Kuidas võtta verd pcr dna hiv jaoks. HIV-i PCR-testid: protseduuri usaldusväärsus ja omadused. Kui palju HIV-teste tehakse

Üks raskemaid haigusi, mida pole veel ravitud, põhjustab inimese immuunpuudulikkuse viirus.

Patogeeni tuvastamine organismis pole lihtne: praegu kasutatakse selleks vaid üksikuid uurimismeetodeid.

Üks neist testidest on polümeraasi ahelreaktsioon (PCR).

Et mõista polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi õukonda, peate koolikursusest meeles pidama rakkude struktuuri eripära.

Iga elusrakk sisaldab valku ja kahte tüüpi nukleiinhappeid: DNA ja RNA. Need on kõige olulisemad rakustruktuurid, kuna sisaldavad erilisel viisil kodeeritud geneetilist teavet.

DNA kood on mikrostruktuuride range jada, mis moodustavad pika ahela.

Viide! PCR-i aluseks on nukleiinhappe võime ise paljuneda.

Kui viirus siseneb tervetesse rakkudesse, hävitab see DNA ahelad.

Sel juhul ei sisalda rakk enam terviklikke ahelaid, vaid ainult väikseid fragmente - nukleotiide. Lisaks on nähtavad ka kõige väiksemad viiruseosakesed.

Polümeraasi ahelreaktsiooni meetod on üles ehitatud kahjustatud DNA ahelate ja jääkrakkude tuvastamisele.

PCR-i diagnostikat on kahte tüüpi:

• kvaliteet. Sobib neile, kelle diagnoos kinnitust ei leia: näitab lihtsalt, kas viirus on rakkudes olemas.
• kvantitatiivne. Patsient saab vastuse “Viiruse DNA-d ei tuvastata”, mis tähendab HIV-i puudumist või informatsiooni haigusetekitaja olemasolu kohta, mis tähendab, et inimene on HIV-nakkusega.

Kui diagnoos on kinnitatud, määratakse kvantitatiivne analüüs. Tema abiga määratakse viiruse RNA (DNA) koopiate arv veres (rakkudes). Kvantitatiivne analüüs võimaldab hinnata HIV-nakatunud inimeste ravi efektiivsust, määrata haiguse raskusastet, selle progresseerumist.

Milliseid diagnostilisi meetodeid saab HIV-nakkuse tuvastada, kirjeldatakse videos:

Selle diagnostikameetodi eelised ja puudused

Nagu igal diagnostilisel meetmel, on PCR-il oma plussid ja miinused.

Meetodi eelised hõlmavad järgmist:

• Kõrge töökindlus. PCR-iga on võimalik tuvastada viiruse väikseimaid jääke, patogeeni tuvastamise tõenäosus ulatub 80% -ni 4-5 päeva pärast nakatumist, 100% - 14 päeva pärast nakatumist. Seega saavutatakse suurim täpsus vererakkudes oleva viiruse DNA uurimisel: viirust saab tuvastada selle arvuga 1-5 koopiat 1 miljoni raku kohta.
• Võimalus kasutada erinevaid biomaterjale(PCR jaoks ei sobi sülg, uriin, higi ja pisarad, kuid kasutada võib naiste verd, spermat ja suguelundite eritist).
• Võimalus ühe testiga läbi viia erinevate haiguste analüüs. PCR abil saate tuvastada HIV, klamüüdia, herpese, tsütomegaloviiruse, ureaplasma, mükoplasma, gonorröa, trihhomonoosi, toksoplasmoosi.
• Kiire tulemuste saavutamise kiirus. On olemas ekspress-PCR-uuring, mille abil saate mõne tunniga diagnoosi tulemused teada.
• Kõrge tundlikkus: PCR, erinevalt näiteks ELISA-st, aitab viirust tuvastada juba esimestel nädalatel pärast nakatumist.
• Võimalus saada tulemusi mõne päeva jooksul pärast nakatumist. Nakatumisel saab viirust määrata 5–14 päeva pärast, ELISA-d on soovitatav teha alles 6 nädala pärast.
• Vanusepiiranguid pole. PCR-i saab teha nii täiskasvanutel kui ka lastel alates sünnihetkest.

PCR-analüüsi peamine omadus on see, et see ei tuvasta viiruse antikehi, vaid viirust ennast.

Eeliste kõrval on vaid mõned puudused:

• Kõrge hind.
• Valepositiivsete tulemuste saamise tõenäosus on umbes 20%. Tavaliselt juhtub see personali süül (vead biomaterjali kogumisel või transportimisel, biomaterjali uurimisel ja tulemuste tõlgendamisel).
• Vajadus kasutada täiustatud kõrgtehnoloogilisi seadmeid, millega on varustatud vaid mõned kliinikud.

Tähelepanu! Ilmselgelt on tehnika eelised palju suuremad kui puudused. Eriti oluline on, et PCR abil on võimalik haigus avastada juba algstaadiumis ja alustada ravi õigeaegselt.

PCR analüüsi tulemus võib olla positiivne juba 14-21 päeva pärast võimalikku nakatumist. Kuid kui analüüs on negatiivne, ei garanteeri see nakkuse puudumist. Parem on teha kinnitav test ELISA meega 2 nädala pärast.

Kuidas HIV-i PCR-testi tehakse, kirjeldatakse videos:

Kes on määratud?

Esiteks määratakse PCR HIV-i kahtluse korral. Tehnika võib olla indikatiivne ka sugulisel teel levivate haiguste, pärilike haiguste avastamisel.

