Histohematska i krvno-moždana barijera mozga. BBB ili krvno-moždana barijera: njena struktura i značaj Prodire kroz GEB u središnji živčani sustav

Krvno-moždana barijera prisutna je kod svih kralješnjaka. Prolazi između središnjeg živčanog i krvožilnog sustava. Zatim ćemo detaljnije razmotriti takav pojam kao što je "krvno-moždana barijera": što je to, koje zadatke obavlja.

Povijesni podaci

Prvi dokaz o postojanju krvno-moždane barijere dobio je Paul Ehrlich 1885. godine. Otkrio je da je boja unesena u krvotok štakora dospjela u sva tkiva i organe, osim u mozak. Ehrlich je sugerirao da se tvar nije proširila na moždano tkivo tijekom intravenske primjene zbog činjenice da nije imala nikakve veze s njima. Taj se zaključak pokazao netočnim. Godine 1909., Ehrlichov student, Goldman, utvrdio je da tripan plavo ne prodire u mozak kada se ubrizgava intravenozno, ali da boji ventrikularni vaskularni pleksus. Godine 1913. pokazao je da se kontrastno sredstvo ubrizgano u cerebrospinalnu tekućinu konja ili psa raspoređuje po tkivima leđne moždine i mozga, ali ne utječe na periferne organe i sustave. Na temelju rezultata pokusa, Goldman je sugerirao da između krvi i mozga postoji prepreka koja sprječava prodor neurotoksičnih spojeva.

ljudska fiziologija

Mozak ima težinu približno jednaku 2% ukupne tjelesne težine. Potrošnja kisika CNS-a je unutar 20% ukupnog volumena koji ulazi u tijelo. Mozak se od ostalih organa razlikuje po najmanjoj opskrbi hranjivim tvarima. Uz pomoć samo anaerobne glikolize, živčane stanice nisu u stanju osigurati svoje energetske potrebe. Kada prestane dotok krvi u mozak, nakon nekoliko sekundi dolazi do gubitka svijesti, a nakon 10 minuta neuroni odumiru. Ljudska fiziologija je uređena na takav način da se energetske potrebe moždanih struktura osiguravaju zahvaljujući aktivnom transportu hranjivih tvari i kisika kroz BBB. Krvne žile središnjeg živčanog sustava imaju neke strukturne i funkcionalne značajke. To ih razlikuje od cirkulacijskih mreža drugih sustava i organa. Ove osobine osiguravaju prehranu, održavanje homeostaze i izlučivanje otpadnih tvari.

Krvno-moždana barijera: fiziologija

Normalna aktivnost mozga moguća je samo u uvjetima biokemijske i elektrolitske homeostaze. Fluktuacije u sadržaju kalcija u krvi, pH i drugim pokazateljima ne bi trebale utjecati na stanje živčanog tkiva. Također se mora zaštititi od prodora neurotransmitera koji cirkuliraju u krvi i mogu promijeniti aktivnost neurona. U mozak ne smiju dospjeti strani uzročnici: patogeni mikroorganizmi i ksenobiotici. Strukturne značajke BBB-a pridonose tome da on predstavlja i imunološku prepreku, jer je nepropusan za veliki broj antitijela, mikroorganizama i leukocita. Poremećaji u krvno-moždanoj barijeri mogu izazvati lezije CNS-a. Mnoge neurološke patologije su neizravno ili izravno povezane s oštećenjem BBB.

Struktura

Kakva je struktura krvno-moždane barijere? Endotelne stanice djeluju kao glavni element. Krvno-moždana barijera također uključuje astrocite i pericite. Postoje tijesni spojevi između endotelnih stanica u cerebralnim žilama. Razmaci između elemenata BBB su manji nego u drugim tkivima tijela. Endotelne stanice, astrociti i periciti djeluju kao strukturna osnova krvno-moždane barijere ne samo kod ljudi nego i kod većine kralješnjaka.

Formiranje

Sve do kraja 20. stoljeća vjerovalo se da krvno-moždana barijera i njezine funkcije nisu u potpunosti razvijene u novorođenčadi i embrija. Ovo prilično rašireno mišljenje nastalo je zbog nekoliko neuspješnih eksperimenata. Tijekom pokusa, embrijima i odraslim životinjama ubrizgavane su boje vezane za proteine ​​ili drugi markeri. Prvi takvi eksperimenti izvedeni su 1920. Markeri ubrizgani u embrije raširili su se po tkivu mozga i tekućini leđne moždine. Ovo nije uočeno kod odraslih životinja. Tijekom pokusa učinjene su neke pogreške. Konkretno, u nekim pokusima korišteno je previše boje, u drugima je povećan osmotski tlak. Zbog toga je došlo do djelomičnog oštećenja vaskularne stijenke, zbog čega se marker proširio po moždanom tkivu. Uz točnu postavku eksperimenta, nije zabilježen prolaz kroz krvno-moždanu barijeru. U krvi embrija molekule spojeva poput transferina, alfa1-fetoproteina i albumina prisutne su u velikim količinama. Ove tvari nisu detektirane, međutim, u međustaničnom prostoru moždanog tkiva, u embrionalnom endotelu, pronađen je transporter P-glikoproteina. To pak ukazuje na prisutnost krvno-moždane barijere u prenatalnom razdoblju.

Propusnost

U procesu razvoja organizma primjećuje se poboljšanje BBB. Za polarizirane male molekule, kao što su saharoza i inulin, propusnost krvno-moždane barijere u novorođenčeta i embrija znatno je veća nego u odraslih. Sličan učinak utvrđen je i za ione. Prolaz inzulina i aminokiselina kroz krvno-moždanu barijeru znatno se ubrzava. To je vjerojatno zbog velike potrebe rastućeg mozga. Istodobno, embrij ima barijeru između tkiva i cerebrospinalne tekućine - "pojasne kontakte" između elemenata ependima.

Mehanizmi prolaza kroz BBB

Postoje dva glavna načina za prevladavanje barijere:

Krvno-moždanu barijeru najlakše prodiru male molekule (primjerice kisik) ili elementi koji su lako topivi u komponentama lipidne membrane smještene u glijalnim stanicama (primjerice etanol). Zbog upotrebe visoko specijaliziranih mehanizama za prevladavanje krvno-moždane barijere, gljivice, bakterije i virusi prodiru kroz nju. Na primjer, uzročnici herpesa prolaze kroz živčane stanice slabog organizma i ulaze u središnji živčani sustav.

Upotreba BBB svojstava u farmakologiji

Moderni učinkoviti lijekovi razvijeni su uzimajući u obzir propusnost krvno-moždane barijere. Na primjer, farmaceutska industrija proizvodi sintetske analgetike na bazi morfija. Ali za razliku od njega, droga ne prolazi kroz BBB. Zbog toga lijekovi učinkovito ublažavaju bol, a da pacijenta ne čine ovisnom o morfiju. Postoje različiti antibiotici koji prolaze krvno-moždanu barijeru. Mnogi od njih smatraju se nezamjenjivima u liječenju određenih zaraznih patologija. Treba imati na umu da predoziranje lijekovima može izazvati ozbiljne komplikacije - paralizu i smrt živaca. U tom smislu, stručnjaci snažno ne preporučuju samoliječenje antibioticima.

Droga koja prolazi kroz BBB

Krvno-moždana barijera je selektivno propusna. Dakle, neki od biološki aktivnih spojeva - kateholamini, na primjer - ne prolaze BBB. Međutim, postoje mala područja u blizini hipofize, pinealne žlijezde i niza područja hipotalamusa gdje ove tvari mogu prijeći krvno-moždanu barijeru. Prilikom propisivanja liječenja liječnik uzima u obzir karakteristike BBB-a. Primjerice, u praktičnoj gastroenterologiji propusnost barijere uzima se u obzir u postupku procjene intenziteta nuspojava pojedinih lijekova na probavne organe. U ovom slučaju pokušavaju dati prednost onim lijekovima koji lošije prolaze kroz BBB. Što se tiče antibiotika, među onima koji dobro prodiru kroz barijeru, treba istaknuti lijek "Nifuratel". Poznat je i pod imenom "Macmirror". Dobro prevladati BBB prokinetiku prve generacije. To posebno uključuje sredstva kao što su Bimaral, Metoklopramid. Djelatna tvar u njima je bromoprid.

BBB i lijekovi sljedećih generacija prokinetika prolaze dobro. Među njima su lijekovi kao što su "Motilak", "Motilium". Djelatna tvar u njima je domperidon. Što je još gore, lijekovi kao što su Itomed i Ganaton prodiru kroz krvno-moždanu barijeru. Aktivni sastojak u njima je itoprid. Najbolji stupanj prolaska kroz BBB uočen je kod lijekova kao što su ampicilin i cefazolin. Također treba reći da je sposobnost prodiranja krvno-moždane barijere u spojevima topivim u mastima veća od one topivih u vodi.

Sve veći broj bolesti znanstvenici objašnjavaju kršenjem funkcija krvno-moždane barijere (BBB). Njegova patološka propusnost razvija se u gotovo svim vrstama patologije CNS-a. S druge strane, kako bi se osigurao prodor određenih lijekova u mozak, svladavanje BBB postaje prioritet. Tehnike koje omogućuju ciljano prevladavanje zaštitne barijere između krvotoka i moždanih struktura mogu dati značajan poticaj liječenju mnogih bolesti.

U jednom od svojih poznatih eksperimenata s bojama, danas već poznati znanstvenik Paul Ehrlich otkrio je krajem 19. stoljeća zanimljiv fenomen koji i dan danas zaokuplja umove znanstvenika: nakon što je u krv pokusnog miša unio organsku boju , promatrajući stanice raznih organa pod mikroskopom, uključujući i stanice povezane s organima središnjeg živčanog sustava, Ehrlich je primijetio da je boja prodrla u sva tkiva, s izuzetkom mozga. Nakon što je asistent znanstvenika ubrizgao boju izravno u mozak, slika pod mikroskopom bila je upravo suprotna: tvar mozga bila je obojena tamnom ljubičasto-plavom bojom, dok u stanicama drugih organa boja nije pronađena. Iz svojih zapažanja Ehrlich je zaključio da mora postojati barijera između mozga i sustavnog krvotoka.

