Zvjezdaste stanice jetre razvijaju se iz. Temeljna istraživanja. O liječenju patologije organa

Međustanična komunikacija može se ostvariti parakrinom sekrecijom i izravnim međustaničnim kontaktima. Poznato je da jetrene perisinusoidne stanice (HPC) uspostavljaju nišu regionalnih matičnih stanica i određuju njihovu diferencijaciju. U isto vrijeme HPC ostaje slabo karakteriziran na molekularnoj i staničnoj razini.

Cilj projekta bio je proučiti interakcije između perisinusoidnih stanica jetre štakora i različitih matičnih stanica kao što su frakcija mononuklearnih stanica krvi iz pupkovine čovjeka (UCB-MC) i multipotencijalne mezenhimalne stromalne stanice izvedene iz koštane srži štakora (BM-MMSC).

Materijali i metode. Štakorski BM-MSC i HPC, ljudske UCB-MC stanice izvedene su standardnim tehnikama. Za proučavanje parakrine regulacije HPC-a ko-kultivirali smo UCB-MC ili BM-MMSC stanice s HPC-om koristeći Boydenove komore i kondicionirani HPC stanični medij. Diferencijalno obilježene stanice su kultivirane, a njihove interakcije promatrane su fazno-kontrastnom fluorescentnom mikroskopijom i imunocitokemijom.

rezultate. Tijekom prvog tjedna uzgoja došlo je do autofluorescencije vitamina A zbog sposobnosti PHC-a da skladišti masti. BM-MMSC pokazao je visoku održivost u svim modelima kokulture. Nakon 2 dana inkubacije u kondicioniranoj podlozi kokulture BM-MMSC s HPC-om primijetili smo promjene u morfologiji MMSC-a - smanjile su se u veličini, a klice su im postale kraće. Ekspresija α-aktina glatkih mišića i desmina bila je slična miofibroblastu - intermedijarnom obliku kulture Ito stanica in vitro. Ove promjene mogu biti posljedica parakrine stimulacije pomoću HPC-a. Najdublji učinak HPC-a na UCB-MC stanice primijećen je u kontaktnoj kokulturi, stoga je važno da UCB-MC stanice stvore izravne kontakte između stanica kako bi održale svoju održivost. Nismo uočili nikakvu fuziju stanica između HPC/UCB i HPC/BM-MMSC stanica u kokulturama. U našim daljnjim eksperimentima planiramo proučavati faktore rasta proizvedene HPC-om za jetrenu diferencijaciju matičnih stanica.

Uvod.

Od posebnog interesa među različitim jetrenim stanicama su perisinusoidne jetrene stanice (Ito stanice). Zbog izlučivanja čimbenika rasta i komponenti izvanstaničnog matriksa stvaraju mikrookruženje hepatocita, a niz znanstvenih istraživanja pokazalo je sposobnost zvjezdastih stanica jetre da tvore mikrookruženje za progenitorske stanice (uključujući i hematopoetske) i utječu na njihovu diferencijaciju u hepatocita. Međustanične interakcije ovih staničnih populacija mogu se odvijati parakrinom sekrecijom faktora rasta ili izravnim međustaničnim kontaktima, međutim, molekularna i stanična osnova ovih procesa ostaje neistražena.

Svrha studije.

Proučavanje mehanizama interakcije Ito stanice s hematopoetskim (HSC) i mezenhimalnim (MMSC) matičnim stanicama u in vitro uvjetima.

Materijali i metode.

Ito stanice štakorske jetre izolirane su dvjema različitim enzimskim metodama. U isto vrijeme, stromalni MMSC su dobiveni iz koštane srži štakora. Mononuklearna frakcija hematopoetskih matičnih stanica izolirana iz krvi ljudske pupkovine. Parakrini učinci Ito stanica proučavani su uzgojem MMSC i HSC u mediju u kojem su rasle Ito stanice, te zajedničkim uzgojem stanica odvojenih polupropusnom membranom. Utjecaj međustaničnih kontakata proučavan je u kokultivaciji stanica. Za bolju vizualizaciju, svaka populacija je označena pojedinačnom fluorescentnom oznakom. Morfologija stanica procijenjena je fazno-kontrastnom i fluorescentnom mikroskopijom. Fenotipske značajke uzgojenih stanica proučavane su imunocitokemijskom analizom.

Rezultati.

Unutar tjedan dana nakon izolacije perisinusoidnih stanica, primijetili smo njihovu sposobnost autofluorescencije zbog njihove sposobnosti nakupljanja masti. Zatim su stanice prešle u međufazu svog rasta i dobile zvjezdasti oblik. U početnim fazama zajedničkog uzgoja Ito stanica s MMSC-ima koštane srži štakora, održivost MMSC-a je održana u svim varijantama uzgoja. Drugi dan, tijekom uzgoja MMSC-a u mediju kulture Ito stanica, došlo je do promjene morfologije MMSC-a - smanjile su se u veličini, a procesi su se skratili. Ekspresija alfa-glatkog mišićnog aktina i desmina u MMSC-u se povećala, što ukazuje na njihovu fenotipsku sličnost s miofibroblastima, međufazom rasta aktiviranih Ito stanica in vitro. Naši podaci ukazuju na učinak parakrinih čimbenika koje luče Ito stanice na svojstva MMSC-a u kulturi.

