Anaeroobsete bakterite tüübid. Anaeroobid. Anaeroobid – bakterioidid

1. Anaeroobide omadused

2. EMCARi diagnoosimine

1. Anaeroobsete mikroorganismide levik looduses.

Anaeroobsed mikroorganismid on kõikjal, kus orgaanilise aine lagunemine toimub ilma O2-le juurdepääsuta: erinevates pinnasekihtides, rannikuääres, sõnnikuhunnikutes, juustu valmimisel jne.

Anaeroobe leidub ka hästi õhustatud pinnases, kui seal leidub O2 neelavaid aeroobe.

Looduses leidub nii kasulikke kui ka kahjulikke anaeroobe. Näiteks loomade ja inimeste soolestikus on anaeroobid, mis toovad kasu peremeesorganismile (B. bifidus), kes täidab kahjuliku mikrofloora antagonisti rolli. See mikroob kääritab glükoosi ja laktoosi ning moodustab piimhapet.

Kuid soolestikus on putrefaktiivsed ja patogeensed anaeroobid. Nad lagundavad valke, põhjustavad mädanemist ja erinevat tüüpi käärimist, vabastavad toksiine (B. Putrificus, B. Perfringens, B. tetani).

Kiudainete lagunemist loomakehas viivad läbi anaeroobid ja aktinomütseedid. Põhimõtteliselt toimub see protsess seedetraktis. Anaeroobe leidub peamiselt kõhunäärmes ja jämesooles.

Pinnases leidub suur hulk anaeroobe. Pealegi võib mõnda neist leida mullas vegetatiivsel kujul ja seal paljuneda. Näiteks B. perfringens. Anaeroobid on reeglina spoore moodustavad mikroorganismid. Eosvormid on välistegurite (kemikaalide) suhtes väga vastupidavad.

2. Mikroorganismide anaerobioos.

Vaatamata mikroorganismide füsioloogiliste omaduste mitmekesisusele on nende keemiline koostis põhimõtteliselt sama: valgud, rasvad, süsivesikud, anorgaanilised ained.

Ainevahetusprotsesse reguleerib ensümaatiline aparaat.

Termini anaerobioos (an - negation, aer - air, bios - life) võttis kasutusele Pasteur, kes avastas esimesena anaeroobse eoseid kandva mikroobi B. Buturis, mis on võimeline arenema vaba O2 puudumisel ja fakultatiivselt arenema keskkonnas. mis sisaldab 0,5% O2 ja võib teda siduda (näiteks B. chauvoei).

Anaeroobsed protsessid - oksüdatsiooni käigus toimub rida dehüdrogeneratsioone, milles "2H" kandub järjestikku ühelt molekulilt teise (lõppkokkuvõttes on kaasatud O2).

Igas etapis vabaneb energia, mida rakk kasutab sünteesiks.

Peroksidaas ja katalaas on ensüümid, mis soodustavad selles reaktsioonis moodustunud H2O2 kasutamist või eemaldamist.

Rangetel anaeroobidel puuduvad hapniku molekulidega seondumise mehhanismid, mistõttu nad ei hävita H2O2 Katalaasi ja H2O2 anaeroobne toime taandub katalaasi raua anaeroobseks redutseerimiseks vesinikperoksiidiga ja aeroobseks oksüdatsiooniks O2 molekuli poolt.

3. Anaeroobide roll loomade patoloogias.

Praegu peetakse tuvastatuks järgmisi anaeroobide põhjustatud haigusi:

EMKAR – B. Chauvoei

Nekrobatsilloos - B. necrophorum

Teetanuse tekitaja on B. Tetani.

Kulu ja kliiniliste tunnuste järgi on neid haigusi raske eristada ning ainult bakterioloogilised uuringud võimaldavad isoleerida vastava patogeeni ja tuvastada haiguse põhjuse.

Mõnel anaeroobil on mitu serotüüpi ja igaüks neist põhjustab erinevaid haigusi. Näiteks B. perfringens - 6 serorühma: A, B, C, D, E, F - mis erinevad bioloogiliste omaduste ja toksiinide moodustumise poolest ning põhjustavad erinevaid haigusi. Niisiis

B. perfringens tüüp A – gaasigangreen inimestel.

B. perfringens tüüp B - B. lambaliha - düsenteeria - tallede anaeroobne düsenteeria.

B. perfringens tüüp C - (B. paludis) ja tüüp D (B. ovitoxicus) - lammaste nakkuslik enterokseemia.

B. perfringens tüüp E – vasikate soole mürgistus.

Anaeroobid mängivad teatud rolli teiste haiguste tüsistuste tekkimisel. Näiteks sigade katku, paratüüfuse, suu- ja sõrataudiga jne, mille tagajärjel muutub protsess keerulisemaks.

