Mwitikio wa mvua. Mmenyuko wa mvua, aina zake, utaratibu na matumizi Athari za antijeni-antibody na matumizi yake

Majibu ya antijeni yenye antibodies huitwa serological au humoral, kwa sababu antibodies maalum zinazohusika ziko daima katika seramu ya damu.

Athari kati ya kingamwili na antijeni zinazotokea katika kiumbe hai zinaweza kutolewa tena kwenye maabara kwa madhumuni ya uchunguzi.

Athari za kinga za kinga ziliingia katika mazoezi ya kugundua magonjwa ya kuambukiza mwishoni mwa karne ya 19 na mwanzoni mwa karne ya 20.

Matumizi ya athari za kinga kwa madhumuni ya uchunguzi inategemea maalum ya mwingiliano wa antijeni na antibody.

Uamuzi wa muundo wa antijeni wa vijidudu na sumu zao ulifanya uwezekano wa kukuza sio tu utambuzi na sera ya matibabu, lakini pia sera ya utambuzi. Sera ya uchunguzi wa kinga hupatikana kwa chanjo ya wanyama (kwa mfano, sungura). Sera hizi hutumiwa kutambua vijidudu au exotoxins kwa muundo wa antijeni kwa kutumia athari za seroloji (mkusanyiko, mvua, urekebishaji wa nyongeza, hemagglutination ya kupita, n.k.). Sera ya uchunguzi wa kinga iliyotibiwa na fluorochrome hutumiwa kwa uchunguzi wa magonjwa ya kuambukiza kwa njia ya fluorescence ya kinga.

Kwa msaada wa antigens inayojulikana (diagnosticums), inawezekana kuamua kuwepo kwa antibodies katika serum ya damu ya mgonjwa au somo (utambuzi wa serological wa magonjwa ya kuambukiza).

Uwepo wa sera maalum ya kinga (uchunguzi) inakuwezesha kuanzisha aina, aina ya microorganism (kitambulisho cha serological ya microbe na muundo wa antijeni).

Udhihirisho wa nje wa matokeo ya athari za serological inategemea hali ya kuweka kwake na hali ya kisaikolojia ya antijeni.

Antijeni za corpuscular hutoa uzushi wa agglutination, lysis, fixation inayosaidia, immobilization.

Antijeni mumunyifu hutoa hali ya mvua, neutralization.

Katika mazoezi ya maabara, kwa madhumuni ya uchunguzi, athari za agglutination, mvua, neutralization, fixation inayosaidia, kizuizi cha hemagglutination, nk hutumiwa.

Mmenyuko wa agglutination (RA)

Kutokana na maalum yake, urahisi wa kuweka na maandamano, mmenyuko wa agglutination umeenea katika mazoezi ya microbiological kwa uchunguzi wa magonjwa mengi ya kuambukiza: homa ya typhoid na paratyphoid (majibu ya Vidal), typhus (Weigl reaction), nk.

Mmenyuko wa agglutination unategemea umaalumu wa mwingiliano wa antibodies (agglutinins) na microbial nzima au seli nyingine (agglutinogens). Kama matokeo ya mwingiliano huu, chembe huundwa - agglomerates ambayo hupita (agglutinate).

Bakteria hai na wafu, spirochetes, fungi, protozoa, rickettsia, pamoja na erythrocytes na seli nyingine zinaweza kushiriki katika mmenyuko wa agglutination.

Mmenyuko huendelea kwa awamu mbili: ya kwanza (isiyoonekana) ni maalum, uunganisho wa antigen na antibodies, pili (inayoonekana) sio maalum, kuunganishwa kwa antigens, i.e. malezi ya agglutinate.

Agglutinate huundwa wakati kituo kimoja amilifu cha kingamwili chenye bivalent kimeunganishwa na kikundi kibainishi cha antijeni.

Mmenyuko wa agglutination, kama mmenyuko wowote wa serological, unaendelea mbele ya elektroliti.

Nje, udhihirisho wa mmenyuko mzuri wa agglutination ni mbili. Katika microbes zisizo na flagellated, ambazo zina O-antijeni ya somatic tu, seli za microbial wenyewe hushikamana moja kwa moja. Agglutination vile inaitwa fine-grained. Inatokea ndani ya masaa 18-22.