Na temelju kokultivacije hematopoetskih matičnih stanica s Ito stanicama, pokazalo se da hematopoetske matične stanice ostaju održive samo pri kontaktnoj kokultivaciji s Ito stanicama. Prema fluorescentnoj analizi mješovitih kultura, fenomen fuzije stanica iz različitih populacija nije otkriven.

Zaključci. Za održavanje vitalnosti hematopoetskih matičnih stanica, prisutnost izravnih međustaničnih kontakata s Ito stanicama je odlučujući čimbenik. Parakrina regulacija primijećena je samo kada su MMSC kultivirani u hranjivom mediju u kojem su rasle Ito stanice. Studija utjecaja specifičnih čimbenika koje proizvode Ito stanice na diferencijaciju HSC i MMSC u staničnoj kulturi planira se provesti u budućim studijama.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
SEI HPE "Kazan Državno medicinsko sveučilište Savezne agencije za zdravstveni i socijalni razvoj"

Provedena je ultrastrukturna, imunohistokemijska i morfometrijska analiza populacije zvjezdastih stanica jetre u dinamici razvoja fibroze i ciroze infektivno virusnog podrijetla. Otkrivena je fibrogena aktivacija zvjezdastih stanica jetre, koju karakterizira smanjenje lipidnih kapljica i sinkrona ekspresija karakteristika sličnih fibroblastima - pozitivna imunohistokemijska reakcija na α-aktin glatkih mišića, hiperplazija granularnog citoplazmatskog retikuluma i pericelularno stvaranje brojnih kolagenih fibrila. Pokazalo se da, unatoč progresivnom smanjenju gustoće broja zvjezdastih stanica koje sadrže lipide tijekom razvoja fibroze, ostaje potreba za održavanjem funkcije taloženja retinoida - kod ciroze jetre zvjezdaste stanice koje sadrže lipide pronađene su u fibrozne pregrade i unutar lobula. Zaključeno je da su zvjezdaste stanice jetre polimorfna heterogena populacija širokog spektra funkcionalnog djelovanja.

fibrogeneza

zvjezdaste stanice jetre

ultrastruktura

imunohistokemija

1. Balabaud C., Bioulac-Sage P., Desmouliere A. Uloga jetrenih zvjezdastih stanica u regeneraciji jetre // J. Hepatol. - 2004. - Vol. 40. – Str. 1023–1026.

2. Brandao D.F., Ramalho L.N.Z., Ramalho F.S. Ciroza jetre i jetrene zvjezdaste stanice // Acta Cirúrgica Brasileira. - 2006. - Vol. 21. – Str. 54–57.

3. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. Klasifikacija kroničnog hepatitisa: dijagnoza, stupnjevanje i stadije // Hepatologija. - 1994. - Vol. 19. - Str. 1523-1520.

4. Gabele E., Brenner D.A., Rippe R.A. Fibroza jetre: Signali koji dovode do pojačanja fibrogenih jetrenih zvjezdastih stanica // Front. Biosc. - 2003. - Vol. 8. – Str. 69–77.

5. Geerts A. O podrijetlu zvjezdastih stanica: mezodermalne, endodermalne ili neuro-ektodermalne? // J. Hepatol. - 2004. - Vol. 40. – Str. 331–334.

6. Gutierrez-Ruiz M.C., Gomez-Quiroz L.E. Fibroza jetre: traženje odgovora na staničnom modelu // Liver Intern. - 2007. - Vol. 10. – Str. 434–439.

7. Kisseljeva T., Brenner D.A. Uloga jetrenih zvjezdastih stanica u fibrogenezi i preokretu fibroze // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2007. - Vol. 22.–P. S73–S78.

8. Ryder S.D. Progresija jetrene fibroze u bolesnika s hepatitisom C: prospektivna ponovljena studija biopsije jetre // Gut. - 2004. - Vol. 53. – P. 451–455.

9. Schuppan D., Afdhal N.H. Ciroza jetre // Lancet. - 2008. - Vol. 371. - Str. 838-851.

10. Senoo H. Struktura i funkcija jetrenih zvjezdastih stanica // Med. elektron. mikrosc. - 2004. - Vol. 37. – Str. 3–15.

Zvjezdaste stanice jetre (lipociti, Ito stanice, jetrene stanice koje nakupljaju mast) lokalizirane su u Disseovim prostorima između hepatocita i endotelne obloge sinusoida i imaju vodeću ulogu u regulaciji retinoidne homeostaze, taložeći do 80% vitamina A . Disseov prostor je područje najveće funkcionalne odgovornosti, osiguravajući transsinusoidnu razmjenu. Koristeći eksperimentalne modele iu staničnoj kulturi, dokazano je da se jetrene zvjezdaste stanice diferenciraju u velike citoplazmatske lipidne kapljice koje sadrže vitamin A; ovaj fenotip se tumači kao "mirovanje".