4. Meetodid anaeroobsete tingimuste loomiseks anaeroobide kasvatamiseks.

Neid on: keemiline, füüsikaline, bioloogiline ja kombineeritud.

Toitekeskkond ja anaeroobide kasvatamine neil.

1. Vedel toitainekeskkond.

A) Lihapeptoonmaksa puljong – Kitt-Torozza sööde – on peamine vedel toitainekeskkond

Selle valmistamiseks kasutatakse 1000 g veisemaksa, mis valatakse 1,l kraaniveega ja steriliseeritakse 40 minutit. Temperatuuril t=110 С

Lahjendatud 3-kordse MPB kogusega

Seadsin pH = 7,8-8,2

1 liitri kohta puljong 1,25 g Nacle

Lisa väikesed tükid maksa

Söötme pinnale kantakse kihiti vaseliiniõli

Autoklaav t=10-112 C - 30-45 min.

B) Ajukeskkond

Koostis - värske veise aju (hiljemalt 18 tundi), puhastatud koorest ja purustatud hakklihamasinas

Sega veega 2:1 ja aja läbi sõela

Segu valatakse katseklaasidesse ja steriliseeritakse 2 tundi t=110 juures

Tihe kultuurisööde

A) Zeismeri veresuhkru agarit kasutatakse puhaskultuuri eraldamiseks ja kasvu iseloomu määramiseks.

Zeissleri agari retsept

3% MPA valatakse 100 ml-sse. ja steriliseerida

Sulanud agarile lisa steriilne! 10 ml. 20% glükoosi (t. s. 2%) ja 15-20 ml. lammaste, veiste, hobuste steriilne veri

Kuiv

B) želatiin - kolonn

Anaeroobide tüübi määramiseks on vaja uurida nende omadusi:

Morfoloogilised, kultuurilised, patoloogilised ja seroloogilised, võttes arvesse nende varieeruvuse potentsiaali.

Anaeroobide morfoloogilised ja biokeemilised omadused

Morfoloogilised tunnused - iseloomustab väljendunud mitmekesisus. Mikroobide vormid elunditest valmistatud määrdudes erinevad järsult kunstlikul toitekeskkonnal saadud mikroobide vormidest. Sagedamini on need varraste või niitide ja harvem kokkide kujul. Sama patogeen võib olla nii pulkade kui ka rühmitatud niitide kujul. Vanades kultuurides võib teda leida kokkide kujul (nt B. necrophorum).

Suurimad on B. gigas ja B. perfringens pikkusega kuni 10 mikronit. Ja laius 1-1,5 mikronit.

Veidi väiksem kui B. Oedematiens 5-8 x 0,8 -1,1. Samal ajal ulatub Vibrion Septicumi keermete pikkus 50-100 mikronini.

Anaeroobide hulgas on enamik eoseid moodustavaid mikroorganisme. Nendes mikroorganismides paiknevad eosed erinevalt. Kuid sagedamini on see Clostridium tüüpi (closter - spindle) Eosed võivad olla ümara ovaalse kujuga. Eoste paiknemine on iseloomulik teatud tüüpi bakteritele: keskel - B. Perfringens, B. Oedematiens jne või subterminaalselt (mõnevõrra lähemale lõppu) - Vibrion Septicum, B. Histolyticus jne, ja ka lõplikult B. Tetani

Eoseid toodetakse üks raku kohta. Eosed tekivad tavaliselt pärast looma surma. Seda omadust seostatakse eoste funktsionaalse eesmärgiga liikide säilitamiseks ebasoodsates tingimustes.

Mõned anaeroobid on liikuvad ja lipukesed paiknevad peretrilise mustriga.

Kapsel on kaitsva funktsiooniga ja sisaldab varutoitaineid.

Anaeroobsete mikroorganismide põhilised biokeemilised omadused

Süsivesikute ja valkude lagundamise võime järgi jagunevad anaeroobid sahharolüütilisteks ja proteolüütilisteks.

