक्टर न केवल उपदंश, बल्कि कई अन्य संक्रामक रोगों के निदान के लिए एक एंजाइम इम्युनोसे लिख सकते हैं।

यदि हम सीधे ट्रेपोनिमा के संक्रमण की स्थिति पर विचार करते हैं, तो परीक्षा का कारण यह हो सकता है:

• रोग के बाहरी लक्षणों की उपस्थिति (चेंक्र्स, सिफिलिटिक रैश, गमास, आदि);
• प्रतिरक्षा में उल्लेखनीय कमी;
• यौन साथी, रिश्तेदारों और परिवार के सदस्यों में उपदंश की पहचान या संदेह;
• अन्य परीक्षणों के दौरान सकारात्मक प्रतिक्रिया;
• अन्य बीमारियों की पहचान जो सिफलिस से जुड़ी हो सकती हैं;
• एक व्यक्ति की व्यक्तिगत इच्छा की जांच की जानी चाहिए।

करने के तरीके

एलिसा को विभिन्न तरीकों से किया जा सकता है। प्रत्येक मामले में, सबसे उपयुक्त विकल्प चुना जाता है।

सबसे पहले, विधियों का एक विभाजन है:

1. गुणात्मक। रोगी के शरीर में किसी संक्रमण या वायरस की उपस्थिति का पता लगाया जाता है।
2. मात्रात्मक। मानव शरीर में एक रोगजनक एजेंट के लिए एंटीबॉडी की एकाग्रता को निर्धारित करता है, जो रोग के विकास के चरण और तीव्रता को इंगित करता है।

आवश्यक प्रतिक्रिया को पुन: उत्पन्न करने के सिद्धांत के अनुसार एलिसा के संचालन के तरीकों का वर्गीकरण भी है।

3 विकल्प हैं:

1. सीधा. लेबल किए गए एंटीबॉडी को प्रदान किए गए रक्त के नमूनों में इंजेक्ट किया जाता है।
2. एंटीजन के साथ अप्रत्यक्ष।अधिशोषित प्रतिजनों को प्राथमिक रूप से एलिसा के लिए अभिप्रेत पॉलीस्टाइरीन प्लेट की कोशिकाओं में रखा जाता है। फिर उनमें वायरस के एंटीबॉडी जोड़े जाते हैं, जो परिणामों के आगे मूल्यांकन के लिए आवश्यक प्रतिरक्षा परिसरों के गठन को भड़काते हैं।
3. एंटीबॉडी के साथ अप्रत्यक्ष।यौन संचारित रोगों के लिए, इस पद्धति का अक्सर उपयोग किया जाता है। इसमें एंटीबॉडी का प्रारंभिक सोखना शामिल है, उसके बाद ही एंटीजन को प्लेट में जोड़ा जाता है।

सामग्री नमूनाकरण नियम

झूठे परिणाम प्राप्त करने के जोखिम को कम करने के लिए, सही ढंग से विश्लेषण के लिए रक्त दान करना आवश्यक है।

एलिसा से गुजरने से पहले, कुछ प्रतिबंधों का पालन किया जाना चाहिए:

• तीव्र शारीरिक और भावनात्मक तनाव से बचें;
• कम से कम 1 से 3 दिन पहले धूम्रपान और शराब पीना छोड़ दें;
• कुछ दिनों के लिए आपको उचित पोषण पर स्विच करने की आवश्यकता है;
• महिलाओं के लिए मासिक धर्म चक्र के चरण को नियंत्रित करना वांछनीय है, क्योंकि हार्मोन परिणामों को विकृत कर सकते हैं;
• अंतिम भोजन रक्तदान से 8-10 घंटे पहले होना चाहिए;
• 10 दिनों के लिए, अध्ययन के परिणामों को प्रभावित करने वाली दवाओं को बाहर रखा गया है।

एलिसा के लिए शिरापरक रक्त को क्यूबिटल नस से लिया जाता है, इसे सुबह खाली पेट लेना चाहिए। सामान्य तौर पर, शिरापरक रक्त के नमूने की तैयारी के लिए मानक नियम लागू होते हैं। किस बीमारी की उपस्थिति के आधार पर परीक्षण किया जा रहा है, रोगी की प्रारंभिक तैयारी के लिए अतिरिक्त आवश्यकताओं को पेश किया जा सकता है।