Viide! PCR-diagnostika algatab sageli inimene, kellel pole haiguse sümptomeid ilmnenud, kuid spekuleeritakse ja muretsetakse võimaliku nakatumise pärast, näiteks pärast kaitsmata vahekorda, hiljutist vereülekannet, kontakti nakatunud inimesega.

Kellele veel uuringut näidatakse?

• Inimesed, kelle ELISA test on kaks korda positiivne. PCR võimaldab teil teha lõpliku diagnoosi.
• Doonorid, kes plaanivad verd loovutada.
• Inimesed, kelle immuunblotanalüüs kinnitas diagnoosi. Immuunblotanalüüs on AIDSi diagnoosimise meetod ja seda tehakse tavaliselt koos PCR-iga.
• Inimesed, kes on HIV-i põhjustatud haiguste ravi staadiumis. PCR võimaldab teil hinnata ravi efektiivsust.
• Vastsündinud, kelle ema on HIV-positiivne (viiruse edasikandumine toimub umbes 30% juhtudest). Juba 2-3 nädalat pärast sündi on võimalik kindlaks teha, kas nakkus on toimunud.

Mõningaid inimesi kontrollitakse ennetava meetmena, kuid see on haruldane, kuna PCR-testi hind on kõrge.

Kui kaua analüüs aega võtab ja kuhu seda teha saab?

Laboris tehakse HIV-i PCR-analüüs.

Vereproovide võtmine ise võtab aega 5-10 minutit ja tulemused on valmis järgmisel päeval.

Ekspressdiagnostika valimisel (näiteks laborites "Invitro" või "Hemotest") võtab tulemuste tõlgendamine spetsialisti poolt vaid 2 tundi.

Erakliinikutes saab diagnostikat soovi korral teha anonüümselt. Selleks tuleb isiklikul visiidil sellest teada anda: igale patsiendile määratakse seerianumber ja antakse juurdepääs isiklikule kontole. Siis saab inimene tulemusi teada ka ilma teistkordse laborikülastuseta.

PCR-uuringu tulemuste usaldusväärsust kirjeldatakse videos:

Uuringu maksumus

PCR-diagnostika ei ole odav, kuna see nõuab teatud täiustatud seadmeid ja eriteadmisi.

Seadmed on saadaval ainult mõnes meditsiinilaboris, mis võimaldab teil määrata kõrge analüüsi maksumuse.

Uuringu keskmine hind on 3000-5000 rubla. Mõnes piirkonnas ei ületa maksumus 1500-2000 rubla.

Kuna on võimalikud valepositiivsed ja valenegatiivsed tulemused või inimene pöördus liiga vara (viirus ei ole veel DNA struktuuri rikkunud, kuid on organismis juba olemas), võib osutuda vajalikuks teine ​​test.

Kõrge hind on tingitud ka asjaolust, et diagnostika jaoks on vaja mitmeid komponente:

1. amplifikatsiooniks ette nähtud DNA segment (maatriks);
2. kaks praimerit;
3. Polümeraas - keemiliselt aktiivne komponent, mis kiirendab viiruseosakeste arvu suurenemist eksponentsiaalselt;
4. desoksüribonukleosiidtrifosfaadid;
5. kahevalentse magneesiumi laetud osakesed;
6. Spetsiaalne lahendus, milles viiakse läbi polümerisatsiooniprotsess. See lahus on mõeldud sobiva happesuse taseme, soolakontsentratsiooni ja magneesiumi koguse säilitamiseks vedelikus.

Samuti on uuringuks vaja väikest kogust vaseliini: see sisaldab rasvu ja keeb kõrgel temperatuuril, mis kaitseb uuritavat proovi ülekuumenemise eest.

Analüüsi läbiviimine

Analüüsiks sobib veri, sperma ja tupest väljumine. Tavaliselt, kasutavad sageli venoosset verd.

Vereproovid võetakse hommikul tühja kõhuga.

Lisaks peate analüüsiks valmistuma:

• 2-3 päeva enne diagnoosi tuleks toidust välja jätta rasvased toidud.
• Alkohol on välistatud 1-2 päeva enne analüüsi.
• 2 nädalat enne analüüsi peate lõpetama immunostimuleerivate ravimite võtmise.
• Viimane söögikord peaks toimuma hiljemalt 8 tundi enne vereloovutust.

Veenist vere võtmisel töödeldakse spetsiaalse lahusega küünarnuki sisemine kõver, misjärel torkab spetsialist naha läbi, asetab veenisüstla nõela ja võtab õige koguse verd. Seejärel eemaldatakse nõel, koht töödeldakse uuesti alkoholiga, patsiendile antakse vatitups.

Patsient peab verejooksu peatamiseks kätt ajutiselt painutama. Kui inimene tunneb end hästi, võib ta kohe koju minna. Pearingluse, iivelduse ja minestamise korral antakse talle esmaabi.

Laborant asetab saadud biomaterjali steriilsesse kolbi ja saadab diagnostikasse. Spetsialist segab lõhestatud bioloogilist materjali spetsiaalses reaktoris ensüümidega, mis sünteesivad erinevaid infektsioone.

Kui veres on väga vähe viirusosakesi, suureneb nende arv ensüümidega suhtlemisel järsult: reaktiivid ühinevad viiruse DNA-ga ja dubleerivad seda.