Olulisemate anaeroobide kirjeldus.

Sulg - 1865 lehma nahas.

B. Schauvoei - on ägeda mittekontaktse nakkushaiguse põhjustaja, mis mõjutab peamiselt veiseid ja lambaid. Haigustekitaja avastati aastatel 1879-1884. Arluenck, Korneven, Thomas.

Morfoloogia ja värvimine: patoloogilisest materjalist (tursevedelik, veri, kahjustatud lihased, seroossed membraanid) valmistatud määrdudes näeb B. Schauvoei välja nagu 2–6 mikronit ümarate otstega vardad. x 0,5-0,7 mikronit. Tavaliselt leitakse pulgad üksikult, kuid mõnikord võib leida ka lühikesi kette (2-4). Ei moodusta niite. See on polümorfse kujuga ja sageli paistes batsillide, sidrunite, pallide, ketaste kujul. Polümorfism on eriti selgelt täheldatav loomsetest kudedest ja valkude ja värske vere rikkast söötmest valmistatud määrdumisel.

B. Schauvoei on liigutatav varras, mille mõlemal küljel on 4-6 lipukat. Ei moodusta kapsleid.

Eosed on suured, ümara kuni pikliku kujuga. Eos paikneb tsentraalselt või subterminaalselt. Eosed moodustuvad nii kudedes kui ka väljaspool keha. Kunstlikul toitainekeskkonnal ilmub eos 24-48 tunni pärast.

B. Schauvoei plekib peaaegu kõigi värvainetega. Noortes kultuurides G+, vanades kultuurides G-. Vardad tajuvad värvi teralisena.

Haigused EMCAR - on oma olemuselt septiline ja seetõttu Cl. Schauvoeid leidub mitte ainult patoloogiliste kõrvalekalletega elundites, vaid ka perikardi eksudaadis, rinnakelmel, neerudes, maksas, põrnas, lümfisõlmedes, luuüdis, nahas ja epiteelikihis ning veres.

Avamata surnukehas paljunevad batsillid ja teised mikroorganismid kiiresti ning seetõttu isoleeritakse segakultuur.

kultuuriväärtused. MPPB Cl. Chauvoei kasvab rikkalikult 16-20 tunniga. Esimestel tundidel on ühtlane hägusus, 24 tunni pärast - järkjärguline puhastamine ja 36-48 tunni pärast - puljongikolonn on täiesti läbipaistev ja toru põhjas on mikroobikehade sete. Tugeval loksutamisel laguneb sade ühtlaseks häguseks.

Martini puljongil - pärast 20-24 tundi kasvamist täheldatakse hägusust ja rohket gaasieraldust. 2-3 päeva pärast - helveste põhjas, keskkonna valgustus.

Cl. Chauvoei kasvab hästi ajukeskkonnas, moodustades väikese koguse gaase. Söötme mustaks muutumist ei toimu.

Zeismeri agaril (verel) moodustab see pärlmutternööbi või viinamarjalehe sarnased kolooniad, lamedad, nende keskel on toitekeskkonna kõrgendus, kolooniate värvus on kahvatulilla.

B. Schauvoei kalgendab piima 3-6 päeva. Kalgendatud piim on pehme, käsnalise massina. Piima peptonisatsiooni ei toimu. Želatiin ei vedeldu. Kähara vadak ei lahjenda. Indool ei moodustu. Nitrit ei taandu nitraadiks.

Virulentsus kunstlikul toitainekeskkonnal kaob kiiresti. Selle säilitamiseks on vaja läbida merisigade keha. Kuivanud lihaste tükkides säilitab see oma virulentsuse mitu aastat.

B. Schauvoei lagundab süsivesikuid:

glükoos

galaktoos

Levulez

sahharoos

laktoos

Maltoos

Ei lagune – mannitool, dultsitool, glütseriin, inuliin, salitsiin. Siiski tuleb tunnistada, et Cl suhe. Chauvoei süsivesikute suhtes on muutlik.

Veyon +2% glükoosi- või seerumagaril moodustuvad väljakasvuga ümarad või läätsetaolised kolooniad.

Antigeenne struktuur ja toksiinide moodustumine

Cl. Chauvoei tuvastas O - antigeen-somaatiline-termostabiilne, mitmed H-antigeenid-termolabiilsed, samuti spooride S-antigeenid.

