Изследване на биоматериал по IF метод. Кръвен тест ELISA - описание на метода, предимства и недостатъци, интерпретация на резултатите. Показания за анализ

В момента се използват огромен брой различни разновидности и модификации на ELISA. Широко разпространени са различни варианти на ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA).

Твърдофазовият ELISA е предложен през 1971 г. Основните принципи на твърдофазния ELISA, независимо от модификацията, са следните:

• 1. На първия етап от реакцията антигени или антитела се адсорбират върху твърдата фаза. В този случай реагентите, които не са свързани с твърдата фаза, лесно се отстраняват чрез промиване.
• 2. Тестовата проба се инкубира в сенсибилизираните ямки. Ямките на положителната контрола съдържат стандартни реагенти. В този случай на повърхността на твърдата фаза се образуват имунни комплекси. Несвързаните компоненти се отстраняват чрез измиване.
• 3. При добавяне на конюгат антитяло-ензим или антиген-ензим и свързването му към имобилизирания имунен комплекс, активното място на ензима остава достъпно за последващо взаимодействие със субстрата. Инкубирането на субстрата в ямки с имобилизиран конюгат води до развитие на цветна реакция. Тази реакция може да бъде спряна на желания етап, тежестта на оцветяването може да се оцени визуално или чрез оптична плътност. Важна стъпка във всеки вариант на твърдофазов анализ е процедурата за измиване на несвързаните реагенти. Важно е не само да се изплакнат компонентите, фиксирани върху твърдата фаза, но и да се отстранят реагентите от цялата дълбочина на слоя. Пробите могат да се измиват автоматично с шайба или ръчно с многоканална пипета. За да проведете ELISA, трябва:
  • · таблетка от полистирол или други използвани варианти на твърда фаза;
  • разтвор за измиване;
  • конюгат (ензимно маркирани антигени или антитела);
  • използваната смес от субстрати;
  • стоп разтвор (Стоп реагент - разтвор за спиране на реакцията);
  • Проби, използвани за положителна и/или отрицателна контрола;
  • стандартен антиген (за изграждане на калибровъчна крива);
  • едноканални и многоканални пипети;
  • · шайба;
  • оптично устройство за определяне на оптичната плътност на тестовия разтвор (ELISA четец, четец, който последователно фотометрира всички ямки);
  • · 5-100 µl от изследвания биологичен материал.

Директен ELISA

1. Антигени или антитела (тестов материал) се адсорбират в ямките на панелите. Често при директен ELISA антигенът, имобилизиран върху твърдата фаза, е клетки и други антигени от частици.

контрол. Като контрола се използват ямки с адсорбирана положителна контролна проба, която задължително съдържа желания антиген, и отрицателна контролна проба, очевидно несъдържаща тестовия антиген. В присъствието на пречистен стандартен антиген, реакцията се провежда в няколко разреждания, така че да може да се построи калибровъчна крива.

• 2. „Блокирайте свободните места на свързване, оставащи върху твърдата фаза, с казеин BSA и т.н. (за предотвратяване на неспецифична сорбция на конюгата върху твърдата фаза).
• 3. Ензимно белязани антитела или антигени (конюгат) се добавят към ямките и се инкубират. Свързването на конюгата към твърдата фаза ще се случи само ако и двата компонента на системата са комплементарни. След инкубиране с конюгата, ямките се промиват, като по този начин се отстранява несвързаната част от конюгата.

• 4. Субстратът, специфичен за използвания ензим, след това се добавя към ямките и се инкубира. Когато се достигне оптималното ниво на оцветяване в ямките на положителната контрола, ензимната реакция се спира.
• 5. Отчитане на реакцията. Първо, резултатите от реакцията се вземат предвид визуално. За по-точно отчитане на резултатите, интензитетът на оцветяване се оценява на ELISA четец с подходящ светлинен филтър. Въз основа на резултатите от анализа се изгражда графика на зависимостта на оптичната плътност от концентрацията. ELISA абсорбционно имобилизиране на антитела
• а) за откриване на антиген; б) за откриване на антитела.

Индиректен ELISA.

Този вариант на ELISA обикновено се използва за откриване на специфични антитела. Стандартният антиген се адсорбира в ямките на панелите и се инкубира с проби от серум или друг биологичен материал, получен от пациента (цереброспинална течност, слюнка и др.). Специфични антитела, свързани с антигена в твърдата фаза, се откриват с помощта на антиглобулинов конюгат. В зависимост от целта на анализа се използват различни антиглобулинови реактиви, които откриват антитела от всички изотипове или специфични за отделни класове и подкласове имуноглобулини. Основното предимство на метода е универсалността на конюгата. Същият конюгат може да се използва за откриване на човешки антитела срещу голямо разнообразие от антигени във всяка проба. Реакцията е методично проста.