क्रियाविधि

एलिसा आयोजित करने के निर्देश काफी सरल हैं:

1. रोगी शिरा से रक्त लेता है।
2. ली गई सामग्री को तैयार किया जा रहा है और एक विशेष महीन-जाली पैलेट पर नमूनों में विभाजित किया गया है।
3. एंटीजन को चुनी हुई विधि के अनुसार एंटीबॉडी के साथ मिलाया जाता है।
4. प्रतिक्रिया का मूल्यांकन किया जाता है। नमूनों की तुलना नियंत्रण नमूनों से की जाती है, परिणामों का गुणात्मक और मात्रात्मक मूल्यांकन किया जाता है।
5. मात्रात्मक संकेतकों (कुल एंटीबॉडी) के उपयोग के साथ डेटा को एक विशेष तालिका में दर्ज किया जाता है।
6. उपस्थित चिकित्सक परिणामों को डिक्रिप्ट करता है। यदि आवश्यक हो, उचित उपचार निर्धारित है।

परीक्षा के बाद, रोगी को परिणामों के साथ एक दस्तावेज दिया जाता है। इसमें संक्रामक रोगों के नामों के साथ चौराहे पर प्रत्येक प्रकार के इम्युनोग्लोबुलिन के विपरीत संबंधित पदनामों के साथ एक तालिका का रूप होता है।

डिक्रिप्शन

केवल एक विशेषज्ञ विश्लेषण के परिणामों को सही ढंग से समझने में सक्षम होगा। अपने दम पर यह पता लगाना मुश्किल है, उदाहरण के लिए, एलिसा के = 1 4 का परिणाम क्या है। सिफलिस विभिन्न रूपों में भी हो सकता है, जो अंतिम डेटा को भी प्रभावित करता है।

परिणाम 3 प्रकार के इम्युनोग्लोबुलिन इंगित करते हैं:

1. आईजीएम. उपदंश के साथ संक्रमण की अवधि निर्धारित करने की अनुमति दें। एक सकारात्मक परिणाम रोग के तेज होने का संकेत देता है। उनकी अनुपस्थिति पुरानी विकृतियों या बीमारी के अव्यक्त रूप की छूट का संकेत दे सकती है।
2. आईजीए.एक ऐसी बीमारी को इंगित करता है जो संक्रमण के बाद से एक महीने से अधिक पुरानी हो गई है। यह सामान्य विकृति और उन्नत जीर्ण दोनों के साथ रोग के तीव्र चरण का भी संकेत है।
3. आईजीजी. यह रोग की चरम अवधि का संकेत है, अर्थात इसका तेज होना। उपदंश के साथ, उपचार के कुछ समय बाद सकारात्मक प्रतिक्रिया दिखाई देती है। कुछ प्रकार की बीमारियों में, यह विकसित प्रतिरक्षा का संकेत हो सकता है।

ये पदार्थ शरीर द्वारा एक निश्चित क्रम में निर्मित होते हैं, जो रोग का एक अतिरिक्त संकेत है। गुणात्मक परीक्षणों के साथ, प्रत्येक प्रकार के रक्त में केवल इम्युनोग्लोबुलिन की उपस्थिति स्थापित की जाती है।

यह विश्लेषण में शामिल सामग्रियों के रंग में बदलाव में व्यक्त किया गया है। मात्रात्मक संकेतक सहायक होते हैं, वे स्थिति का अधिक सटीक वर्णन करते हैं। एंटीजन और एंटीबॉडी का अनुपात रोग की गंभीरता और शरीर की प्रतिक्रिया की तीव्रता को इंगित करता है।

क्या करें

यदि रोगी को वास्तव में उपदंश है, तो हमेशा एक सकारात्मक एलिसा का पता लगाया जाता है, इस तरह के अध्ययन में ट्रेपोनिमा की उपस्थिति को नोटिस नहीं करना असंभव है। निराशा न करें, रोग उपचार के लिए अच्छी तरह से प्रतिक्रिया करता है, खासकर प्रारंभिक अवस्था में।