Cl. Chauvoei – põhjustab aglutiniinide ja komplemendi siduvate antikehade moodustumist. Moodustab mitmeid tugevaid hemolüütilisi, nekrotiseerivaid ja surmava toimega valgulise iseloomuga toksiine, mis määravad patogeeni patogeensuse.

Stabiilsus on tingitud eoste olemasolust. Mädanenud surnukehades säilib see kuni 3 kuud, sõnnikuhunnikutes koos loomsete kudede jäänustega - 6 kuud. Eosed püsivad pinnases kuni 20-25 aastat.

Keetmine olenevalt toitekeskkonnast 2-12 min (aju), puljongikultuurid 30 min. - t = 100-1050C, lihastes - 6 tundi, soolalihal - 2 aastat, otsene päikesevalgus - 24 tundi, 3% formaliinilahus - 15 minutit, 3% karboolhappe lahus mõjutab eoseid vähe, 25% NaOH - 14 tundi, 6% NaOH - 6-7 päeva. Madal temperatuur ei mõjuta eoseid.

Loomade tundlikkus.

Looduslikes tingimustes on veised haiged 3 kuu vanuselt. kuni 4 aastat. Loomad kuni 3 kuud. ei haigestu (ternestaalne immuunsus), vanemad kui 4 aastat - loomad olid haiged varjatud kujul. Ei ole välistatud haigus kuni 3 kuud. ja vanemad kui 4 aastat.

Lambad, pühvlid, kitsed, hirved on samuti haiged, kuid harva.

Kaamelid, hobused, sead on immuunsed (juhtumeid on märgitud).

Inimene, koerad, kassid, kanad on immuunsed.

Laboriloomad - merisead.

Inkubatsiooniperiood on 1-5 päeva. Haiguse kulg on äge. Haigus algab ootamatult, temperatuur tõuseb 41-43 C. Tugev pärssimine lõpetab närimise. Põhjuseta lonkamine on sageli sümptomaatiline, mis viitab lihaste süvakihtide kahjustusele.

Tüve, alaselja, õla, harvemini rinnaku, kaela, submandibulaarse ruumi lõigus tekivad põletikulised kasvajad - kõvad, kuumad, valulikud ning muutuvad peagi külmaks ja valutuks.

Löökpillid – tempoheli

Palpatsioon - cropitus.

Nahk muutub tumesiniseks. Lammas - vill torkab kasvaja kohas välja.

Haiguse kestus on 12-48 tundi, harva 4-6 päeva.

Pat. anatoomia: laip on väga paistes. Ninast eraldub hapu lõhnaga verist vahtu (rääsunud õli).Lihasekahjustuse koha nahaalune kude sisaldab infiltraate, hemorraagiat ja gaase. Lihased on mustjaspunased, kaetud hemorraagiaga, kuivad, poorsed, vajutamisel krõmpsuvad. Hemorraagiaga kestad. Põrn ja maks on laienenud.

anaeroobsed organismid

Aeroobsed ja anaeroobsed bakterid identifitseeritakse vedelas toitainekeskkonnas O 2 kontsentratsioonigradiendi järgi:
1. Kohustuslik aeroobne(hapnikku nõudvad) bakterid enamasti kogutakse toru ülaossa, et neelata maksimaalne kogus hapnikku. (Erand: mükobakterid – kile kasv pinnal vaha-lipiidmembraani tõttu.)
2. Kohustuslik anaeroobne bakterid kogunevad põhja, et vältida hapnikku (või mitte kasvada).
3. Valikuline Bakterid kogunevad peamiselt ülaosasse (mis on soodsam kui glükolüüs), kuid neid võib leida kogu söötmest, kuna nad ei sõltu O 2 -st.
4. Mikroaerofiilid kogutakse toru ülemisse ossa, kuid nende optimaalne on madal hapnikukontsentratsioon.
5. Aerotolerantne anaeroobid ei reageeri hapniku kontsentratsioonile ja jaotuvad kogu katseklaasis ühtlaselt.

Anaeroobid- organismid, mis saavad energiat hapniku juurdepääsu puudumisel substraadi fosforüülimise teel, võivad substraadi mittetäieliku oksüdatsiooni lõppsaadused oksüdeerida, et toota rohkem energiat ATP kujul lõpliku prootoni aktseptori juuresolekul organismide poolt, mis teostavad oksüdatiivset fosforüülimine.

