Hogyan kell vért venni a pcr DNS-hez hiv. HIV PCR-tesztek: az eljárás megbízhatósága és jellemzői. Hány HIV-tesztet végeznek

Az egyik legsúlyosabb, még meg nem gyógyult betegséget a humán immunhiány vírus okozza.

Nem könnyű kimutatni a kórokozót a szervezetben: jelenleg csak néhány kutatási módszert alkalmaznak erre.

Az egyik ilyen teszt az polimeráz láncreakció (PCR).

A polimeráz láncreakció módszerének megértéséhez emlékeznie kell a sejtek szerkezetének sajátosságaira az iskolai tanfolyamból.

Minden élő sejt fehérjét és kétféle nukleinsavat tartalmaz: DNS-t és RNS-t. Ezek a legfontosabb sejtszerkezetek, mert különleges módon kódolt genetikai információkat tartalmaznak.

A DNS-kód a mikrostruktúrák szigorú szekvenciája, amelyek hosszú láncot alkotnak.

Referencia! A PCR alapjaként egy nukleinsav önmagát szaporodó képességét használják.

Amikor a vírus bejut az egészséges sejtekbe, elpusztítja a DNS-szálakat.

Ebben az esetben a sejt többé nem tartalmaz teljes láncokat, hanem csak kis fragmentumokat - nukleotidokat. Ráadásul a vírus legkisebb részecskéi is láthatóak lesznek.

A polimeráz láncreakciós módszer a sérült DNS-láncok és a maradék sejtek kimutatására épül.

A PCR-diagnosztikának két típusa van:

• minőség. Alkalmas azok számára, akiknek a diagnózist nem erősítették meg: egyszerűen megmutatja, hogy a vírus jelen van-e a sejtekben.
• mennyiségi. A páciens a „Vírus DNS-e nem észlelhető” eredményt kapja, ami a HIV hiányát jelenti, vagy információt kap a kórokozó jelenlétéről, ami azt jelenti, hogy a személy HIV-fertőzött.

Megerősített diagnózis esetén kvantitatív elemzést rendelnek hozzá. Segítségével meghatározzák a vírus RNS-ének (DNS) másolatainak számát a vérben (sejtekben). A kvantitatív elemzés lehetővé teszi a HIV-fertőzöttek kezelésének hatékonyságának felmérését, a betegség súlyosságának, progressziójának meghatározását.

Milyen diagnosztikai módszerek képesek kimutatni a HIV-fertőzést a videóban:

Ennek a diagnosztikai módszernek az előnyei és hátrányai

Mint minden diagnosztikai intézkedésnek, a PCR-nek is megvannak az előnyei és hátrányai.

A módszer előnyei a következők:

• Magas megbízhatóság. PCR-rel a vírus legkisebb maradványai is kimutathatók, a kórokozó kimutatásának valószínűsége a fertőzés után 4-5 nappal eléri a 80%-ot, a fertőzés után 100% - 14 nappal. Így a legnagyobb pontosságot a vírus DNS-ének vérsejtekben történő tanulmányozása éri el: egy vírust akkor lehet kimutatni, ha annak száma 1-5 kópia/1 millió sejt.
• Különféle bioanyagok felhasználásának lehetősége(PCR-re a nyál, a vizelet, a verejték és a könny nem alkalmas, de a nők vére, spermája és nemi szervi váladéka felhasználható).
• Különböző betegségek elemzésének lehetősége egy mintán. A PCR segítségével kimutathatja a HIV, chlamydia, herpesz, citomegalovírus, ureaplasma, mycoplasma, gonorrhoea, trichomoniasis, toxoplasmosis.
• Az eredmények gyors elérése. Létezik egy expressz PCR-vizsgálat, amely lehetővé teszi, hogy néhány órán belül megtudja a diagnosztikai eredményeket.
• Magas érzékenység: A PCR, ellentétben például az ELISA-val, már a fertőzés utáni első hetekben segít a vírus kimutatásában.
• A fertőzés után néhány napon belül eredményeket lehet elérni. Fertőzés esetén a vírust 5-14 nap múlva lehet meghatározni, míg az ELISA-t csak 6 hét után célszerű elvégezni.
• Nincs korhatár. A PCR a születés pillanatától kezdve végezhető felnőtteknél és gyermekeknél egyaránt.

A PCR-elemzés fő jellemzője, hogy nem a vírus elleni antitesteket, hanem magát a vírust észleli.

Csak néhány hátránya van az előnyökhöz képest:

• Magas ár.
• A hamis pozitív eredmények megszerzésének valószínűsége körülbelül 20%. Ez általában a személyzet hibájából következik be (hibák a bioanyag begyűjtésében vagy szállításában, a bioanyag tanulmányozásában és az eredmények értelmezésében).
• A fejlett high-tech berendezések használatának szükségessége, amelyekkel csak néhány klinika van felszerelve.

Figyelem! Nyilvánvaló, hogy a technika előnyei sokkal nagyobbak, mint a hátrányai. Különösen fontos, hogy a PCR segítségével a betegség kezdeti fejlődési stádiumában felismerhető és időben megkezdhető a kezelés.

A PCR analízis eredménye már 14-21 nappal az esetleges fertőzés után pozitív lehet. De ha az elemzés negatív, ez nem garantálja a fertőzés hiányát. Jobb 2 hét elteltével ELISA mézzel megerősítő tesztet végezni.

A HIV PCR-tesztjének végrehajtását a videó írja le:

Ki van beosztva?

