A máj csillagsejtjei abból fejlődnek ki. Alapkutatás. A szervpatológia kezeléséről

Az intercelluláris kommunikáció parakrin szekrécióval és közvetlen sejt-sejt kapcsolatokkal valósulhat meg. Ismeretes, hogy a hepatikus perisinusoid sejtek (HPC) regionális őssejtek rést hoznak létre és meghatározzák azok differenciálódását. Ugyanakkor a HPC továbbra is gyengén jellemezhető molekuláris és sejtszinten.

A projekt célja a patkány máj perisinusoid sejtek és a különféle őssejtek, például a humán köldökzsinórvér mononukleáris sejtfrakciója (UCB-MC) és a patkány csontvelőből származó multipotenciális mezenchimális stromasejtek (BM-MMSC) közötti kölcsönhatások vizsgálata volt.

Anyagok és metódusok. Patkány BM-MSC és HPC, humán UCB-MC sejteket standard technikákkal származtattunk. A HPC parakrin szabályozásának tanulmányozásához UCB-MC vagy BM-MMSC sejteket HPC-vel együtt tenyésztettünk Boyden kamrák és kondicionált HPC sejttáptalajok felhasználásával. A differenciálisan jelölt sejteket együtt tenyésztettük, és kölcsönhatásaikat fáziskontraszt fluoreszcens mikroszkóppal és immuncitokémiával figyeltük meg.

eredmények. A tenyésztés első hetében az A-vitamin autofluoreszcenciája volt megfigyelhető a PHC zsírtároló képessége miatt. A BM-MMSC minden együtttenyésztési modellben magas életképességet mutatott. 2 napos inkubálás után kondicionált tápközegben BM-MMSC és HPC kotenyészetben változást figyeltünk meg az MMSC morfológiájában - csökkent a méretük és rövidebbek lettek a csíráik. Az α-Smooth Muscle Actin és a dezmin expressziója hasonló volt a myofibroblaszthoz, amely az Ito sejttenyészet in vitro közbenső formája. Ezeket a változásokat a HPC parakrin stimulációja okozhatja. A HPC UCB-MC sejtekre gyakorolt ​​legmélyebb hatását a kontakt kotenyészetben figyelték meg, ezért az UCB-MC sejtek számára fontos, hogy közvetlen sejt-sejt kapcsolatokat hozzanak létre életképességük megőrzése érdekében. Nem figyeltünk meg semmilyen sejtfúziót a HPC /UCB és a HPC /BM-MMSC sejtek között kotenyészetekben. További kísérleteinkben a HPC által termelt növekedési faktorok tanulmányozását tervezzük az őssejtek májban történő differenciálódásához.

Bevezetés.

A májsejtek sokfélesége közül különösen érdekesek perisinusoid májsejtek (Ito sejtek). A növekedési faktorok és extracelluláris mátrix komponensek szekréciója révén a hepatociták mikrokörnyezetét hozzák létre, és számos tudományos vizsgálat igazolta a májcsillagsejtek azon képességét, hogy mikrokörnyezetet képezzenek a progenitor sejtek számára (beleértve a hematopoetikus sejteket is), és befolyásolják azok differenciálódását hepatociták. Ezen sejtpopulációk intercelluláris kölcsönhatásai a növekedési faktorok parakrin szekréciójával vagy közvetlen intercelluláris kontaktusokkal valósulhatnak meg, azonban ezeknek a folyamatoknak a molekuláris és sejtes alapja még feltáratlan.

A tanulmány célja.

Interakciós mechanizmusok tanulmányozása Ito sejtek hematopoietikus (HSC) és mesenchymális (MMSC) őssejtekkel in vitro körülmények között.

Anyagok és metódusok.

A patkánymáj Ito sejtjeit két különböző enzimatikus módszerrel izoláltuk. Ugyanakkor patkányok csontvelőjéből stromális MMSC-ket nyertünk. Emberi köldökzsinórvérből izolált hematopoietikus őssejtek mononukleáris frakciója. Az Ito-sejtek parakrin hatásait MMSC-k és HSC-k tenyésztésével tanulmányozták abban a tápközegben, amelyben az Ito-sejtek növekedtek, és egy féligáteresztő membránnal elválasztott sejteket együtt tenyésztettek. Az intercelluláris kontaktusok hatását a sejtek együttes tenyésztésében tanulmányozták. A jobb láthatóság érdekében minden populációt egyedi fluoreszcens jelöléssel jelöltünk. A sejtek morfológiáját fáziskontraszt és fluoreszcens mikroszkóppal értékeltük. A tenyésztett sejtek fenotípusos jellemzőit immuncitokémiai analízissel vizsgáltuk.

Eredmények.

A perisinusoid sejtek izolálása után egy héten belül autofluoreszcenciát észleltünk zsírfelhalmozó képességük miatt. Ezután a sejtek növekedésük egy köztes fázisába mentek át, és csillag alakúak lettek. Az Ito-sejtek patkány csontvelői MMSC-kkel való együttes tenyésztésének kezdeti szakaszában az MMSC-k életképessége minden tenyésztési változatban megmaradt. A második napon, amikor az MMSC-ket Ito sejtek tápközegében tenyésztették, az MMSC-k morfológiája megváltozott: méretük csökkent, a folyamatok lerövidültek. Az alfa-simaizom aktin és a dezmin expressziója az MMSC-ben megnövekedett, jelezve fenotípusos hasonlóságukat a miofibroblasztokkal, amelyek az aktivált Ito-sejtek in vitro növekedésének köztes stádiuma. Adataink az Ito sejtek által szekretált parakrin faktorok hatását mutatják a tenyészetben lévő MMSC-k tulajdonságaira.