Anaeroobid on ulatuslik organismide rühm, nii mikro- kui ka makrotasandil:

• anaeroobsed mikroorganismid- ulatuslik prokarüootide rühm ja mõned algloomad.
• makroorganismid - seened, vetikad, taimed ja mõned loomad (foraminifera klass, enamik helminte (fluke klass, paelussid, ümarussid (näiteks ascaris)).

Lisaks on anaeroobsel glükoosi oksüdatsioonil oluline roll loomade ja inimeste vöötlihaste töös (eriti kudede hüpoksia korral).

Anaeroobide klassifikatsioon

Mikrobioloogias kehtestatud klassifikatsiooni järgi eristatakse:

• Fakultatiivsed anaeroobid
• Kapneistlikud anaeroobid ja mikroaerofiilid
• Aerotolerantsed anaeroobid
• Mõõdukalt ranged anaeroobid
• kohustuslikud anaeroobid

Kui organism suudab lülituda ühelt metaboolselt rajalt teisele (näiteks anaeroobselt hingamiselt aeroobsele hingamisele ja vastupidi), siis nimetatakse seda tinglikult nn. fakultatiivsed anaeroobid .

Kuni 1991. aastani eristati mikrobioloogias klassi kapneistlikud anaeroobid, mis nõuab madalat hapnikusisaldust ja suurenenud süsinikdioksiidi kontsentratsiooni (Brucella veise tüüp - B. abortus)

Mõõdukalt range anaeroobne organism jääb ellu molekulaarse O 2 -ga keskkonnas, kuid ei paljune. Mikroaerofiilid suudavad ellu jääda ja paljuneda madala O 2 osarõhuga keskkonnas.

Kui organism ei suuda "lülituda" anaeroobselt hingamiselt aeroobsele, kuid ei sure molekulaarse hapniku juuresolekul, siis kuulub ta rühma aerotolerantsed anaeroobid. Näiteks piimhape ja paljud võibakterid

kohustuslik Anaeroobid surevad molekulaarse hapniku O 2 juuresolekul - näiteks perekonna bakterid ja arheed: Bacteroides, Fusobakter, Butyrivibrio, Metanobakter). Sellised anaeroobid elavad pidevalt hapnikuvaeses keskkonnas. Kohustuslike anaeroobide hulka kuuluvad mõned bakterid, pärmid, lipukesed ja ripslased.

Hapniku ja selle vormide mürgisus anaeroobsetele organismidele

Hapnikurikas keskkond on orgaaniliste eluvormide suhtes agressiivne. See on tingitud reaktiivsete hapnikuliikide moodustumisest elu jooksul või erinevate ioniseeriva kiirguse vormide mõjul, mis on palju toksilisemad kui molekulaarne hapnik O 2 . Tegur, mis määrab organismi elujõulisuse hapnikukeskkonnas, on funktsionaalse antioksüdantide süsteemi olemasolu, mis on võimeline elimineerima: superoksiidi aniooni (O 2 -), vesinikperoksiidi (H 2 O 2), singletthapnikku (O .) ja ka molekulaarne hapnik ( O 2) keha sisekeskkonnast. Enamasti pakuvad sellist kaitset üks või mitu ensüümi:

• superoksiidi dismutaseelimineeriv superoksiidi anioon (O 2 -) ilma energiakasuta kehale
• katalaas, eemaldades vesinikperoksiidi (H 2 O 2), ilma et see tooks kehale energiat
• tsütokroom- ensüüm, mis vastutab elektronide ülekande eest NAD H-st O 2 -le. See protsess annab kehale märkimisväärse energiakasu.

Aeroobsed organismid sisaldavad kõige sagedamini kolme tsütokroomi, fakultatiivsed anaeroobid - üks või kaks, kohustuslikud anaeroobid ei sisalda tsütokroome.

Anaeroobsed mikroorganismid võivad keskkonda aktiivselt mõjutada, luues sobiva keskkonna redokspotentsiaali (nt Cl.perfringens). Mõned külvatud anaeroobsete mikroorganismide kultuurid langetavad enne paljunema hakkamist pH 2 0 väärtuselt väärtusele , kaitstes end redutseeriva barjääriga, teised - aerotolerantsed - toodavad oma elutegevuse käigus vesinikperoksiidi, tõstes pH 2 0-ni.