Pola stoljeća nakon otkrića Paula Ehrlicha, s pojavom moćnijih mikroskopa koji su mogli promatrati objekte pri 5000 puta većem povećanju od Ehrlichovog mikroskopa, krvno-moždana barijera je doista identificirana. Leži u zidovima višekilometarske mreže krvnih žila koja opskrbljuje svaku od stotina milijardi živčanih stanica u ljudskom mozgu. Kao i sve krvne žile, moždane žile iznutra su obložene endotelnim stanicama. Međutim, endoteliociti, koji su dio neurovaskularne jedinice mozga, naliježu jedni na druge gušće nego u ostatku vaskularnog korita. Međustanični kontakti između njih nazivaju se "tijesnim spojevima" (tight junctions). Sposobnost formiranja kompaktnog nefenestriranog monosloja, ekspresija visoko specijaliziranih transportnih molekula i proteina stanične adhezije omogućuju endoteliocitima održavanje niske razine transcitoze. Također, endotel je pod utjecajem regulacije pericita, astrocita, neurona i molekula izvanstaničnog matriksa, čime je jasno da BBB nije samo sloj endoteliocita, već aktivan organ koji uključuje različite vrste stanica. Takvo međudjelovanje stanica, koje osigurava barijernu funkciju, sprječava slobodno kretanje tekućina, makromolekula, iona, objašnjava zašto niti boja Paula Ehrlicha niti neki lijekovi ne mogu prodrijeti iz krvi u moždano tkivo.

I prije nego što je prisutnost BBB postala jasna, liječnici i znanstvenici bili su svjesni njegovog značaja. A miješanje u funkcioniranje ove barijere smatralo se lošom idejom. S vremenom se ta ideja promijenila, jer se pokazalo da su BBB vrlo aktivna struktura. Stanice s obje strane barijere su u stalnom kontaktu, međusobno utječući jedna na drugu. Različiti unutarstanični molekularni signalni putovi određuju kapacitet BBB-a u odnosu na različite vrste molekula (ovdje bih želio podsjetiti na Wnt signalni put, koji koordinira mnoge procese povezane s diferencijacijom stanica, a također je uključen u održavanje integriteta BBB). Leukociti, na primjer, za koje se dugo smatralo da su preveliki da bi prešli BBB, zapravo prolaze kroz njega izvođenjem "imunološkog nadzora". Mikroskopska oprema i sami mikroskopi ni sada ne staju u razvoju, stalno se usložnjavaju i otvaraju sve više mogućnosti za vizualizaciju fino uređenih struktura živog organizma. Na primjer, korištenjem dvofotonskog mikroskopa moguće je promatrati živo tkivo moždane kore na dubini od oko 300 mikrona, što je proveo Maiken Nedergaard, MD, sa Sveučilišta u Rochesteru. Izvela je sljedeće manipulacije: uklonjen je dio lubanje miša, zatim je u krvotok ubrizgana boja, što je omogućilo promatranje BBB-a na djelu u stvarnom vremenu. Istraživač je uspio pratiti kako su se pojedinačne stanice kretale iz krvotoka kroz stijenku kapilara - kroz sam sloj endotelnih stanica koji se smatrao nepropusnim za njih prije samo 20 godina.

Prije nego što je konstruiran dvofotonski mikroskop, istraživači su koristili klasične metode: na primjer, promatrali su mrtve stanice tkiva kroz mikroskop, što nije davalo puno objašnjenja o funkcioniranju BBB-a. Vrijedno je promatrati rad BBB-a u dinamici. U nizu eksperimenata, Nedergaard i njezini kolege stimulirali su određenu skupinu živčanih stanica, što je otkrilo nevjerojatnu dinamičnost BBB-a: krvne žile koje okružuju neurone su se proširile kada su živčane stanice bile stimulirane, osiguravajući povećan protok krvi, kako su se stimulirani neuroni počeli širiti akcijski potencijal; sa smanjenjem nadražujućih impulsa, žile su se odmah ponovno suzile. Također, pri procjeni funkcija BBB važno je obratiti pozornost ne samo na endoteliocite, već i na već spomenute astrocite i pericite koji okružuju krvne žile i olakšavaju interakciju između krvi, endotela i neurona. Mikroglijalne stanice koje cirkuliraju oko stanice ne smiju se podcjenjivati, jer defekti u njihovim funkcijama mogu imati važnu ulogu u nastanku neurodegenerativnih bolesti, jer u ovom slučaju, imunološka obrana BBB-a je oslabljena. Kada endotelne stanice umru, prirodno ili kao posljedica oštećenja, stvaraju se "praznine" u krvno-moždanoj barijeri, a endotelne stanice nisu u stanju odmah zatvoriti ovo područje, budući da je za stvaranje tijesnih spojeva potrebno vrijeme. To znači da se endoteliociti u ovom području moraju privremeno zamijeniti nekim drugim tipom stanica. Mikroglijalne stanice su te koje dolaze u pomoć, obnavljajući barijeru dok se endotelne stanice potpuno ne obnove. To je pokazao eksperiment tima dr. Nedergaarda, kada su 10-20 minuta nakon oštećenja kapilare mišjeg mozga laserskim zrakama mikroglijalne stanice ispunile oštećenje. Zbog toga je jedna od hipoteza kojom znanstvenici pokušavaju objasniti nastanak neurodegenerativnih bolesti neispravan rad mikroglijskih stanica. Na primjer, potvrđena je uloga BBB poremećaja u razvoju napada multiple skleroze: imunološke stanice migriraju u velikom broju u moždana tkiva, pokrećući sintezu antitijela koja napadaju mijelin, uslijed čega se uništava mijelinska ovojnica aksona.

Patološka propusnost BBB također igra ulogu u nastanku i tijeku epilepsije. Dugo je poznato da su epileptički napadaji povezani s prolaznim kršenjem integriteta BBB. Istina, donedavno se vjerovalo da je to posljedica epileptičkih napadaja, a ne uzrok. Ali s primitkom novih rezultata istraživanja, ovo gledište se postupno promijenilo. Na primjer, prema laboratoriju Sveučilišta u Amsterdamu, učestalost napadaja kod štakora povećavala se u skladu s otvaranjem BBB. Što je narušavanje barijere bilo izraženije, to je vjerojatnije da su životinje razvile vremenski oblik epilepsije. Ovi podaci također koreliraju s rezultatima dobivenim u klinici Cleveland (SAD) pri provođenju testova na svinjama, kao i na primjeru ljudi: u oba slučaja napadaji su se dogodili nakon otvaranja BBB, ali nikad prije.

Znanstvenici se također bave odnosom između funkcioniranja BBB i Alzheimerove bolesti. Na primjer, bilo je moguće identificirati dva BBB proteina koji vjerojatno igraju ulogu u razvoju ove bolesti. Jedan od tih proteina, RAGE, posreduje u prodoru beta-amiloidnih molekula iz krvi u moždano tkivo, a drugi, LRP1, transportira ih van. Ako se poremeti ravnoteža u aktivnosti ovih proteina, nastaju karakteristični amiloidni plakovi. Iako je primjena ovih spoznaja u terapiji tek u budućnosti, rezultati su obećavajući: na mišjem modelu moguće je spriječiti taloženje beta-amiloida blokiranjem gena odgovornog za sintezu RAGE proteina u endotelnim stanicama. Moguće je da će lijekovi koji blokiraju protein RAGE, a koji se već razvijaju, imati sličan učinak kod ljudi.

Uz problem vraćanja integriteta BBB-a, drugi problem povezan s njegovim funkcioniranjem je, kao što je već spomenuto, prijenos lijekova kroz barijeru između krvotoka i mozga. Metabolizam koji se odvija putem BBB podložan je određenim pravilima. Da bi prešla barijeru, tvar ili ne smije premašiti masu od 500 kDa (ovaj parametar odgovara većini antidepresiva, antipsihotika i hipnotika), ili koristiti prirodne mehanizme za BBB prijelaz, kao što to čini npr. L-dopa, koji je prekursor dopamina i prenosi se kroz BBB posebnim nosačem; ili tvar mora biti lipofilna, budući da afinitet prema spojevima koji sadrže masti osigurava prolaz kroz bazalnu membranu. 98% lijekova ne ispunjava niti jedan od ova tri kriterija, što znači da ne mogu ostvariti svoj farmakološki učinak u mozgu. Navedene kriterije tehnolozi bezuspješno pokušavaju implementirati tijekom razvoja oblika lijekova. Iako oblici topivi u mastima lako prodiru kroz BBB, neki od njih se odmah izlučuju natrag u krvotok, drugi se zaglave u debljini membrane bez postizanja konačnog cilja. Osim toga, lipofilnost nije selektivno svojstvo BBB membrana, pa stoga takvi lijekovi mogu praktički neselektivno proći kroz stanične membrane bilo kojeg organa u tijelu, što je također, naravno, minus.

Načini prevladavanja krvno-moždane barijere

Pravi proboj bila je uporaba kirurške metode za prevladavanje BBB-a, koju je razvio neurokirurg sa Sveučilišta Texas u Dallasu. Metoda se sastoji u uvođenju hiperosmolarne otopine manitola u arteriju koja vodi do mozga. Zbog osmolarnog učinka (količina otopljene tvari u hiperosmolarnoj otopini manitola veća je od one unutar endotelnih stanica, pa se prema zakonu osmoze voda kreće prema većoj koncentraciji otopljene tvari) endotelne stanice gube vodu, skupljaju se, prekidaju se čvrsti kontakti između njih, au BBB-u nastaje privremeni defekt koji omogućuje prolazak lijekova ubrizganih u istu arteriju u moždano tkivo. Takvo privremeno otvaranje BBB traje od 40 minuta do 2 sata, nakon čega dolazi do obnove endoteliocita i kontakata između njih. Ova tehnika je spasonosna za pacijente s dijagnosticiranim tumorom mozga, kada tumor dobro reagira na kemoterapiju, ali samo ako kemoterapijski lijek dospije u moždano tkivo i nakupi u području infiltracije malignih stanica u potrebnoj koncentraciji.