A vérképző őssejtek Ito-sejtekkel történő együttes tenyésztése alapján kimutatták, hogy a hematopoetikus őssejtek csak akkor maradnak életképesek, ha együtt tenyésztjük Ito-sejtekkel. A vegyes kultúrák fluoreszcens analízise szerint a különböző populációkból származó sejtek fúziójának jelensége nem derült ki.

Következtetések. A hematopoetikus őssejtek életképességének megőrzése érdekében az Ito sejtekkel való közvetlen intercelluláris kontaktus jelenléte döntő tényező. Parakrin szabályozást csak akkor figyeltek meg, amikor az MMSC-ket olyan tápközegben tenyésztették, amelyben Ito-sejtek növekedtek. Az Ito sejtek által termelt specifikus faktorok sejtkultúrában a HSC-k és MMSC-k differenciálódására gyakorolt ​​hatásának vizsgálatát a jövőbeni vizsgálatok során tervezzük.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
SEI HPE "Szövetségi Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Ügynökség Kazany Állami Orvostudományi Egyeteme"

Elvégeztük a májcsillagsejtek populációjának ultrastrukturális, immunhisztokémiai és morfometriai elemzését a fertőző vírus eredetű fibrózis és cirrhosis kialakulásának dinamikájában. Kiderült a májcsillagsejtek fibrogén aktivációja, amelyet a lipidcseppek csökkenése és a fibroblaszt-szerű tulajdonságok szinkron expressziója jellemez - pozitív immunhisztokémiai reakció a simaizom α-aktinjára, a szemcsés citoplazmatikus retikulum hiperpláziája és számos sejt pericelluláris képződése. kollagén rostok. Kimutatták, hogy annak ellenére, hogy a fibrózis kialakulása során fokozatosan csökken a lipidtartalmú csillagsejtek számsűrűsége, a retinoidok lerakódási funkciójának fenntartása továbbra is fennáll - májcirrhosisban lipidtartalmú csillagsejteket találtak a rostos septa és a lebenyek belsejében. Arra a következtetésre jutottak, hogy a májcsillagsejtek polimorf heterogén populáció, széles spektrumú funkcionális aktivitással.

fibrogenezis

a máj csillagsejtjei

ultrastruktúra

immunhisztokémia

1. Balabaud C., Bioulac-Sage P., Desmouliere A. A máj csillagsejtek szerepe a máj regenerációjában // J. Hepatol. - 2004. - 20. évf. 40. – P. 1023–1026.

2. Brandao D.F., Ramalho L.N.Z., Ramalho F.S. Májcirrhosis és májcsillagsejtek // Acta Cirúrgica Brasileira. - 2006. - 20. évf. 21. – P. 54–57.

3. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. A krónikus hepatitis osztályozása: Diagnózis, osztályozás és staging // Hepatológia. - 1994. - 1. évf. 19. - P. 1523-1520.

4. Gabele E., Brenner D.A., Rippe R.A. Májfibrózis: A fibrogén májcsillagsejt amplifikációjához vezető jelek // Front. Biosc. - 2003. - 20. évf. 8. – P. 69–77.

5. Geerts A. A csillagsejtek eredetéről: mezodermális, endodermális vagy neuro-ektodermális? // J. Hepatol. - 2004. - 20. évf. 40. – P. 331–334.

6. Gutierrez-Ruiz M.C., Gomez-Quiroz L.E. Májfibrózis: sejtmodellekre adott válaszok keresése // Liver Intern. - 2007. - 20. évf. 10. – P. 434–439.

7. Kisseleva T., Brenner D.A. A májcsillagsejtek szerepe a fibrogenezisben és a fibrózis visszafordításában // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2007. - 20. évf. 22.–P. S73–S78.

8. Ryder S.D. A májfibrózis előrehaladása hepatitis C-ben szenvedő betegeknél: prospektív ismételt májbiopsziás vizsgálat // Gut. - 2004. - 20. évf. 53. – P. 451–455.

9. Schuppan D., Afdhal N.H. Májcirrhosis // Lancet. - 2008. - Vol. 371. - P. 838-851.

10. Senoo H. A máj csillagsejtek szerkezete és működése // Med. elektron. microsc. - 2004. - 20. évf. 37. – P. 3–15.

A máj csillagsejtek (lipociták, Ito-sejtek, zsírfelhalmozó májsejtek) a hepatociták és a szinuszoidok endoteliális bélése közötti Disse-terekben lokalizálódnak, és vezető szerepet játszanak a retinoid homeosztázis szabályozásában, akár 80%-ban lerakják az A-vitamint. . A Disse tér a legnagyobb funkcionális felelősség területe, amely transzsinuszos cserét biztosít. Kísérleti modellekkel és sejttenyészetben kimutatták, hogy a máj csillagsejtek nagy, A-vitamint tartalmazó citoplazmatikus lipidcseppekké differenciálódnak; ezt a fenotípust „pihenőként” értelmezik.