Analüüs viiakse läbi mitmes etapis, kuna molekulide jagunemine toimub eksponentsiaalselt. Ühest lahtrist selgub 2, 2 - 4 ja nii edasi.

Arstide arvamusi ja ülevaateid analüüsides võime kindlalt öelda: praegu on PCR-diagnostika kõige täpsem meetod HIV-nakkuse testimiseks.

Viide! Analüüsi abil on võimalik tuvastada viiruse olemasolu organismis juba paar päeva pärast nakatumist, isegi kui viirusstruktuuride arv on vaid 1-5 ühikut miljoni raku kohta. Kuid ärge unustage meetodi puudusi, näiteks valepositiivsete tulemuste saamise tõenäosust.

Sellest hoolimata jääb PCR üheks vähestest testidest, mis võimaldab haigust õigeaegselt diagnoosida ja ravi alustada.

PCR-i diagnostikatehnika töötas algselt välja 35 aastat tagasi Ameerika teadlane Kari Mullis. Uuringu leiutaja sai 1993. aastal oma teedrajava töö eest rahvusvahelise Nobeli preemia. See on muutunud mis tahes laboritegevuse jaoks asendamatuks.

PCR-i kasutatakse molekulaarbioloogias, et teha palju koopiaid (amplifitseerida) väikestest DNA lõikudest. DNA polümeraas saab lisada nukleotiidi ainult olemasolevale 3-OH rühmale. Seega vajab ta praimerit, millele saab lisada esimese nukleotiidi. See nõue võimaldab teil määratleda mustrite jada konkreetse osa, mida tuleb diagnoosida. PCR-reaktsiooni lõpus koguneb konkreetne järjestus miljardites koopiates (amplikonites).

PCR hõlmab kütte- ja jahutusprotsessi, mida nimetatakse termiliseks tsükliks, mida teostavad spetsiaalsed masinad. Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on suhteliselt lihtne meetod. See võimendab DNA matriitsi, et saada spetsiifilisi DNA fragmente in vitro (in vitro analüüs). Traditsioonilised meetodid DNA järjestuse kloonimiseks vektoris ja selle replikatsiooniks elusrakus nõuavad sageli mitmepäevast kuni mitmenädalast tööd. Kuid DNA järjestuste amplifitseerimise tulemused saate PCR-i abil paari tunni pärast.

Enamik nakkushaiguste diagnoosimisel kasutatavaid biokeemilisi analüüse nõuab küllaltki suures koguses bioloogilist materjali. PCR puhul ei ole see tingimus kohustuslik. Seega võib PCR pakkuda tundlikumat patogeeni tuvastamist. Ja teatud järjestuste kõrgem võimendamine lühema ajaga üsna piiratud hulga biomaterjaliga. Need omadused muudavad tehnika äärmiselt kasulikuks. Mitte ainult fundamentaaluuringutes, vaid ka isiklikel eesmärkidel. Sealhulgas geneetilise identiteedi testimine, kohtuekspertiis, tööstuslik kvaliteedikontroll.

Analüüsi peamine väärtus seisneb võimaluses tuvastada sugulisel teel levivaid patoloogiaid enne esimeste märkide ilmnemist. Kui HIV-nakkuse varajane diagnoosimine on vajalik, kasutatakse PCR-analüüsi. Nagu ka viiruse RNA määramine doonori veres. Analüüsi kõrge tundlikkuse tõttu võib vastuse saada 7–14 päeva pärast väidetavat nakatumist. Diagnoosi usaldusväärsus ulatub 85–98%. Kuid PCR-testi ei määrata kõigile. Sest see on üsna kallis uuring. Kõige tähtsam on see, et see nõuab laboritöötajatelt kalleid seadmeid ja teatud professionaalseid oskusi. Kui patsient ei ole varem olnud suurenenud infektsiooniriskiga seotud olukordades, ei ole polümeraasi reaktsioon soovitatav.

Kvalitatiivne polümeraasi reaktsioon HIV-i jaoks

Kvaliteetse HIV-i PCR-i läbiviimine võimaldab teil kindlaks teha viirushaiguse olemasolu kehas. Patsient saab tulemuse järgmiste märkide kujul: positiivne, valepositiivne, negatiivne. Kuid uuring ei võimalda määrata retroviiruse koopiate arvu. Kvalitatiivset analüüsi ei tehta patsientidel, kellel on varem diagnoositud infektsioon. Seda ei ole ette nähtud viirusevastase ravi efektiivsuse kontrolliks.

HIV-i PCR kvantitatiivne tüüp

Seda tehakse viiruse RNA koopiate määramiseks patsiendi bioloogilises materjalis. Kvantitatiivne PCR on ette nähtud ainult eelnevalt tuvastatud infektsiooniga patsientidele käimasoleva ravi jälgimiseks.

reaalajas PCR

Seda kasutatakse laboratoorses diagnostikas DNA lõikude koopiate moodustamiseks. Samuti samaaegseks kvantitatiivseks uuringuks ja DNA järjestuse tuvastamiseks biomaterjalis. Tegelikult on diagnoos kvantitatiivne PCR.

Märkusena!

Erinevates laborites leiate mitmeid diagnostilisi koostisi: "PCR kvantitatiivne määramine" ja "Reaalajas PCR".

Mõlemad analüüsid on identsed.