Sve veća važnost pridaje se ulozi zvjezdastih stanica u razvoju fibroze i ciroze jetre. Nakon primanja fibrogenih podražaja, "mirujuće" zvjezdaste stanice se "transdiferenciraju", poprimajući fenotip sličan miofibroblastima, te počinju proizvoditi kolagen, proteoglikane i druge komponente izvanstaničnog matriksa. Fibroza na razini središnjih vena, sinusoida ili portalnih žila ograničava normalnu hemodinamiku jetre, što dovodi do smanjenja metabolički učinkovitog parenhima, nadalje - portalne hipertenzije i porto-sistemskog ranžiranja. Nakupljanje vezivnog tkiva u Disseovim prostorima remeti normalan metabolički promet između krvi i hepatocita ometajući čišćenje cirkulirajućih makromolekula, mijenjajući međustanične interakcije i dovodeći do disfunkcije jetrenih stanica.

Postoje oprečna mišljenja o tome mogu li se aktivirane zvjezdaste stanice vratiti u fenotip mirovanja. Dobiveni su dokazi da fibrogene zvjezdaste stanice jetre mogu djelomično izravnati proces aktivacije, na primjer, kada su izložene retinoidima ili kada su u interakciji s komponentama izvanstaničnog matriksa, uključujući fibrilarni kolagen tipa I ili komponente bazalne membrane. Rješenje ovog problema u osnovi je problema reverzibilnosti fibroze i razvoja terapijskih pristupa liječenju ciroze jetre.

Svrha studije- provesti sveobuhvatno istraživanje strukturnih i funkcionalnih značajki zvjezdastih stanica jetre u dinamici fibroznih promjena u modelu kronične HCV infekcije.

Materijal i metode istraživanja

Provedeno je sveobuhvatno svjetlo-optičko, elektronsko-mikroskopsko i morfometrijsko istraživanje bioptata jetre kod kronične HCV infekcije u različitim stadijima fibroznih promjena (100 uzoraka podijeljenih u 4 jednake skupine prema težini fibroze). Važno je napomenuti da se zvjezdaste stanice koje sadrže lipide najbolje vizualiziraju na polutankim rezovima, fibrogene zvjezdaste stanice - samo na ultratankim rezovima ili pomoću imunohistokemijskog snimanja.

Uzorci jetre fiksirani su u 4% otopini paraformaldehida ohlađenoj na 4°C, pripremljenoj u Millonigovom fosfatnom puferu (pH 7,2-7,4); parafinski rezovi su obojeni hematoksilinom i eozinom u kombinaciji s Perlsovom reakcijom po van Giesonu uz dodatno bojanje elastičnih vlakana Weigertovim resorcinol fuksinom te je učinjena PAS reakcija. Polutanki rezovi su obojeni Schiffovim reagensom i azurom II. Istraživanje je provedeno na univerzalnom mikroskopu Leica DM 4000B (Njemačka). Mikrografije su snimljene digitalnom kamerom Leica DFC 320 i softverom Leica QWin. Ultratanki rezovi obojeni uranil acetatom i olovnim citratom ispitivani su u elektronskom mikroskopu JEM 1010 pri naponu ubrzanja od 80 kW.

Stadij fibroze jetre određen je na ljestvici od 4 stupnja, u rasponu od portalne fibroze (stadij I) do ciroze sa stvaranjem porto-centralnih vaskulariziranih septi i nodularnom transformacijom parenhima. Zvjezdaste stanice jetre i drugi stanični elementi koji proizvode matriks otkriveni su u dinamici fibroze ekspresijom α-aktina glatkih mišića.

Ekspresija α-aktina glatkih mišića u jetrenim stanicama koje proizvode matriks testirana je metodom neizravne imunoperoksidaze u dva koraka s negativnim kontrolnim sustavom snimanja streptavidin-biotin za produkte reakcije. Primarna korištena protutijela bila su mišja monoklonska protutijela na α-aktin glatkih mišića (NovoCastra Lab. Ltd, UK) razrijeđena 1:25; kao sekundarna antitijela – univerzalna biotinilirana antitijela. Produkti imunohistokemijske reakcije vizualizirani su pomoću diaminobenzidina, zatim su rezovi obojeni Mayerovim hematoksilinom. Brojna gustoća zvjezdastih stanica koje sadrže lipide procijenjena je na polutankim rezovima u jedinici vidnog polja od 38 000 µm2. Za statističku obradu podataka korišten je Studentov t-test; razlike u uspoređivanim parametrima smatrane su značajnima ako je vjerojatnost pogreške P manja od 0,05.

Rezultati istraživanja i rasprava

Uz minimalne fibrozne promjene u jetri bolesnika s kroničnim hepatitisom C, u pravilu se nalazi prilično velik broj zvjezdastih stanica koje su jasno vidljive samo na polutankim i ultratankim rezovima i diferencirane su u Disseovim prostorima. prisustvom velikih kapljica lipida u citoplazmi. Transformacija zvjezdastih stanica iz "mirujućih", koje sadrže retinoide, u fibrogene stanice praćena je postupnim smanjenjem broja lipidnih kapljica. S tim u vezi, stvarni broj zvjezdastih stanica može se odrediti opsežnim elektronsko-mikroskopskim i imunohistokemijskim istraživanjem.

U početnim stadijima fibroze (0, I) kod kroničnog hepatitisa C, pri proučavanju polutankih rezova, populacija zvjezdastih stanica jetre razlikovala se izraženim polimorfizmom - veličina, oblik, broj kapljica lipida i njihova tinktorijalna svojstva oštro su varirala. : razlike u osmiofilnosti materijala koji sadrži lipide u različitim stanicama. Gustoća broja zvjezdastih stanica jetre, vizualizirana u preparatima prisutnošću citoplazmatskih kapljica lipida, bila je 5,01 ± 0,18 po jedinici vidnog polja.