यदि परीक्षा परिणाम सकारात्मक है तो क्या करें:

• डॉक्टर के संकेतों के अनुसार अतिरिक्त परीक्षाओं से गुजरना;
• चुनी हुई योजना के अनुसार एंटीबायोटिक चिकित्सा का एक कोर्स करें;
• प्रतिरक्षा प्रणाली को मजबूत करने पर ध्यान दें;
• अपने यौन साथी को बीमारी के बारे में सूचित करें;
• भविष्य में, नियमित रूप से निवारक निदान से गुजरना जब तक कि औषधालय में पंजीकरण रद्द न हो जाए (सकारात्मक परीक्षण परिणामों के अभाव में 5 वर्ष के बाद)।

बीमार अवकाश को स्थगित करने और परिणामों को सार्वजनिक करने से डरने की कोई आवश्यकता नहीं है। निदान एन्क्रिप्टेड है और गुप्त रहता है, केवल अगर अन्य लोगों को संक्रमण का खतरा है, तो समस्या के बारे में रिश्तेदारों और यौन साथी को सूचित करना आवश्यक है ताकि वे आवश्यक परीक्षाओं से गुजर सकें।

गलत सकारात्मक परिणाम और इसके कारण

कभी-कभी अन्य परीक्षणों का परिणाम दर्ज किया जाता है और एलिसा उपदंश के लिए गलत सकारात्मक होता है। यही कारण है कि 2-3 सहायक विधियों को करने और थोड़ी देर बाद एंजाइम इम्यूनोसे को दोहराने की सिफारिश की जाती है।

ऐसी अशुद्धियाँ दुर्लभ हैं, वे मुख्य रूप से ऐसे कारकों के कारण हैं:

• गर्भावस्था;
• पुराने रोगों;
• हाल ही में टीकाकरण;
• चोट।

झूठे-सकारात्मक परिणामों को तीव्र और जीर्ण में विभाजित किया जाता है, जो उन्हें उकसाने वाले कारक की प्रकृति पर निर्भर करता है।

मुख्य तालिका में प्रस्तुत किए गए हैं:

ऐसी स्वास्थ्य समस्याओं की उपस्थिति में, उपदंश के लिए एक परीक्षण सकारात्मक परिणाम दिखा सकता है, लेकिन यह केवल रोग से लड़ने के लिए शरीर द्वारा प्रोटीन के उत्पादन का परिणाम है। हालांकि, एलिसा उन्हें एंटीजन के रूप में पहचानती है।

गर्भावस्था के दौरान एक महिला को सिफलिस से संक्रमित होने पर डेढ़ साल की उम्र तक का एक स्वस्थ बच्चा झूठे सकारात्मक एलिसा परिणामों का अनुभव कर सकता है। इस उम्र से पहले, रक्त में अभी पूरी तरह से खुद को नवीनीकृत करने का समय नहीं है, इसलिए इसमें मां के एंटीबॉडी मौजूद हो सकते हैं। अपवाद आईजीएम इम्युनोग्लोबुलिन का पता लगाने की स्थिति है।

आप इस लेख में वीडियो देखकर एंजाइम इम्युनोसे की विशेषताओं और इसकी कार्यप्रणाली के बारे में अधिक जान सकते हैं।

एलिसा या एंजाइम इम्यूनोएसे संक्रामक प्रकृति के सहित कई विकृतियों को निर्धारित करने का एक आधुनिक तरीका है। अध्ययन प्रयोगशाला में किया जाता है। तकनीक का मुख्य उद्देश्य एंटीबॉडी का पता लगाना है, उनकी उपस्थिति शरीर में रोगजनक एजेंटों के प्रवेश को इंगित करती है। आधुनिक चिकित्सा कई बीमारियों के निदान और तीसरे पक्ष के यौगिकों की पहचान करने के लिए एलिसा विश्लेषण का उपयोग करती है।