Materjali võtmine HIV diagnoosimiseks

Bioloogilise materjali proovide võtmine HIV diagnoosimiseks PCR-i abil toimub vastavalt teatud standarditele. Manipuleerimine toimub ravitoas. Kasutatakse ühekordselt kasutatavaid steriilseid instrumente. Instrumentidega pakendi avamine toimub otse patsiendi lähedal. Kogutud materjal asetatakse steriilsetesse katsutitesse, mis on eelnevalt töödeldud CrO3-ga (kroomiseguga). Bioloogiline materjal on veeniveri, mida loovutatakse hommikul ja tühja kõhuga. Mõni päev enne analüüsi peaksite välistama alkoholi, rasvaste ja vürtsikute toitude kasutamise, lõpetama ravimite võtmise.

Kui ravimeid ei ole võimalik kõrvaldada, tuleb sellest enne analüüsi anda teada.

Lisaks võib samaaegsete sugulisel teel levivate haiguste tuvastamiseks võtta tampooni ureetrast ja tupest. Uuring viiakse läbi anonüümselt, tulemused saab patsient isiklikult. Soovitav on isikut tõendav dokument kaasas olla.

Kui kaua ma võin HIV-i jaoks PCR-i võtta

HIV-viiruse olemasolu on võimalik tuvastada hiljem 4-6 päeva pärast nakatumist. Sel juhul ulatub analüüsi teabesisaldus 85% -ni. 10-13 päeva pärast võib analüüs määrata haiguse 98% täpsusega. Negatiivne tulemus kehtib ainult siis, kui see esitatakse mitte varem kui 2 nädalat pärast väidetavat nakatumist.

Valepositiivse tulemuse põhjused

Valepositiivset tulemust on raske saada.

See on võimalik bioloogilise materjali proovide võtmise reeglite eiramise, katseklaasi ebaõige märgistamise, madala kvaliteediga testimissüsteemi kasutamise ja muude sarnaste tegurite korral. Muudel juhtudel on sellise tulemuse saamise võimalus mitte suurem kui 2%.

Kui kaua kulub testitulemuste saamiseks?

Tehnilisest vaatenurgast on PCR tulemused võimalik saada 4 tunni jooksul. Praktikas saab patsient labori järelduse aga ühest kuni mitme päevani. Üldiselt sõltub ajastus labori töökoormusest ja selle töö organiseeritusest.

Polümeraasi reaktsiooni läbiviimine vastsündinul

PCR määratakse, kui laps sünnib HIV-positiivselt emalt. ELISA läbiviimine sel juhul ei ole informatiivne. Kuna lapsel on retroviiruse vastased antikehad kuni umbes 2. eluaastani. Sel põhjusel ei anna ensüümi immuunanalüüs täpset vastust. PCR-i läbiviimisel 4-6-nädalasel lapsel ja positiivse tulemuse saamisel räägime infektsioonist.

Kui 8 nädala kuni kuue kuu vanuselt tehtud PCR annab negatiivseid tulemusi (eeldusel, et laps ei toitunud ema rinnapiimast), on nakatumine välistatud.

Miks on ELISA HIV-i määramiseks parem?

Polümeraasi reaktsioon võimaldab tuvastada viiruse RNA-d, selle olemasolu organismis, sealhulgas kvantitatiivselt. ELISA ülesanne on määrata HIV-nakkuse antikehad. Ensüüm-immunoanalüüs võimaliku nakkuse määramiseks ei ole madalam kui PCR, selle täpsus ulatub 99% -ni. Kuid erinevalt PCR-ist ei suuda see haigust selle arengu varases staadiumis kindlaks teha.

PCR-i eelised HIV-i jaoks

• Polümeraasi reaktsioon määrab otseselt nakkustekitaja olemasolu. Näiteks ELISA abil saab tuvastada ainult mikroorganismide antikehi ja jääkprodukte.
• Analüüs tuvastab selgelt konkreetse patogeeni, isegi kui on mitu ristreageerivat patogeeni.
• Tehnika võimaldab uurida igasugust bioloogilist materjali, sealhulgas kuivatatud veretilku.

PCR-i puuduste hulgas võib välja tuua analüüsi suurenenud tundlikkuse. Mõnikord põhjustab see valepositiivse tulemuse. See juhtub siis, kui katseklaasis või instrumentidel on isegi väike kogus võõr-DNA-d.

HIV-i diagnoosimine PCR ja ELISA abil: tõlgendamine, tulemuste usaldusväärsus

ELISA, mille tulemused näitavad HIV-vastaste antikehade ja p24 antigeeni puudumist organismis, on negatiivne. Kui need molekulid on olemas, tehakse positiivne diagnostiline järeldus. Mõnel juhul võib patsient saada valepositiivse või valenegatiivse tulemuse. See on varase raseduse, herpesinfektsiooni esinemise, materjali ebaõige proovivõtmise ja katseklaaside transportimise rikkumiste tagajärg. Lisaks leitakse sarnaseid tulemusi käimasolevate autoimmuunhaiguste ja erinevat tüüpi hepatiidiga patsientidel. Võib teha Western bloti (immuunblotanalüüs), mis ühendab ELISA ja viirusvalkude eraldamise.

Siis on positiivne tulemus viirusnakkuse gp160 glükoproteiini juuresolekul. See on HIV-i ümbrise glükoproteiinide gp41 ja gp120 eelkäija. Kui need molekulid puuduvad, loetakse laborianalüüsi tulemus negatiivseks. Western Blot'i läbiviimine koos ELISA-ga võimaldab saada tulemusi, mille usaldusväärsus ületab 98%. Juhul, kui ELISA on positiivne ja Western blot negatiivne, peetakse testimist kahtlaseks ja nõuab PCR-i.