Egyre nagyobb jelentőséget tulajdonítanak a csillagsejteknek a fibrózis és a májcirrhosis kialakulásában betöltött szerepének. Fibrogén ingerek fogadásakor a "pihenő" csillagsejtek "transzdifferenciálódnak", miofibroblaszt-szerű fenotípust kapnak, és elkezdenek kollagént, proteoglikánokat és az extracelluláris mátrix egyéb összetevőit termelni. A központi vénák, szinuszoidok vagy portális erek szintjén kialakuló fibrózis korlátozza a máj normális hemodinamikáját, ami a metabolikusan hatékony parenchyma csökkenéséhez, továbbá portális hipertóniához és porto-szisztémás söntéshez vezet. A kötőszövet felhalmozódása a Disse tereiben megzavarja a normál metabolikus forgalmat a vér és a hepatociták között azáltal, hogy megzavarja a keringő makromolekulák kiürülését, megváltoztatja az intercelluláris kölcsönhatásokat, és a májsejtek működési zavarához vezet.

Ellentmondó vélemények vannak arról, hogy az aktivált csillagsejtek képesek-e visszaállítani a nyugalmi fenotípust. Bizonyítékot kaptak arra vonatkozóan, hogy a máj fibrogén csillagsejtek részben képesek kiegyenlíteni az aktiválási folyamatot, például ha retinoidoknak vannak kitéve, vagy ha kölcsönhatásba lépnek az extracelluláris mátrix komponenseivel, beleértve az I. típusú fibrilláris kollagént vagy az alapmembrán komponenseket. Ennek a kérdésnek a megoldása a fibrózis reverzibilitásának problémája és a májcirrhosis kezelésére szolgáló terápiás megközelítések kidolgozása az alapja.

A tanulmány célja- átfogó vizsgálatot végezni a májcsillagsejtek szerkezeti és funkcionális jellemzőiről a fibrotikus változások dinamikájában krónikus HCV fertőzés modelljében.

Anyag és kutatási módszerek

A májbiopsziás minták átfogó fényoptikai, elektronmikroszkópos és morfometriai vizsgálatát végeztük krónikus HCV fertőzésben a fibrotikus elváltozások különböző stádiumaiban (100 minta a fibrózis súlyossága szerint 4 egyenlő csoportra osztva). Fontos megjegyezni, hogy a lipidtartalmú csillagsejtek a legjobban a félvékony metszeteken, a fibrogén csillagsejteken láthatók – csak ultravékony metszeteken vagy immunhisztokémiai képalkotással.

A májmintákat Millonig-féle foszfátpufferben (pH 7,2-7,4) készített, 4 °C-ra hűtött 4%-os paraformaldehid oldatban rögzítettük; a paraffin metszeteket hematoxilinnel és eozinnal festették meg Perls-reakcióval kombinálva, van Gieson szerint az elasztikus szálak Weigert-féle rezorcin-fukszinnal történő további festésével, és PAS-reakciót hajtottak végre. A félvékony metszeteket Schiff-reagenssel és azure II-vel festettük meg. A vizsgálatot Leica DM 4000B univerzális mikroszkóppal (Németország) végezték. A mikrofelvételek Leica DFC 320 digitális fényképezőgéppel és Leica QWin szoftverrel készültek. Az uranil-acetáttal és ólom-citráttal kontrasztos ultravékony metszeteket JEM 1010 elektronmikroszkóppal vizsgáltuk 80 kW gyorsítófeszültség mellett.

A májfibrózis stádiumát 4 pontos skálán határoztuk meg, a portális fibrózistól (I. stádium) a cirrhosisig, a porto-centrális vaszkularizált septa kialakulásával és a parenchyma csomós átalakulásával. A simaizom α-aktin expressziójával a fibrózis fejlődésének dinamikájában a máj csillagsejteket és más mátrixot termelő sejtelemeket detektáltunk.

A simaizom α-aktin expresszióját mátrixot termelő májsejtekben kétlépcsős indirekt immunperoxidáz módszerrel, negatív kontroll sztreptavidin-biotin képalkotó rendszerrel teszteltük a reakciótermékekre. A simaizom α-aktinja elleni egér monoklonális antitesteket (NovoCastra Lab. Ltd, UK) 1:25 hígításban alkalmaztuk elsődleges antitestként; mint másodlagos antitestek – univerzális biotinilált antitestek. Az immunhisztokémiai reakció termékeit diaminobenzidinnel tettük láthatóvá, majd a metszeteket Mayer-féle hematoxilinnel ellenfestettük. A lipidtartalmú csillagsejtek számsűrűségét félvékony metszeteken, 38 000 µm2-es látómező egységben határoztuk meg. A statisztikai adatfeldolgozáshoz Student-féle t-próbát alkalmaztunk; az összehasonlított paraméterek közötti különbségeket szignifikánsnak tekintettük, ha a P hibavalószínűség kisebb, mint 0,05.

Kutatási eredmények és megbeszélés

A krónikus hepatitis C-ben szenvedő betegek májának minimális fibrotikus elváltozásai mellett általában meglehetősen nagy számú csillagsejt található, amelyek csak félvékony és ultravékony metszeteken láthatók jól, és a Disse tereiben differenciálódnak. nagy lipidcseppek jelenléte a citoplazmában. A "pihenő", retinoidokat tartalmazó csillagsejtek fibrogén sejtekké történő átalakulása a lipidcseppek számának fokozatos csökkenésével jár. Ebben a tekintetben a csillagsejtek valódi számát átfogó elektronmikroszkópos és immunhisztokémiai vizsgálattal lehet meghatározni.