Основните етапи на индиректния ELISA за откриване на антитела:

• 1. Антигенът се адсорбира върху твърдата фаза, след което се отмива от несвързаните компоненти.
• 2. Блокирайте сайтове за безплатно обвързване. Изпран.

• 3. Тестовият материал се добавя към ямките, инкубира се и след това се промива. Успоредно с това се поставят проби с положителни и отрицателни контроли.
• 4. Добавете антиглобулинов конюгат в работно разреждане, инкубирайте, отмийте несвързаните компоненти.
• 5. Субстратът се въвежда, инкубира се. При достигане на оптималното ниво на оцветяване в ямките на положителната контрола, реакцията се спира чрез добавяне на стоп разтвор.
• 6. Измерете количеството на реакционния продукт на четеца ELISA.

При оптимални условия на анализ, методът е много специфичен и чувствителен. Позволява ви да откриете нанограмови количества антитела в серума на изследваните пациенти. За получаване на задоволителни резултати е необходима стандартизация на реагентите и методологиите. Този вариант на ELISA може да се използва и за тестване на моноклонални антитела.

"Сандвич" - вариант на ELISA за откриване на антигени.

Антигените, открити с помощта на този вариант на ELISA, трябва да имат множество антитяло-свързващи епитопи или да имат повтарящи се, пространствено разделени епитопи с една и съща специфичност.

При провеждането на този вариант на ELISA високо специфични поли- или моноклонални антитела, адсорбирани върху твърдата фаза, се инкубират с тестовата проба. След процедурата на промиване към ямките се добавят маркирани с ензим антитела (конюгат) към същия антиген и след това се провеждат всички останали етапи на реакцията. Ефективността на образуване на специфичен комплекс на всеки етап от анализа зависи от константата на свързване на реакцията антиген-антитяло.

Основните етапи на анализа:

• 1. Моноклонални антитела или афинитетно пречистени поликлонални антитела са имобилизирани върху твърдата фаза.
• 2. Тестовата проба се въвежда в ямките на панелите, положителна контролна проба и отрицателна контролна проба се поставят успоредно в различни разреждания. Инкубира се и се измива.
• 3. Към ямките се добавят белязани с ензим моноклонални или поликлонални антитела (конюгат). Промиването се извършва след инкубиране.
• 4. Въвежда се субстрат, инкубира се. Реакцията се спира, когато се постигне оптимално оцветяване в ямките на положителната контрола.
• 5. Отчитане на резултатите на ELISA четец.

Основното предимство на метода е високата му чувствителност, която надхвърля възможностите на другите ELISA схеми.

Конкурентна ELISA.

Тази опция за анализ се основава на конкуренцията на белязани (конюгирани) и небелязани (тест) антитела за свързване с антигена, адсорбиран върху твърдата фаза. Количеството ензим, прикрепен към твърдата фаза, ще намалее пропорционално на съдържанието на свободни антитела в сместа. За определяне на антигена се използва същата опция, но в този случай желаният антиген се конкурира с белязания стандартен антиген за свързване с антитела, имобилизирани на повърхността на твърдата фаза.

Състезателният метод изисква минимален брой операции, ниска консумация на реагенти и може лесно да се автоматизира. При провеждане на конкурентен ELISA за откриване на антитела е по-добре да се използват белязани моноклинални антитела, тогава конкуренцията на конюгата с тестовата проба възниква за един епитоп на антигена, адсорбиран върху твърдата фаза. Този вариант на ELISA се използва за определяне на различни съединения, като човешки имуноглобулини, раково-ембрионален антиген, инсулин и др. Позволява откриването на антитела към диагностично значими епитопи на инфекциозни агенти.

Основните етапи на анализа за откриване на антиген:

• 1. Моноклонални антитела, специфични за антигена, който трябва да се открие, се имобилизират върху твърдата фаза.
• 2. Добавете антигена, маркиран с ензима и тестовата проба в известна концентрация в ямките на панелите. Извършете инкубиране и промиване. Успоредно с това положителните и отрицателните контроли се поставят в съседни ямки. За изграждане на калибрирането се използва стандартен небелязан антиген в различни разреждания.
• 3. Добавете субстрат, инкубирайте, спрете реакцията, когато се развие оптимално оцветяване в ямките на положителната контрола.
• 4. Отчитане на реакцията на ELISA четеца.

В този случай количеството антиген в тестовата проба е обратно пропорционално на ензимната активност върху твърдата фаза.

инхибиторен ELISA.