Značajke ultrastrukture zvjezdanih stanica povezane su s heterogenošću elektronske gustoće kapljica lipida ne samo unutar iste stanice, već i između različitih lipocita: osmiofilniji rubni rub isticao se na pozadini elektron-prozirnog lipidnog supstrata; osim toga, jezgre su izrazito polimorfne, a duljina citoplazmatskih procesa je varirala. Među ultrastrukturnim značajkama zvjezdanih stanica koje sadrže lipide, uz prisutnost lipidnih kapljica, može se primijetiti vrlo mala količina citoplazmatskog matriksa, siromašnog membranskim organelama, uključujući mitohondrije, pa se stoga, očito, ovaj fenotip lipocita naziva " mirovanje" ili "pasivno" .

U stadijima fibroze II i III, ultrastruktura većine zvjezdastih stanica stekla je takozvani mješoviti ili prijelazni fenotip - istodobna prisutnost morfoloških značajki i stanica koje sadrže lipide i stanica sličnih fibroblastima. U takvim lipocitima jezgre su imale duboke invaginacije nukleoleme, veći nukleolus i povećani volumen citoplazme koja je zadržavala kapljice lipida. Istodobno se naglo povećao broj mitohondrija, slobodnih ribosoma, polisoma i tubula granularnog citoplazmatskog retikuluma. U pravilu je došlo do membranskog kontakta lipidnih kapljica i mitohondrija, što ukazuje na "iskorištenje" lipida. U mnogim stanicama razgradnja lipidnih kapljica odvija se stvaranjem autofagosoma, koji se zatim eliminiraju egzocitozom. U nekim slučajevima zabilježena je proliferacija zvjezdastih stanica mješovitog fenotipa.

Zvjezdaste stanice koje proizvode matriks, najbrojnije u fazi ciroze jetre, karakterizirane su potpunim odsustvom lipidnih granula, oblikom sličnim fibroblastima, razvijenim odjelom za sintezu proteina i stvaranjem kontraktilnih fibrilarnih struktura u citoplazmi; pericelularno u Disseovim prostorima lokalizirani su brojni snopići kolagenih fibrila specifične poprečne ispruganosti.

Općenito, tijekom progresije kroničnog hepatitisa C, praćenog intralobularnom perisinusoidnom fibrogenezom, došlo je do morfoloških znakova aktivacije zvjezdastih stanica jetre, njihove transformacije iz takozvanih "pasivnih", akumulirajućih vitamina A, u fibrogene i proliferirajuće stanice.

U fazi transformacije u cirozu jetre došlo je do značajnog smanjenja numeričke gustoće zvjezdastih stanica koje sadrže lipide, što ukazuje na njihovu fibrogenu transformaciju. Međutim, u slučaju formirane ciroze jetre, u izoliranim slučajevima, postojala su područja jetrenog parenhima s perisinusoidnim zvjezdastim stanicama koje sadrže lipide. Osim toga, u jednom uzorku pronađeni su brojni lipociti u periportalnom fibroznom tkivu, što vjerojatno ukazuje na važnu ulogu zvjezdastih stanica u metabolizmu retinoida u organizmu, čak iu fazi ciroze organa. Osim toga, čini se da zvjezdaste stanice imaju niz drugih funkcija, nalaze se i u ekstrahepatalnim organima kao što su gušterača, pluća, bubrezi i crijeva, a postoji mišljenje da jetrene i ekstrahepatalne zvjezdaste stanice tvore diseminirani sustav zvjezdastih stanica tijelo, slično APUD sustavu. Na primjer, unatoč povezanosti fibrogenih zvjezdastih stanica s cirozom jetre, njihova aktivacija može imati korisnu ulogu u slučajevima akutne ozljede, jer je rezultat odgovarajući stromalni krug za regeneraciju parenhimskih stanica.

Ozbiljnost perihepatocelularne fibroze u kroničnoj HCV infekciji, prema morfometrijskoj analizi, imala je značajnu inverznu korelaciju s numeričkom gustoćom zvjezdastih stanica koje sadrže lipide - u fazi fibroze III i s cirozom organa iznosila je 0,20 ± 0,03 po vidnom polju. jedinica, što je znatno manje (str< 0,05), чем на стадиях фиброза 0 - I (5,01 ± 0,18) и II (2,02 ± 0,04).

Fibrogenu aktivnost jetrenih stanica koje proizvode matriks ispitali smo pomoću imunohistokemijske studije ekspresije alfa-aktina glatkih mišića. Produkti imunohistokemijskih reakcija različitog intenziteta pronađeni su u citoplazmi aktiviranih zvjezdastih stanica lokaliziranih unutar jetrenih režnjića. Osobito značajna ekspresija α-aktina glatkih mišića zabilježena je u citoplazmi fibroblasta i miofibroblasta portalnih zona, stanica glatkih mišića krvnih žila i miofibroblasta oko središnjih vena.