Mindenekelőtt a HIV gyanúja esetén PCR-t írnak elő. A technika indikatív lehet a nemi úton terjedő betegségek, örökletes betegségek kimutatására is.

Referencia! A PCR-diagnosztikát gyakran olyan személy kezdeményezi, akinél nem jelentkeztek a betegség tünetei, de vannak találgatások és aggodalmak az esetleges fertőzéssel kapcsolatban, például védekezés nélküli közösülés, közelmúltbeli vérátömlesztés, fertőzött személlyel való érintkezés után.

Kinek mutatják még meg a vizsgálatot?

• Azok az emberek, akiknek ELISA-tesztje kétszer pozitív. A PCR lehetővé teszi a végső diagnózis felállítását.
• Véradást tervező donorok.
• Emberek, akiknél az immunoblot megerősítette a diagnózist. Az immunblot egy módszer az AIDS diagnosztizálására, és általában a PCR-rel együtt végzik.
• Emberek, akik a HIV által okozott betegségek kezelésének szakaszában vannak. A PCR lehetővé teszi a terápia hatékonyságának értékelését.
• Újszülöttek, akiknek anyja HIV-pozitív (a vírus átvitele az esetek körülbelül 30%-ában fordul elő). Már a születés után 2-3 héttel meg lehet állapítani, hogy történt-e fertőzés.

Vannak, akiket megelőző intézkedésként szűrnek, de ez ritka, mert a PCR-vizsgálat költsége magas.

Mennyi ideig tart az elemzés és hol tudom elvégezni?

A HIV PCR analízisét a laboratóriumban végzik.

Maga a vérvétel 5-10 percet vesz igénybe, és másnapra készen is van az eredmény.

Az expressz diagnosztika kiválasztásakor (például az "Invitro" vagy a "Hemotest" laboratóriumokban) az eredmények szakember általi értelmezése mindössze 2 órát vesz igénybe.

Magánklinikán a diagnosztika igény szerint névtelenül is elvégezhető. Ehhez személyes vizit alkalmával ezt be kell jelenteni: minden pácienshez sorszámot rendelnek, és hozzáférést kapnak egy személyes fiókhoz. Ezután egy személy megtudhatja az eredményeket a második laboratóriumi látogatás nélkül is.

A PCR-vizsgálat eredményeinek megbízhatóságát a videó írja le:

Kutatási költség

A PCR diagnosztika nem olcsó, hiszen bizonyos korszerű berendezéseket, valamint speciális szaktudást igényel.

A berendezés csak néhány orvosi laboratóriumban áll rendelkezésre, ami lehetővé teszi az elemzés magas költségének beállítását.

Egy tanulmány átlagos ára 3000-5000 rubel. Egyes régiókban a költség nem haladja meg az 1500-2000 rubelt.

Mivel előfordulhat álpozitív és álnegatív eredmény, vagy túl korán jelentkezett a személy (a vírus még nem törte meg a DNS-szerkezetet, de már jelen van a szervezetben), szükség lehet egy második vizsgálatra.

A magas költség annak is köszönhető, hogy a diagnosztikához számos összetevőre van szükség:

1. amplifikációra szánt DNS-szegmens (mátrix);
2. két primer;
3. Polimeráz - kémiailag aktív komponens, amely exponenciálisan felgyorsítja a vírusrészecskék számának növekedését;
4. dezoxiribonukleozid-trifoszfátok;
5. Kétértékű magnézium töltött részecskéi;
6. Speciális megoldás, amelyben a polimerizációs folyamatot hajtják végre. Ezt az oldatot úgy alakították ki, hogy megfelelő szinten tartsa a savasságot, a sókoncentrációt és a magnézium mennyiségét a folyadékban.

Ezenkívül a vizsgálathoz kis mennyiségű vazelinre van szükség: zsírokat tartalmaz, és magas hőmérsékleten forr, ami megvédi a vizsgált mintát a túlmelegedéstől.

Elemzés lefolytatása

Vér, sperma és hüvelyváladék alkalmas elemzésre. Általában, gyakran használnak vénás vért.

A vérvételt reggel, üres gyomorban végzik.

Ezenkívül fel kell készülnie az elemzésre:

• 2-3 nappal a diagnózis előtt a zsíros ételeket ki kell zárni az étrendből.
• Az elemzés előtt 1-2 nappal az alkoholt kizárják.
• 2 héttel az elemzés előtt abba kell hagynia az immunstimuláló gyógyszerek szedését.
• Az utolsó étkezést legkésőbb 8 órával a véradás előtt kell megtenni.

A vénából történő vérvételkor a könyök belső hajlítását speciális oldattal kezelik, majd a szakember átszúrja a bőrt, felhelyezi a vénafecskendő tűjét és leveszi a megfelelő mennyiségű vért. Ezután a tűt eltávolítják, a helyet ismét alkohollal kezelik, a beteget vattacsomót kapnak.

A vérzés megállítása érdekében a betegnek ideiglenesen be kell hajlítania a karját. Ha valaki jól érzi magát, azonnal hazamehet. Szédülés, hányinger és ájulás esetén elsősegélyben részesítik.

A laboráns a kapott bioanyagot steril lombikba helyezi és diagnosztikára küldi. A szakember a felhasadt biológiai anyagot egy speciális reaktorban keveri össze különféle fertőzéseket szintetizáló enzimekkel.