Samal ajal on glükolüüs iseloomulik ainult anaeroobidele, mis sõltuvalt lõppreaktsiooni saadustest jagunevad mitut tüüpi fermentatsiooniks:

• piimhappe fermentatsioon Lactobacillus ,Streptokokk , Bifidobakter, samuti mõned hulkraksete loomade ja inimeste kuded.
• alkoholkäärimine - sahharomütseedid, Candida (seeneriigi organismid)
• sipelghape - enterobakterite perekond
• butüür - teatud tüüpi klostriidid
• propioonhape - propionobakterid (näiteks Propionibacterium acnes)
• fermentatsioon koos molekulaarse vesiniku vabanemisega - mõned Clostridiumi liigid, Sticklandi kääritamine
• metaankäärimine - näiteks Metanobakter

Glükoosi lagunemise tulemusena tarbitakse 2 molekuli ja sünteesitakse 4 ATP molekuli. Seega on ATP kogusaagis 2 ATP molekuli ja 2 NAD·H 2 molekuli. Reaktsiooni käigus saadud püruvaati kasutab rakk erineval viisil, olenevalt sellest, millist tüüpi kääritamist see järgneb.

Käärimise ja lagunemise antagonism

Evolutsiooni käigus kujunes ja kinnistus fermentatiivse ja mädaneva mikrofloora bioloogiline antagonism:

Süsivesikute lagunemisega mikroorganismide poolt kaasneb keskkonna oluline vähenemine, valkude ja aminohapete lagunemisega aga suurenemine (leelistumine). Iga organismi kohanemine teatud keskkonnareaktsiooniga mängib looduses ja inimese elus olulist rolli, näiteks käärimisprotsesside tõttu välditakse silo, kääritatud köögiviljade ja piimatoodete mädanemist.

Anaeroobsete organismide kasvatamine

Anaeroobide puhaskultuuri isoleerimine skemaatiliselt

Anaeroobsete organismide kasvatamine on peamiselt mikrobioloogia ülesanne.

Anaeroobide kasvatamiseks kasutatakse spetsiaalseid meetodeid, mille põhiolemus on õhu eemaldamine või selle asendamine spetsiaalse gaasiseguga (või inertgaasidega) suletud termostaatides. - anaerostaadid .

Teine võimalus anaeroobide (kõige sagedamini mikroorganismide) kasvatamiseks toitekeskkonnas on redutseerivate ainete (glükoos, naatriumsipelghape jne) lisamine, mis vähendavad redokspotentsiaali.

Tavaline anaeroobsete organismide kasvukeskkond

Üldise keskkonna jaoks Wilson - Blair aluseks on agar-agar, millele on lisatud glükoosi, naatriumsulfiti ja raudkloriidi. Klostriidid moodustavad sellel söötmel musti kolooniaid, redutseerides sulfiti sulfiidaniooniks, mis ühineb raua (II) katioonidega, et saada must sool. Reeglina tekivad sellel söötmel agarisamba sügavusele mustad kolooniamoodustised.

kolmapäeval Kitta - Tarozzi koosneb liha-peptoonpuljongist, 0,5% glükoosist ja maksa- või hakklihatükkidest, et omastada keskkonnast hapnikku. Enne külvamist kuumutatakse söödet keeva veevannis 20-30 minutit, et söötmest õhk eemaldada. Pärast külvi täidetakse toitekeskkond koheselt parafiini või parafiinõli kihiga, et isoleerida see hapniku juurdepääsu eest.

Anaeroobsete organismide üldkultuurimeetodid

Gaspack- süsteem tagab keemiliselt enamiku anaeroobsete mikroorganismide kasvuks vastuvõetava gaasisegu püsivuse. Suletud mahutis reageerib vesi naatriumboorhüdriidi ja naatriumvesinikkarbonaadi tablettidega, moodustades vesiniku ja süsinikdioksiidi. Seejärel reageerib vesinik pallaadiumkatalüsaatoril oleva gaasisegu hapnikuga, moodustades vee, mis juba reageerib uuesti boorhüdriidi hüdrolüüsiga.

Selle meetodi pakkusid välja Brewer ja Olgaer 1965. aastal. Arendajad tutvustasid ühekordselt kasutatavat vesinikku genereerivat kotikest, mida hiljem täiustati sisemist katalüsaatorit sisaldavateks süsihappegaasi tootvateks kotikesteks.