A krónikus hepatitis C fibrózisának kezdeti szakaszában (0, I), a félvékony metszetek vizsgálatakor a májcsillagsejtek populációja kifejezett polimorfizmussal volt megkülönböztetve - a lipidcseppek mérete, alakja, száma és színezési tulajdonságai élesen változtak. : különbségek a lipidtartalmú anyag ozmiofilitásában a különböző sejtekben. A májcsillagsejtek számsűrűsége a preparátumokban citoplazmatikus lipidcseppek jelenléte alapján 5,01 ± 0,18 volt látótér egységenként.

A csillagsejtek ultrastruktúrájának sajátosságai nemcsak ugyanazon a sejten belül, hanem a különböző lipociták között is a lipidcseppek elektronsűrűségének heterogenitásával járnak: egy elektrontranszparens lipidszubsztrát hátterében egy ozmiofilebb marginális perem emelkedett ki; emellett a sejtmagok élesen polimorfak, és a citoplazmatikus folyamatok hossza változó. A lipidtartalmú csillagsejtek ultrastrukturális jellemzői, valamint a lipidcseppek jelenléte mellett nagyon kis mennyiségű citoplazmatikus mátrixot figyelhetünk meg, amely szegény membránszervecskékben, beleértve a mitokondriumokat is, ezért nyilvánvalóan ezt a lipociták fenotípusát nevezik. pihenő" vagy "passzív" .

A fibrózis II és III stádiumában a legtöbb csillagsejt ultrastruktúrája az úgynevezett kevert vagy átmeneti fenotípust nyerte el - a lipidtartalmú és fibroblasztszerű sejtek morfológiai jellemzőinek egyidejű jelenlétét. Az ilyen lipocitákban a sejtmagok mélyen behatoltak a nukleolemmába, nagyobb volt a sejtmag, és megnövekedett a citoplazma térfogata, amely megtartotta a lipidcseppeket. Ugyanakkor a szemcsés citoplazmatikus retikulum mitokondriumainak, szabad riboszómáinak, poliszómáinak és tubulusainak száma meredeken megnövekedett. Általában a lipidcseppek és a mitokondriumok membránkontaktusa volt, ami a lipidek "hasznosítását" jelzi. Sok sejtben a lipidcseppek lebontása autofagoszómák képződésével valósult meg, amelyek aztán exocitózissal eliminálódnak. Egyes esetekben vegyes fenotípusú csillagsejtek proliferációját figyelték meg.

A májcirrhosis stádiumában a legtöbb mátrixot termelő csillagsejteket a lipidszemcsék teljes hiánya, a fibroblaszt-szerű forma, a fejlett fehérjeszintetizáló kompartment, valamint a citoplazmában kontraktilis fibrilláris struktúrák kialakulása jellemezte; pericellulárisan a Disse tereiben számos kollagénszál köteg specifikus keresztirányú csíkozással lokalizálódott.

Általánosságban elmondható, hogy a krónikus hepatitis C progressziója során, intralobuláris perisinusoidális fibrogenezissel kísérve, a máj csillagsejtek aktiválódásának morfológiai jelei voltak, az úgynevezett "passzív", felhalmozódó A-vitaminból fibrogén és proliferáló sejtekké alakultak át.

A májcirrhosissá való átalakulás szakaszában a lipidtartalmú csillagsejtek számsűrűsége jelentős csökkenést mutatott, ami fibrogén átalakulásukra utal. Kialakult májcirrhosis esetén azonban egyedi esetekben a májparenchyma perisinusoid lipidtartalmú csillagsejtekkel rendelkező területei voltak. Emellett egy mintában számos lipocitát találtak a periportális rostos szövetben, ami valószínűleg a csillagsejtek fontos szerepére utal a szervezetben a retinoidok metabolizmusában, még szervi cirrhosis stádiumában is. Ezen kívül úgy tűnik, hogy a csillagsejtek számos más funkciót is ellátnak, megtalálhatók az extrahepatikus szervekben, például a hasnyálmirigyben, a tüdőben, a vesében és a belekben, és az a vélemény, hogy a máj és az extrahepatikus csillagsejtek disszeminált csillagsejtrendszert alkotnak. a test, hasonlóan az APUD rendszerhez. Például annak ellenére, hogy a fibrogén csillagsejtek a májcirrhosissal társulnak, aktiválódásuk jótékony szerepet játszhat akut sérülések esetén, mert az eredmény egy megfelelő stromális körfolyamat a parenchymalis sejtek regenerálódásához.

A perihepatocelluláris fibrózis súlyossága krónikus HCV fertőzésben a morfometriai analízis szerint szignifikáns fordított korrelációt mutatott a lipidtartalmú csillagsejtek számszerű sűrűségével - a fibrózis III stádiumában és szervi cirrhosisban 0,20 ± 0,03 volt látómezőnként egység, ami lényegesen kisebb (o< 0,05), чем на стадиях фиброза 0 - I (5,01 ± 0,18) и II (2,02 ± 0,04).

A mátrixot termelő májsejtek fibrogén aktivitását a simaizom alfa-aktin expressziójának immunhisztokémiai vizsgálatával teszteltük. Különböző intenzitású immunhisztokémiai reakciók termékeit találtuk az aktivált csillagsejtek citoplazmájában, a májlebenyek belsejében. A simaizom α-aktin különösen jelentős expresszióját figyelték meg a fibroblasztok és a portális zónák myofibroblasztjainak citoplazmájában, az erek simaizomsejtjeiben és a központi vénák körüli myofibroblasztokban.