Enamiku naiste ja meeste jaoks on see sugulisel teel leviv haigus kõige kardetavam. Sel põhjusel kogeb mõistlik inimene pärast juhuslikku intiimsuhet ilma barjääri rasestumisvastase vahendita, samuti seksuaalpartnerite sagedast vahetamist ja pärast kirurgilisi operatsioone teatud erksusega. Kõige usaldusväärsem viis selguse saamiseks on minna kliinikusse ja teha HIV-i suhtes PCR-test.

Vereanalüüsi abil saab määrata järgmisi näitajaid:

• HIV-i olemasolu eitamine / kinnitamine varjatud perioodil (esimestel nädalatel pärast nakatumist ei tuvastata ELISA testides antikehi nende puudumise või liiga madala kontsentratsiooni tõttu).
• HIV-1, HIV-2 genotüübi määramine.
• Staatuse tuvastamine lastel, kes on sündinud ema-kandjatest (HIV-antikehi tuvastatakse pikka aega kõigil HIV-nakkusega naistel sündinud lastel. Alla 48-aastastel lastel on soovitav määrata viiruse DNA elutunnid, 1-2 kuud, 3-6 kuud).
• ELISA testide valenegatiivsed, valepositiivsed ja kahtlased tulemused.
• HIV-i hulga diagnoosimine ja viiruskoormuse muutuste jälgimine ajas (juba väljakujunenud AIDS-i diagnoosi korral kasutatakse PCR analüüsi prognoosimiseks, dünaamiliseks jälgimiseks ja käimasoleva ravi jälgimiseks).

HIV PCR testi hind

HIV PCR ANALÜÜS – MILLAL SEDA TEHA, MIKS JA MIS AJAL

1. HIV DNA. Inimese immuunpuudulikkuse viiruse (HIV) DNA diagnostikat saab kasutada varajase võimaliku nakatumise tuvastamiseks pärast kõrge riskiga juhtumit (vereanalüüsid võetakse juba 10 päeva pärast võimalikku nakatumist). Nakkuse täielikuks välistamiseks on siiski vaja 4. ja 12. nädalal läbi viia teine ​​uuring ja ELISA diagnostika.
   Analüüsi tulemused: HIV DNA (kvalitatiivne analüüs)- "ei leitud" või "leitud". Viimasel juhul on HIV-nakkuse kinnitamiseks vaja teha korduvaid lisauuringuid. Kui tulemus on negatiivne, kuid on suur nakkusoht, on vajalik teine ​​uuring - vereloovutamine PCR või ELISA abil mõne aja pärast.
2. HIV RNA. HIV RNA kvantitatiivne määramine PCR abil (nn "viiruskoormus") on üks HIV-nakkuse kulgemise prognoosi hindamise indikaatoreid ja viirusevastase ravi efektiivsuse varaseim näitaja. Test on näidustatud haiguse kulgu jälgimiseks, ravi alustamise otsustamiseks ja selle efektiivsuse hindamiseks.
   HIV RNA uuringut PCR abil saab kasutada täiskasvanutel, kellel on pärast kõrge riskiga episoodi (ligikaudu 7–10 päeva pärast tõenäolist nakatumist) võimaliku infektsiooni varane usaldusväärne diagnoos. HIV RNA kõrge tiitri olemasolu antikehade puudumisel võimaldab diagnoosida ägedat HIV-nakkust. Diagnoosi täpsustamiseks on aga vaja läbi viia kordusuuring ja ELISA diagnostika 1 ja 3 kuu jooksul.
   PCR HIV RNA kohaletoimetamine selle infektsiooniga rasedatele naistele 3-4 nädalat enne eeldatavat sünnituskuupäeva on näidustatud sünnitusviisi (loodusliku sünnikanali kaudu või keisrilõike kaudu) lahendamiseks.
   Analüüsi tulemused: HIV 1. tüüpi HIV RNA (kvantitatiivne analüüs)- "ei tuvastatud" (see on normaalne).
3. HIV resistentsus. Analüüs HIV-i resistentsuse määramiseks proteaasi ja pöördtranskriptaasi inhibiitorite suhtes on näidustatud HIV-nakkusega patsientidele, kellel on ebaefektiivne ravi, samuti ägeda infektsiooni ajal enne viirusevastase ravi alustamist. Uuring võimaldab teil määrata HIV-i resistentsust ravimitele. Analüüsi tulemuste põhjal saab infektsionist teada proteaasi inhibiitorite, nukleosiid- ja mittenukleosiidsete pöördtranskriptaasi inhibiitorite suhtes resistentsete mutatsioonide olemasolu, samuti teabe iga ravimiresistentsusega mutatsiooniga seotud aminohappe positsiooni kohta.
4. Mitmekülgne diagnostika: C-hepatiidi viiruse RNA / B-hepatiidi viiruse DNA / inimese immuunpuudulikkuse viiruse (HIV) 1. ja 2. tüüpi RNA kvalitatiivne määramine (ultratundlik meetod). Analüüs võimaldab varakult diagnoosida HIV-nakkust, viiruslikku C- ja B-hepatiiti. Uuring on näidustatud viirusliku B- ja C-hepatiidi, HIV 1./2. tüübi varaseks avastamiseks riskirühma kuuluvatel isikutel. DNA või RNA viiruste tuvastamine viitab infektsioonile.