Zeissleri meetod kasutatakse eoseid moodustavate anaeroobide puhaste kultuuride isoleerimiseks. Selleks inokuleerige Kitt-Tarozzi söötmele, kuumutage seda 20 minutit 80 ° C juures (vegetatiivse vormi hävitamiseks), täitke sööde vaseliiniõliga ja inkubeerige 24 tundi termostaadis. Seejärel külvatakse puhaskultuuride saamiseks veresuhkru agarile. Pärast 24-tunnist kultiveerimist uuritakse huvipakkuvaid kolooniaid – neid subkultuuritakse Kitt-Tarozzi söötmel (koos järgneva isoleeritud kultuuri puhtuse kontrollimisega).

Fortneri meetod

Fortneri meetod- inokulatsioonid tehakse Petri tassil, millel on paksendatud söötme kiht, mis on agarasse lõigatud kitsa soonega pooleks jagatud. Üks pool külvatakse aeroobsete bakterite kultuuriga, teine ​​pool on nakatatud anaeroobsete bakteritega. Tassi servad täidetakse parafiiniga ja inkubeeritakse termostaadis. Esialgu jälgitakse aeroobse mikrofloora kasvu ning seejärel (peale hapniku imendumist) aeroobse mikrofloora kasv järsult peatub ja algab anaeroobse mikrofloora kasv.

Weinbergi meetod kasutatakse kohustuslike anaeroobide puhaste kultuuride saamiseks. Kitta-Tarozzi söötmel kasvatatud kultuurid viiakse suhkrupuljongisse. Seejärel viiakse materjal ühekordselt kasutatava Pasteuri pipetiga suhkruliha-peptoonagariga kitsastesse tuubidesse (Vignal torudesse), sukeldades pipeti toru põhja. Inokuleeritud katseklaasid jahutatakse kiiresti, mis võimaldab fikseerida bakteriaalset materjali kõvastunud agari paksuses. Torusid inkubeeritakse termostaadis ja seejärel uuritakse kasvanud kolooniaid. Kui huvipakkuv koloonia leitakse, tehakse selle asemele sisselõige, materjal võetakse kiiresti ja inokuleeritakse Kitta-Tarozzi söötmele (koos seejärel isoleeritud kultuuri puhtuse kontrollimisega).

Peretzi meetod

Peretzi meetod- sulatatud ja jahutatud suhkruagar-agarisse viiakse bakterikultuur ja valatakse korgipulkadele (või tikutükkidele) asetatud klaasi alla Petri tassi. Meetod on kõigist kõige vähem töökindel, kuid seda on üsna lihtne kasutada.

Diferentsiaal- diagnostiline toitainekeskkond

• keskkondades gissa("kirju rida")
• kolmapäeval Ressel(Russell)
• kolmapäeval Ploskireva või baktoagar "Zh"
• Vismuti sulfiitagar

Sisuline meedia: 1% peptoonveele lisada 0,5% teatud süsivesiku (glükoos, laktoos, maltoos, mannitool, sahharoos jne) lahus ja Andrede happe-aluse indikaator, valada katseklaasidesse, millesse asetatakse ujuk gaasiliste saaduste püüdmiseks. tekkinud süsivesinike lagunemisel.

Ressel kolmapäeval(Russell) kasutatakse enterobakterite (Shigella, Salmonella) biokeemiliste omaduste uurimiseks. Sisaldab toitainelist agar-agarit, laktoosi, glükoosi ja indikaatorit (bromotümoolsinist). Söötme värvus on rohuroheline. Tavaliselt valmistatakse kaldpinnaga 5 ml torudes. Külvamine toimub süstimise teel kolonni sügavusse ja tõmbega mööda kaldpinda.

Kolmapäev Ploskirev(Bactoagar Zh) on diferentsiaaldiagnostiline ja selektiivne sööde, kuna see pärsib paljude mikroorganismide kasvu ja soodustab patogeensete bakterite (tüüfuse, paratüüfuse, düsenteeria tekitajad) kasvu. Laktoosnegatiivsed bakterid moodustavad sellel söötmel värvituid kolooniaid, laktoospositiivsed bakterid aga punaseid kolooniaid. Sööde sisaldab agarit, laktoosi, briljantrohelist, sapisooli, mineraalsooli, indikaatorit (neutraalne punane).