A fibrogenezis sejtmechanizmusaira vonatkozó adatok nagy része májcsillagsejteken végzett vizsgálatokból származik, ugyanakkor egyértelmű, hogy a májfibrózis kialakulásában különböző mátrixtermelő sejtek (mindegyik sajátos lokalizációjú, immunhisztokémiai és ultrastrukturális fenotípussal) járulnak hozzá. Ide tartoznak a portális traktusok fibroblasztjai és myofibroblasztjai, vaszkuláris simaizomsejtek, valamint a központi vénák körüli myofibroblasztok, amelyek krónikus májkárosodás esetén aktiválódnak.

Következtetés

Kimutatták a májcsillagsejtek szerepét a szervfibrózis kialakulásában krónikus hepatitis C-ben A fibrózis progressziójával a lipidtartalmú csillagsejtek számszerű sűrűsége jelentősen csökken, miközben a populáció egy része megtartja az ún. "A metabolikus funkció fenotípusa. A fibrogén aktiváció állapotában lévő „miofibroblasztszerű” májcsillagsejteket a következő szerkezeti és funkcionális jellemzők jellemzik: a lipidcseppek számának csökkenése és ezt követő eltűnése, a granuláris citoplazmatikus retikulum és a mitokondriumok hiperpláziája, fokális proliferáció, immunhisztokémiai expresszió fibroblaszt-szerű jellemzők, beleértve a simaizom α-aktint, és a pericelluláris kollagén fibrillumok képződése a Disse tereiben.

Így a májcsillagsejtek nem statikus, hanem dinamikus populáció, amely közvetlenül részt vesz az intralobuláris perihepatocelluláris mátrix átalakulásában.

Ellenőrzők:

Vavilin V.A., az orvostudományok doktora, professzor, vezető. Gyógyszeranyagcsere Laboratórium, Molekuláris Biológiai és Biofizikai Kutatóintézet, Orosz Orvostudományi Akadémia szibériai fiókja, Novoszibirszk;

Kliver E.E., az orvostudományok doktora, vezető kutató, Kórmorfológiai és Elektronmikroszkópos Laboratórium, Novoszibirszk Keringési Patológiai Kutatóintézet, E.N. akadémikus. Meshalkin, az Orosz Föderáció Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Minisztériuma, Novoszibirszk.

A művet 2011. augusztus 15-én kapta meg a szerkesztő.

Bibliográfiai link

Szerkezet endoteliális sejtek, Kupffer és Ito sejtek, akkor két ábra példáját fogjuk megvizsgálni.

A szövegtől jobbra látható ábra mutatja a máj szinuszos kapillárisai (SC).- intralobuláris szinuszos kapillárisok, amelyek a bemeneti venuláktól a központi vénáig terjednek. A máj sinusoid kapillárisai anasztomózis hálózatot alkotnak a májlemezek között. A szinuszos kapillárisok bélését endoteliális sejtek és Kupffer sejtek alkotják.

A szövegtől balra lévő ábra a májlemezt (LP) és a kettőt mutatja a máj szinuszos kapillárisai (SC-k). függőlegesen és vízszintesen szeletelve az Ito perisinusoidális sejtek (CI-k) megjelenítéséhez. Az ábrán az elvágott epeutak (LC) is láthatók.

A Kupffer-sejtek folyamatai az endothelsejtek közötti összekötő eszközök nélkül haladnak át, és gyakran áthaladnak a sinusoidok lumenén. A Kupffer-sejtek egy ovális sejtmagot, sok mitokondriumot, egy jól fejlett Golgi-komplexumot, a szemcsés endoplazmatikus retikulum rövid ciszternáit, sok lizoszómát (L), maradéktesteket és ritka gyűrűs lemezeket tartalmaznak. A Kupffer-sejtek nagy fagolizoszómákat (PL) is tartalmaznak, amelyek gyakran tartalmaznak elavult eritrocitákat és idegen anyagokat. Hemosiderin vagy vas zárványok is kimutathatók, különösen szupravitális festéskor.

A Kupffer-sejtek felszínén szabálytalan, lapított citoplazmatikus redők, úgynevezett lamellipodia (LP) - lamellás szárak, valamint filopodia (F) és mikrobolyhok (MV) nevű folyamatok láthatók, amelyeket glikokalix borít. A plazmalemma vermiform testeket (CT) képez, központi elhelyezkedésű sűrű vonallal. Ezek a szerkezetek kondenzált glikokalixot képviselhetnek.

Kupffer sejtek- Ezek makrofágok, nagy valószínűséggel független sejtnemzetséget alkotnak. Általában más Kupffer sejtekből származnak az utóbbi mitotikus osztódása miatt, de származhatnak a csontvelőből is. Egyes szerzők úgy vélik, hogy ezek aktivált endotélsejtek.

Időnként egy véletlenszerű autonóm idegrost (NF) halad át a Disse terén. Egyes esetekben a rostok érintkeznek a hepatocitákkal. A hepatociták széleit mikrobolyhokkal tarkított interhepatocyte depressziók (MU) határolják.

Ágak fedél a máj szinuszos kapillárisaiés bizonyos esetekben áthaladnak a májlemezeken, érintkezve a szomszédos máj sinusoidokkal. A folyamatok nem állandóak, elágazóak és vékonyak; lapítottak is lehetnek. A lipidcseppek felhalmozódó csoportjai meghosszabbodnak, és szőlőkefe megjelenését öltik.

Úgy tartják, hogy perisinusoid Ito sejtek rosszul differenciált mezenchimális sejtek, amelyek hematopoietikus őssejteknek tekinthetők, mivel patológiás körülmények között zsírsejtekké, aktív vér őssejtekké vagy fibroblasztokká alakulhatnak.