एलिसा विश्लेषण: इसे कब और कैसे किया जाता है

एलिसा पद्धति का उपयोग करके, विशेषज्ञ रक्त सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी (इम्युनोग्लोबुलिन) की उपस्थिति का पता लगा सकते हैं और एंटीजन का निर्धारण कर सकते हैं। इम्युनोग्लोबुलिन शरीर के सुरक्षात्मक कार्यों द्वारा किए गए जटिल तंत्रिका प्रक्रियाओं के परिणामस्वरूप उत्पन्न होते हैं। वे विदेशी एजेंटों के प्रवेश के लिए प्रतिरक्षा प्रणाली की एक प्राकृतिक प्रतिक्रिया हैं। प्रत्येक प्रकार के रोगज़नक़ के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उत्पादन किया जाता है।

महत्वपूर्ण: कुछ परिसरों की उपस्थिति से, एंजाइम इम्यूनोएसे विधि आपको मानव शरीर में रोगज़नक़ के प्रकार की पहचान करने की अनुमति देती है।

एलिसा द्वारा निदान निम्नलिखित बीमारियों का पता लगाने के लिए किया जाता है:

• दाद;
• वायरल प्रकार हेपेटाइटिस;
• एपस्टीन-बार वायरस (दाद प्रकार 4);
• साइटोमेगालो वायरस।

एक रक्त परीक्षण से मुख्य रोगजनक बैक्टीरिया का पता चलता है जो सिफलिस, यूरियाप्लाज्मोसिस और ट्राइकोमोनिएसिस के विकास को भड़काते हैं। विश्लेषण के माध्यम से, विशेषज्ञ 600 प्रकार के एलर्जी के प्रति एंटीबॉडी का निर्धारण करते हैं। अंग प्रत्यारोपण की तैयारी के लिए एंजाइम इम्युनोसे का संचालन करना उपयुक्त है।

महत्वपूर्ण: कुछ मामलों में, एलिसा मानव शरीर में ऑन्कोलॉजी के निर्धारण के लिए एक अतिरिक्त विधि है।

विश्लेषण विशेष रूप से प्रयोगशाला में किया जाता है। शोध के लिए, शिरापरक रक्त को क्यूबिटल नस से लिया जाता है। विश्लेषण के परिणाम अगले दिन उपलब्ध होंगे। विश्वसनीय जानकारी प्राप्त करने के लिए, विशेषज्ञ एलिसा की तैयारी के नियमों का पालन करने की सलाह देते हैं:

• अध्ययन से एक दिन पहले, मसालेदार और स्मोक्ड खाद्य पदार्थों के उपयोग को छोड़ना आवश्यक है;
• शराब प्रतिबंधित है;
• सुबह खाली पेट रक्तदान किया जाता है;
• अध्ययन से पहले, किसी भी शारीरिक और भावनात्मक तनाव को बाहर करना आवश्यक है;
• धूम्रपान बंद करने की सलाह दी जाती है।

एंजाइम इम्युनोसे द्वारा किन विकृति का पता लगाया जाता है

एंजाइम इम्युनोसे का उपयोग करते हुए, एक विशेषज्ञ इम्युनोग्लोबुलिन के विभिन्न वर्गों को निर्धारित करता है, जिसकी उपस्थिति शरीर में रोग प्रक्रियाओं के विकास को इंगित करती है। तो, एलिसा के मुख्य संकेतक आईजीएम और आईजीजी हैं। आईजीएम इम्युनोग्लोबुलिन की उपस्थिति एक तीव्र रोग प्रक्रिया के विकास को इंगित करती है। रक्त में IgG का संकेतक पुनर्प्राप्ति के चरण के लिए विशिष्ट है।

एलिसा के विश्लेषण के माध्यम से, विशेषज्ञ कई खतरनाक बीमारियों की पहचान करते हैं। इसमे शामिल है:

महत्वपूर्ण: आरवी के लिए रक्त दान करके सकारात्मक परिणाम प्राप्त होने पर उपदंश की पुष्टि के लिए एक एलिसा परीक्षण निर्धारित किया जाता है।

समय पर निदान आपको चिकित्सा की प्रभावशीलता को ट्रैक करने और यदि आवश्यक हो, तो इसे समायोजित करने की अनुमति देता है।

विश्लेषण को समझना: सकारात्मक और नकारात्मक प्रतिक्रिया

एलिसा के परिणामों की व्याख्या एक विशेषज्ञ द्वारा प्राप्त आंकड़ों के आधार पर की जाती है। उत्तर सकारात्मक या नकारात्मक हो सकता है।