Vijiumbe vidogo vilivyo na alama vina antijeni mbili - antijeni ya O-somatic na H-antijeni ya bendera. Ikiwa seli zitashikamana na flagella, flakes kubwa huru hutengenezwa na mmenyuko huo wa agglutination huitwa coarse-grained. Inakuja ndani ya masaa 2-4.

Mmenyuko wa agglutination unaweza kuweka wote kwa madhumuni ya uamuzi wa ubora na upimaji wa antibodies maalum katika seramu ya damu ya mgonjwa, na kwa madhumuni ya kuamua aina ya pathogen iliyotengwa.

Mmenyuko wa agglutination unaweza kuwekwa katika toleo la kina, ambalo hukuruhusu kufanya kazi na seramu iliyopunguzwa kwa kiwango cha utambuzi, na kwa lahaja ya kuanzisha athari ya kiashiria, ambayo inaruhusu, kimsingi, kugundua antibodies maalum au kuamua spishi za pathojeni.

Wakati wa kuanzisha mmenyuko wa kina wa agglutination, ili kuchunguza antibodies maalum katika seramu ya damu ya somo, serum ya mtihani inachukuliwa kwa dilution ya 1:50 au 1:100. Hii ni kutokana na ukweli kwamba katika seramu nzima au iliyopunguzwa kidogo, antibodies ya kawaida inaweza kuwa katika viwango vya juu sana, na kisha matokeo ya majibu yanaweza kuwa sahihi. Nyenzo ya mtihani katika lahaja hii ya majibu ni damu ya mgonjwa. Damu inachukuliwa kwenye tumbo tupu au si mapema zaidi ya masaa 6 baada ya chakula (vinginevyo, kunaweza kuwa na matone ya mafuta katika seramu ya damu, na kuifanya kuwa mawingu na haifai kwa utafiti). Seramu ya damu ya mgonjwa kawaida hupatikana katika wiki ya pili ya ugonjwa huo, kukusanya 3-4 ml ya damu bila kuzaa kutoka kwa mshipa wa cubital (kwa wakati huu, kiwango cha juu cha antibodies maalum kinajilimbikizia). Kiini cha uchunguzi kilichotayarishwa kutoka kwa seli zilizouawa lakini ambazo hazijaharibiwa za spishi mahususi zenye muundo maalum wa antijeni hutumiwa kama antijeni inayojulikana.

Wakati wa kuanzisha mmenyuko wa kina wa agglutination ili kuamua aina, aina ya pathojeni, antijeni ni pathojeni hai iliyotengwa na nyenzo za mtihani. Inajulikana ni antibodies zilizomo katika serum ya uchunguzi wa kinga.

Seramu ya uchunguzi wa kinga hupatikana kutoka kwa damu ya sungura iliyochanjwa. Baada ya kuamua titer (dilution ya juu ambayo antibodies hugunduliwa), seramu ya uchunguzi hutiwa ndani ya ampoules na kuongeza ya kihifadhi. Seramu hii hutumiwa kutambua na muundo wa antijeni wa pathogen iliyotengwa.

Wakati wa kuanzisha majibu ya takriban ya agglutination kwenye slaidi ya kioo, sera yenye mkusanyiko wa juu wa antibodies hutumiwa (katika dilutions ya si zaidi ya 1:10 au 1:20).

Kwa pipette ya Pasteur, tone moja la salini na seramu hutumiwa kwenye kioo. Kisha kiasi kidogo cha microbes huongezwa kwa kila tone katika kitanzi na kuchanganywa kabisa mpaka kusimamishwa kwa homogeneous kunapatikana. Dakika chache baadaye, na majibu mazuri, nguzo inayoonekana ya vijidudu (granularity) inaonekana kwenye tone na seramu, tope sare inabaki kwenye kushuka kwa udhibiti.

Kadirio la mmenyuko wa agglutination mara nyingi hutumika kuamua spishi za vijidudu vilivyotengwa kutoka kwa nyenzo zinazochunguzwa. Matokeo yaliyopatikana inaruhusu sisi takribani kuharakisha utambuzi wa ugonjwa huo. Ikiwa mmenyuko hauonekani vizuri kwa jicho la uchi, inaweza kuzingatiwa chini ya darubini. Katika kesi hii, inaitwa microagglutination.

Mmenyuko wa takriban wa agglutination, ambao huwekwa na tone la damu ya mgonjwa na antijeni inayojulikana, inaitwa damu-drip.