Normál körülmények között az Ito-sejtek részt vesznek a zsír és az A-vitamin felhalmozódásában, valamint az intralobuláris retikuláris és kollagénrostok (KB) termelésében.

csillagsejtek

Felül - Az Ito-sejt (HSC) sematikus ábrázolása a legközelebbi hepatociták (PC) szomszédságában, a szinuszos máj epiteliális sejtek (EC) alatt. S - máj sinusoid; KC - Kupffer sejt. Balra lent – ​​Ito sejtek tenyészetben fénymikroszkóp alatt. Jobbra lent – ​​Az elektronmikroszkóppal az Ito-sejtek (HSC) számos zsírvakuólumát (L) tárják fel, amelyek retinoidokat tárolnak.

Ito sejtek(szinonimák: a máj csillagsejtje, zsírtároló sejt, lipocita, Angol Máj csillagsejt, HSC, Ito sejt, Ito sejt ) - a májlebeny perisinusoid terében található periciták, amelyek két különböző állapotban képesek működni - nyugodtés aktív. Aktivált Ito-sejtek nagy szerepet játszanak a fibrogenezisben - májkárosodásban a hegszövet képződésében.

Az ép májban csillagsejtek találhatók nyugodt állapot. Ebben az állapotban a sejteknek több kinövése van, amelyek a szinuszos kapillárist veszik körül. A sejtek másik megkülönböztető jellemzője az A-vitamin (retinoid) tartalék jelenléte a citoplazmában zsírcseppek formájában. A csendes Ito-sejtek az összes májsejt 5-8%-át teszik ki.

Az Ito-sejtek kinövéseit két típusra osztják: perisinusoidális(subendoteliális) és interhepatocelluláris. Az elsők elhagyják a sejttestet, és a szinuszos kapilláris felületén húzódnak, vékony ujjszerű ágakkal borítva. A perisinusoid kinövéseket rövid bolyhok borítják, és jellegzetes hosszú mikronyúlványokkal rendelkeznek, amelyek még tovább nyúlnak a kapilláris endothel cső felületén. Az interhepatocelluláris kinövések, miután legyőzték a hepatociták lemezét és elérik a szomszédos sinusoidot, több perisinusoidális kinövésre oszlanak. Így az Ito-cella átlagosan valamivel több, mint két szomszédos szinuszoidot takar.

Amikor a máj károsodik, Ito sejtek válnak aktivált állapot. Az aktivált fenotípust a proliferáció, a kemotaxis, a kontraktilitás, a retinoidraktárak elvesztése és a myofibroblastszerű sejtek termelése jellemzi. Az aktivált májcsillagsejtek az új gének, például az α-SMA, a kemokinek és a citokinek fokozott szintjét is mutatják. Az aktiválás a fibrogenezis korai szakaszának kezdetét jelzi, és megelőzi az ECM fehérjék fokozott termelését. A májgyógyulás végső szakaszát az aktivált Ito-sejtek fokozott apoptózisa jellemzi, aminek következtében számuk meredeken csökken.

Arany-kloridos festést használnak az Ito-sejtek mikroszkópos megjelenítésére. Azt is megállapították, hogy e sejtek más myofibroblasztoktól való differenciálódásának megbízható markere a reelin fehérje expressziója.

Sztori

Linkek

• Young-O Queon, Zachary D. Goodman, Jules L. Dienstag, Eugene R. Schiff, Nathaniel A. Brown, Elmar Burckhardt, Robert Schoonhoven, David A. Brenner, Michael W. Fried (2001) Csökkent fibrogenezis: Immunohistochemical Study of Páros biopsziás májsejtek lamivudin-terápia után krónikus hepatitis B-ben szenvedő betegeknél. Journal of Haepotology 35; 749-755. - az "Infections and Antimicrobial Therapy" című folyóirat 04/N 3/2002. számában megjelent cikk fordítása a Consilium-Medicum honlapján.
• Popper H: Az A-vitamin eloszlása ​​a szövetben, fluoreszcens mikroszkóppal kimutatva. Physiol Rev 1944, 24:205-224.

Megjegyzések

Wikimédia Alapítvány. 2010 .

Nézze meg, mi a "csillagsejtek" más szótárakban:

Cells - Szerezzen működő akciós kupont az Akademikán a Kozmetikai Galériában, vagy nyereséges cellákat vásároljon ingyenes szállítással a Kozmetikai Galériában.

Fent egy Ito-sejt (HSC) vázlatos ábrázolása látható a közeli hepatociták (PC) mellett, alatta a máj szinuszos epiteliális sejtek (EC). S a máj szinuszoidjai; KC Kupffer sejt. Alsó bal Ito-sejtek tenyészetben fénymikroszkóp alatt ... Wikipédia

IDEGSEJTEK- IDEGSEJTEK, az idegszövet fő elemei. Megnyitotta N. Ehrenbergnek és ő írta le először 1833-ban. Részletesebb adatok az N. to.-ról azok alakjának és axiális hengeres folyamat meglétének megjelölésével, valamint ... ... Nagy Orvosi Enciklopédia

A kisagykéreg nagy neuronjai (Lásd Cerebellum) (M), amelyek axonjai túlnyúlnak a határain; Ya. E. Purkin írta le 1837-ben. A P.-n keresztül az M kéreg parancshatásai a neki alárendelt motoros centrumokra (M magjaira és a vestibularis magokra) valósulnak meg. U…… Nagy szovjet enciklopédia

Vagy a Gephyrei a Vermidea alcsoport egyik osztálya, a férgek vagy Vermesek egy fajtája. Az ebbe az osztályba tartozó állatok kizárólag tengeri formák, amelyek meleg és hideg tengerek iszapjában és homokjában élnek. A csillag alakú Ch. osztályát Katrfage hozta létre ... ...