Vismuti sulfiitagar See on loodud salmonelloosi isoleerimiseks puhtal kujul nakatunud materjalist. Sisaldab trüptilist seedimist, glükoosi, salmonella kasvufaktoreid, briljantrohelist ja agarit. Söötme erinevad omadused põhinevad Salmonella võimel toota vesiniksulfiidi, nende vastupidavusel sulfiidi, briljantrohelise ja vismuttsitraadi olemasolule. Kolooniad on tähistatud vismutsulfiidi musta värviga (tehnika on sarnane söötmega Wilson - Blair).

Anaeroobsete organismide ainevahetus

Anaeroobsete organismide metabolismil on mitu erinevat alarühma:

Anaeroobne energia metabolism kudedes inimene ja loomad

Anaeroobne ja aeroobne energia tootmine inimese kudedes

Teatud loomade ja inimeste kudesid iseloomustab suurenenud resistentsus hüpoksia suhtes (eriti lihaskoe). Normaalsetes tingimustes toimub ATP süntees aeroobselt ning intensiivse lihastegevuse ajal, kui hapniku kohaletoimetamine lihastesse on raskendatud, hüpoksia seisundis, samuti kudede põletikuliste reaktsioonide ajal domineerivad ATP regeneratsiooni anaeroobsed mehhanismid. Skeletilihastes on tuvastatud 3 tüüpi anaeroobset ja ainult üks aeroobne ATP regeneratsiooni rada.

3 tüüpi anaeroobset ATP sünteesi rada

Anaeroobsete hulka kuuluvad:

• Kreatiinfosfataasi (fosfogeenne või alaktaat) mehhanism – refosforüülimine kreatiinfosfaadi ja ADP vahel
• Müokinaas - süntees (muidu resüntees) ATP kahe ADP molekuli (adenülaattsüklaas) transfosforüülimise reaktsioonis
• Glükolüütiline - vere glükoosi- või glükogeenivarude anaeroobne lagunemine, mis lõpeb moodustumisega

Anaeroobid I Anaeroobid (kreeka negatiivne eesliide an- + aēr + b elu)

mikroorganismid, mis arenevad vaba hapniku puudumisel nende keskkonnas. Neid leidub peaaegu kõigis erinevate mäda-põletikuliste haiguste patoloogilise materjali proovides, need on tinglikult patogeensed, mõnikord patogeensed. Eristada fakultatiivset ja kohustuslikku A. Fakultatiivset A. on võimelised eksisteerima ja paljunema nii hapnikus kui hapnikuvabas keskkonnas. Nende hulka kuuluvad coli, Yersinia, Streptococcus ja muud bakterid .

Kohustuslik A. sureb vaba hapniku olemasolul keskkonnas. Need jagunevad kahte rühma: need, mis moodustuvad ehk klostriidid, ja bakterid, mis ei moodusta eoseid ehk nn mitteklostriidilised anaeroobid. Klostriidide hulgas eristatakse anaeroobsete klostriidide infektsioonide põhjustajaid - botulism, klostriidide haavainfektsioon, teetanus. Mitteklostriidide A. hulka kuuluvad gramnegatiivsed ja grampositiivsed pulgakujulised või sfäärilised bakterid: fusobakterid, veillonellad, peptokokid, peptostreptokokid, propionibakterid, eubakterid jne. Mitteklostriidilised A. on inimese ja normaalse mikrofloora lahutamatu osa loomad, kuid samal ajal mängivad olulist rolli selliste mäda-põletikuliste protsesside tekkes nagu kopsu- ja ajuabstsessid, pleura empüeem, näo-lõualuu piirkonna flegmoon, keskkõrvapõletik jne. Enamik anaeroobseid infektsioone (anaeroobne infektsioon) , põhjustatud mitteklostriidsete anaeroobide poolt, viitab endogeensetele ja areneb peamiselt organismi vastupanuvõime langusega operatsioonide, jahutamise, nõrgenenud immuunsuse tagajärjel.

Kliiniliselt olulise A. põhiosa moodustavad bakteroidid ja fusobakterid, peptostreptokokid ja eosed Gram-positiivsed pulgad. Bakteroidid põhjustavad umbes poole anaeroobsete bakterite põhjustatud mäda-põletikulistest protsessidest.

Bibliograafia: Laboratoorsed uurimismeetodid kliinikus, toim. V.V. Menšikov. M., 1987.