Athari ya hemagglutination isiyo ya moja kwa moja au passive (IPHA)

Mmenyuko huu ni nyeti zaidi kuliko mmenyuko wa agglutination na hutumiwa katika uchunguzi wa maambukizi yanayosababishwa na bakteria, rickettsiae, protozoa na microorganisms nyingine.

RPGA hukuruhusu kugundua mkusanyiko mdogo wa antibodies.

Mwitikio huu unahusisha erithrositi ya kondoo au erithrositi ya binadamu yenye damu ya kundi I, iliyohamasishwa na antijeni au kingamwili.

Ikiwa antibodies hugunduliwa katika seramu ya mtihani, basi erythrocytes iliyohamasishwa na antigens (erythrocyte diagnosticum) hutumiwa.

Katika baadhi ya matukio, ikiwa ni muhimu kuamua antigens mbalimbali katika nyenzo za mtihani, erythrocytes iliyohamasishwa na globulini za kinga hutumiwa.

Matokeo ya RPHA yanazingatiwa na asili ya sediment ya erythrocyte.

Matokeo ya mmenyuko huchukuliwa kuwa chanya, ambayo erythrocytes hufunika sawasawa chini ya bomba la mtihani (mwavuli inverted).

Kwa mmenyuko mbaya, erythrocytes kwa namna ya diski ndogo (kifungo) iko katikati ya chini ya tube ya mtihani.

Mmenyuko wa mvua (RP)

Tofauti na mmenyuko wa agglutination, antijeni ya mmenyuko wa mvua (precipitinogen) ni misombo ya mumunyifu, ukubwa wa chembe ambazo hukaribia ukubwa wa molekuli.

Hizi zinaweza kuwa protini, tata za protini na lipids na wanga, dondoo za microbial, lysates mbalimbali au filtrates ya tamaduni za microbial.

Kingamwili ambazo huamua mali ya serum ya kinga huitwa precipitins, na bidhaa ya majibu katika mfumo wa mvua inaitwa precipitate.

Sera ya uvunaji hupatikana kwa chanjo bandia ya mnyama aliye na vijiumbe hai au vilivyouawa, pamoja na lysates na dondoo mbalimbali za seli za vijidudu.

Kwa chanjo ya bandia, inawezekana kupata sera ya mvua kwa protini yoyote ya kigeni ya asili ya mimea na wanyama, na pia haptens wakati mnyama amechanjwa na antijeni kamili iliyo na hapten hii.

Utaratibu wa mmenyuko wa mvua ni sawa na ule wa mmenyuko wa agglutination. Kitendo cha kunyunyiza sera kwenye antijeni ni sawa na kitendo cha sera ya agglutinating. Katika visa vyote viwili, chini ya ushawishi wa seramu ya kinga na elektroliti, chembe za antijeni zilizosimamishwa kwenye kioevu huongezeka (kupungua kwa kiwango cha utawanyiko). Hata hivyo, kwa mmenyuko wa agglutination, antijeni inachukuliwa kwa namna ya kusimamishwa kwa microbial turbid homogeneous (kusimamishwa), na kwa majibu ya mvua - kwa namna ya ufumbuzi wa uwazi wa colloidal.

Athari ya kunyesha ni nyeti sana na inaweza kutambua kiasi kidogo cha antijeni.

Mmenyuko wa mvua hutumiwa katika mazoezi ya maabara kwa utambuzi wa tauni, tularemia, anthrax, meningitis na magonjwa mengine, na pia katika uchunguzi wa kimatibabu.

Katika mazoezi ya usafi, mmenyuko huu huamua uwongo wa bidhaa za chakula.

Mmenyuko wa mvua unaweza kufanywa sio tu katika zilizopo za mtihani, lakini pia katika gel, na kwa masomo mazuri ya kinga ya antijeni, njia ya immunophoresis hutumiwa.

Mmenyuko wa mvua wa gel ya agar, au njia ya kueneza ya mvua, hukuruhusu kusoma kwa undani muundo wa mchanganyiko wa antijeni mumunyifu wa maji. Ili kuanzisha majibu, gel (nusu-kioevu au agar denser) hutumiwa. Kila sehemu inayounda antijeni huenea kuelekea kingamwili inayolingana kwa kiwango tofauti. Kwa hiyo, complexes ya antijeni mbalimbali na antibodies sambamba ziko katika sehemu tofauti za gel, ambapo huunda mistari ya mvua. Kila moja ya mistari inalingana na tata moja tu ya antijeni-antibody. Mmenyuko wa mvua kwa kawaida huwekwa kwenye joto la kawaida.