В този вариант на ELISA антигенът, присъстващ в тестовата проба, се свързва с маркирани с ензим моноклонални антитела и инхибира тяхното взаимодействие със стандартния антиген, имобилизиран върху твърдата фаза. Наличието в пробата дори на следи от антиген, специфичен за конюгата, ще инхибира свързването на белязани антитела към имобилизирания антиген. Степента на инхибиране е правопропорционална на съдържанието на антигена в разтвора. За количествен анализ се изгражда калибровъчна крива, като се използват серийни разреждания на стандартния антиген. Основните етапи на инхибиторния ELISA за откриване на антиген (фиг. 6).

• 1. Адсорбирайте стандартния антиген в ямките на панелите. Изберете работно разреждане на белязани антитела чрез титруване.
• 2. Конюгатът се инкубира предварително при работното разреждане с разреждания на тестовата проба, стандартен антиген и положителни контролни проби.
• 3. Сместа се прехвърля в ямките на панелите. За да се контролира 100% свързване, само белязани антитела се добавят към няколко ямки, без инхибиторен антиген. Панелите се инкубират и след това се измиват.
• 4. Добавете субстрат.
• 5. Запишете резултатите.

Концентрацията на антигена, която трябва да се определи в тестовата проба, е обратно пропорционална на ензимната активност върху твърдата фаза.

ELISA може да се използва не само за определяне на разтворим антиген или антитяло, но и на клетки, които произвеждат различни протеини.

Ензимен имунооцветяващ метод (ELISPOT).

През 1983 г. технологията ELISA беше адаптирана за откриване на лимфоидни клетки, секретиращи антитела или антигени (напр. цитокини) in vitro. Методът се нарича ELISPOT (ензимен имуноанализ или спот метод). Основният принцип на метода:

• 1. На повърхността на полистиролова ямка (използвайки панели с 24-ямкови клетъчни култури) се адсорбират антигени или антитела, които служат като "улавяне" реагенти.
• 2. Добавят се изследваните лимфоидни клетки, култивират се няколко часа при 37°С, като им се дава възможност да заемат определено място и да изпълняват секреторна функция. Антитела или антигени, секретирани от такива клетки, се улавят от реагенти, адсорбирани върху твърдата фаза.
• 3. Клетките се отстраняват с помощта на измиващ разтвор с детергент за лизиране на клетки.
• 4. Местата на натрупване на секреторни продукти се показват чрез добавяне на антитела, свързани с ензима (антиглобулинов реагент).
• 5. Добавя се смес субстрат-агароза (използваните субстрати трябва да се разтворят в агароза и да образуват неразтворими реакционни продукти), на повърхността на твърдата фаза се образуват кафяви или сини петна (в зависимост от използваните ензими и субстрати), разкриващи зоните, където клетките бяха разположени.
• * Получените петна се преброяват под микроскоп, това ще бъде броят на секретиращите клетки.

Нитроцелулозната мембрана може да се използва като твърда фаза.В този случай има редица предимства: поради високия адсорбционен капацитет на NCM е необходимо значително по-малко количество антиген, използван като "захващащ" реагент, в допълнение, не е необходимо да се включва агароза в субстрата.

Чрез едновременно определяне на броя на секретиращите клетки и общото количество секретиран антиген или антитяло в ямката, което е възможно при използване на различен субстрат, е възможно да се определи количеството на секретирана субстанция от една клетка.

Този метод намери широко приложение за оценка на броя на клетките, които секретират антигена, уловен от адсорбираните антитела, той се използва за определяне на броя на клетките, които секретират цитокини (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IFN-y, TNF-a).

Системи за усилване на сигнала.

Когато се използват антитела с висок афинитет, чувствителността на отделните варианти на ELISA е много висока и теоретично позволява откриването на единични антигенни молекули, но на практика чувствителността е ограничена от редица фактори: ензимна активност, интензитет на сигнала и методи за отчитане на сигнала . Системите за усилване на сигнала позволяват да се увеличи чувствителността на различни варианти на ELISA. Помислете за някои от тези системи:

Въз основа на взаимодействието на авидин-биотин.

Биотиновите коензимни молекули (m.m. 244 Da) се конюгират с антитела с помощта на биотинил-N-хидроксисукцимид. Малка молекула биотин е по-лесна за свързване към имуноглобулин или друг протеин, без да се нарушават неговите имунни или ензимни свойства. Ензимът в този случай е свързан с гликопротеина авидин на яйчния белтък. Афинитетът на свързване на авидин към биотин е много висок (константата на дисоциация на комплекса е 10-15 mol), конюгатът авидин-ензим е здраво фиксиран върху комплекса антиген-антитяло-биотин. След добавяне на подходящия субстрат реакционният продукт се определя спектрофотометрично или чрез интензитета на луминесценция.