Nende vereanalüüside valmisoleku tingimused - 3 kuni 7 kalendripäeva. Meie meditsiinikeskuses saate Moskvas HIV-nakkuse diagnoosimiseks läbida kvalitatiivse ja kvantitatiivse PCR-analüüsi. Vereproovid iga päev, kella 10-00, kaasa arvatud

HIV-i PCR on üks kõige informatiivsemaid molekulaargeneetilise diagnoosimise meetodeid. See meetod aitab tuvastada patsiendi erinevaid nakkushaigusi ja haigusi, mis on päritud. Sama diagnostiline meetod on rakendatav ka biomaterjali testimisel HIV-i, raske haiguse, mis areneb kogu patsiendi elu jooksul, esinemise suhtes. Arstliku abiga oli PCR üks soovitatavate tasuliste testide hulgas, mis tehti inimese immuunpuudulikkuse viiruse kahtluse korral. Uuringu usaldusväärsus õigustab end aga vaid 80 juhul 100-st.

HIV-i PCR-diagnostika tähistab polümeraasi ahelreaktsiooni. Selle liigi uurimiseks kasutatakse erinevat tüüpi bioloogilisi materjale. Nende hulgas võib kasutada verd, lisaks patsiendi tupest või meestel seemnevedelikku.

Tähelepanu! PCR-i sülge HIV-i diagnoosimisel ei kasutata. Sellist lähenemist peetakse ebaefektiivseks, kuna selles materjalis on HIV-vastaseid antikehi minimaalses kontsentratsioonis. Sama kehtib uriini, higi ja pisarate kohta.

Kirjeldatud uuringu näidustus on topeltpositiivne ELISA (ensümaatiline immunoanalüüs). Alternatiivsetest sihtkohtadest tuleb juttu hiljem.

Analüüsi olemusest lähemalt

HIV PCR-analüüsi aluseks on nukleiinhappe võime ise paljuneda. Elusrakud koosnevad valgust ja samadest hapetest ehk teisisõnu RNA-st ja DNA-st. Molekulid toimivad geneetilise koodi valvuritena.
Viirusosakeste (HIV) madala kontsentratsiooni korral biomaterjalis ei sisalda proov terveid DNA (desoksüribonukleiinhappe) ahelaid, vaid ainult nende komponente, mida nimetatakse nukleotiidideks. Analüüs võimaldab tuvastada isegi ebaolulisi viirusrakkude jäänuseid. Just see asjaolu seletab PCR-i võimet näidata tulemusi varases staadiumis – paar nädalat pärast HIV-nakkust.

Kõige kvalitatiivsemaid tulemusi polümeraasi ahelreaktsioonist tuleks oodata venoosse vere uurimisel. Proov seeditakse seadmega. Seejärel töödeldakse fraktsioone ensümaatiliselt. Reaktiivsed ained koos viiruse DNA osakestega dubleerivad seda. Selliste elementide arv suureneb vastavalt ahela põhimõttele, kuni nende (mitte antikehade) olemasolu patsiendi veres muutub laborantidele märgatavaks. Ükski olemasolevatest diagnostikameetoditest ei tööta täpselt samal põhimõttel.

Reaktsiooni komponendid

PCR-meetodi abil saate eelnevalt teada viiruse arengust organismis. Miks ei võiks seda tasuta meditsiini vallas populaarseks nimetada ja igal pool teha? Fakt on see, et selline HIV-test on väga kallis ja nõuab järgmisi komponente:

• desoksüribonukleiinhappe maatriks, sealhulgas amplifitseerimiseks mõeldud DNA segment;
• kaks praimerit (iga ahela segmendi jaoks);
• keemiliselt aktiivse komponendi polümeraas viirusosakeste polümerisatsiooni kiirendamiseks;
• desoksüribonukleosiidtrifosfaadid;
• kahevalentse magneesiumi osakesed (laetud);
• spetsiaalne lahendus soodsate tingimuste loomiseks, mis tagab õige happesuse taseme, soola kontsentratsiooni, magneesiumiosakeste arvu vedelikus.

Tähelepanu! Proovi kaitsmiseks ülekuumenemise eest lisatakse materjalile väike kogus vaseliini, mis sisaldab rasvu ja vastavalt kõrge keemistemperatuuriga.

Analüüsi suhteliselt kõrge täpsus on tingitud selle suurenenud tundlikkusest, mis stimuleerib reaktsiooni teiste viiruste antikehadele.

HIV-i PCR-meetodi eelised ja puudused

Allolevas tabelis oleva meetodi objektiivseks hindamiseks toome välja mitmeid uuringu eeliseid ja puudusi:

Ilmselgelt on tehnika eelised suuremad. Kui hinnata diagnoosi tüüpi edasise ravi produktiivsust ja patsiendi eluea pikendamise võimalust, on PCR kõige kindlam viis edu saavutamiseks.

Analüüsi funktsioonid

Kirjeldatud analüüsi põhijooneks on võime HIV varakult diagnoosida, milleks teised uurimismeetodid ei suuda. Mitu päeva pärast väidetavat nakatumist saan PCR jaoks verd annetada? Tavaliselt on see ajavahemik 10-14 päeva. Järgmise 24 tunni jooksul saab patsient tulemuse. Terminite võimalikud kõrvalekalded on seletatavad diagnostikakeskuste ja kliinikute individuaalsete töötingimustega.