Njia ya immunophoresis imeenea katika utafiti wa muundo wa antijeni wa seli ya microbial.

Mchanganyiko wa antijeni huwekwa kwenye kisima kilicho katikati ya shamba la agar kilichomwagika kwenye sahani. Mkondo wa umeme hupitishwa kupitia gel ya agar. Antijeni mbalimbali zilizojumuishwa katika hoja tata kama matokeo ya hatua ya sasa, kulingana na uhamaji wao wa electrophoretic. Baada ya mwisho wa electrophoresis, seramu maalum ya kinga huletwa ndani ya mfereji iko kando ya sahani na kuwekwa kwenye chumba cha unyevu. Mistari ya mvua huonekana kwenye tovuti za uundaji wa tata ya antijeni-antibody.

Mmenyuko wa neutralization wa exotoxin na antitoxin (RN)

Mmenyuko huo ni msingi wa uwezo wa seramu ya antitoxic kugeuza hatua ya exotoxin. Inatumika kwa titration ya sera ya antitoxic na uamuzi wa exotoxin.

Wakati seramu inapopunguzwa, kipimo fulani cha sumu inayofanana huongezwa kwa dilutions tofauti za seramu ya antitoxic. Kwa neutralization kamili ya antijeni na kutokuwepo kwa antibodies zisizotumiwa, flocculation ya awali hutokea.

Mmenyuko wa flocculation unaweza kutumika sio tu kwa titration ya serum (kwa mfano, diphtheria), lakini pia kwa titration ya sumu na toxoid.

Mwitikio wa kutoweka kwa sumu na antitoxin ni muhimu sana kwa vitendo kama njia ya kuamua shughuli ya sera ya matibabu ya antitoxic. Antijeni katika mmenyuko huu ni exotoxin ya kweli.

Nguvu ya seramu ya antitoxic imedhamiriwa na vitengo vya kawaida vya AE.

AU 1 ya seramu ya antitoxic ya diphtheria ni kiasi kinachopunguza DLM 100 ya exotoxin ya diphtheria. AU 1 ya seramu ya botulinamu ni kiasi ambacho hupunguza 1000 DLM ya sumu ya botulinum.

mmenyuko wa neutralization ili kuamua aina au aina ya exotoxin (katika utambuzi wa tetanasi, botulism, diphtheria, nk) inaweza kufanywa katika vitro (kulingana na Ramon), na wakati wa kuamua sumu ya seli za microbial - katika gel (kulingana na Ouchterlony).

Majibu ya Lysis (RL)

Moja ya mali ya kinga ya seramu ya kinga ni uwezo wake wa kufuta microbes au vipengele vya seli vinavyoingia ndani ya mwili.

Kingamwili maalum zinazosababisha kufutwa (lysis) ya seli huitwa lysins. Kulingana na asili ya antijeni, wanaweza kuwa bacteriolysins, cytolysins, spirochetolizins, hemolysins, nk.

Lysines zinaonyesha athari zao tu mbele ya sababu ya ziada - inayosaidia.

Kikamilisho, kama sababu ya kinga isiyo maalum ya humoral, hupatikana katika karibu maji yote ya mwili, isipokuwa maji ya ubongo na maji ya chumba cha mbele cha jicho. Maudhui ya ziada ya juu na ya mara kwa mara yalibainishwa katika seramu ya damu ya binadamu na mengi yake katika seramu ya damu ya nguruwe. Katika mamalia wengine, yaliyomo katika nyongeza katika seramu ya damu ni tofauti.

Kikamilisho ni mfumo mgumu wa protini za whey. Haina msimamo na huanguka kwa digrii 55 kwa dakika 30. Kwa joto la kawaida, nyongeza huharibiwa ndani ya masaa mawili. Ni nyeti sana kwa kutetemeka kwa muda mrefu, kwa hatua ya asidi na mionzi ya ultraviolet. Walakini, nyongeza huhifadhiwa kwa muda mrefu (hadi miezi sita) katika hali kavu kwa joto la chini.

Kusaidia kukuza lysis ya seli microbial na seli nyekundu za damu.

Tofautisha majibu ya bacteriolysis na hemolysis.

Kiini cha mmenyuko wa bacteriolysis ni kwamba wakati seramu maalum ya kinga inapounganishwa na seli zake za kuishi za homologous mbele ya inayosaidia, microbes ni lysed.