Една молекула авидин се състои от четири идентични субединици, способна е да взаимодейства с четири биотинови молекули, което позволява да се използва като свързваща молекула между две биотин-съдържащи съединения. В този случай ензимът също е биотинилиран и авидинът действа като мост, свързващ две молекули, съдържащи биотинови остатъци. Към получения комплекс антиген-антитяло-биотин се добавя свободен авидин, последван от биотинилиран ензим. Запишете реакцията.

Протеинът авидин може да бъде неспецифично сорбиран върху други молекули; следователно все повече се използва друг биотин-свързващ протеин, стрептавидин, открит в бактерията Streptomyces avidinii. Стрептавидин също образува силен комплекс с биотин и се състои от четири идентични субединици.

Използването на комплекса авидин-биотин позволява значително да се повиши чувствителността на ELISA, тъй като десетки биотинови молекули могат да бъдат свързани с една AT молекула по време на синтеза на конюгат. Получаването на конюгати (антитела и ензими с биотин) е доста лесно и е съпроводено с минимални промени в тяхната имунологична и ензимна активност. Като универсални реактиви могат да се използват конюгати на ензими с биотин.

Използване на хемилуминесцентни реакции.

Хемилуминесцентните реакции могат да се използват за получаване на сигнал в ELISA, като същевременно се повишава чувствителността на метода и се намалява времето за анализ. Пероксидазата от хрян се използва широко като етикет в ELISA и различни хемилуминесцентни реакции също могат да се използват за откриването й. Хемилуминесцентните реакции се основават на способността на луминола да свети, когато се окислява с водороден пероксид. При директен анализ ензимната реакция произвежда водороден пероксид и окислява луминол; тази реакция се катализира от пероксидаза от хрян. За подобряване на сигнала се използват различни съединения, например луциферин, феноли, в този случай интензитетът на луминесценция се повишава 10-100 пъти, в някои случаи 500 пъти (подобрен хемилуминесцентен анализ). Луминесцентният сигнал е много стабилен, нивото му достига максимум за 30 s (за сравнение: цветната реакция с OPD като индикатор се развива напълно само за 30 min).

При индиректен анализ с луминол или негови производни антитялото се маркира. Такъв етикет в свободно състояние може да се окислява от водороден пероксид с освобождаване на светлина. Ако е образувал комплекс, той губи способността си да се окислява.

Базирани на каскадни системи.

За повишаване на чувствителността на ELISA могат да се използват ензимни каскадни системи. В този случай първият свързан с антитяло ензим води до редуцируем субстрат за втората ензимна система. Втората ензимна система може да бъде субстратно-циклична или редоксициклична. В този случай фосфо-глюкоизомераза, алдолаза, алкална фосфатаза могат да служат като ензимни етикети. Крайният реакционен продукт се определя визуално или спектрофотометрично.

Системите за усилване ELISA постигат висока чувствителност. Такива системи ELISA се използват за определяне на нивото на хормоните.

Имуноензимният анализ (ELISA) се провежда за цялостна оценка на защитните функции на тялото. По време на изследването се определя броят и свойствата на имунните клетки, наличието на необходимите антитела. Кръвният тест ELISA се извършва за диагностициране на инфекциозни, хематологични, автоимунни заболявания, първични и вторични имунодефицити. Помислете какво е кръвен тест чрез ELISA и какви индикации съществуват за това изследване.

Какво е

Кръвният тест ELISA е лабораторен метод, който открива антитела или антигени в кръвна проба. Това изследване се използва за откриване на нивото на имуноглобулини, имунологични комплекси, хормони.

Показания за анализ

За назначаването на кръвен тест ELISA има следните показания:

• диагностика на полово предавани инфекции - уреаплазма, микоплазма, хламидия, трихомонада, сифилис;
• диагностика на вирусни заболявания - цитомегаловирус, херпес, хепатит, вирус на Епщайн-Бар;
• определяне на нивото на хормоните;
• диагностика на онкологични заболявания;
• определяне на имунодефицит;
• диагностика на алергии;
• предоперативен цялостен преглед преди трансплантация на органи;
• оценка на ефективността на терапията.

Принцип на метода

Принципът на действие на метода за ензимен имуноанализ се основава на определянето на специфични протеинови антитела в кръвта - имуноглобулини. Имуноглобулините се произвеждат от човешката имунна система, когато антигени (чужди микроорганизми) навлязат в тялото. Тези имунни молекули се свързват с различни инфекциозни агенти в тялото и ги неутрализират.

Имуноглобулините имат важна характеристика - специфичност. Благодарение на това те могат да се свържат със специфичен антиген, образувайки комплекс антиген-антитяло. По време на кръвен тест ELISA именно този комплекс се определя качествено и количествено.

Има пет класа имуноглобулини. Но обикновено се определят три класа - имуноглобулини A, M, G. Тези антитела се натрупват в тялото по различно време от момента на инфекцията.