Uuringu eesmärk

PCR tehakse enamasti HIV (inimese immuunpuudulikkuse sündroomi) tuvastamiseks. Kuid analüüsi võib võtta ka juhul, kui kahtlustate sugulisel teel levivate haiguste teket. Sama meetod on rakendatav ka pärilike haiguste diagnoosimisel.

PDR-diagnostika: läbiviimise põhjused

Millal peaksin PCR jaoks verd loovutama? Enamasti annetatakse bioloogilist materjali siis, kui inimese immuunpuudulikkuse viirus on kohanenud organismi tingimustega, stimuleerinud antikehade tootmist ja tekitanud esimesed HIV-i sümptomid. Kuid see on õigustatud ainult siis, kui nakatumisest on möödunud piisavalt aega ja see hõlmab ELISA-uuringut.

PCR-i vajadus tekib patsiendi algatusel, kes soovib haigust kiiresti diagnoosida (kui see on olemas). Selle põhjuseks võivad olla: kaitsmata vahekord, kokkupuude nakatunud inimese bioloogilise materjaliga, hiljutine vereülekanne jne.

Kes on määratud PCR-i?

HIV-nakkuse määramine PCR-ga spetsialisti soovitusel toimub järgmistel juhtudel:

• esialgne diagnoos. PCR kinnitab või lükkab täpselt ELISA tulemuse ümber;
• Western blot uuring kinnitas diagnoosi. Immunoblotanalüüs on täiendav viis AIDSi uurimiseks . Mõlemat meetodit kasutatakse koos, mis välistab võimaluse panna ekslik diagnoos;
• kinnitatud HIV-staatusega PCR abil jälgitakse valitud ravi mõju;
• doonorivere testimiseks HIV-antikehade olemasolu kohta;
• vastsündinu HIV-staatuse määramiseks, kui ema on positiivne. PCR esimestel elupäevadel võimaldab teil kindlaks teha emakasisese infektsiooni või imiku nakatumise sünnikanali läbimise ajal. Katse tehakse 2-3 nädalat pärast sündi.

Kui kaua võtab PCR analüüs aega ja kus seda teha saab?

HIV-i PCR-analüüs viiakse läbi spetsiaalses laboris. Test ise ja tulemuse tõlgendamine ei nõua palju aega: kuu või isegi nädal. Vere võtmiseks kulub kuni 6 minutit. Tavalisel juhul ei vaja spetsialist diagnoosi tegemiseks ja järelduse tegemiseks rohkem kui päeva. Esimesed 8 tundi on vere uurimine, ülejäänud aeg kulub registreerimisele. Tulemust saab kätte juba järgmisel päeval pärast proovi võtmist. Ekspresstesti kestus on 2 tundi.

Tähelepanu! Kohustusliku tervisekindlustuse poliis võimaldab sooritada riiklikus tervishoiuasutuses testi tasuta.

Peaaegu iga kommertslabor on võimeline läbi viima uuringuid ja seda anonüümselt. Inimesele määratakse spetsiaalne number, millega seejärel tulemused seotakse. See teave laaditakse asutuse veebisaidile üles kasutaja isiklikul kontol.

Kui palju maksab PCR-testi tegemine?

See uuringute läbiviimise meetod on üsna kallis. See on tingitud asjaolust, et PCR-i on vaja läbi viia uusimal meditsiiniseadmel, manipuleerimine nõuab spetsialistidelt piisavaid teadmisi.

Kiire küsimus: kui palju maksab inimesel HIV-i PCR-testi tegemine? See nõuab umbes 56-60 dollarit.

Analüüsi läbiviimine

HIV-i PCR-testi läbiviimine hõlmab:

• vereproovide võtmine uuringuteks;
• täiendav spermaproovide võtmine mehelt ja suguelundite sekretsioonist naiselt.

Tähelepanu! Selle tulemusena võimaldab test arstidel määrata patsiendi seisundi jälgimiseks suurt viiruskoormust.

Selle HIV-testi muud omadused, mida tuleb arvestada:

• paar päeva enne analüüsi peaks patsient vähendama rasvaste toitude hulka dieedis;
• vereproovid võetakse tühja kõhuga;
• lõhestatud bioloogilistele materjalidele lisatakse spetsiaalses reaktoris erinevaid infektsioone sünteesivad ensüümid;
• analüüs viiakse läbi mitmes etapis, kuna molekulide jagunemine toimub aritmeetilises progressioonis. Spetsiaalne programm võrdleb HIV tuvastamiseks suurt hulka rakustruktuure.

Täpsed diagnostikameetodid, mis hõlmavad PCR-i, on kallid, kuid võimaldavad HIV-i varakult tuvastada. Selliste patoloogiate ravis on kõige olulisem õige ja õigeaegne diagnoos, mis võib parandada inimese elukvaliteeti ja selle kestust.

Üheks kõige täpsemaks ja usaldusväärsemaks molekulaargeneetilise diagnostika meetodiks peetakse PCR-i ehk polümeraasi ahelreaktsiooni. See meetod võimaldab diagnoosida patsiendil erinevat tüüpi pärilikke ja nakkuslikke haigusi.

PCR - uuring võimaldab teil diagnoosida ühte sellistest keerukatest haigustest, mida on raske ravida. HIV-i PCR-i usaldusväärsus õigustab end vaid 80 juhul 100-st.