Ovo je samo jedan od načina da se prevlada BBB. Nema manje zanimljivih načina, oni su prikazani u dijagramu u nastavku. Nadam se da će se netko nakon čitanja poželjeti udubiti u temu kako bi shvatio mogućnosti manipulacije krvno-moždanom barijerom i kako upravo kontrola nad njezinim funkcioniranjem može pomoći u borbi protiv raznih bolesti.

Izvori:
Angažiranje neuroznanosti za unaprjeđenje translacijskih istraživanja u biologiji moždane barijere - cjeloviti tekst članka, izvatci iz kojeg su korišteni u postu, o sudjelovanju BBB u razvoju raznih bolesti i načinima za njegovo prevladavanje
J. Interlandi Wege durch die Blut-Hirn-Schranke, Spektrum der Wissenschaft, spezielle Auflage, 2/2016.
Otvaranje krvno-moždane barijere - pregled načina otvaranja BBB
Endotelne progenitorske stanice u razvoju i obnovi cerebralnog endotela - o nastanku i modeliranju BBB

MI. Saveljeva, E.A. Sokova

4.1. PREGLED DISTRIBUCIJE LIJEKOVA I ODNOSA S PROTEINIMA PLAZME

Nakon što jednim od putova primjene uđu u sustavnu cirkulaciju, ksenobiotici se distribuiraju u organe i tkiva. Niz fizikalnih i fizioloških procesa koji se odvijaju istovremeno ovisi o fizikalno-kemijskim svojstvima lijekova i na taj način oblikuju različite načine njihove distribucije u tijelu. Primjeri fizičkih procesa su jednostavno razrjeđivanje ili otapanje lijeka u unutarstaničnim i izvanstaničnim tekućinama. Primjeri fizioloških procesa su vezanje proteina plazme, dostupnost tkivnih kanala i prodiranje lijeka kroz različite tjelesne barijere. Sljedeći čimbenici mogu utjecati na distribuciju lijeka:

protok krvi;

Stupanj vezanja na proteine ​​plazme;

Fizikalno-kemijska svojstva pripravaka;

Stupanj (dubina) i opseg prodiranja lijeka kroz fiziološke barijere;

Stupanj eliminacije, zbog kojeg se lijek kontinuirano uklanja iz tijela, a koji se natječe s fenomenom distribucije.

protok krvi

protok krvi- volumen krvi koji doseže određeno područje u tijelu u jedinici vremena. Omjer volumen/vrijeme i količina protoka krvi u različitim dijelovima tijela razlikuju se. Ukupni protok krvi je 5000 ml/min i odgovara kapacitetu srca u mirovanju. Srčani kapacitet(minutni volumen srca) - volumen krvi koju srce pumpa u jednoj minuti. Osim minutnog volumena srca, postoji tako važan čimbenik kao volumen krvi u različitim dijelovima sistemske cirkulacije. U prosjeku srce sadrži 7% ukupnog volumena krvi, plućni sustav - 9%, arterije - 13%, arteriole i kapilare - 7%, a vene, venule i cijeli venski sustav - preostalih 64%. Kroz propusne stijenke kapilara dolazi do izmjene lijekova, hranjivih i drugih tvari s intersticijalnom tekućinom organa/tkiva, nakon čega se kapilare spajaju s venulama, koje postupno konvergiraju u velike vene. Kao rezultat transkapilarne izmjene, lijek se prenosi kroz stijenku kapilare u tkivo zbog razlike u tlaku (osmotski i hidrostatski tlak) unutarnjeg i vanjskog dijela kapilare ili koncentracijskog gradijenta. Dostava ksenobiotika u određene dijelove tijela ovisi o brzini protoka krvi i mjestu primjene lijeka.

Protok krvi je glavni čimbenik raspodjele lijekova u ljudskom tijelu, dok koncentracijski gradijent igra neznatnu ulogu (ili uopće ne sudjeluje) u masovnoj isporuci lijeka u organe i tkiva. Protok krvi značajno određuje brzinu isporuke lijeka u određeno područje tijela i odražava relativnu stopu rasta koncentracije ksenobiotika, pri kojoj se uspostavlja ravnoteža između organa/tkiva i krvi. Količina lijekova pohranjenih ili raspoređenih u tkivu ovisi o veličini tkiva i fizikalno-kemijskim karakteristikama lijeka, faktoru razdvajanja između organa/tkiva i krvi.

Fenomen koji ograničava protok krvi(distribucija ograničena perfuzijom; fenomen ograničen transmisijom; distribucija ograničena propusnošću) - ovisnost transkapilarne izmjene

te skladištenje lijeka u tkivu od fizikalno-kemijskih karakteristika lijeka.

Transkapilarna izmjena lijekova ograničena perfuzijom

Kako bismo razlikovali dvije vrste distribucije, pretpostavimo da je kapilara šuplji cilindar duljine L i radijus r , u kojem krv teče brzinom ν u pozitivnom smjeru X. Koncentracija lijeka u tkivu oko kapilare - c tkanina, te koncentracija u krvi C krv. Lijek prolazi

kapilarna membrana zbog koncentracijskog gradijenta između krvi i tkiva. Razmotrite odjeljak ili segment smjera između x i x+dx, gdje je razlika u masi protoka lijeka između početka i kraja segmenta dx jednak masenom protoku kroz stijenku kapilare. Jednakost zapisujemo u sljedećem obliku (4-1):

onda će jednadžba (4-4) imati oblik:

Protok mase kroz stijenku kapilare u tkivo je j tkanina u izražavanju

neto masa protoka koji napušta kapilaru na određenoj duljini L(4-6):

Izvršivši transformaciju jednadžbe (4-6) pomoću jednadžbe (4-5), dobivamo:

Nađimo kapilarni zazor:

Kapilarni klirens je volumen krvi iz kojeg se ksenobiotik širi u tkivo u jedinici vremena. Distribucija omjera ekstrakcije (omjera ekstrakcije):

Jednadžba (4-9) se može pretvoriti:

Jednadžba (4-10) pokazuje da omjer oporavka izražava ravnotežni udio između koncentracije lijeka u tkivu, arterijskim kapilarama, na venskoj strani kapilara. Uspoređujući jednadžbe (4-5) i (4-10) nalazimo da je kapilarni klirens jednak protoku krvi pomnoženom s omjerom oporavka.

Razmotrimo distribuciju ograničenu difuzijom (ili distribuciju ograničenu propusnošću). Na P>PS ili C arterija≈ C vena

lijek je malo lipofilan i omjer povrata je manji od jedan, a distribucija lijeka ograničena je vrlo brzom difuzijom kroz kapilarnu membranu. Odredimo prijenos mase lijeka u tkivo:

Pokretačka snaga za prijenos ksenobiotika u tkivo je koncentracijski gradijent. Razmotrite distribuciju ograničenu perfuzijom (ili distribuciju ograničenu protokom krvi). Na Q ili C vena≈ C tkiva koncentracija lijeka u tkivu je u ravnoteži

s koncentracijom lijeka na venskoj strani kapilara, a lijek je vrlo lipofilan. Omjer povrata je jednak ili blizu jedinice, pa je stoga apsorpcija lijeka u tkivu termodinamički mnogo povoljnija od njegove prisutnosti u krvi, a distribucija je ograničena samo brzinom isporuke lijeka u tkivo. . Nakon što lijek dospije u tkivo, odmah se apsorbira. Odredimo prijenos mase lijeka u tkivo:

Vezanje lijekova za proteine

Vezanje lijekova na proteine ​​plazme značajno utječe na njihovu distribuciju u organizmu. Male molekule lijeka povezane s proteinima mogu lako probiti barijere. U tom smislu, distribucija ksenobiotika vezanog na proteine ​​razlikovat će se od distribucije nevezanog lijeka. Interakcija funkcionalnih skupina lijeka s membranskim ili unutarstaničnim receptorima može biti kratka. Vezanje na proteine ​​ne utječe samo na distribuciju lijeka u tijelu, već utječe i na terapijski ishod. Stoga je za farmakokinetičku analizu, regulaciju režima doziranja i postizanje optimalnog terapijskog učinka potrebno koristiti koncentraciju slobodnog lijeka u plazmi.

Vezanje na proteine ​​lijekova koji se koriste zajedno s drugim lijekovima može se razlikovati od onih koji se uzimaju sami. Promjene u vezivanju proteina rezultat su zamjene jednog lijeka drugim u kombinaciji s proteinima plazme. Slična se supstitucija također može dogoditi na staničnoj razini s drugim proteinima i tkivnim enzimima. Supstitucija uzrokuje povećanje slobodne frakcije lijeka u plazmi i njegovo nakupljanje na receptorskim mjestima proporcionalno koncentraciji lijeka. Važno je prilagoditi režim doziranja lijekova kada se istodobno primjenjuju. Promjena vezanja lijekova na proteine ​​važno je pitanje, posebno za lijekove s uskim terapeutskim rasponom.