• Имуноглобулини клас M (IgM)се появяват в кръвта най-напред на петия ден от момента на заразяването. Те са в тялото в продължение на 5-6 седмици, след което изчезват от кръвния поток. IgM антителата показват остър период на заболяването или обостряне на заболяването в хроничния му ход.
• Приблизително 3-4 седмици след инфекцията имуноглобулините се появяват в кръвта клас G (IgG). Те могат да съществуват в човешката кръв в продължение на няколко месеца или дори години. Според декодирането на кръвния тест ELISA, ако в две кръвни проби, взети последователно две седмици по-късно, количеството IgG имуноглобулини е повишено, те говорят за текуща инфекция или реинфекция - повторно заразяване със същата инфекция.
• Имуноглобулини клас А (IgA)могат да бъдат открити чрез този изследователски метод 2-4 седмици след инфекция или обостряне на инфекциозно заболяване. От тях само 20% циркулират в кръвта, останалите се секретират от лигавиците. IgA антителата изчезват от кръвния поток 2-8 седмици след унищожаването на инфекциозните агенти. Изчезването на тези имуноглобулини означава излекуване на инфекцията. Ако след края на заболяването се установи наличието на IgA антитела в кръвта, тогава заболяването е преминало в хроничен стадий.

Подготовка за анализ

Човешка кръв най-често се използва за провеждане на кръвен тест ELISA. Но можете също да изследвате съдържанието на стъкловидното тяло, цереброспиналната течност, амниотичната течност.

На пациента се взема кръвна проба за изследване от кубиталната вена. Препоръчва се кръводаряване на празен стомах (от момента на последното хранене трябва да минат поне 12 часа). Необходимо е да се каже на лекаря, ако пациентът приема лекарства, тъй като някои от тях могат да променят резултата от анализа. Надеждността на резултатите от изследването се влияе от употребата на алкохол и наркотици.

Декриптиране

Формата на резултата от този анализ показва положителен (+) или отрицателен (-) резултат за всеки клас имуноглобулини.

Помислете за интерпретацията на възможно декодиране на кръвния тест ELISA.

• Отрицателен резултат на IgM, IgG, IgA - липса на имунитет към инфекция.
• Отрицателен IgM, IgA и положителен IgG резултат - слединфекциозен или следваксинален имунитет.
• Отрицателни или положителни IgG, IgA и положителни IgM е остра инфекция.
• Положителният резултат от IgM, IgG, IgA е обостряне на хронично инфекциозно заболяване.
• Отрицателен IgM резултат и отрицателен или положителен IgG, IgA резултат е хронична инфекция.
• Отрицателен IgM резултат и без IgG, IgA - възстановяване.

Предимства на метода

Кръвният тест ELISA има много предимства. Основните могат да бъдат разграничени:

• относително висока точност (чувствителност);
• възможност за ранна диагностика;
• способността да се проследява динамиката на инфекциозния процес;
• високо ниво на унификация, което позволява масови проучвания;
• кратък период от време, необходим за получаване на резултата от анализа;
• удобство при работа;
• автоматизация на всички етапи на анализа;
• относително ниска цена.

недостатъци

Недостатъкът на метода ELISA е, че понякога дава фалшиво отрицателни или фалшиво положителни резултати. В допълнение към техническите грешки по време на изследването, причината за фалшивите резултати може да бъде ревматоидният фактор при пациента, наличието на хронични заболявания (при които се произвеждат антитела), метаболитни нарушения и прием на определени лекарства.

• аскаридоза;
• трихинелоза - анализът се извършва няколко пъти, максималното ниво на антитела се определя на 4-12 седмица след инфекцията;
• цистицеркоза;
• тениоза;
• фасциолиаза - антителата се определят в острия стадий на заболяването;
• описторхоза - извършва диференциална диагноза между хронични и остри форми на заболяването;
• лямблиоза;
• висцерална и кожна лайшманиоза;
• амебиаза;
• токсоплазмоза.

4.2 4.20 от 5 (5 гласа)

Списъкът на стандартните диагностични мерки, използвани за инфекциозни заболявания, включва ензимен имуноанализ. Ако ELISA за сифилис е положителен, не се паникьосвайте веднага.

Нека разгледаме по-подробно характеристиките на тази изследователска техника и принципите за дешифриране на резултатите, получени при различни категории пациенти.

Имуноензимният анализ е един от най-разпространените методи за диагностициране на инфекциозни заболявания. Той принадлежи към категорията трепонемни тестове, т.е. може да се използва за определяне на наличието в тялото на пациента на причинителя на сифилис - бледа трепонема.