Većina podataka o staničnim mehanizmima fibrogeneze dolazi iz studija provedenih na jetrenim zvjezdastim stanicama, međutim, jasno je da različite stanice koje proizvode matriks (svaka sa specifičnom lokalizacijom, imunohistokemijskim i ultrastrukturnim fenotipom) pridonose razvoju jetrene fibroze. Oni uključuju fibroblaste i miofibroblaste portalnog trakta, vaskularne glatke mišićne stanice i miofibroblaste oko središnjih vena, koji se aktiviraju u stanjima kronične ozljede jetre.

Zaključak

Dokazana je uloga zvjezdastih stanica jetre u razvoju fibroze organa kod kroničnog hepatitisa C. S progresijom fibroze značajno se smanjuje brojčana gustoća zvjezdastih stanica koje sadrže lipide, dok dio populacije zadržava tzv. "fenotip za metaboličku funkciju. Zvjezdaste stanice jetre poput miofibroblasta u stanju fibrogene aktivacije karakterizirane su sljedećim strukturnim i funkcionalnim značajkama: smanjenjem broja i naknadnim nestankom lipidnih kapljica, hiperplazijom granularnog citoplazmatskog retikuluma i mitohondrija, žarišnom proliferacijom, imunohistokemijskom ekspresijom karakteristika sličnih fibroblastima, uključujući α-aktin glatkih mišića, i stvaranje pericelularnih kolagenskih fibrila u Disseovim prostorima.

Dakle, zvjezdaste stanice jetre nisu statična, već dinamička populacija koja je izravno uključena u remodeliranje intralobularnog perihepatocelularnog matriksa.

Recenzenti:

Vavilin V.A., doktor medicinskih znanosti, profesor, voditelj. Laboratorij za metabolizam lijekova, Istraživački institut za molekularnu biologiju i biofiziku, Sibirski ogranak Ruske akademije medicinskih znanosti, Novosibirsk;

Kliver E.E., doktor medicinskih znanosti, vodeći istraživač, Laboratorij za patomorfologiju i elektronsku mikroskopiju, Novosibirsk Istraživački institut za cirkulatornu patologiju nazvan po akademiku E.N. Meshalkin iz Ministarstva zdravstva i socijalnog razvoja Ruske Federacije, Novosibirsk.

Rad je zaprimljen u uredništvo 15.08.2011.

Bibliografska poveznica

Struktura endotelne stanice, Kupfferove i Itove stanice, razmotrit ćemo primjer dvije figure.

Slika desno od teksta prikazuje sinusoidne kapilare (SC) jetre- intralobularne sinusoidalne kapilare, koje se povećavaju od ulaznih venula do središnje vene. Jetreni sinusoidni kapilari tvore anastomoznu mrežu između jetrenih lamina. Sluznicu sinusoidnih kapilara čine endotelne stanice i Kupfferove stanice.

Slika lijevo od teksta prikazuje jetrenu ploču (LP) i dvije sinusoidne kapilare (SC) jetre izrezan okomito i vodoravno kako bi se prikazale Ito perisinusoidne stanice (CI). Slika također prikazuje presječene žučne kanale (LC).

Procesi Kupfferovih stanica prolaze bez ikakvih spojnih naprava između endotelnih stanica i često prelaze lumen sinusoida. Kupfferove stanice sadrže ovalnu jezgru, mnogo mitohondrija, dobro razvijen Golgijev kompleks, kratke cisterne zrnatog endoplazmatskog retikuluma, mnogo lizosoma (L), rezidualna tijela i rijetke prstenaste ploče. Kupfferove stanice također sadrže velike fagolizosome (PL), koji često sadrže zastarjele eritrocite i strane tvari. Također se mogu otkriti hemosiderin ili inkluzije željeza, osobito pri supravitalnom bojenju.

Na površini Kupfferovih stanica nalaze se nepravilni spljošteni citoplazmatski nabori koji se nazivaju lamelipodije (LP) - lamelarne peteljke, kao i procesi koji se nazivaju filopodije (F) i mikrovile (MV) prekrivene glikokaliksom. Plazmalema tvori vermiformna tijela (CT) sa središnje smještenom gustom linijom. Ove strukture mogu predstavljati kondenzirani glikokaliks.

Kupfferove stanice- To su makrofagi, vrlo vjerojatno tvore samostalan rod stanica. Obično potječu iz drugih Kupfferovih stanica zbog mitotske diobe potonjih, ali također mogu potjecati iz koštane srži. Neki autori smatraju da su to aktivirane endotelne stanice.

Povremeno, nasumično autonomno živčano vlakno (NF) prolazi kroz Disseov prostor. U nekim slučajevima, vlakna imaju kontakt s hepatocitima. Rubovi hepatocita ograničeni su interhepatocitnim udubljenjima (MU) prošaranim mikrovilima.

Poklopac grana sinusoidne kapilare jetre a u nekim slučajevima prolaze kroz jetrene lamine, dolazeći u kontakt sa susjednim jetrenim sinusoidima. Procesi nisu stalni, razgranati i tanki; mogu biti i spljoštene. Akumulirajući skupine lipidnih kapljica, izdužuju se i poprimaju izgled četke grožđa.

Vjeruje se da perisinusoidalni Ito stanice su slabo diferencirane mezenhimalne stanice koje se mogu smatrati hematopoetskim matičnim stanicama, jer se u patološkim uvjetima mogu transformirati u masne stanice, aktivne krvne matične stanice ili fibroblaste.