Proteini plazme koji su uključeni u interakciju između proteina i lijeka

bjelančevina- glavni protein plazme i tkiva odgovoran za vezanje lijekova, koji se sintetizira isključivo hepatocitima jetre. Molekularna težina albumina je 69 000 Da; poluživot je otprilike 17-18 dana. Protein se uglavnom distribuira u krvožilnom sustavu i, unatoč velikoj molekularnoj veličini, dodatno se može distribuirati u ekstravaskularnoj zoni. Albumin ima negativno i pozitivno nabijene regije. Lijek stupa u interakciju s albuminom zahvaljujući vodikovim vezama (hidrofobno vezanje) i van der Waalsovim silama. Neki čimbenici koji imaju značajan učinak na tijelo, kao što su trudnoća, operacija, dob, etničke i rasne razlike, mogu utjecati na interakciju lijekova s ​​albuminom. Bubrezi ne filtriraju albumin, pa se stoga lijekovi koji se vežu na albumin također ne filtriraju. Stupanj vezanja ne utječe samo na distribuciju lijeka, već i na bubrežnu eliminaciju i metabolizam lijeka. Hepatociti jetre mogu preuzeti samo slobodni lijek. Stoga, što je veći postotak lijeka vezanog za proteine, to je manja apsorpcija u jetri i brzina metabolizma lijeka. Kao što je ranije spomenuto, stupanj vezanja lijeka na albumin plazme također se može značajno promijeniti primjenom drugih lijekova koji zamjenjuju glavni lijek, što rezultira povećanjem koncentracije slobodnog lijeka u plazmi.

Ostali proteini plazme su fibrinogen, globulini (γ- i β 1 -globulin – transferin), ceruloplazmin te α- i β-lipoproteini. Fibrinogen i njegov polimerizirani oblik fibrin sudjeluju u stvaranju krvnih ugrušaka. Globulini, odnosno γ-globulini, su antitijela koja stupaju u interakciju s određenim antigenima. Transferin je uključen u transport željeza, ceruloplazmin je uključen u prijenos bakra, a α- i β-lipoproteini su glasnici komponenti topivih u mastima.

Procjena parametara vezanja proteina

Vezanje lijekova na proteine ​​plazme obično se određuje in vitro u fiziološkim uvjetima pH i tjelesne temperature. Metode određivanja - ravnotežna dijaliza, dinamička dijaliza, ultrafiltracija, gel filtracijska kromatografija, ultracentri-

fuzije, mikrodijalize i nekoliko novih metodologija koje se brzo razvijaju za eksperimente visoke propusnosti. Cilj je procijeniti koncentraciju slobodnog lijeka u ravnoteži s kompleksom protein-lijek. Odabrana metodologija i eksperimentalni uvjeti trebaju biti takvi da se održavaju stabilnost i ravnoteža kompleksa i da koncentracija slobodnog lijeka nije precijenjena zbog prebrze degradacije kompleksa tijekom mjerenja. Nakon toga, većina kompleksa lijek-protein se drži zajedno slabom kemijskom interakcijom, elektrostatskog tipa (van der Waalsova sila), a vodikova veza ima tendenciju razdvajanja pri povišenoj temperaturi, osmotskom tlaku i nefiziološkom pH.

Uobičajena metoda dijalize plazme, odnosno otopine proteina s pH 7,2-7,4, nije učinkovita pri različitim koncentracijama lijeka. Smjesa nakon dijalize postaje izotonična s NaCl [na 37°C kroz membranu za dijalizu s molekularnim kontrakcijama od oko 12 000-14 000 Da u odnosu na ekvivalentni volumen fosfatnih pufera (≈67, pH 7,2-7,4)]. Dijalizna membrana u obliku vrećice koja sadrži protein i lijek stavlja se u pufersku otopinu. Prefabricirana modificirana verzija vrećice ima dva odjeljka koja su odvojena dijaliznom membranom. Ravnoteža slobodnog lijeka koji prolazi kroz membranu obično se postiže za oko 2-3 sata.Koncentracija slobodnog lijeka mjeri se na strani pufera, tj. izvan vrećice ili odjeljka, odvojene membranom, koja bi trebala biti jednaka koncentraciji slobodnog lijeka unutar vrećice ili odjeljka; koncentracija slobodnog lijeka u vrećici mora biti u ravnoteži s lijekom vezanim za protein. U dijalizi se koristi otopina albumina ili uzorak čiste plazme koji sadrži albumin. Parametri vezanja lijeka su slobodni udio ili pridružena konstanta, koja se može odrediti korištenjem zakona djelovanja mase:

gdje K a- konstanta asocijacije; C D- koncentracija slobodnog lijeka u molekulama; C Pr- koncentracija proteina sa slobodnim pričvrsnim mjestima; CDP- koncentracija kompleksa lijek-protein; k 1 i k 2 - konstante razine izravnih i obrnutih reakcija,

odnosno. Recipročne veze su trajne i poznate su kao konstante disocijacije (4-14):

Vrijednost pridružene konstante K a predstavlja stupanj vezanja lijeka na proteine. Lijekovi koji se intenzivno vežu na proteine ​​plazme obično imaju veliku konstantu asocijacije. Na temelju jednadžbe (4-14) može se odrediti koncentracija kompleksa lijek-protein:

Ako je poznata koncentracija ukupnih proteina (C) na početku pokusa u epruveti, a koncentracija kompleksa lijek-protein (C) procijenjena eksperimentalno, tada se može odrediti koncentracija slobodnih proteina. (C Pr), u ravnoteži sa kompleksom:

Zamjena jednadžbe (4-15) s jednadžbom (4-16) za C Pr vodi:

Transformirajmo jednadžbu (4-18):

Prilikom uspostavljanja CDP/ S PT(broj molova vezanog lijeka po molu proteina za ravnotežu) jednak je r, tj. r = CDP/ C PT , tada će se jednadžba (4-19) promijeniti:

Pri množenju jednadžbe (4-20) sa n(n je broj mjesta vezanja po molu proteina), dobivamo Langmuirovu jednadžbu:

Langmuirova jednadžba (4-21) i graf r protiv C D rezultira hiperboličkom izotermom (slika 4-1). Pojednostavite jednadžbu (4-21). Uzmimo Langmoorovu jednadžbu (4-21) u obrnutom obliku. Dvostruka recipročna jednadžba (4-22) pokazuje da je dijagram 1/r prema 1/C D linearan s nagibom jednakim 1/nK a i sjecišnu točku duž y-osi 1/ n(Slika 4-2):

Riža. 4-1. Langmoorova izoterma. Na y-osi - broj molova lijeka vezanog po molu proteina; na apscisnoj osi – koncentracija slobodnog lijeka

Transformacijom jednadžbe (4-21) mogu se dobiti dvije verzije linearne jednadžbe:

Scatchardov zaplet opisuje odnos između r/C D i r kao ravna linija s nagibom jednakim asocijativnoj konstanti K a(Slika 4-3). Sjecište s osi x jednak je broju spojenih odsječaka n, točki presjeka s osi na jednako je pK a ..

Nadalje, jednadžba (4-21) može se preurediti kako bi se osigurao pravocrtni odnos u smislu slobodnih i vezanih koncentracija lijeka:

Riža. 4-2. Dualni recipročni Klotzov dijagram

Jednadžba (4-21) pokazuje odnos između recipročnih r(molovi vezanog lijeka po molu proteina) i C D

Riža. 4-3. Linijski dijagram CDP/CD (omjer vezanih mjesta i slobodnog lijeka) u odnosu na CDP (koncentracija vezanog lijeka)

(koncentracija slobodnog lijeka). Sjecište s osi na je recipročna vrijednost broja vezanih mjesta po molu proteina i omjera nagiba prema točki presjeka na- asocijativna konstanta ravnoteže.

Raspored c dp / c d protiv c dp -

linija s nagibom jednakim -K a i sjecište duž y-osi nKC PT . Ova se jednadžba koristi kada je koncentracija proteina nepoznata. Procjena K a temelji se na koncentraciji lijeka izmjerenoj u odjeljku pufera. Određivanje lijeka vezanog na proteine ​​temelji se na procjeni slobodne frakcije

Scatchard dijagram (Slika 4-4) je ravna linija (za jednu vrstu povezanih parcela).

Langmoorova jednadžba za nekoliko vrsta povezanih parcela:

gdje n 1 i K a1 - parametri iste vrste identično povezanih odjeljaka; n 2 i K a2 - parametri druge vrste identično povezanih odjeljaka, i tako dalje. Na primjer, ostatak asparaginske ili glutaminske kiseline, -COO -, može biti jedan tip mjesta vezivanja, a -S - ostatak cisteina ili -NH 2± - ostatak histidina - drugi tip mjesta vezivanja. Kada lijek ima afinitet za dvije vrste veznih mjesta, tada je zaplet

Riža. 4-4. Scatchardov zaplet

Scatchard r/d protiv r ne predstavlja ravnu liniju, već krivulju (sl. 4-5). Ekstrapolacija početnih i krajnjih segmenata krivulje rezultira ravnim linijama koje odgovaraju jednadžbama:

Riža. 4-5. Scatchardov zaplet

Scatchardov dijagram predstavlja vezanje proteina dviju različitih klasa regija. Krivulja predstavlja prva dva elementa

jednadžbe (4-26), koje su definirane kao ravne linije - nastavci linearnih segmenata početnog i završnog dijela krivulje. Linija 1 predstavlja visok afinitet (afinitet) i nizak kapacitet veznih mjesta, a linija 2 - nizak afinitet i visok kapacitet veznih mjesta.

Kada su afinitet i kapacitet dvaju veznih mjesta različiti, tada linija s većom točkom sjecišta na i manja sjecišna točka x definira visok afinitet i nizak kapacitet mjesta, dok linija s manjom sjecišnom točkom na i veća točka sjecišta x određuje nizak afinitet i visok kapacitet veznih mjesta.