Ha nagyon kevés vírusrészecske van a vérben, számuk meredeken növekszik az enzimekkel való kölcsönhatás során: a reagensek egyesülnek a vírus DNS-ével, és megkettőződnek.

Az elemzés több szakaszban történik, mivel a molekulák osztódása exponenciálisan megy végbe. Egy cellából 2, 2-4 és így tovább.

Az orvosok véleményét és véleményét elemezve bátran kijelenthetjük: jelenleg a PCR-diagnosztika a legpontosabb módszer a HIV-fertőzés kimutatására.

Referencia! Az elemzés segítségével már néhány nappal a fertőzés után megállapítható a vírus jelenléte a szervezetben, még akkor is, ha a vírusszerkezetek száma millió sejtenként mindössze 1-5 egység. Ne felejtse el azonban a módszer hiányosságait, például a hamis pozitív eredmények megszerzésének valószínűségét.

Ennek ellenére a PCR továbbra is azon kevés tesztek egyike, amelyek lehetővé teszik a betegség időben történő diagnosztizálását és a kezelés megkezdését.

A PCR diagnosztikai technikát eredetileg 35 évvel ezelőtt fejlesztette ki Kari Mullis amerikai tudós. A tanulmány kitalálója 1993-ban nemzetközi Nobel-díjat kapott úttörő munkájáért. Nélkülözhetetlenné vált minden laboratóriumi tevékenységhez.

A PCR-t a molekuláris biológiában használják kis DNS-szakaszok sok másolatának készítésére (amplifikálására). A DNS-polimeráz csak egy nukleotidot tud hozzáadni egy már meglévő 3-OH-csoporthoz. Tehát szüksége van egy primerre, amelyhez hozzáadhatja az első nukleotidot. Ez a követelmény lehetővé teszi a mintasorozat egy meghatározott szakaszának meghatározását, amelyet diagnosztizálni kell. A PCR-reakció végén egy adott szekvencia több milliárd másolatban (amplikonban) halmozódik fel.

A PCR magában foglalja a hőciklusnak nevezett fűtési és hűtési folyamatot, amelyet speciális gépek hajtanak végre. A polimeráz láncreakció (PCR) egy viszonylag egyszerű technika. Felerősíti a DNS-templátot, hogy specifikus DNS-fragmenseket nyerjen in vitro (in vitro analízis). A DNS-szekvencia vektorba klónozásának és élő sejtben történő replikációjának hagyományos módszerei gyakran több naptól több hétig tartó kutatást igényelnek. De néhány óra múlva megkaphatja a DNS-szekvenciák amplifikációjának eredményét PCR segítségével.

A fertőző betegségek diagnosztizálására használt biokémiai elemzések többsége meglehetősen nagy mennyiségű biológiai anyagot igényel. A PCR esetében ez a feltétel nem kötelező. Így a PCR érzékenyebb kórokozó kimutatást biztosíthat. És bizonyos szekvenciák magasabb szintű amplifikációja rövidebb idő alatt meglehetősen korlátozott mennyiségű bioanyag mellett. Ezek a tulajdonságok rendkívül hasznossá teszik a technikát. Nemcsak alapkutatásban, hanem személyes célokra is. Beleértve a genetikai identitásvizsgálatot, a kriminalisztikai vizsgálatokat, az ipari minőségellenőrzést.

Az elemzés fő értéke a szexuális úton terjedő patológiák kimutatásának lehetősége az első jelek megjelenése előtt. PCR-elemzést alkalmaznak, ha a HIV-fertőzés korai felismerése szükséges. Valamint a vírus RNS-ének meghatározása a donor vérében. Az assay nagy érzékenysége miatt a válasz az állítólagos fertőzés után 7-14 nappal érhető el. A diagnózis megbízhatósága eléri a 85-98%-ot. A PCR-teszt azonban nem mindenkihez van rendelve. Mert ez elég drága kutatás. A legfontosabb, hogy drága felszerelést és bizonyos szakmai ismereteket igényel a laboratóriumi személyzettől. Ha a beteg korábban nem volt fokozott fertőzésveszélyes helyzetekben, polimerázreakció nem tanácsos.

Kvalitatív típusú polimeráz reakció HIV-re

A HIV kiváló minőségű PCR elvégzése lehetővé teszi a vírusos betegség jelenlétének meghatározását a szervezetben. A páciens a következő jegyek formájában kaphatja meg az eredményt: pozitív, hamis pozitív, negatív. A tanulmány azonban nem teszi lehetővé a retrovírus másolatainak számának meghatározását. Kvalitatív elemzést nem végeznek olyan betegeknél, akiknél korábban fertőzést diagnosztizáltak. Nem írják elő a vírusellenes terápia hatékonyságának ellenőrzésére.

A HIV PCR kvantitatív típusa

A vizsgálat célja a vírus RNS másolatának meghatározása a páciens biológiai anyagában. A kvantitatív PCR-t csak korábban azonosított fertőzésben szenvedő betegeknél írják elő, a folyamatban lévő kezelés ellenőrzéseként.

valós idejű PCR

Laboratóriumi diagnosztikában használják DNS-szelvények másolatainak előállítására. A bioanyagban található DNS-szekvencia egyidejű kvantitatív vizsgálatára és kimutatására is. Valójában a diagnózis kvantitatív PCR.

Egy megjegyzésben!

Különféle laboratóriumokban számos diagnosztikai készítmény található: „PCR kvantitatív meghatározás” és „Valós idejű PCR”.

Mindkét elemzés azonos.