Peamiseks viisiks HIV-nakkuse diagnoosimiseks inimkehas peetakse tema verd, see tähendab, et tehakse selle haiguse testimine. Lihtsaim ja levinum viis diagnoosimiseks on veenivere võtmine ja selle läbiviimine spetsiaalses laboris. Muidugi võib saadud positiivne tulemus olla vale, seetõttu kontrollitakse seda referentlaboris täpsemalt uurimismeetodil uuesti.

Polümeraasi ahelreaktsiooni peetakse üsna kulukaks protseduuriks ja selle rakendamine nõuab spetsiaalset varustust ja kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste. Just sel põhjusel ei ole see elanikkonna seas laialdaselt levinud.

PCR-analüüsi kasutamine HIV-i diagnoosimisel võimaldab teil saada täpse ja usaldusväärse tulemuse haiguse esinemise kohta, kuid see sõltub sageli patsiendi enda ettevalmistusest.

PCR-analüüs viiakse läbi järgmistel juhtudel:

1. HIV-nakkuse diagnoosimine vastsündinutel, kes on sündinud AIDS-iga nakatunud emalt.
2. HIV-i kontsentratsiooni kontrollimiseks patsiendi veres
3. Doonori vereanalüüs.

Isegi kui PCR-test näitab positiivset tulemust, ei pane diagnoosi ainult selline test. Enamasti kasutatakse seda vaidluste lahendamise lisameetodina.

Kahjuks ei saa PCR-analüüsi nimetada universaalseks meetodiks, mis annab täpsed tulemused nakkuse olemasolu või puudumise kohta inimkehas. See on tingitud asjaolust, et seda tüüpi uuringud annavad sagedamini kui muud meetodid valepositiivseid tulemusi. Seda diagnostilist meetodit kasutatakse haiguse diagnoosimisel või HIV-nakkuse läbiviimisel. Seda kasutatakse peamiselt AIDS-i viiruse diagnoosimise abimeetodina.

Vaatamata valepositiivse tulemuse võimalusele on sellisel HIV-testil siiski mitmeid eeliseid võrreldes teiste diagnostikameetoditega. PCR-analüüsi saab teha juba 11-15 päeva pärast väidetava nakatumise kuupäeva ja kõik muud meetodid võimaldavad hinnata AIDS-i viiruse esinemist inimkehas alles pärast pikka aega. See lahknevus on seletatav asjaoluga, et enamik HIV-i skriiningteste põhineb viiruse määramisel, mille moodustumine toimub kolme kuu jooksul.

Peamine erinevus PCR-uuringu ja muude diagnostikameetodite vahel seisneb selles, et see ei tuvasta viirust, vaid viiruse enda olemasolu patsiendi kehas.

Just sel põhjusel võib polümeeri ahelreaktsiooni meetodit nimetada ideaalseks, kui on vaja varakult avastada. Lisaks on võimalik sellist meetodit kasutada juhul, kui antikehade olemasolu ei saa olla usaldusväärne näitaja.

Lisateavet HIV-uuringute kohta leiate videost.

Kui on vaja tuvastada inimkeha patoloogia aste või raskusaste, kasutavad nad PCR-uuringut kvantitatiivsel viisil. Just tema võimaldab teil saada teavet nakkuse kontsentratsiooni taseme kohta patsiendi kehas. Haiguse progresseerumisega kaasneb viiruse kontsentratsiooni järkjärguline tõus ja kvantitatiivne PCR-diagnostika võimaldab kindlaks teha infektsiooni staadiumi ja käimasoleva efektiivsuse. "Viiruskoormuse" diagnoosimine enne haiguse diagnoosimist ja pärast ravi võimaldab teha järelduse ravi efektiivsuse kohta.

Muud HIV-i diagnoosimise meetodid

Siiani on HIV-nakkuse diagnoosimine standardne protseduur, mis hõlmab erinevat tüüpi diagnostikat:

ELISA testisüsteemid

Sellise sõeluuringuga saab viiruse tuvastada mõne nädala jooksul pärast selle sisenemist inimkehasse. Sellise uuringu eesmärk ei ole kindlaks teha viiruse olemasolu patsiendil, vaid diagnoosida selle vastaste antikehade teket. ELISA teste on mitu põlvkonda, millest igaüks on erineva tundlikkusega. Selline test annab mõnikord tulemusi, mis on seletatav ebaõige töötlemise ja erinevat tüüpi patoloogiate esinemisega patsiendi kehas.

immuunbloteerimine

Kui immuunblotanalüüs näitab positiivset tulemust, võime rääkida HIV-i lõpliku diagnoosi tegemisest. Selle rakendamise peamine meetod on nirotselluloosriba kasutamine, millele kantakse viirusliku päritoluga valgud.

Ekspressmeetodid

Seda peetakse HIV-nakkuse diagnoosimise vallas uudseks ja tulemust saab hinnata mõne minuti jooksul pärast nende läbiviimist. Kõige täpsemad ja usaldusväärsemad tulemused annavad immunokromatograafilised testid, mille kasutamine põhineb kapillaarvoolu põhimõttel.

HIV-nakkuse olemasolust organismis saab rääkida alles pärast ELISA testide kinnitamist IB analüüsiga.

HIV-nakkuse diagnoosimine inimkehas muudab oluliselt tema harjumuspärast elustiili ja suhteid teistega. Analüüside tulemuste säilitamine on meditsiinipersonali kohustus ja ainult patsient otsustab, kellele oma haigusest teatada. PCR on üks diagnostilistest meetoditest, mis suudab tuvastada viiruse olemasolu inimkehas vaid mõne nädalaga.