4.2. PRODOR LIJEKOVA KROZ HISTOHEMATSKE BARIJERE

Većina lijekova nakon apsorpcije i ulaska u krv neravnomjerno se raspoređuje po različitim organima i tkivima te nije uvijek moguće postići željenu koncentraciju lijeka u ciljnom organu. Značajan utjecaj na prirodu distribucije lijekova imaju histohematske barijere koje se javljaju na putu njihove distribucije. Godine 1929. akademik L.S. Stern je prvi put na Međunarodnom kongresu fiziologije u Bostonu izvijestio o postojanju

tijelo fizioloških zaštitnih i regulacijskih histohematskih barijera (HGB). Dokazano je da je fiziološka histohematska barijera kompleks najsloženijih fizioloških procesa koji se odvijaju između krvi i tkivne tekućine. GGB reguliraju protok tvari potrebnih za njihovu aktivnost iz krvi u organe i tkiva i pravovremeno izlučivanje krajnjih produkata staničnog metabolizma, osiguravaju stalnost optimalnog sastava tkivne (izvanstanične) tekućine. Istodobno, HGB sprječava ulazak stranih tvari iz krvi u organe i tkiva. Značajka GGB-a je njegova selektivna propusnost, tj. sposobnost prolaska nekih tvari i zadržavanja drugih. Većina istraživača prepoznaje postojanje specijaliziranih fizioloških HGB-a koji su važni za normalno funkcioniranje pojedinih organa i anatomskih struktura. Tu spadaju: hematoencefalni (između krvi i središnjeg živčanog sustava), hematooftalmički (između krvi i intraokularne tekućine), hematolabirintski (između krvi i endolimfe labirinta), barijera između krvi i spolnih žlijezda (hematoovarijska, hematotestikularna). Posteljica također ima "zaštitna" svojstva koja štite fetus u razvoju. Glavni strukturni elementi histohematskih barijera su endotel krvnih žila, bazalna membrana, koja uključuje veliki broj neutralnih mukopolisaharida, glavnu amorfnu tvar, vlakna itd. Struktura HGB-a u velikoj je mjeri određena strukturnim značajkama organa i varira ovisno o morfološkim i fiziološkim značajkama organa i tkiva.

Prodor lijekova kroz krvno-moždanu barijeru

Glavna sučelja između CNS-a i periferne cirkulacije su krvno-moždana barijera (BBB) ​​​​i hematolikvorne barijere. Površina BBB je približno 20 m 2 i tisućama puta veća od površine hematolikvorne barijere, tako da je BBB glavna barijera između CNS-a i sistemske cirkulacije. Prisutnost u moždanim strukturama BBB-a, koji odvaja cirkulaciju od intersticijalnog prostora i sprječava ulazak niza polarnih spojeva izravno u moždani parenhim, određuje karakteristike medikamentozne terapije.

PII neurološke bolesti. Propusnost BBB određena je endotelnim stanicama moždanih kapilara, koje imaju epitelne, vrlo otporne uske spojeve, što isključuje paracelularne putove za fluktuacije tvari kroz BBB, a prodiranje lijekova u mozak ovisi o transcelularnom prijevoz. Glijalni elementi koji oblažu vanjsku površinu endotela i, očito, igraju ulogu dodatne lipidne membrane, također su od neke važnosti. Lipofilni lijekovi uglavnom lako difundiraju kroz BBB, za razliku od hidrofilnih lijekova, čiji je pasivni transport ograničen visokorezistentnim tijesnim spojevima endotelnih stanica. Koeficijent topljivosti u mastima je od odlučujućeg značaja za prodiranje kroz krvno-moždanu barijeru. Tipičan primjer su opći anestetici - brzina njihovog narkotičkog djelovanja izravno je proporcionalna koeficijentu topljivosti u mastima. Ugljični dioksid, kisik i lipofilne tvari (u koje spada većina anestetika) lako prolaze kroz BBB, dok je za većinu iona, proteina i velikih molekula (npr. manitol) on praktički nepropustan. U kapilarama mozga praktički nema pinocitoze. Postoje i drugi načini prodiranja spojeva kroz BBB, neizravno preko receptora, uz sudjelovanje specifičnih nosača. Pokazalo se da se specifični receptori za neke od cirkulirajućih peptida i proteina plazme eksprimiraju u endotelu kapilara mozga. Peptidni receptorski sustav BBB uključuje receptore za inzulin, transferin, lipoproteine ​​itd. Prijevoz velikih proteinskih molekula osigurava se njihovim aktivnim hvatanjem. Utvrđeno je da se prodiranje lijekova i spojeva u mozak može izvršiti aktivnim transportom uz sudjelovanje aktivnih transportnih sustava "upumpavanja" i "ispumpavanja" (slika 4.6). To omogućuje kontrolu selektivnog transporta droga kroz BBB i ograničava njihovu neselektivnu distribuciju. Otkriće "pumping" transportera - glikoproteina-P (MDR1), transportera iz obitelji proteina povezanih s višestrukom rezistencijom na lijekove (MRP), proteina rezistencije raka dojke (BCRP) dalo je značajan doprinos razumijevanju transporta lijekova kroz BBB. Pokazalo se da P-glikoprotein ograničava transport niza tvari u mozak. Nalazi se na apikalnom dijelu endotelnih stanica i vrši izlučivanje pretežno hidrofilnih kationa iz mozga u lumen krvnih žila.

Riža. 4.6. Transporteri uključeni u transport droge kroz BBB (Ho R.H., Kim R.B., 2005.)

novih lijekova, npr. citostatika, antiretrovirusnih lijekova itd. Značaj P-glikoproteina u ograničavanju transporta lijekova kroz BBB može se pokazati na primjeru loperamida koji je potencijalni opioidni lijek po svom mehanizmu djelovanja na gastrointestinalni receptore trakta. Međutim, nema učinaka na središnji živčani sustav (euforija, respiratorna depresija), budući da loperamid, kao supstrat P-glikoproteina, ne prodire u središnji živčani sustav. U prisustvu inhibitora mdrl kinidina, pojačavaju se središnji učinci loperamida. Transporteri iz obitelji MRP nalaze se ili na bazalnom ili na apikalnom dijelu endotelnih stanica. Ovi transporteri uklanjaju glukuronizirane, sulfatirane ili glutationske konjugate lijeka. U eksperimentu je utvrđeno da je protein rezistencije na više lijekova MRP2 uključen u funkcioniranje BBB i ograničava aktivnost antiepileptika.

Neki članovi obitelji prijenosnika organskih aniona (OAT3) eksprimirani su u endoteliocitima kapilara mozga, koji također igraju važnu ulogu u distribuciji niza lijekova u CNS-u. Supstrati lijekova ovih prijenosnika su, na primjer, feksofenadin, indometacin. Ekspresija izoformi polipeptida koji prenose organske anione (OATP1A2) u BBB važna je za prodiranje lijekova u mozak. Međutim, vjeruje se da je ekspresija prijenosnika "ispumpavanja" (MDR1, MRP, BCRP) razlog ograničenog farmakološkog pristupa lijekova mozgu i drugim tkivima, kada koncentracija može biti niža od one potrebne za postizanje željeni učinak. Značajan

broj mitohondrija u endotelu moždanih kapilara ukazuje na sposobnost održavanja energetski ovisnih i metaboličkih procesa dostupnih za aktivni transport lijekova kroz BBB. U endotelnim stanicama kapilara mozga pronađeni su enzimi koji su sposobni oksidirati, konjugirati spojeve kako bi zaštitili same stanice i, sukladno tome, mozak od mogućih toksičnih učinaka. Dakle, postoje najmanje dva razloga koji ograničavaju dotok lijekova u CNS. Prvo, ovo su strukturne značajke BBB-a. Drugo, BBB uključuje aktivni metabolički sustav enzima i sustav "ispumpavanja" transportera, koji čini biokemijsku barijeru za većinu ksenobiotika. Ova kombinacija fizičkih i biokemijskih svojstava BBB endotela sprječava više od 98% potencijalnih neurotropnih lijekova da uđu u mozak.

Čimbenici koji utječu na transport lijeka do mozga

Farmakodinamički učinci endogenih tvari i bolesti utječu na funkcije BBB, što dovodi do promjena u transportu lijekova do mozga. Različita patološka stanja mogu poremetiti propusnost krvno-tkivnih barijera, na primjer, s meningoencefalitisom, propusnost krvno-moždane barijere naglo se povećava, što uzrokuje razne vrste kršenja integriteta okolnih tkiva. Povećanje propusnosti BBB uočeno je kod multiple skleroze, Alzheimerove bolesti, demencije kod pacijenata zaraženih HIV-om, encefalitisa i meningitisa, visokog krvnog tlaka, mentalnih poremećaja. Značajan broj neurotransmitera, citokina, kemokina, perifernih hormona, izloženost aktivnim oblicima O 2 mogu promijeniti funkcije i propusnost BBB. Na primjer, histamin, djelujući na H2 receptore okrenute prema lumenu endotelnih stanica, povećava propusnost barijere za tvari niske molekularne težine, što je povezano s kršenjem uskih spojeva između epitelnih stanica. Propusnost histohematskih barijera može se mijenjati usmjereno, što se koristi u klinici (npr. za povećanje učinkovitosti kemoterapijskih lijekova). Smanjenje barijernih funkcija BBB-a zbog kršenja strukture uskih spojeva koristi se za isporuku lijekova u mozak, na primjer, korištenje manitola, uree. Osmotsko "otvaranje" BBB omogućuje pacijentima s primarnim limfomom

mozga i glioblastoma pojačan transport do mozga tijekom ograničenog vremenskog razdoblja citostatika (npr. metotreksat, prokarbazin). Nježnija metoda utjecaja na BBB je njegovo "biokemijsko" otvaranje, koje se temelji na sposobnosti prostaglandina, upalnih medijatora, da povećaju poroznost cerebralnih žila. Temeljito drugačija mogućnost povećanja isporuke lijeka u mozak je uporaba prolijekova. Prisutnost u mozgu specifičnih transportnih sustava za isporuku njegovih komponenti za održavanje života (aminokiseline, glukoza, amini, peptidi) omogućuje njihovu upotrebu u svrhu usmjerenog transporta hidrofilnih lijekova u mozak. Potraga za načinima prijenosa polarnih spojeva, koje karakterizira niska propusnost kroz BBB, stalno se širi. Obećavajuće u tom smislu može biti stvaranje transportnih sustava temeljenih na prirodnim kationskim proteinima - histonima. Vjeruje se da se napredak u području stvaranja novih učinkovitih lijekova može postići poboljšanjem metoda odabira obećavajućih kemijskih spojeva i optimiziranjem putova dostave peptidnih i proteinskih lijekova, kao i genetskog materijala. Istraživanja su pokazala da određene nanočestice mogu transportirati spojeve peptidne strukture (delargin), hidrofilne tvari (tubokurarin), lijekove koje iz mozga pumpa P-glikoprotein (loperamid, doksorubicin) u mozak. Jedan od obećavajućih smjerova u stvaranju lijekova koji prodiru kroz histagematske barijere je razvoj nanosfera na bazi modificiranog silicijevog dioksida, sposobnih za učinkovitu isporuku genetskog materijala ciljnim stanicama.