U normalnim uvjetima, Ito stanice sudjeluju u nakupljanju masti i vitamina A kao iu proizvodnji intralobularnih retikularnih i kolagenih vlakana (KB).

zvjezdaste stanice

Gore - Shematski prikaz Ito stanica (HSC) u susjedstvu najbližih hepatocita (PC), ispod sinusoidnih epitelnih stanica jetre (EC). S - sinusoida jetre; KC - Kupfferova ćelija. Dolje lijevo - Ito stanice u kulturi pod svjetlosnim mikroskopom. Dolje desno - Elektronska mikroskopija otkriva brojne masne vakuole (L) Ito stanica (HSC) koje pohranjuju retinoide.

Ito stanice(sinonimi: zvjezdaste stanice jetre, stanica za skladištenje masti, lipocit, Engleski Hepatična zvjezdasta stanica, HSC, Ito stanica, Ito stanica ) - periciti koji se nalaze u perisinusoidnom prostoru jetrenog lobula, sposobni funkcionirati u dva različita stanja - smiriti i aktiviran. Aktivirane Ito stanice igraju veliku ulogu u fibrogenezi – stvaranju ožiljnog tkiva kod oštećenja jetre.

U intaktnoj jetri nalaze se zvjezdaste stanice mirno stanje. U tom stanju stanice imaju nekoliko izdanaka koji okružuju sinusoidnu kapilaru. Druga značajka razlikovanja stanica je prisutnost rezervi vitamina A (retinoida) u njihovoj citoplazmi u obliku masnih kapljica. Mirne Ito stanice čine 5-8% svih jetrenih stanica.

Izdanci Ito stanica dijele se u dvije vrste: perisinusoidalni(subendotelni) i interhepatocelularni. Prvi napuštaju tijelo stanice i pružaju se duž površine sinusne kapilare, prekrivajući je tankim prstastim granama. Perisinusoidne izrasline prekrivene su kratkim resicama i imaju karakteristične dugačke mikroizbočine koje se protežu još dalje duž površine endotelne cijevi kapilara. Interhepatocelularni izdanci, prevladavši ploču hepatocita i dosegnuvši susjedni sinusoid, podijeljeni su u nekoliko perisinusoidnih izdanaka. Dakle, Ito ćelija u prosjeku pokriva nešto više od dvije susjedne sinusoide.

Kada je jetra oštećena, Ito stanice postaju aktivirano stanje. Aktivirani fenotip je karakteriziran proliferacijom, kemotaksijom, kontraktilnošću, gubitkom zaliha retinoida i proizvodnjom stanica sličnih miofibroblastima. Aktivirane zvjezdaste stanice jetre također pokazuju povećane razine novih gena kao što su α-SMA, kemokini i citokini. Aktivacija ukazuje na početak ranog stadija fibrogeneze i prethodi povećanoj proizvodnji ECM proteina. Završnu fazu cijeljenja jetre karakterizira pojačana apoptoza aktiviranih Ito stanica, zbog čega se njihov broj naglo smanjuje.

Bojanje zlatnim kloridom koristi se za vizualizaciju Ito stanica pod mikroskopom. Također je utvrđeno da je pouzdan marker za diferencijaciju ovih stanica od ostalih miofibroblasta njihova ekspresija proteina reelina.

Priča

Linkovi

• Young-O Queon, Zachary D. Goodman, Jules L. Dienstag, Eugene R. Schiff, Nathaniel A. Brown, Elmar Burckhardt, Robert Schoonhoven, David A. Brenner, Michael W. Fried (2001.) Smanjena fibrogeneza: Imunohistokemijska studija Uparene biopsije jetrenih stanica nakon terapije lamivudinom u bolesnika s kroničnim hepatitisom B. Journal of Haepothology 35; 749-755 (prikaz, ostalo). - prijevod članka u časopisu "Infections and Antimicrobial Therapy", Volume 04/N 3/2002, na web stranici Consilium-Medicum.
• Popper H: Distribucija vitamina A u tkivu otkrivena fluorescentnom mikroskopijom. Physiol Rev 1944, 24:205-224.

Bilješke

Zaklada Wikimedia. 2010. godine.

Pogledajte što su "zvjezdane ćelije" u drugim rječnicima:

Stanice - uzmite aktivan kupon za popust u Akademici za Galeriju kozmetike ili isplative ćelije za kupnju uz besplatnu dostavu na akciji u Galeriji kozmetike

Gore je shematski prikaz Ito stanica (HSC) uz obližnje hepatocite (PC), ispod jetrenih sinusoidnih epitelnih stanica (EC). S sinusoide jetre; KC Kupfferova ćelija. Dolje lijevo Ito stanice u kulturi pod svjetlosnim mikroskopom ... Wikipedia

NERVNE ĆELIJE- ŽIVČANE STANICE, glavni elementi živčanog tkiva. Otvorio ga je N. to. Ehrenberg i prvi opisao 1833. Detaljniji podaci o N. to. s naznakom njihovog oblika i postojanja aksijalnog cilindričnog procesa, kao i ... ... Velika medicinska enciklopedija

Veliki neuroni kore malog mozga (vidi Cerebellum) (M), čiji se aksoni protežu izvan njegovih granica; opisao 1837. Ya. E. Purkin. Kroz P. do. ostvaruju se naredbeni učinci korteksa M na motoričke centre koji su mu podređeni (jezgre M i vestibularne jezgre). U…… Velika sovjetska enciklopedija

Ili Gephyrei razred podtipa Vermidea ili Vermidea, vrsta crva ili Vermes. Životinje koje pripadaju ovoj klasi su isključivo morski oblici koji žive u mulju i pijesku toplih i hladnih mora. Klasu zvjezdastih Ch. osnovao je Katrfage ... ...