Nem tévesztendő össze a neutronnal. Piramis neuronsejtek az egér agykéregben A neuron (idegsejt) az idegrendszer szerkezeti és funkcionális egysége. Ez a cella összetett szerkezettel rendelkezik, és nagyon speciális szerkezetű ... ... Wikipédia

Ez az elnevezés bizonyos pigmentsejtekre és pigmentet tartalmazó sejtrészekre (állati és növényi) egyaránt vonatkozik. Az X. gyakrabban található növényekben (lásd N. Gaidukov korábbi cikkét), de protozoákban is le vannak írva ... Enciklopédiai szótár F.A. Brockhaus és I.A. Efron

- (cellulae flammeae), csillóköteggel és hosszú folyamattal rendelkező sejtek, amelyek a protonephridium tubulusának proximális részét zárják. Központ, rész "P. to., amely számos stellate folyamatok, átjut az üregbe, egy csomó hosszú csilló leszáll a rue-ba ... ...

Csillag alakú endotheliociták (reticuloendoteliocyti stellatum), a reticulo endothel rendszer sejtjei, belül helyezkednek el. kétéltűek, hüllők, madarak és emlősök máj kapillárisszerű ereinek (szinuszoidjainak) felülete. Tanult K. ........ Biológiai enciklopédikus szótár

Lángsejtek (cellulae flammeae), csillóköteggel és hosszú folyamattal rendelkező sejtek, amelyek a protonephridium tubulusának proximális részét zárják. Központ. része P. to., amelynek számos. stellate folyamatok, átjut az üregbe, egy köteg leszáll a rue-ba ... ... Biológiai enciklopédikus szótár

- (S. Golgi) a kisagykéreg szemcsés rétegének csillagneuronjai ... Nagy orvosi szótár

Az endotoxin fő forrása a szervezetbenGram-negatív bélflóra. Jelenleg nem kétséges, hogy a máj a fő szerv endotoxin tisztítása. Ena dotoxint először a sejt veszi fel Kami Kupffer (KK), kölcsönhatásba lép a membránreceptorral CD 14. Önmagaként tud kötődni a receptorhoz lipopoliszacharid(LPS), és komplexe a lipid A-kötő fehérjével plazma csomó. Az LPS és a máj makrofágok kölcsönhatása reakciók kaszkádját váltja ki, amelyek a máj termelésén és kibocsátásán alapulnak. citokinek és más biológiailag aktív ionok közvetítők.

Számos publikáció jelent meg a makró szerepérőla máj (LK) szerepe a bakteriális LPS felvételében és kiürülésében, azonban az endotélium kölcsönhatása más mesenchymális sejtek, különösen perisinusoidális Az Ito-sejtek gyakorlatilag nem vizsgálták.

KUTATÁSI MÓDSZER

200 g súlyú fehér hím patkányokat intraperitoneálisan 1 ml steril sóoldatban injektáltunk. erősen tisztított liofilizálva LPS E. coli 0111 törzs 0,5-es adagokban,2,5, 10, 25 és 50 mg/kg. A 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 órás és 1 hetes periódusokban a belső szerveket érzéstelenítés alatt eltávolítottuk, és pufferolt 10%-os formalinba helyeztük. Az anyagot paraffin tömbökbe ágyazták. Az 5 µm vastag metszeteket megfestettük immunhisztokémiaisztreptavidin-biotin dezmin elleni antitestek módszerével, α - sima- izom aktin (A-GMA) és nukleáris antigén jól szaporodó sejtek ( PCNA, " Dako"). Desmint használták markerként perisinusoidálisIto sejtek, A-GMA - as marker ve myofibroblasztok, PCNA - szaporodó sejtek. Az endotoxin májsejtekben történő kimutatására tisztított anti-Re-glikolipidantitestek (KDO Általános és Klinikai Patológiai Intézet, Moszkva).

A VIZSGÁLAT EREDMÉNYEI

25 mg/ttkg és afeletti dózisok esetén halálos sokkot figyeltek meg 6 órával az LPS beadása után. Az LPS-nek való akut expozíció a májszöveten az Ito-sejtek aktiválódását okozta, ami számuk növekedésében nyilvánult meg. Szám dezminpozitív 6 órával az LPS injekció után növekedett, és elérte a maximumot ma 48-72 óráig (1. ábra, a, b).

Rizs. 1. Patkánymáj metszetek vki, feldolgozva LSAB -nekem- chennymides elleni antitestek enyém(zenekar α - sima nyaki aktin (c), x400 (a, b) x200 (c).

a - endotoxin bevezetése előttbe, szingli dezminpozitívIto sejtek a periportális zónában; b- 72 óraendotoxin beadása után on: számos dezminpozitív Ito sejtek; ban ben- en bevezetése után 120 órával dotoxin: α - simaizom csak ny aktin van jelenco a simaizomsejtekben kah edények.