Anyag gyűjtése a HIV diagnózisához

A HIV PCR segítségével történő diagnosztizálására szolgáló biológiai anyag mintavételét bizonyos szabványok szerint végzik. A manipuláció a kezelőszobában történik. Eldobható steril eszközöket használnak. A csomagolás felnyitása a műszerekkel közvetlenül a beteg közelében történik. Az összegyűjtött anyagot CrO3-mal (króm keverékkel) előkezelt steril csövekbe helyezzük. A biológiai anyag a vénás vér, amelyet reggel és éhgyomorra adnak le. Néhány nappal a vizsgálat előtt ki kell zárnia az alkohol, a zsíros és fűszeres ételek fogyasztását, abba kell hagynia a gyógyszerek szedését.

Ha a gyógyszerek visszavonása nem lehetséges, ezt az elemzés előtt jelenteni kell.

Ezenkívül a húgycsőből és a hüvelyből tampont lehet venni az egyidejű szexuális úton terjedő betegségek azonosítására. A vizsgálatot anonim módon végzik, az eredményeket a páciens személyesen kapja meg. Személyi igazolványt ajánlott magunkkal vinni.

Mennyi ideig szedhetem a PCR-t HIV-re?

A HIV-vírus jelenléte később is kimutatható 4-6 nappal a fertőzés után. Ebben az esetben az elemzés információtartalma eléri a 85%-ot. 10-13 nap elteltével az elemzés 98% -os pontossággal meghatározhatja a betegséget. A negatív eredmény csak akkor érvényes, ha legkorábban 2 héttel az állítólagos fertőzés után nyújtják be.

A hamis pozitív eredmény okai

Nehéz hamis pozitív eredményt elérni.

Erre a biológiai anyag mintavételi szabályainak be nem tartása, a cső helytelen címkézése, rossz minőségű vizsgálati rendszer alkalmazása és egyéb hasonló tényezők esetén van lehetőség. Más esetekben az ilyen eredmény elérésének esélye nem több, mint 2%.

Mennyi időbe telik a teszteredmények megszerzése?

Technikai szempontból a PCR eredmények 4 órán belül elérhetők. A gyakorlatban azonban a páciens egy naptól több napig kap laboratóriumi következtetést. Általában az időzítés a laboratórium leterheltségétől és a munka szervezettségétől függ.

Polimeráz reakció végrehajtása újszülöttben

A PCR-t akkor írják elő, ha gyermeke HIV-pozitív anyától születik. Az ELISA elvégzése ebben az esetben nem tájékoztató jellegű. Mivel a gyermeknek körülbelül 2 éves koráig vannak antitestei a retrovírus ellen. Emiatt az enzim immunoassay nem ad pontos választ. Amikor PCR-t végeznek egy 4-6 hetes gyermeknél, és pozitív eredményt kapnak, fertőzésről beszélünk.

Ha a 8 hetes-hat hónapos korban végzett PCR negatív eredményt mutat (feltéve, hogy a gyermek nem táplálkozott az anyatejjel), a fertőzés kizárt.

Miért jobb az ELISA a HIV meghatározására?

A polimeráz reakció lehetővé teszi a vírus RNS-ének azonosítását, a testben való jelenlétét, beleértve a mennyiségi adatokat is. Az ELISA feladata a HIV-fertőzés elleni antitestek meghatározása. A lehetséges fertőzés meghatározására szolgáló enzimes immunoassay nem rosszabb, mint a PCR, pontossága eléri a 99%-ot. A PCR-rel ellentétben azonban nem képes meghatározni a betegséget a fejlődésének korai szakaszában.

A PCR előnyei HIV esetén

• A polimeráz reakció közvetlenül meghatározza a fertőző ágens jelenlétét. Például az ELISA csak egy mikroorganizmus antitesteit és salakanyagait képes kimutatni.
• A vizsgálat egyértelműen azonosít egy adott kórokozót, még akkor is, ha több keresztreakcióba lépő is létezik.
• A technika lehetővé teszi bármilyen biológiai anyag tanulmányozását, beleértve a szárított vércseppeket is.

A PCR hiányosságai közül kiemelhető az elemzés fokozott érzékenysége. Ez néha hamis pozitív eredményt ad. Ez akkor fordul elő, ha még kis mennyiségű idegen DNS is jelen van a kémcsőben vagy a műszereken.

A HIV diagnózisa PCR és ELISA segítségével: értelmezés, az eredmények megbízhatósága

Az ELISA, amelyben a teszt eredményei azt mutatják, hogy a szervezetben hiányzik a HIV elleni antitestek és a p24 antigén, negatív. Ha ezek a molekulák jelen vannak, pozitív diagnosztikai következtetést adnak ki. Egyes esetekben a beteg hamis pozitív vagy hamis negatív eredményt kaphat. Ez a korai terhesség, a herpeszfertőzés jelenléte, a helytelen anyagmintavétel és a kémcsövek szállításának megsértése következménye. Ezenkívül hasonló eredményeket találtak a folyamatban lévő autoimmun betegségekben és különböző típusú hepatitisben szenvedő betegeknél. Western blot (immunblot) végezhető, amely egyesíti az ELISA-t és a vírusfehérjék elválasztását.