Prijenos lijekova kroz hematoplacentalnu barijeru

Ranija pretpostavka da placentarna barijera pruža prirodnu zaštitu fetusa od učinaka egzogenih tvari, uključujući lijekove, točna je samo u ograničenoj mjeri. Ljudska posteljica složen je transportni sustav koji djeluje kao polupropusna barijera koja odvaja majku od fetusa. Tijekom trudnoće posteljica regulira izmjenu tvari, plinova, endogenih i egzogenih molekula, uključujući i lijekove, u kompleksu fetus-majka. Brojna istraživanja pokazala su da posteljica morfološki i funkcionalno ima ulogu organa odgovornog za transport lijekova.

Ljudska posteljica sastoji se od fetalnog tkiva (korionske ploče i korionske resice) i majčinog (decidua). Decidualne pregrade dijele organ na 20-40 kotiledona, koji predstavljaju strukturne i funkcionalne vaskularne jedinice posteljice. Svaki kotiledon predstavljen je viloznim stablom koje se sastoji od endotela fetalnih kapilara, strome vilosa i trofoblastičnog sloja, ispranog majčinom krvlju, koji se nalazi u interviloznom prostoru. Vanjski sloj svakog stabla vila formiran je od višejezgrenog sinciciotrofoblasta. Polarizirani sinciciotrofoblastični sloj, koji se sastoji od mikrovilozne apikalne membrane okrenute prema majčinoj krvi, i bazalne (fetalne) membrane hemoplacentalna je barijera za transplacentalni transport većine tvari. Tijekom trudnoće dolazi do smanjenja debljine placentarne barijere, uglavnom zbog nestanka citotrofoblastičnog sloja.

Transportna funkcija posteljice određena je uglavnom placentarnom membranom (hematoplacentalna barijera), debljine oko 0,025 mm, koja odvaja krvožilni sustav majke i krvožilni sustav fetusa.

U fiziološkim i patološkim uvjetima metabolizam placente treba promatrati kao aktivnu funkciju membrane posteljice koja selektivno kontrolira prolaz ksenobiotika kroz nju. Prijenos lijekova kroz placentu može se razmotriti na temelju proučavanja istih mehanizama koji funkcioniraju kada tvari prolaze kroz druge biološke membrane.

Dobro je poznato da posteljica obavlja brojne funkcije kao što su izmjena plinova, prijenos hranjivih tvari i otpadnih tvari, proizvodnja hormona, funkcioniranje kao aktivan endokrini organ vitalan za uspješnu trudnoću. Hranjive tvari poput glukoze, aminokiselina i vitamina prolaze kroz placentu posebnim transportnim mehanizmima koji se javljaju u majčinoj apikalnoj membrani i fetalnoj bazalnoj membrani sinciciotrofoblasta. Istodobno, uklanjanje metaboličkih produkata iz krvožilnog sustava fetusa kroz placentu u krvožilni sustav majke također se odvija posebnim transportnim mehanizmima. Za neke spojeve posteljica služi kao zaštitna barijera za fetus u razvoju, sprječavajući ulazak destruktivnih

osobni ksenobiotici s majke na fetus, dok drugima olakšava njihov prijelaz i do fetusa i iz fetalnog odjeljka.

Transport lijekova u placenti

Poznato je pet mehanizama transplacentarne izmjene: pasivna difuzija, olakšana difuzija, aktivni transport, fagocitoza i pinocitoza. Posljednja dva mehanizma relativno su važna u transportu lijekova kroz placentu, a većinu lijekova karakterizira aktivni transport.

Pasivna difuzija je dominantan oblik metabolizma u placenti, koji omogućuje molekuli da se kreće niz gradijent koncentracije. Količina lijeka koji prolazi kroz posteljicu pasivnom difuzijom u bilo kojem vremenskom razdoblju ovisi o njegovoj koncentraciji u krvnoj plazmi majke, njegovim fizikalno-kemijskim svojstvima i svojstvima posteljice koja određuju koliko brzo se to događa.

Proces ove difuzije reguliran je Fickovim zakonom.

Međutim, brzina pasivne difuzije je toliko niska da se ne uspostavlja ravnotežna koncentracija u krvi majke i fetusa.

Placenta je poput dvoslojne lipidne membrane i stoga samo frakcija lijekova koja nije vezana za proteine ​​može slobodno difundirati kroz nju.

Pasivna difuzija karakteristična je za niskomolekularne, u mastima topive, pretežno neionizirane oblike lijekova. Lipofilne tvari u neioniziranom obliku lako difundiraju kroz placentu u krv fetusa (antipirin, tiopental). Brzina prijenosa kroz placentu ovisi uglavnom o koncentraciji neioniziranog oblika određenog lijeka pri danom pH krvi, topljivosti lipida i veličini molekula. Lijekovi molekulske mase > 500 Da često ne prolaze u potpunosti placentu, a lijekovi molekularne mase > 1000 Da sporije prodiru kroz posteljičnu membranu. Na primjer, različiti heparini (3000-15000 Da) ne prolaze kroz placentu zbog svoje relativno velike molekularne težine. Većina lijekova ima molekularnu težinu > 500 Da, tako da veličina molekule rijetko ograničava njihov prolaz kroz placentu.

U osnovi, lijekovi su slabe kiseline ili baze i njihova se disocijacija događa pri fiziološkoj pH vrijednosti. U ioniziranom obliku, lijekovi obično ne mogu proći kroz lipidnu membranu.

posteljica. Razlika između pH vrijednosti fetusa i majke utječe na omjer koncentracije fetusa/majke za slobodnu frakciju lijeka. U normalnim uvjetima fetalni pH praktički je isti kao pH majke. Međutim, pod određenim uvjetima, pH vrijednost fetusa može značajno pasti, što rezultira smanjenjem transporta esencijalnih lijekova iz fetusa u odjeljak majke. Primjerice, istraživanje prijenosa lidokaina kroz placentu MEGX testom pokazalo je da je koncentracija lidokaina u fetusu viša nego u majke tijekom poroda, što može uzrokovati neželjene učinke kod fetusa ili novorođenčeta.

Olakšana difuzija

Ovaj transportni mehanizam tipičan je za mali broj lijekova. Često ovaj mehanizam nadopunjuje pasivnu difuziju, na primjer u slučaju ganciklovira. Olakšana difuzija ne zahtijeva energiju, potrebna je tvar nosač. Obično je rezultat ovakvog transporta lijekova kroz placentu ista koncentracija u krvnoj plazmi majke i fetusa. Ovaj transportni mehanizam specifičan je uglavnom za endogene supstrate (npr. hormone, nukleinske kiseline).

Aktivni transport lijeka

Istraživanja molekularnih mehanizama aktivnog transporta lijeka kroz placentnu membranu pokazala su njegovu važnu ulogu u funkcioniranju hematoplacentalne barijere. Ovaj transportni mehanizam tipičan je za lijekove koji imaju strukturnu sličnost s endogenim tvarima. U ovom slučaju, proces prijenosa tvari ne ovisi samo o veličini molekule, već io prisutnosti tvari nosača (transportera).

Aktivni transport lijekova kroz placentnu membranu pomoću proteinske pumpe zahtijeva utrošak energije, obično zbog hidrolize ATP-a ili energije transmembranskog elektrokemijskog gradijenta kationa Na+, Cl+ ili H+. Svi aktivni transporteri mogu djelovati protiv koncentracijskog gradijenta, ali također mogu postati neutralni.

Aktivni prijenosnici lijekova nalaze se ili na majčinom dijelu apikalne membrane ili na fetalnom dijelu bazalne membrane, gdje prenose lijekove u sinciciotrofoblast

ili iz njega. Posteljica sadrži transportere koji olakšavaju kretanje supstrata iz posteljice u majčinu ili fetalnu cirkulaciju („pumpanje“), kao i transportere koji pomiču supstrate i u i iz posteljice, čime se olakšava transport ksenobiotika u i iz posteljice. fetalni i majčin odjeljak ("ispumpavanje"/"ispumpavanje"). Postoje transporteri koji reguliraju kretanje supstrata samo u posteljicu („pumpanje“).

Istraživanja posljednjeg desetljeća bila su posvećena proučavanju "transportera pumpanja" kao "aktivne komponente" placentarne "barijere". To je P-glikoprotein (MDR1), obitelj proteina povezanih s otpornošću na više lijekova (MRP) i proteina otpornosti na rak dojke (BCRP). Otkriće ovih prijenosnika dalo je značajan doprinos razumijevanju transplacentalne farmakokinetike.

P-glikoprotein, transmembranski glikoprotein kodiran ljudskim genom za rezistenciju na više lijekova MDR1, eksprimira se na majčinoj strani placentne membrane sinciciotrofoblasta, gdje aktivno uklanja lipofilne lijekove iz fetalnog odjeljka zahvaljujući energiji hidrolize ATP-a. Glikoprotein-P je "ispušni" transporter, koji aktivno uklanja ksenobiotike iz cirkulacije fetusa u cirkulaciju majke. P-glikoprotein ima široki supstratni spektar, prenosi lipofilne lijekove, neutralne i nabijene katione koji pripadaju različitim farmakološkim skupinama, uključujući antimikrobne (npr. rifampicin), antivirusne (npr. inhibitore HIV proteaze), antiaritmike (npr. verapamil), antineoplastike (na primjer, vinkristin).