Ne smije se brkati s neutronom. Piramidne neuronske stanice u kori velikog mozga miša Neuron (živčana stanica) je strukturna i funkcionalna jedinica živčanog sustava. Ova stanica ima složenu strukturu i visoko je specijalizirana u strukturi ... ... Wikipedia

Ovaj naziv se primjenjuje i na određene pigmentne stanice i na dijelove stanica (životinjskih i biljnih) koji sadrže pigment. Češće se X. nalaze u biljkama (vidi prethodni članak N. Gaidukova), ali su također opisani u protozoama ... Enciklopedijski rječnik F.A. Brockhaus i I.A. Efron

- (cellulae flammeae), stanice sa snopom cilija i dugim procesom, zatvarajući proksimalni dio tubula protonefridija. Centar, dio „P. do., koji ima brojne zvjezdasti procesi, prelazi u šupljinu, hrpa dugih cilija spušta se u ulicu ... ...

Zvjezdasti endotelociti (reticuloendoteliocyti stellatum), stanice retikuloendotelnog sustava, smještene s unutarnje strane. površine kapilarnih žila (sinusoida) jetre u vodozemaca, gmazova, ptica i sisavaca. Studirao K. ... ... Biološki enciklopedijski rječnik

Plamene stanice (cellulae flammeae), stanice sa snopom cilija i dugim procesom, zatvaraju proksimalni dio tubula protonefridija. Centar. dio P. do., imajući brojne. zvjezdasti procesi, prelazi u šupljinu, snop se spušta u ulicu ... ... Biološki enciklopedijski rječnik

- (S. Golgi) zvjezdasti neuroni granularnog sloja cerebelarnog korteksa ... Veliki medicinski rječnik

Glavni izvor endotoksina u tijeluje Gram-negativna crijevna flora. Trenutno nema sumnje da je jetra glavni organ čišćenje endotoksina. Endotoksin prvo preuzima stanica Kami Kupffer (KK), u interakciji s membranskim receptorom CD 14. Može se vezati za receptor kao sam lipopolisaharid(LPS), i njegov kompleks s proteinom koji veže lipid A plazma grumen. Interakcija LPS-a s jetrenim makrofagima pokreće kaskadu reakcija koje se temelje na proizvodnji i otpuštanju ion citokina i drugih biološki aktivnih posrednici.

Postoje mnoge publikacije o ulozi makroajetre (LK) u preuzimanju i čišćenju bakterijskog LPS-a, međutim, interakcija endotela s drugim mezenhimski stanice, posebno perisinusoidalni Ito stanicama, praktički se ne proučava.

NAČIN ISTRAŽIVANJA

Bijelim mužjacima štakora težine 200 g intraperitonealno je ubrizgan 1 ml sterilne fiziološke otopine. visoko pročišćen liofilizirani LPS E. coli soj 0111 u dozama od 0,5,2,5, 10, 25 i 50 mg/kg. U razdobljima od 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 h i 1 tjedan, unutarnji organi su uklonjeni pod anestezijom i stavljeni u puferirani 10% formalin. Materijal je ugrađen u parafinske blokove. Sekcije debljine 5 µm su obojene imunohistokemijskistreptavidin-biotin metodom antitijela na desmin, α - glatko, nesmetano- mišićni aktin (A-GMA) i nuklearni antigen dobro proliferirajuće stanice ( PCNA, " Dako"). Desmin je korišten kao marker perisinusoidalniIto stanice, A-GMA - as marker ve miofibroblasti, PCNA - proliferirajuće stanice. Za otkrivanje endotoksina u stanicama jetre, pročišćeni anti-Re-glikolipidantitijela (Institut za opću i kliničku patologiju KDO, Moskva).

REZULTATI ISTRAŽIVANJA

Pri dozi od 25 mg/kg i više, fatalni šok je opažen 6 sati nakon primjene LPS-a. Akutna izloženost LPS-u na tkivu jetre uzrokovala je aktivaciju Ito stanica, što se očitovalo povećanjem njihova broja. Broj desminpozitivan stanica se povećao od 6 sati nakon injekcije LPS-a i dosegnuo maksimum ma do 48-72 h (sl. 1, a, b).

Riža. 1. Dijelovi jetre štakora sy, obrađeno LSAB -mi- chennymiantitijela na des rudnik(a, b) i α - glatko, nesmetano cervikalni aktin (c), x400 (a, b) x200 (c).

a - prije uvođenja endotoksinana, samac desminpozitivanIto stanice u periportalnoj zoni; b- 72 hnakon primjene endotoksina na: brojni desminpozitivan Ito stanice; u- 120 sati nakon uvođenja en dotoksin: α - glatki mišić prisutan je samo ny aktinco u glatkim mišićnim stanicama kah posuda.