Ekkor pozitív eredmény lesz a vírusfertőzés gp160 glikoproteinje jelenlétében. Ez a gp41 és gp120 HIV burok glikoproteinek prekurzora. Ha ezek a molekulák hiányoznak, a laboratóriumi vizsgálat eredménye negatívnak minősül. A Western Blot elvégzése ELISA-val kombinálva lehetővé teszi olyan eredmények elérését, amelyek megbízhatósága meghaladja a 98%-ot. Abban az esetben, ha az ELISA pozitív és a Western Blot negatív, a vizsgálat kétségesnek minősül, és PCR-t igényel.

A legtöbb nő és férfi számára ez a szexuális úton terjedő betegség a leginkább félelmetes. Emiatt egy véletlenszerű, akadálymentes fogamzásgátlás nélküli intim kapcsolat, valamint gyakori szexuális partnerváltás és műtéti beavatkozások után az értelmes ember bizonyos éberséget tapasztal. A tisztázás legmegbízhatóbb módja az, ha elmegy a klinikára, és elvégez egy PCR-tesztet HIV-re.

A vérvizsgálat a következő mutatók meghatározására használható:

• A HIV jelenlétének tagadása / megerősítése a látens időszakban (a fertőzés utáni első hetekben az ELISA-tesztek nem mutatnak ki antitesteket hiányuk vagy túl alacsony koncentráció miatt).
• A HIV-1, HIV-2 genotípusának meghatározása.
• A státusz azonosítása olyan gyermekeknél, akik anyától-hordozóktól születtek (HIV elleni antitestek hosszú ideig kimutathatók minden HIV-fertőzött nőtől született gyermekben. 48 év alatti gyermekeknél kívánatos a vírus DNS-ének meghatározása életórák, 1-2 hónap, 3-6 hónap).
• Az ELISA tesztek álnegatív, álpozitív és kétes eredményei.
• A HIV mennyiségének diagnosztizálása és a vírusterhelés időbeli változásának nyomon követése (az AIDS már megállapított diagnózisa esetén a PCR-elemzést prognózisra, dinamikus monitorozásra és a folyamatban lévő terápia monitorozására használják).

A HIV PCR teszt ára

HIV PCR ELEMZÉS – MIKOR, MIÉRT ÉS MI IDŐBEN KÉSZÜLT

1. HIV DNS. A humán immundeficiencia vírus (HIV) DNS-diagnosztikája felhasználható a lehetséges fertőzés korai kimutatására egy magas kockázatú esemény után (a vérvizsgálatot az esetleges fertőzés után már 10 nappal kell elvégezni). A fertőzés teljes kizárása érdekében azonban a 4. és 12. héten egy második vizsgálatot és ELISA-diagnosztikát kell végezni.
   Elemzési eredmények: HIV DNS (kvalitatív elemzés)- "nem található" vagy "talált". Ez utóbbi esetben ismételt további vizsgálatok szükségesek a HIV-fertőzés igazolására. Ha az eredmény negatív, de nagy a fertőzés veszélye, egy második vizsgálatra van szükség - bizonyos idő után véradásra PCR vagy ELISA módszerrel.
2. HIV RNS. A HIV-RNS mennyiségi meghatározása PCR-rel (az úgynevezett "vírusterhelés") a HIV-fertőzés lefolyásának prognózisának értékelésére szolgáló egyik mutató, és a vírusellenes terápia hatékonyságának legkorábbi mutatója. A vizsgálat a betegség lefolyásának nyomon követésére, a terápia megkezdésének eldöntésére és annak hatékonyságának értékelésére szolgál.
   A HIV-RNS PCR-vizsgálata olyan felnőtteknél alkalmazható, akiknél a lehetséges fertőzés korai, megbízható diagnózisa magas kockázatú epizódot követően (körülbelül 7-10 nappal a valószínű fertőzés után) alkalmazható. A HIV RNS magas titerének jelenléte antitestek hiányában lehetővé teszi az akut HIV-fertőzés diagnosztizálását. A diagnózis tisztázása érdekében azonban 1 és 3 hónapon belül egy második vizsgálatot és ELISA-diagnosztikát kell végezni.
   Ebben a fertőzésben szenvedő terhes nőknél a PCR HIV RNS leadása a szülés várható időpontja előtt 3-4 héttel javasolt a szülés módjának (természetes szülőcsatornán vagy császármetszéssel) történő megoldására.
   Elemzési eredmények: HIV 1-es típusú HIV RNS (kvantitatív elemzés)- "nincs észlelve" (ez normális).
3. HIV rezisztencia. A HIV proteáz- és reverz transzkriptáz-gátlókkal szembeni rezisztenciájának meghatározására szolgáló elemzés indokolt olyan HIV-fertőzött betegeknél, akiknek a terápiája nem hatékony, valamint akut fertőzés esetén a vírusellenes kezelés megkezdése előtt. A tanulmány lehetővé teszi a HIV gyógyszerekkel szembeni rezisztenciájának meghatározását. Az elemzés eredményei alapján a fertőző szakorvos megismeri a proteázgátlókkal, nukleozid és nem nukleozid reverz transzkriptáz gátlókkal szembeni rezisztencia mutációk jelenlétét, valamint információt kap a gyógyszerrezisztencia-mutációhoz kapcsolódó egyes aminosav-pozíciókról.
4. Multiprime átfogó diagnosztika: hepatitis C vírus RNS / hepatitis B vírus DNS / humán immunhiány vírus (HIV) 1. és 2. típusú RNS kvalitatív meghatározása (ultraszenzitív módszer). Az elemzés lehetővé teszi a HIV-fertőzés, a vírusos hepatitis C és B korai stádiumban történő diagnosztizálását. A vizsgálat a vírusos hepatitis B és C, HIV 1/2 típusú fertőzés korai kimutatására javallt veszélyeztetett egyéneknél. A DNS vagy RNS vírusok kimutatása fertőzést jelez.