Чрез ELISA сифилисът се открива поради откриването на антитела срещу трепонема. Те се съдържат в кръвта на пациента и техният вид и количество зависят от стадия и формата на заболяването, което ви позволява да получите важна информация за текущото състояние на човешкото здраве.

Предимства и недостатъци

ELISA много често се предписва при съмнение за сифилис или други инфекциозни заболявания. Това се дължи на факта, че анализът ви позволява да идентифицирате точния тип и стадий на заболяването, а неговата надеждност остава на високо ниво - вероятността за грешка въз основа на резултатите от множество изследвания е само 1%, първичният ELISA има точност около 90%.

Използването на висококачествени реактиви и модерно оборудване ни позволява да увеличим максимално точността на индикаторите.

Като цяло предимствата на метода са:

1. Висока точност на резултата. Вероятността за получаване на неверни данни е много малка.
2. Минимизиране на човешкия фактор на влияние.Съвременното оборудване за провеждане на ELISA изключва човешкото влияние върху резултатите от изследването поради автоматизацията на процеса.
3. Откриване на специфични антитела. Невъзможно е да се объркат антигени от един тип с други, така че анализът показва точен резултат за конкретна диагноза.
4. Фиксиране на най-малките отклонения от нормата. Дори и най-малката концентрация на патологични агенти няма да остане незабелязана.

Не забравяйте за недостатъците на този метод. ELISA има следните недостатъци:

1. Висока цена. Високата цена се дължи на много фактори, по-специално на необходимостта от добро оборудване, висококачествени реактиви и специалисти с достатъчно ниво на обучение.
2. Необходимостта от предварителна диагноза. Трябва да знаете кои антигени да търсите, тъй като без допълнителни данни ще бъде невъзможно да се направи точна диагноза.
3. Вероятността за фалшив положителен резултат. Някои състояния на тялото и други фактори могат да изкривят крайните данни.

Показания за провеждане

Лекарят може да предпише ензимен имуноанализ за диагностициране не само на сифилис, но и на редица други инфекциозни заболявания.

Ако разгледаме ситуацията директно с инфекцията с трепонема, причината за изследването може да бъде:

• появата на външни симптоми на заболяването (шанкъри, сифилитичен обрив, гума и др.);
• значително намаляване на имунитета;
• идентифициране или подозрение за сифилис при сексуален партньор, роднини и членове на семейството;
• положителна реакция по време на други тестове;
• идентифициране на други заболявания, които могат да бъдат свързани със сифилис;
• личното желание на човек да бъде прегледан.

Методи за провеждане

ELISA може да се извърши по различни начини. Във всеки случай се избира най-подходящият вариант.

На първо място, методите се разделят на:

1. Качествена. Установява се наличието на инфекция или вирус в тялото на пациента.
2. Количествени. Определя концентрацията на антитела срещу патогенен агент в човешкото тяло, което показва етапа и интензивността на развитие на заболяването.

Съществува и класификация на методите за провеждане на ELISA според принципа на възпроизвеждане на необходимата реакция.

Има 3 варианта:

1. Направо. Белязаните антитела се инжектират в предоставените кръвни проби.
2. Индиректен с антигени.Адсорбираните антигени се поставят предварително в клетките на полистиролова плака, предназначена за ELISA. След това към тях се добавят антитела на вируси, което провокира образуването на имунни комплекси, необходими за по-нататъшна оценка на резултатите.
3. Индиректен с антитела.За болести, предавани по полов път, този метод често се използва. Това включва предварителна сорбция на антитела, едва след това антигените се добавят към плаката.

Правила за вземане на проби от материали

За да се намалят рисковете от получаване на фалшиви резултати, е необходимо да се дарява кръв за анализ правилно.

Преди да се подложите на ELISA, трябва да се спазват някои ограничения:

• избягвайте силен физически и емоционален стрес;
• откажете пушенето и алкохола поне 1 до 3 дни предварително;
• за няколко дни трябва да преминете към правилно хранене;
• желателно е жените да контролират фазата на менструалния цикъл, тъй като хормоните могат да изкривят резултатите;
• последното хранене трябва да бъде 8-10 часа преди кръводаряването;
• за 10 дни се изключват лекарства, които могат да повлияят на резултатите от изследването.

За ELISA се взема венозна кръв от кубиталната вена, трябва да се вземе сутрин на празен стомах. По принцип се прилагат стандартните правила за подготовка за вземане на венозна кръв. В зависимост от наличието на кое заболяване се изследва могат да се въведат допълнителни изисквания за предварителна подготовка на пациента.