1-ben heti szám dezminpozitív sejtek csökkentek, demagasabb volt a referenciaértékeknél. Nál nél Ebben az esetben nem figyeltük meg a megjelenését A-GMA-pozitív sejtek a sinusban dah máj. belső pozitív kontroll az A-GMA elleni antitestekkel festve simaizomsejtek azonosítására szolgálta portális traktusok A-GMA-t tartalmazó vénás erei (1. ábra, ban ben). Ezért az Ito-sejtek számának növekedése ellenére egyszer Az LPS hatása nem vezet átalakuláshoz ( transzdifferenciálódás) miofibroblasztokká.

Rizs. 2. A máj metszetepatkányok, kezelt LSAB - jelölt antitestek PCNA. a - az en bevezetése előtt dotoxin: egyetlenszaporodó gének patociták, x200; b - 72 órával az endotoxin bejuttatása után: számos proliferáló hepatocita, x400.

Növekvő mennyiség dezminpozitív a sejtek a portálzónán belül indultak el. 6 órától 24 óráig az LPS beadása után perisinusoidális sejteket csak a portális traktusok környékén találtak, i.e. az 1. aci zónában noosa. Abban az időben 48-72 óra, amikor mákot figyeltek megmaximális mennyiség dezminpozitív ragasztóáram, az acinus más zónáiban is megjelentek; ennek ellenére az Ito-sejtek többsége még mindig periportálisan helyezkedett el.

Talán ez annak köszönhető, hogy periportálisantalálható CC-k az elsők, amelyek rögzítik a bélből a portális vénán keresztül vagy a szisztémás keringésből származó endotoxin. Ak titált minőségellenőrzések széles skáláját állítják elő citokinek, amelyekről úgy gondolják, hogy kiváltják az Ito sejtek aktiválódását és transzdifferenciálódás miofibroblasztokká. Nyilvánvalóan ezért reagálnak először a citokinek felszabadulására az aktivált májmakrofágok közelében (az acinus 1. zónájában) található Ito sejtek. Vizsgálatunk során azonban nem figyeltük meg őket. transzdifferenciálódás ban ben myofibroblasztok, és ez arra utal, hogy a CK és a hepatociták által kiválasztott citokinek a már megindult folyamatot támogató tényezőként szolgálhatnak. transzdifferenciálódás, de valószínűleg nem tudják kiváltani a máj egyszeri LPS-expozíciójával.

A sejtek proliferációs aktivitásának növekedését szintén főként az acinus 1. zónájában figyelték meg. Ez valószínűleg azt jelenti, hogy minden (vagy majdnem minden) folyamat kifelé irányul ról ről- és az intercelluláris interakciók parakrin szabályozása, a periportális zónákban haladjon tovább. A proliferáló sejtek számának növekedését figyelték meg 24 órával az LPS beadása után; a pozitív sejtek száma 72 órára nőtt (maximális proliferációs aktivitás, 2. ábra, a, b). Mind a hepatociták, mind a sinusoid sejtek szaporodtak. Azonban a színezés PCNA nem ad képes azonosítani a proliferiok típusát szinuszos sejtek meghajtása. A szakirodalom szerint az endotoxin hatása a a QC száma. Azt hiszik, hogy kb Mind a máj makrofágok proliferációja, mind a monociták más szervekből történő migrációja miatt befolyik. A CK által kibocsátott citokinek növelhetik az Ito-sejtek proliferációs kapacitását. Ezért logikus feltételezni, hogy a proliferáló sejteket a perisinusoidális Ito sejtek. Számuk általunk regisztrált növekedése láthatóan szükséges a növekedési faktorok szintézisének fokozásához és az extracelluláris mátrix helyreállításához károsodás esetén. Ez lehet a máj kompenzáló-regeneratív reakcióinak egyik láncszeme, hiszen az Ito-sejtek a fő forrásai az extracelluláris mátrix, az őssejt-faktor és a hepatocita növekedési faktor komponenseinek, amelyek a javításban és a differenciálódásban vesznek részt. a máj rovka hámsejtjei. Hiányzó az Ito-sejtek ugyanazt az átalakulását myofibroblasztok azt jelzi, hogy egy endotoxin agressziós epizód nem elegendő a májfibrózis kialakulásához.

Így az endotok akut expozíciója sina számának növekedését okozza dezminpozitív Ito sejtek, ami a májkárosodás közvetett jele. Mennyiség perisinusoidális sejtek növekszik, nyilvánvalóan szaporodásuk eredményeként. Az endotoxin-agresszió egyetlen epizódja visszafordulást okoz az én aktiválásom perisinusoidális Ito sejtekés nem vezet oda transzdifferenciálódás miofibroblasztokba. Ezzel kapcsolatban feltételezhető, hogy az aktiválási mechanizmusokban és transzdifferenciálódás Az Ito sejtekben nemcsak az endotoxin és a citokinek vesznek részt, hanem az intercelluláris kölcsönhatások néhány egyéb tényezője is.

IRODALOM

1. Mayansky D.N., Wisse E., Decker K. // Új határok hepatológia. Novoszibirszk, 1992.

2. Szalahov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Yakovlev M.Yu. // Sikeres modern, biol. 1998. Vol. 118, Issue . 1. S. 33-49.

3. Yakovlev M. Yu. // Kazan . m egység magazin 1988. No. 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Boltív. [b]. 1992. Vol. 61.P. 343-349.

5. Gressner A. M. // Hepatogastronerology. 1996. évf. 43. P. 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. et al. // Természet. 1995. évf. 373., 6516. sz., 699-702.

7. bölcs E., Braet F., Luo D. et al. // Toxicol. Pathol. 1996. Vol. 24., 1. sz. P. 100-111.