A vérvizsgálatok készenléti ideje 3-7 naptári nap. Kvalitatív és kvantitatív PCR-elemzést adhat át a HIV-fertőzés diagnosztizálására Moszkvában az egészségügyi központunkban. Vérvétel naponta 10-00 óráig, beleértve

A HIV PCR a molekuláris genetikai diagnózis egyik leginformatívabb módszere. Ez a módszer segít azonosítani a páciens különféle fertőző és öröklődő betegségeit. Ugyanez a diagnosztikai módszer alkalmazható a bioanyag HIV jelenlétének ellenőrzésére is, amely súlyos betegség, amely a beteg egész életében kialakul. Orvosi segítséggel a PCR a humán immunhiány vírus gyanúja esetén az egyik ajánlott, térítés ellenében végzett vizsgálat lett. A vizsgálat megbízhatósága azonban 100 esetből csak 80 esetben igazolja magát.

A HIV PCR diagnosztikája a polimeráz láncreakció rövidítése. Ennek a fajnak a tanulmányozására különféle típusú biológiai anyagokat használnak. Ezek közül a vér, valamint a páciens hüvelyéből származó váladék vagy férfiaknál az ondófolyadék használható.

Figyelem! A PCR-hez használt nyálat nem használják a HIV diagnosztizálására. Ezt a megközelítést hatástalannak ismerik el, mivel ebben az anyagban a HIV-ellenes antitestek minimális koncentrációban vannak jelen. Ugyanez vonatkozik a vizeletre, az izzadságra és a könnyekre is.

A leírt vizsgálat indikációja a kettős pozitív ELISA (enzimatikus immunoassay). Az alternatív úti célokról később lesz szó.

Bővebben az elemzés lényegéről

A HIV PCR-analízisének alapja a nukleinsav önreprodukciós képessége. Az élő sejtek fehérjéből és ugyanezekből a savakból, más szóval RNS-ből és DNS-ből állnak. A molekulák a genetikai kód őrzőiként működnek.
Ha a bioanyagban a vírusrészecskék (HIV) alacsony koncentrációban vannak jelen, a minta nem tartalmaz teljes DNS- (dezoxiribonukleinsav) láncot, hanem csak azok komponenseit, az úgynevezett nukleotidokat. Az elemzés lehetővé teszi a vírussejtek jelentéktelen maradványainak kimutatását is. Ez a tény magyarázza a PCR azon képességét, hogy a korai szakaszban – néhány héttel a HIV-fertőzés után – eredményeket tudjon kimutatni.

A polimeráz láncreakció legminőségibb eredményeire a vénás vér vizsgálatánál kell számítani. A mintát a berendezéssel emésztjük. A frakciókat ezután enzimes kezelésnek vetjük alá. A reaktív anyagok a vírus DNS részecskéivel kombinálva megkettőzik azt. Az ilyen elemek száma a láncelv szerint növekszik mindaddig, amíg jelenlétük (nem antitestek) a páciens vérében észrevehetővé válik a laboránsok számára. A létező diagnosztikai módszerek egyike sem működik pontosan ugyanazon az elven.

Reakció komponensek

A PCR módszerrel előre tájékozódhat a vírus szervezetben történő fejlődéséről. Miért nem nevezhető népszerűnek az ingyenes orvoslás területén és mindenhol csinálják? Az a tény, hogy egy ilyen HIV-teszt nagyon drága, és a következő összetevőket igényli:

• dezoxiribonukleinsav mátrixa, beleértve az amplifikációra szánt DNS-szegmenst;
• két primer (minden láncszegmenshez);
• kémiailag aktív komponens polimeráz a vírusrészecskék polimerizációjának felgyorsítására;
• dezoxiribonukleozid-trifoszfátok;
• kétértékű magnézium részecskék (töltött);
• speciális megoldás a kedvező feltételek megteremtésére, a megfelelő savtartalom, sókoncentráció, a folyadékban lévő magnéziumrészecskék számának biztosítására.

Figyelem! A minta túlmelegedésének védelme érdekében az anyaghoz kis mennyiségű vazelint adnak, amely zsírokat és ennek megfelelően magas forráspontot tartalmaz.

Az elemzés viszonylag nagy pontossága a megnövekedett érzékenységnek köszönhető, ami stimulálja a reakciót más vírusok ellenanyagaira.

A PCR technika előnyei és hátrányai HIV esetén

A módszer objektív értékeléséhez az alábbi táblázatban bemutatjuk a tanulmány számos előnyét és hátrányát:

Nyilvánvaló, hogy a technika előnyei nagyobbak. Ha a diagnózis típusát a további kezelés eredményessége és a beteg életének meghosszabbítása szempontjából értékeljük, a PCR a legbiztosabb út a sikerhez.

Elemzési funkciók

A leírt elemzés fő jellemzője a HIV korai diagnosztizálásának képessége, amire más kutatási módszerek nem képesek. Hány nappal az állítólagos fertőzés után adhatok vért PCR-hez? Általában ez az időtartam 10-14 nap. A következő 24 órán belül a beteg megkapja az eredményt. A kifejezések lehetséges eltéréseit a diagnosztikai központok és klinikák egyéni munkakörülményei magyarázzák.