Методика

Инструкциите за провеждане на ELISA са доста прости:

1. Пациентът взема кръв от вената.
2. Взетият материал се подготвя и разделя на проби върху специална фина палета.
3. Антигените се смесват с антитела според избрания метод.
4. Реакцията се оценява. Пробите се сравняват с контролните проби, извършва се качествена и количествена оценка на резултатите.
5. Данните се въвеждат в специална таблица с прилагане на количествени показатели (общи антитела).
6. Лекуващият лекар дешифрира резултатите. Ако е необходимо, се предписва подходящо лечение.

След прегледа на пациента се издава документ с резултатите. Той има формата на таблица със съответните обозначения срещу всеки тип имуноглобулин в пресечната точка с имената на инфекциозните заболявания.

Декриптиране

Само специалист ще може правилно да дешифрира резултатите от анализите. Трудно е да разберете сами, например, какво означава резултатът от ELISA k = 1 4. Сифилисът може да се появи и в различни форми, което също влияе на крайните данни.

Резултатите показват 3 вида имуноглобулини:

1. IgM. Позволява да се определи периодът на заразяване със сифилис. Положителният резултат показва обостряне на заболяването. Липсата им може да показва ремисия на хронични патологии или латентна форма на заболяването.
2. IgA.Показва заболяване, което е изминало повече от месец от заразяването. Това също е признак на острата фаза на заболяването, както с обикновени патологии, така и с напреднали хронични.
3. IgG. Това е признак за пиковия период на заболяването, тоест неговото обостряне. При сифилис положителна реакция се появява известно време след лечението. При някои видове заболявания може да е признак на развит имунитет.

Тези вещества се произвеждат от тялото в определена последователност, което е допълнителен признак на заболяването. С качествени изследвания се установява само наличието на имуноглобулини в кръвта от всеки тип.

Това се изразява в промяна на цвета на материалите, участващи в анализа. Количествените показатели са спомагателни, те по-точно описват ситуацията. Съотношението на антигени и антитела показва тежестта на заболяването и интензивността на реакцията на организма.

Какво да правя

Ако пациентът наистина има сифилис, абсолютно винаги се открива положителен ELISA, невъзможно е да не забележите наличието на трепонема в такова изследване. Не се отчайвайте, болестта се повлиява добре от лечението, особено в началните етапи.

Какво да направите, ако резултатът от теста е положителен:

• се подлагат на допълнителни прегледи според показанията на лекаря;
• вземете курс на антибиотична терапия според избраната схема;
• съсредоточете се върху укрепването на имунната система;
• информирайте сексуалния си партньор за заболяването;
• в бъдеще редовно се подлагат на превантивна диагностика до отписване в диспансера (след 5 години при липса на положителни резултати от теста).

Няма нужда да отлагате отпуск по болест и да се страхувате от публичност на резултатите. Диагнозата е криптирана и остава тайна, само ако има заплаха от инфекция за други хора, е необходимо да се информират роднини и сексуален партньор за проблема, така че те да преминат необходимите изследвания.

Фалшив положителен резултат и причините за него

Понякога резултатът от други тестове се записва и ELISA е фалшиво положителен за сифилис. Ето защо се препоръчва да се извършат 2-3 спомагателни метода и след известно време да се повтори имуноензимният анализ.

Такива неточности са редки, те се дължат главно на такива фактори:

• бременност;
• хронични болести;
• скорошна ваксинация;
• нараняване.

Фалшивите положителни резултати се разделят на остри и хронични, в зависимост от естеството на фактора, който ги е провокирал.

Основните са представени в таблицата:

При наличието на такива здравословни проблеми тестът за сифилис може да покаже положителен резултат, но това е само следствие от производството на протеини в организма за борба с болестта. ELISA обаче ги разпознава като антигени.

Здраво дете на възраст до година и половина може да получи фалшиво положителни резултати от ELISA, ако една жена е била заразена със сифилис по време на бременност. Преди тази възраст кръвта все още няма време да се обнови напълно, така че антителата на майката могат да присъстват в нея. Изключение прави ситуацията с откриването на IgM имуноглобулини.

Можете да научите повече за характеристиките на ензимния имуноанализ и неговата методология, като гледате видеоклипа в тази статия.

ELISA или ензимен имуноанализ е модерен начин за определяне на много патологии, включително тези с инфекциозен характер. Изследването се провежда в лаборатория. Основната цел на техниката е да се открият антитела, тяхното присъствие показва проникването на патогенни агенти в тялото. Съвременната медицина използва ELISA анализ за диагностициране на много заболявания и идентифициране на съединения на трети страни.

ELISA анализ: кога и как се извършва

С помощта на метода ELISA специалистите могат да открият наличието на специфични антитела (имуноглобулини) в кръвния серум и да определят антигени. Имуноглобулините се произвеждат в резултат на сложни невронни процеси, осъществявани от защитните функции на тялото. Те са естествена реакция на имунната система при проникване на чужди агенти. За всеки тип патоген се произвеждат специфични антитела.