U apikalnoj membrani sinciciotrofoblasta otkrivena je ekspresija tri tipa "pumping" transportera iz obitelji MRP (MRP1-MRP3), koji su uključeni u transport mnogih supstrata lijekova i njihovih metabolita: metatreksata, vinkristina, vinblastina, cisplatin, antivirusni lijekovi, paracetamol, ampicilin itd.

Visoka aktivnost ATP-ovisnog proteina rezistencije raka dojke (BCRP) pronađena je u placenti. BCRP može aktivirati otpornost tumorskih stanica na lijekove protiv raka – topotekan, doksorubicin itd. Dokazano je da

placentarni BCRP ograničava transport topotekana i mitoksantrona do fetusa u gravidnih miševa.

Transporteri organskih kationa

Transporter dvaju organskih kationa (OCT2) eksprimira se u bazalnoj membrani sinciciotrofoblasta i prenosi karnitin preko placente iz cirkulacije majke u cirkulaciju fetusa. Supstrati lijeka za placentarni OCT2 su metamfetamin, kinidin, verapamil i pirilamin, koji se natječu s karnitinom, ograničavajući njegov prolaz kroz placentu.

Monokarboksilatni i dikarboksilatni transporteri

Monokarboksilati (laktat) i dikarboksilati (sukcinat) aktivno se transportiraju u placenti. Monokarboksilatni transporteri (MCT) i dikarboksilatni transporteri (NaDC3) eksprimirani su u apikalnoj membrani placente, iako MCT mogu biti prisutni i u bazalnoj membrani. Ove transportere pokreće elektrokemijski gradijent; MCT su povezani s kretanjem H + kationa, a NaDC3 - s Na + . Međutim, malo je informacija o potencijalnom učinku ovih prijenosnika na kretanje lijekova kroz placentu. Stoga se valproična kiselina, unatoč očitom riziku od toksičnih učinaka na fetus, uključujući teratogenost, često koristi za liječenje epilepsije tijekom trudnoće. Pri fiziološkom pH, valproinska kiselina lako prolazi placentu i omjer koncentracije fetus/majka je 1,71. Istraživanja niza autora pokazala su da postoji aktivan transportni sustav za valproičnu kiselinu. Ovaj transportni sustav uključuje MCT vezane na H + katione, koji uzrokuju visoku brzinu kretanja valproične kiseline do fetusa kroz placentarnu barijeru. Iako se valproična kiselina natječe s laktatom, pokazalo se da je ona također supstrat za druge transportere.

Tako za neke spojeve posteljica služi kao zaštitna barijera za fetus u razvoju, sprječavajući ulazak raznih ksenobiotika s majke na fetus, dok za druge olakšava njihov prolaz i do fetusa i iz fetalnog odjeljka, općenito funkcionirajući kao ksenobiotički sustav detoksikacije. Vodeću ulogu u procesu aktivnog trans-

Port lijeka kroz placentu provode placentni transporteri sa specifičnošću za supstrat.

Trenutno je sasvim očito da je razumijevanje i poznavanje uloge različitih prijenosnika u kretanju lijekova kroz hematoplacentalnu barijeru neophodno za procjenu vjerojatnih učinaka lijekova na fetus, kao i za procjenu omjera koristi i rizika za majke i fetusa tijekom farmakoterapije tijekom trudnoće.

Prijenos lijeka kroz krvno-oftalmološku barijeru

Hematooftalmička barijera (HOB) obavlja funkciju barijere u odnosu na prozirne medije oka, regulira sastav intraokularne tekućine, osiguravajući selektivnu opskrbu leće i rožnice esencijalnim hranjivim tvarima. Kliničke studije omogućile su razjašnjenje i proširenje pojma hematooftalmičke barijere, uključujući histagematski sustav, kao i govorenje o postojanju tri njezine komponente u normalnim i patološkim stanjima: iridocilijarna, korioretinalna i papilarna (tablica 4.1. ).

Tablica 4.1. Hematooftalmološka barijera

Krvne kapilare u oku ne dolaze izravno u kontakt sa stanicama i tkivima. Cjelokupna složena izmjena između kapilara i stanica odvija se kroz intersticijsku tekućinu na ultrastrukturnoj razini i karakterizirana je mehanizmima kapilarne, stanične i membranske propusnosti.

Prijenos lijeka kroz krvno-testikularnu barijeru

Normalna funkcija spermatogenih stanica moguća je samo zahvaljujući prisutnosti posebne, selektivno propusne hematotestikularne barijere (HTB) između krvi i sadržaja sjemenih tubula. GTP čine endotelne stanice kapilara, bazalna membrana, pravi sjemeni tubul, citoplazma Sertolijevih stanica, intersticijsko tkivo i tunica albuginea. Lipofilni lijekovi prodiru kroz GTB difuzijom. Nedavne studije pokazale su da se prodiranje lijekova i spojeva u testise može provesti aktivnim transportom uz sudjelovanje glikoproteina-P (MDR1), prijenosnika obitelji proteina povezanih s višestrukom rezistencijom na lijekove (MRP1, MRP2), dojke protein otpornosti na rak BCRP (ABCG2), koji ima ulogu efluksa u testisima za brojne lijekove, uključujući one toksične (na primjer, ciklosporin).

Prodor lijekova kroz hematofolikularnu barijeru jajnika

Glavni strukturni elementi ovarijalne hematofolikularne barijere (HFB) su teka stanice sazrijevajućeg folikula, folikularni epitel i njegova bazalna membrana, koji određuju njegovu propusnost i selektivna svojstva u odnosu na hidrofilne spojeve. Trenutno je dokazana uloga P-glikoproteina (MDR1) kao aktivne komponente HFB, koja ima zaštitnu ulogu, sprječavajući prodor ksenobiotika u jajnike.

Književnost

Alyautdin R.N. Molekularni mehanizmi ciljanog transporta lijeka u mozak // RMJ. - 2001. - ? 2. - S. 3-7.

Bradbury M. Koncept krvno-moždane barijere: Per. s engleskog. - M., 1983.

Goryukhina O.A. Perspektive uporabe kationskih proteina za transport lijekova u moždano tkivo. Biokemijske i molekularno biološke osnove fizioloških funkcija: sat. Umjetnost. - St. Petersburg, 2004. - S. 168-175.

Kukes V.G. Metabolizam lijekova: klinički i farmakološki aspekti. - M., 2004.

Morozov V.I., Yakovlev A.A. Hematooftalmička barijera (klinička i funkcionalna opažanja) // Oftalmokirurgija. -

2002. - ? 2. - S. 45-49.

Stern L. Fiziologija i patologija histohematskih barijera. -

Allen J.D., Brinkhuis R.F., Wijnholds J. et al. Mišji gen Bcrp1/Mxr/Abcp: pojačanje i prekomjerna ekspresija u staničnoj liniji odabranoj za otpornost na topotekan, mitoksantron ili doksorubicin // Cancer Res. - 1999. - Vol. 59.-

Allikmets R, Schriml L.M., Hutchinson A. et al. Ljudski placentno-specifični ATP-vezujući kazetni gen (ABCP) na kromosomu 4q22 koji je uključen u otpornost na više lijekova // Cancer Res. - 1998. - Vol. 58. - P. 5337-53379.

Balkovetz D.F., Leibach F.H., Mahesh V.B. et al. Protonski gradijent je pokretačka sila za transport laktata uzbrdo u vezikulama četkaste membrane ljudske posteljice // J. Biol. Chem. - 1988. - Vol. 263.-

Crni K.L. Biokemijsko otvaranje krvno-moždane barijere // Adv. dostava lijeka vlč. - 1995. - Vol. 15. - Str. 37-52.

Blamire A.M., Anthony D.C., Rajagopalan B. et al. Interleukinom-1beta-inducirane promjene u propusnosti krvno-moždane barijere, prividnom koeficijentu difuzije i cerebralnom volumenu krvi u mozgu štakora: studija magnetske rezonancije // J. Neurosci. - 2000. - Vol. dvadeset. - ? 21. - P. 8153-8159.

Borst P., Evers R., Kool M. et al. Obitelj proteina otpornosti na više lijekova //

biohim. Biophys. acta. - 1999. - Vol. 1461. -? 2. - Str. 347-357.

Cavalli R. de, Lanchote V. L., Duarte G. et al. Farmakokinetika i transplacentalni prijenos lidokaina i njegovog metabolita za perinealnu analgetsku pomoć trudnicama // Eur. J.Clin. Pharmacol. - 2004. - Vol. - 60. -? osam. -

Collier A.C., Tingle M.D., Keelan J.A. et al. Visoko osjetljiva metoda fluorescentne mikroploče za određivanje aktivnosti UDP-glukuronozil transferaze u tkivima i staničnim linijama placente // Drug Metab. Dispos. - 2000. -

Vol. 28. - P. 1184-1186.

de Boer A.G., Gaillard P.J. Krvno-moždana barijera i transport lijeka do mozga // STP Pharmasci. - 2002. - Vol. 12. - ? 4. - Str. 229-234.

Evseenko D., Paxton J W.W., Keelan J.A. Aktivni transport kroz ljudsku placentu: utjecaj na učinkovitost i toksičnost lijeka // Exp. Opin. Metab. Toxicol. - 2006. - Vol. 2. -? 1. - Str. 51-69.

Forestier F, Daffos F, Capella-Pavlovsky M. Heparin niske molekularne težine (PK 10169) ne prolazi placentu tijekom drugog tromjesečja trudnoće ispitivanje izravnim uzorkovanjem fetalne krvi pod ultrazvukom // Thromb.

Res. - 1984. - Vol. 34. - Str. 557-560.

Forestier F., Daffos F., Rainaut M. et al. Heparin niske molekulske mase (CY 216) ne prolazi kroz placentu tijekom trećeg tromjesečja trudnoće // Thromb. hemost. - 1987. - Vol. 57. - Str. 234.

Fromm M.F. Važnost P-glikoproteina na krvno-tkivnim barijerama //

Ganapathy V., Ganapathy M.E., Tiruppathi C. et al. Uzlazni transport sukcinata potaknut natrijem, visokog afiniteta u četkastim membranskim vezikulama posteljice // Biochem. J. - 1988. - Vol. 249. - 179-184

Ganapathy V., Prasad P.D., Ganapathy M.E. et al. Placentalni transporteri relevantni za distribuciju lijeka kroz sučelje majka-fetus // J. Pharmacol.