A tanulmány célja

A PCR-t többnyire a HIV (humán immunhiányos szindróma) kimutatására végzik. Az elemzés azonban akkor is elvégezhető, ha szexuális úton terjedő betegségek kialakulását gyanítja. Ugyanez a módszer alkalmazható örökletes betegségek diagnosztizálására is.

PDR diagnosztika: a lefolytatás okai

Mikor kell vért adni PCR-hez? A legtöbb esetben biológiai anyag adományozására akkor kerül sor, amikor a humán immunhiányos vírus alkalmazkodott a szervezet körülményeihez, serkenti az antitestek termelését, és kiváltja a HIV első tüneteit. Ez azonban csak akkor indokolt, ha elegendő idő telt el a fertőzés után, és ELISA-vizsgálattal jár.

A PCR szükségessége annak a betegnek a kezdeményezésére merül fel, aki azonnal meg akarja állapítani a betegséget (ha van ilyen). Ennek oka lehet: védekezés nélküli közösülés, érintkezés a fertőzött személy biológiai anyagával, friss vérátömlesztés stb.

Ki van kijelölve a PCR-re?

A HIV-fertőzés PCR-rel történő meghatározása szakember javaslatára a következő esetekben történik:

• előzetes diagnózis. A PCR pontosan megerősíti vagy cáfolja az ELISA eredményt;
• A Western blot megerősítette a diagnózist. Az immunoblot egy további módszer az AIDS tanulmányozására . Mindkét módszert együtt alkalmazzák, ami kizárja a hibás diagnózis felállításának lehetőségét;
• igazolt HIV-státussal PCR segítségével monitorozzuk a kiválasztott kezelés hatását;
• donoros vérvizsgálathoz HIV-antitestek jelenlétére;
• az újszülött HIV-státuszának meghatározására, ha az anya pozitív. A PCR az élet első napjaiban lehetővé teszi a méhen belüli fertőzés vagy a csecsemő fertőzésének meghatározását a születési csatornán való áthaladás során. A vizsgálatot a születés után 2-3 héttel végezzük.

Mennyi ideig tart egy PCR elemzés, és hol lehet elvégezni?

A HIV PCR-elemzését speciális laboratóriumban végzik. Maga a teszt és az eredmény értelmezése nem igényel sok időt: egy hónapot vagy akár egy hetet. A vérvétel legfeljebb 6 percig tart. Szokásos esetben a szakembernek legfeljebb egy napra lesz szüksége a diagnózis felállításához és a következtetés kibocsátásához. Az első 8 óra a vér vizsgálata, a fennmaradó időt a regisztrációra fordítják. Az eredmény a mintavételt követő napon már átvehető. Az expressz tesztelés időtartama 2 óra.

Figyelem! A kötelező egészségbiztosítás lehetővé teszi az egészségügyi közintézményben történő térítésmentes vizsgát.

Szinte minden kereskedelmi laboratórium képes kutatást végezni, mégpedig névtelenül. Egy személy egy speciális számot kap, amelyhez az eredményeket kötik. Ezeket az információkat a felhasználó személyes fiókjában töltik fel az intézmény honlapjára.

Mennyibe kerül egy PCR teszt?

Ez a kutatási módszer meglehetősen drága. Ez annak köszönhető, hogy a PCR-t a legújabb orvosi eszközön kell elvégezni, a manipuláció megfelelő ismereteket igényel a szakemberektől.

Sürgős kérdés: mennyibe kerül egy személynek egy PCR-teszt elvégzése HIV-re? Ez körülbelül 56-60 dollárt igényel.

Elemzés lefolytatása

A HIV PCR-teszt elvégzése magában foglalja:

• vérminta vétel kutatáshoz;
• további mintavétel férfitől és nemi váladékból nőtől.

Figyelem! Ennek eredményeként a vizsgálat lehetővé teszi az orvosok számára, hogy meghatározzák a magas vírusterhelést a páciens állapotának nyomon követése érdekében.

A HIV-teszt egyéb jellemzői, amelyeket figyelembe kell venni:

• néhány nappal a vizsgálat előtt a betegnek csökkentenie kell a zsíros ételek mennyiségét az étrendben;
• a vérvételt üres gyomorban végzik;
• Különféle fertőzéseket szintetizáló enzimeket adnak a felhasadt biológiai anyagokhoz egy speciális reaktorban;
• az elemzés több szakaszban történik, mivel a molekulák osztódása aritmetikai sorrendben történik. Egy speciális program nagyszámú sejtszerkezetet hasonlít össze a HIV kimutatására.

A pontos diagnosztikai módszerek, amelyek magukban foglalják a PCR-t is, drágák, de korán felismerhetik a HIV-t. Az ilyen patológiák kezelésében a legfontosabb a helyes és időben történő diagnózis, amely javíthatja az emberi élet minőségét és időtartamát.

A molekuláris genetikai diagnosztika egyik legpontosabb és legmegbízhatóbb módszere a PCR, azaz a polimeráz láncreakció. Ez a módszer lehetővé teszi a különböző típusú örökletes és fertőző betegségek diagnosztizálását a páciensben.

PCR - egy tanulmány lehetővé teszi az olyan összetett betegségek diagnosztizálását, mint a nehezen kezelhető. A HIV PCR megbízhatósága 100 esetből csak 80 esetben igazolja magát.