Важно: чрез наличието на определени комплекси методът на ензимен имуноанализ ви позволява да идентифицирате вида на патогена в човешкото тяло.

Диагностиката чрез ELISA се извършва за откриване на следните заболявания:

• херпес;
• вирусен тип хепатит;
• Вирус на Epstein-Barr (херпес тип 4);
• цитомегаловирус.

Кръвен тест разкрива основните патогенни бактерии, които провокират развитието на сифилис, уреаплазмоза и трихомониаза. Чрез анализ експертите определят антитела към 600 вида алергени. Провеждането на имуноензимен анализ е подходящо при подготовката за трансплантация на органи.

Важно: в някои случаи ELISA е допълнителен метод за определяне на онкологията в човешкото тяло.

Анализът се извършва изключително в лабораторията. За изследване се взема венозна кръв от кубиталната вена. Резултатите от анализа ще бъдат готови на следващия ден. За да получите надеждна информация, експертите препоръчват да следвате правилата за подготовка за ELISA:

• един ден преди изследването е необходимо да се откаже от употребата на пикантни и пушени храни;
• алкохолът е забранен;
• кръвта се дарява сутрин на празен стомах;
• преди изследването е необходимо да се изключи всякакъв физически и емоционален стрес;
• препоръчително е да спрете да пушите.

Какви патологии се откриват чрез ензимен имуноанализ

С помощта на ензимен имуноанализ специалистът определя различни класове имуноглобулини, чието присъствие показва развитието на патологични процеси в организма. И така, основните показатели на ELISA са IgM и IgG. Наличието на IgM имуноглобулин показва развитието на остър патологичен процес. Показателят IgG в кръвта е типичен за етапа на възстановяване.

Чрез анализа на ELISA специалистите идентифицират редица опасни заболявания. Те включват:

Важно: ELISA тест се предписва за потвърждаване на сифилис, когато се получи положителен резултат чрез даряване на кръв за RV.

Навременната диагноза ви позволява да проследите ефективността на терапията и, ако е необходимо, да я коригирате.

Дешифриране на анализа: положителен и отрицателен отговор

Тълкуването на резултатите от ELISA се извършва от специалист въз основа на получените данни. Отговорът може да бъде положителен или отрицателен.

Положителен ELISA

Резултатът се счита за положителен, ако по време на изследването в кръвта са открити имуноглобулини от класове IgG и IgM. Наличието на представените компоненти показва развитието на следните заболявания:

• сифилис;
• вирусен тип хепатит;
• CMVI (цитомегаловирус);
• херпес;
• шарка;
• заболявания, провокирани от стафилококи и стрептококи;
• хламидия.

С развитието на сифилис специфични антитела се откриват в кръвта 14 дни след инфекцията. Според броя им специалистът определя тежестта на хода на заболяването. Активната терапия на сифилис елиминира всички бактерии след 6 месеца. Ако няма лечение, ще отнеме поне 1,5 години, за да се възстанови напълно тялото.

ELISA анализът открива хепатит от вирусен тип дори в инкубационния период, преди да се появят първите симптоми.

CMVI е често срещана патология, която се среща при всеки трети човек. За населението не представлява опасност, инфекцията възниква в утробата.

Обикновено в човешкото тяло няма антитела срещу херпесния вирус. Когато се открият, е обичайно да се диагностицира острата фаза на заболяването.

С развитието на варицела в човешката кръв се откриват специфични IgM имуноглобулини. Те са в състояние да останат в тялото в продължение на 2 години, след пълното елиминиране на патологията.

За да се определят заболяванията, причинени от стрептококи и стафилококи, позволява двоен тест за ELISA. При повторно изследване нивото на специфичните антитела бързо се повишава.

Развитието на хламидия се показва при високо ниво на имуноглобулин - 1:8 и по-високо. Индикаторът може да варира в зависимост от прогресията на заболяването.

Внимание: за да потвърди развитието на определен патологичен процес, специалистът предписва допълнителни лабораторни и инструментални изследвания. Цялостното проучване ви позволява да предпишете ефективен режим на лечение.

Отрицателен ELISA

При отрицателен резултат в човешката кръв не се откриват специфични имуноглобулини от клас IgM. Може би наличието на IgG, антителата са в състояние да останат в тялото след заболявания, бактериален и вирусен тип. В някои случаи тяхното присъствие в кръвния серум продължава десетилетия.

Внимание: само опитен специалист може правилно да дешифрира резултатите от анализа.

Самообучението на отговорите в повечето случаи води до опити за диагностициране и предписване на неправилно лечение, без участието на лекар. Такова въздействие се счита за идеално за по-нататъшното прогресиране на патологичния процес.