Exp. Ther. - 2000. - Vol. 294. - Str. 413-420.

Garland M. Farmakologija prijenosa lijeka kroz placentu // Obstet. Gynecol. Clin. North Am. - 1998. - Vol. 25. - Str. 21-42.

Goodwin J.T., Clark D.E. In silico predviđanja prolaska krvno-moždane barijere: razmatranja koja treba "imati na umu" // J. Pharmacol. Exp.Ther. - 2005. - Vol. 315. - Str. 477-483.

Gordon-Cardo C., O'Brien J.P., Casals D. et al. Gen rezistencije na više lijekova (P-glikoprotein) eksprimiraju endotelne stanice na mjestima krvno-moždane barijere // Proc. Natl Acad. sci. - 1989. - Vol. 86. - 695-698.

Graff C.L., Pollack G.M. Prijenos lijeka kroz krvno-moždanu barijeru i

horoidni pleksus // Curr. lijek metab. - 2004. - Vol. 5. - Str. 95-108.

Hahn T., Desoye G. Ontogenija transportnih sustava glukoze u placenti i njezinim progenitorskim tkivima // Rana trudnoća. - 1996. - Vol. 2.-

Heidrun P., Maren F., Wolfgang L. Protein otpornosti na više lijekova MRP2 doprinosi funkciji krvno-moždane barijere i ograničava antiepileptik

aktivnost lijeka // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 2003. - Vol. 306. -? 1. - Str. 124-131.

Henderson G.I., Hu Z.Q., Yang Y. et al. Prijenos ganciklovira putem ljudske placente i njegovi učinci na fetalne stanice štakora // Am. J. Med. sci. - 1993. -

Vol. 306. - 151-156.

Hill M.D., Abramson F.P. Značaj vezanja proteina plazme na fetalnu/materinsku distribuciju lijekova u stanju dinamičke ravnoteže // Clin. Pharmacokinet. -

1988. - Vol. 14. - Str. 156-170.

Ho R.H., Kim R.B. Transporteri i terapija lijekovima: implikacije na dispoziciju lijekova i bolest // Clin. Pharmacol. Ther. - 2005. - Vol. 78.-

Jonker J.W., Smit J.W., Brinkhuis R.F. et al. Uloga proteina rezistencije raka dojke u bioraspoloživosti i fetalnoj penetraciji topotekana // J. Natl

Inst. raka - 2000. - Vol. 92. - P. 1651-1656.

Konig J., Nies A.T., Cui Y. et al. Konjugirane izvozne pumpe obitelji proteina otpornosti na više lijekova (MRP): lokalizacija, specifičnost supstrata i otpornost na lijekove posredovana MRP2 // Biochim. Biophys. acta. - 1999. -

Vol. 1461. - Str. 377-394.

Lagrange P., Romero I.A., Minn A. et al. Promjene transendotelne propusnosti izazvane slobodnim radikalima u an in vitro model krvno-moždane barijere// Free Radic. Biol. Med. - 1999. - Vol. 27,? 5-6. -

Lee G., Dallas S., Hong M. i sur. Transporteri lijekova u središnjem živčanom sustavu: razmatranja moždanih barijera i moždanog parenhima // Pharmacol. vlč. - 2001. - Vol. 53. -? 4. - Str. 569-596.

Lehr C.-M. Prijenos lijekova na biološkim barijerama: Mehanizmi, modeli i metode unapređivanja isporuke lijekova // Pharm. Res. - 2003. - Vol. 54.-

Leslie E.M., Deeley R.G., Cole S.P. Proteini otpornosti na više lijekova: uloga P-glikoproteina, MRP1, MRP2 i BCRP (ABCG2) u obrani tkiva // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2005., 1. svibnja. - God. 204.-? 3.-

Malone F.D., D "Alton M.E. Lijekovi u trudnoći: antikonvulzivi // Semin. Perinatol. - 1997. - Vol. 21. - Str. 114-123.

Mattila K.M., Pirtila T., Blennow K. i sur. Promijenjena funkcija krvno-moždane barijere u Alzheimerovoj bolesti? // Acta Neurol. Scand. - 1994. -

Vol. 89. - Str. 192-198.

Muller N. Psihoneuroimunologija: implikacije za medikamentozno liječenje psihijatrijskih poremećaja // CNS Drugs. - 1995. - Vol. četiri. - ? 2. - Str. 125-140.

Nakamura H, Usigome F, Koyabu N. et al. Transport valproinske kiseline ovisan o protonskom gradijentu u vezikulama četkaste membrane ljudske placente //

Pharm. Res. - 2002. - Vol. 19. - Str. 154-161.

Nau H. Fizikalno-kemijska i strukturna svojstva koja reguliraju placentarni prijenos lijeka // Fetal placental drug transfer / Eds R.A. Polin, W.W. Fox // Fetalna i neonatalna fiziologija / Eds R.A. Polin, W.W. lisica. - Philadelphia: W.B. Saunders, 1992. - P. 130-141.

Pacifici G.M., Nottoli R. Placentalni prijenos lijekova primijenjenih na

majka // Clin. Pharmacokinet. - 1995. - Vol. 28.-? 3. - Str. 235-269.

Pardridge W.M. Isporuka krvno-moždane barijere // Drug Discov. danas. - siječanj 2007. - Vol. 12. - ? 1-2. - Str. 54-61.

Pardridge W.M., Log B.B. PS proizvodi i in silico modeli mozga lijeka

penetracija // Drug Discov. danas. - 2004. - Vol. 9. - Str. 392-393.

Pienimaki P., Lampela E., Hakkola J. et al. Farmakokinetika okskarbazepina i karbamazepina u ljudskoj placenti // Epilepsija. - 1997. -

Vol. 38. - Str. 309-316.

Sadeque A.J., Wandel C., He H. et al. Povećana isporuka lijeka u mozak inhibicijom P-glikoproteina // Clin. Pharmacol. Ther. - 2000. - Vol. 68.-

Schinkel A.H., Borst P. Otpornost na više lijekova posredovana P-glikoproteinima // Semin. Rak biol. - 1991. - Vol. 2. - Str. 213-226.

Schinkel A.H., Wagenaar E., Mol C.A. et al. P-glikoprotein u krvno-moždanoj barijeri miševa utječe na prodiranje u mozak i farmakološku aktivnost mnogih kopita // J. Clin. Ulagati. - 1996. - Vol. 97. - P. 2517-2524.

Sjeme A.E. Prijenos placente // Intrauterini razvoj / Ed. A.C. Barnes. - Philadelphia: Lea i Febiger, 1968. - P. 103-128.

Smith C.H., Moe A.J., Ganapathy V. Putevi transporta hranjivih tvari kroz epitel posteljice // Annu. vlč. Nutr. - 1992. - Vol. 12. -

Syme M.R., Paxton J.W., Keelan J.A. Prijenos i metabolizam lijekova ljudskom placentom // Clin. Pharmacokinet. - 2004. - Vol. 43.-? 8. - 487-514.

Tamai I., Tsuji A. Prolaženje lijekova preko transportera

krvno-moždana barijera // J. Pharm. sci. - 2000. - Vol. 89.-? 11. - Str. 1371-1388.

Takeda M., Khamdang S., Narikawa S. et al. Karakterizacija transporta metotreksata i njegove interakcije lijekova s ​​ljudskim transporterima organskih aniona //

J Pharmacol. Exp. Ther. - 2002. - Vol. 302.-P. 666-671.

Thiebaut F., Tsuruo T., Yamada H. et al. Stanična lokalizacija produkta gena otpornosti na više lijekova u normalnim ljudskim tkivima // Proc. Natl Acad. sci. USA- 1987. - Vol. 84. - P. 7735-7738.

Thuerauf N., Fromm M.F. Uloga transportera P-glikoproteina za dispoziciju i učinke lijekova sa središnjim djelovanjem i za patogenezu bolesti SŽS-a // Eur. Arh. Klinika za psihijatriju. neurosci. - 2006, kolovoz. -

Vol. 256.-? 5. - Str. 281-286.

Tsao N., Hsu H.P., Wu C.M. et al. Faktor nekroze tumora-alfa uzrokuje povećanje propusnosti krvno-moždane barijere tijekom sepse // J. Med. mikrobiol. - 2001. - Vol. pedeset. - ? 9. - Str. 812-821.

Tsuji A. Krvno-moždana barijera i dostava lijeka u CNS // -

Tunkela A., Scheld W.M. Patogeneza i patofiziologija bakterijskog meningitisa // Ann. vlč. Med. - 1993. - Vol. 44. - Str. 103-120.

Ushigome F., Takanaga H., Matsuo H. et al. Mehanizam preuzimanja valproične kiseline u staničnoj liniji humanog koriokarcinoma placente (BeWo) // Eur. J.

Pharmacol. - 2001. - Vol. 417. - Str. 169-176.

Utoguchi N., Audus K.L. Transport valproične kiseline posredovan nosačem u BeWo stanicama, stanična linija ljudskog trofoblasta // Int. J Pharm. - 2000. - Vol. 195. - Str. 115-124.

Ward R.M. Terapija fetusa lijekovima // J. Clin. Pharmacol. - 1993. -

Vol. 33. - Str. 780-789.

Williams K.S., Hickey W.F. Imunologija multiple skleroze // Clin. neurosci. - 1994. - Vol. 2. - Str. 229-245.

Wu X., Huang W., Prasad P.D. Funkcionalne karakteristike i obrazac distribucije organskog kationa 2 (OCT2), transportera organskog kationa/karnitina // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1999. - Vol. 290.-

Zhang Y., Han H., Elmquist W.F. Ekspresija različitih homologa proteina povezanih s otpornošću na više lijekova (MRP) u endotelu mikrožila mozga