A HIV-fertőzés emberi szervezetben történő diagnosztizálásának fő módja a vére, vagyis ennek a betegségnek a vizsgálatát végzik. A diagnózis legegyszerűbb és leggyakoribb módja a vénás vér vétele és egy speciális laboratóriumban történő levezetése. Természetesen a kapott pozitív eredmény hamis is lehet, ezért a referencialaboratóriumban pontosabb kutatási módszerrel újraellenőrzik.

A polimeráz láncreakció meglehetősen költséges eljárásnak számít, megvalósítása speciális felszerelést és magasan képzett szakembereket igényel. Emiatt nem terjedt el széles körben a lakosság körében.

A PCR-elemzés alkalmazása a HIV diagnosztizálására lehetővé teszi, hogy pontos és megbízható eredményt kapjon a betegség jelenlétéről, azonban ez gyakran magának a betegnek a felkészültségétől függ.

A PCR elemzést a következő esetekben végezzük:

1. HIV-fertőzés diagnosztizálása AIDS-fertőzött anyától született újszülötteknél.
2. A HIV koncentrációjának szabályozása a páciens vérében
3. Donor vérvizsgálata.

Még ha a PCR teszt pozitív eredményt is mutat, a diagnózist nem csak egy ilyen teszt állítja fel. Leggyakrabban a viták megoldásának kiegészítő módszereként használják.

A PCR-elemzés sajnos nem nevezhető univerzális módszernek, amely pontos eredményeket ad az emberi szervezet fertőzésének jelenlétére vagy hiányára. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy az ilyen típusú vizsgálatok gyakrabban adnak hamis pozitív eredményeket, mint más módszerek. Ezt a diagnosztikai módszert betegség diagnosztizálására vagy HIV-fertőzés lefolytatására használják. Főleg segédmódszerként használják az AIDS vírus diagnosztizálására.

A hamis pozitív eredmény lehetősége ellenére azonban egy ilyen HIV-teszt számos előnnyel rendelkezik más diagnosztikai módszerekkel szemben. A PCR-elemzés már az állítólagos fertőzés időpontja után 11-15 nappal elvégezhető, és minden más módszer csak hosszú idő elteltével teszi lehetővé az AIDS-vírus emberi szervezetben való jelenlétének felmérését. Ezt az eltérést az magyarázza, hogy a legtöbb HIV szűrővizsgálat a vírus meghatározásán alapul, amelynek kialakulása három hónapon belül megtörténik.

A PCR-vizsgálat és az egyéb diagnosztikai módszerek közötti fő különbség az, hogy nem vírust, hanem magának a vírusnak a jelenlétét mutatják ki a páciens szervezetében.

A polimer láncreakciós módszer éppen ezért nevezhető ideálisnak, ha korai felismerésre van szükség. Ezenkívül lehetőség van ilyen módszer végrehajtására abban az esetben, ha az antitestek jelenléte nem lehet megbízható indikátor.

Tudjon meg többet a HIV-kutatásról a videóban.

Ha szükséges azonosítani a patológia mértékét vagy súlyosságát az emberi testben, akkor kvantitatív módon PCR-vizsgálatot végeznek. Ő az, aki lehetővé teszi, hogy információt kapjon a fertőzés koncentrációjának szintjéről a páciens testében. A betegség progresszióját a vírus koncentrációjának fokozatos növekedése kíséri, és a kvantitatív PCR-diagnosztika lehetővé teszi a fertőzés stádiumának és a folyamatban lévő hatékonyságának meghatározását. A "vírusterhelés" diagnosztizálása a betegség diagnózisa előtt és a kezelés után lehetővé teszi, hogy következtetést vonjon le a kezelés hatékonyságáról.

Egyéb HIV-diagnosztikai módszerek

Napjainkig a HIV-fertőzés diagnosztizálása standard eljárás, amely különféle típusú diagnosztikai módszereket foglal magában:

ELISA tesztrendszerek

Egy ilyen szűrővizsgálattal néhány héten belül kimutatható a vírus az emberi szervezetbe jutás után. Egy ilyen vizsgálat célja nem a vírus jelenlétének megállapítása a betegben, hanem az ellene antitestek termelésének diagnosztizálása. Az ELISA-teszteknek több generációja létezik, amelyek mindegyike eltérő érzékenységgel rendelkezik. Egy ilyen vizsgálat néha eredményeket ad, ami a nem megfelelő feldolgozás és a különböző típusú patológiák jelenlétével magyarázható a páciens testében.

immunblot

Abban az esetben, ha az immunblot pozitív eredményt mutat, akkor beszélhetünk a HIV végső diagnózisáról. Megvalósításának fő módja egy nirocellulóz csík használata, amelyre vírus eredetű fehérjéket visznek fel.

Expressz módszerek

Ez újdonságnak számít a HIV-fertőzés diagnosztizálása terén, és az eredmény néhány percen belül értékelhető az elvégzésük után. A legpontosabb és legmegbízhatóbb eredményeket az immunkromatográfiás tesztek adják, amelyek alkalmazása a kapillárisáram elvén alapul.

A HIV-fertőzés jelenlétéről a szervezetben csak az ELISA-tesztek IB elemzéssel történő megerősítése után lehet beszélni.

A HIV-fertőzés diagnosztizálása az emberi szervezetben jelentős változásokat hoz a megszokott életmódjában és másokkal való kapcsolatában. A vizsgálatok eredményének megőrzése az egészségügyi személyzet feladata, és csak a beteg dönti el, hogy kinek jelenti be betegségét. A PCR az egyik diagnosztikai módszer, amely néhány hét alatt képes kimutatni egy vírus jelenlétét az emberi szervezetben.