U 1 broj tjedna desminpozitivan stanice su se smanjile, alibio viši od referentnih vrijednosti. Na U ovom slučaju nismo uočili pojavu A-GMA-pozitivan stanice u sinusu dah jetra. unutarnje pozitivno kontrola kada se boje antitijelima na A-GMA služio za identifikaciju glatkih mišićnih stanicavenske žile portalnog trakta koje sadrže A-GMA (Sl. 1, u). Stoga, unatoč povećanju broja Ito stanica, jednom Utjecaj LPS-a ne dovodi do transformacije ( transdiferencijacija) ih u miofibroblaste.

Riža. 2. Dijelovi jetreštakori, liječeni LSAB -označena antitijela na PCNA. a - prije uvođenja en dotoksin: pojedinačniproliferirajući geni patocita, x200; b - 72 sata nakon uvođenja endotoksina: brojni proliferirajući hepatociti, x400.

Povećanje količine desminpozitivan stanice započete unutar portalne zone. Od 6 do 24 sata nakon primjene LPS-a perisinusoidalni stanice su nađene samo oko portalnih trakta, tj. u 1. aci zoni noosa. U vremenu od 48-72 sata, kada je uočen makmaksimalna količina desminpozitivan ljepilo struje, pojavili su se iu drugim zonama acinusa; unatoč tome, većina Ito stanica još uvijek je bila smještena periportalno.

Možda je to zbog činjenice da periportalnolocirani CC su prvi za hvatanje endotoksin koji dolazi iz crijeva kroz portalnu venu ili iz sistemske cirkulacije. Ak tivated QC proizvode širok raspon citokini, za koje se smatra da pokreću aktivaciju Ito stanica i transdiferencijacija u miofibroblaste. Očito, zato su Ito stanice smještene u blizini aktiviranih jetrenih makrofaga (u 1. zoni acinusa) prve koje reagiraju na otpuštanje citokina. Međutim, nismo ih promatrali u našem istraživanju. transdiferencijacija u miofibroblasti, a to sugerira da citokini koje luče CK i hepatociti mogu poslužiti kao čimbenik koji podržava proces koji je već započeo transdiferencijacija, ali ga vjerojatno ne mogu potaknuti jednim izlaganjem jetre LPS-u.

Također je primijećeno povećanje proliferativne aktivnosti stanica uglavnom u 1. zoni acinusa. To vjerojatno znači da su svi (ili gotovo svi) procesi usmjereni prema van oko- i parakrina regulacija međustaničnih interakcija odvija se u periportalnim zonama. Povećanje broja proliferirajućih stanica opaženo je 24 sata nakon primjene LPS-a; broj pozitivnih stanica se povećao do 72 h (maksimalna proliferativna aktivnost, sl. 2, a, b). Proliferirali su i hepatociti i sinusoidne stanice. Međutim, bojanje PCNA ne daje sposobnost identificiranja vrste proliferija pogonske sinusne ćelije. Prema literaturi, djelovanje endotoksina dovodi do povećanja broj QC-a. Misle da se radi o odvija se i zbog proliferacije jetrenih makrofaga i zbog migracije monocita iz drugih organa. Citokini koje oslobađa CK mogu povećati proliferativni kapacitet Ito stanica. Stoga je logično pretpostaviti da proliferirajuće stanice predstavljaju perisinusoidalni Ito stanice. Povećanje njihovog broja koje smo registrirali očito je potrebno za povećanje sinteze faktora rasta i obnavljanje izvanstaničnog matriksa u uvjetima oštećenja. To može biti jedna od poveznica u kompenzacijsko-regenerativnim reakcijama jetre, budući da su Ito stanice glavni izvor komponenti izvanstaničnog matriksa, faktora matičnih stanica i faktora rasta hepatocita, koji sudjeluju u reparaciji i diferencijaciji. rovka epitelne stanice jetre. Odsutan ista transformacija Ito stanica u miofibroblasti ukazuje da jedna epizoda agresije endotoksina nije dovoljna za razvoj fibroze jetre.

Dakle, akutna izloženost endotok sina uzrokuje povećanje broja desminpozitivan Ito stanice, što je neizravni znak oštećenja jetre. Količina perisinusoidalni stanica se povećava, očito kao rezultat njihove proliferacije. Jedna epizoda agresije endotoksina uzrokuje preokret moja aktivacija perisinusoidalni Ito stanice a ne dovodi do transdiferencijacija u miofibroblaste. S tim u vezi može se pretpostaviti da u mehanizmima aktivacije i transdiferencijacija U Ito stanicama nisu uključeni samo endotoksin i citokini, već i neki drugi čimbenici međustaničnih interakcija.

KNJIŽEVNOST

1. Majanskog D.N., Wisse E., Decker K. // Nove granice hepatologija. Novosibirsk, 1992.

2. Salakhov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Yakovlev M.Yu. // Uspjesi suvremeni, biol. 1998. Svezak 118, broj . 1. S. 33-49.

3. Yakovlev M.Yu. // Kazan . m jedinica časopis 1988. br. 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Arh. [b]. 1992. godine. Vol. 61.P. 343-349 (prikaz, ostalo).

5. Gressner A. M. // Hepatogastronerologija. 1996. sv. 43. Str. 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. i sur. // Priroda. 1995 Vol. 373, br. 6516. Str. 699-702.

7. mudar E., Braet F., Luo D. i sur. // Toxicol. Pathol. 1996. godine. Vol. 24, broj 1. Str. 100-111.