सकारात्मक एलिसा

यदि अध्ययन के दौरान रक्त में आईजीजी और आईजीएम वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन पाए गए तो परिणाम सकारात्मक माना जाता है। प्रस्तुत घटकों की उपस्थिति निम्नलिखित रोगों के विकास को इंगित करती है:

• उपदंश;
• वायरल प्रकार हेपेटाइटिस;
• सीएमवीआई (साइटोमेगालोवायरस);
• दाद;
• छोटी माता;
• स्टेफिलोकोसी और स्ट्रेप्टोकोकी द्वारा उकसाए गए रोग;
• क्लैमाइडिया।

उपदंश के विकास के साथ, संक्रमण के 14 दिन बाद रक्त में विशिष्ट एंटीबॉडी पाए जाते हैं। उनकी संख्या के अनुसार, विशेषज्ञ रोग के पाठ्यक्रम की गंभीरता को निर्धारित करता है। एक्टिव सिफलिस थेरेपी 6 महीने के बाद सभी बैक्टीरिया को खत्म कर देती है। यदि कोई इलाज नहीं है, तो शरीर को पूरी तरह से ठीक होने में कम से कम 1.5 साल लगेंगे।

एलिसा विश्लेषण पहले लक्षण प्रकट होने से पहले, ऊष्मायन अवधि में भी वायरल प्रकार के हेपेटाइटिस का पता लगाता है।

सीएमवीआई एक सामान्य विकृति है जो हर तीसरे व्यक्ति में होती है। आबादी के लिए यह खतरा नहीं है, गर्भ में संक्रमण होता है।

आम तौर पर, मानव शरीर में हर्पीस वायरस के प्रति एंटीबॉडी नहीं होते हैं। जब उनका पता लगाया जाता है, तो यह रोग के तीव्र चरण का निदान करने के लिए प्रथागत है।

चिकनपॉक्स के विकास के साथ, मानव रक्त में विशिष्ट IgM इम्युनोग्लोबुलिन पाए जाते हैं। पैथोलॉजी के पूर्ण उन्मूलन के बाद, वे 2 साल तक शरीर में रहने में सक्षम हैं।

स्ट्रेप्टोकोकी और स्टेफिलोकोसी के कारण होने वाली बीमारियों का निर्धारण करने के लिए, एलिसा के लिए एक दोहरा परीक्षण अनुमति देता है। जब पुन: जांच की जाती है, तो विशिष्ट एंटीबॉडी का स्तर तेजी से बढ़ता है।

क्लैमाइडिया का विकास उच्च स्तर के इम्युनोग्लोबुलिन - 1: 8 और ऊपर द्वारा इंगित किया गया है। रोग की प्रगति के आधार पर संकेतक भिन्न हो सकते हैं।

ध्यान दें: एक निश्चित रोग प्रक्रिया के विकास की पुष्टि करने के लिए, विशेषज्ञ अतिरिक्त प्रयोगशाला और वाद्य अध्ययन निर्धारित करता है। एक व्यापक अध्ययन आपको एक प्रभावी उपचार आहार निर्धारित करने की अनुमति देता है।

नकारात्मक एलिसा

एक नकारात्मक परिणाम के साथ, मानव रक्त में आईजीएम वर्ग के विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन का पता नहीं लगाया जाता है। शायद आईजीजी की उपस्थिति, एंटीबॉडी शरीर में बीमारियों, बैक्टीरिया और वायरल प्रकार के बाद भी रहने में सक्षम हैं। कुछ मामलों में, रक्त सीरम में उनकी उपस्थिति दशकों तक बनी रहती है।

ध्यान दें: केवल एक अनुभवी विशेषज्ञ ही विश्लेषण के परिणामों को सही ढंग से समझ सकता है।

ज्यादातर मामलों में उत्तरों के स्व-अध्ययन से डॉक्टर की भागीदारी के बिना, गलत उपचार का निदान और निर्धारण करने का प्रयास होता है। इस तरह के प्रभाव को रोग प्रक्रिया की आगे की प्रगति के लिए आदर्श माना जाता है।