Mmenyuko wa hemolysis huwa na ukweli kwamba wakati erythrocytes inakabiliwa na maalum, kinga kwao serum (hemolytic) mbele ya inayosaidia, erythrocytes kufuta, i.e. hemolysis.

Mmenyuko wa hemolysis katika mazoezi ya maabara hutumiwa kuamua tairi inayosaidia, na pia kuzingatia matokeo ya vipimo vya kurekebisha utambuzi wa Borde-Jangu na Wassermann.

Titer inayosaidia ni kiasi kidogo zaidi ambacho husababisha lysis ya seli nyekundu za damu ndani ya dakika 30 katika mfumo wa hemolytic kwa kiasi cha 2.5 ml. Mmenyuko wa lysis, kama athari zote za serological, hutokea mbele ya elektroliti.

Majibu ya kurekebisha (CFR)

Mmenyuko huu hutumiwa katika masomo ya maabara kugundua antibodies katika seramu ya damu kwa maambukizo anuwai, na pia kutambua pathojeni kwa muundo wa antijeni.

Jaribio la urekebishaji unaosaidia ni mtihani mgumu wa serolojia na una sifa ya unyeti wa juu na maalum.

Kipengele cha mmenyuko huu ni kwamba mabadiliko katika antijeni wakati wa mwingiliano wake na antibodies maalum hutokea tu mbele ya inayosaidia. Kijazo hutangazwa tu kwenye changamano ya antibody-antijeni. Kingamwili-antijeni changamani huundwa tu ikiwa kuna uhusiano kati ya antijeni na kingamwili iliyopo kwenye seramu.

Kusaidia adsorption kwenye tata ya antijeni-antibody inaweza kuathiri hatima ya antijeni kwa njia tofauti, kulingana na sifa zake.

Baadhi ya antijeni hupitia mabadiliko makali ya kimaadili chini ya hali hizi, hadi kufutwa (hemolysis, jambo la Isaev-Pfeifer, hatua ya cytolytic). Wengine hubadilisha kasi ya harakati (treponema immobilization). Bado wengine hufa bila mabadiliko makubwa ya uharibifu (athari ya baktericidal au cytotoxic). Hatimaye, adsorption inayosaidia inaweza kuambatana na mabadiliko katika antijeni ambayo yanapatikana kwa urahisi kwa uchunguzi (Bordet-Jangu, athari za Wasserman).

Kulingana na utaratibu, RSC inaendelea katika awamu mbili:
a) Awamu ya kwanza ni uundaji wa changamano cha antijeni-kingamwili na utangazaji kwenye changamano hii inayosaidia. Matokeo ya awamu haionekani kwa macho.
b) Awamu ya pili ni mabadiliko katika antijeni chini ya ushawishi wa antibodies maalum mbele ya inayosaidia. Matokeo ya awamu yanaweza kuonekana au yasionekane.

Katika kesi wakati mabadiliko katika antijeni yanabaki kuwa hayawezi kufikiwa kwa uchunguzi wa kuona, ni muhimu kutumia mfumo wa pili ambao hufanya kama kiashiria ambacho hukuruhusu kutathmini hali ya nyongeza na kuhitimisha juu ya matokeo ya majibu.

Mfumo huu wa kiashiria unawakilishwa na vipengele vya mmenyuko wa hemolysis, ambayo ni pamoja na erithrositi ya kondoo na seramu ya hemolytic iliyo na antibodies maalum kwa erythrocytes (hemolysins), lakini isiyo na inayosaidia. Mfumo huu wa kiashiria huongezwa kwenye mirija ya majaribio saa moja baada ya kuweka CSC kuu.

Ikiwa athari ya urekebishaji inayosaidia ni chanya, basi tata ya antibody-antijeni huundwa ambayo adsorbs hukamilisha yenyewe. Kwa kuwa nyongeza hutumiwa kwa kiasi kinachohitajika kwa mmenyuko mmoja tu, na lysis ya erithrositi inaweza kutokea tu mbele ya inayosaidia, basi wakati inapotangazwa kwenye tata ya antijeni-antibody, seli nyekundu ya seli katika mfumo wa hemolytic (kiashiria) haitatokea. Ikiwa mmenyuko wa urekebishaji unaosaidia ni hasi, tata ya antijeni-antibody haijaundwa, inayosaidia inabaki bure, na wakati mfumo wa hemolytic unaongezwa, lysis ya erythrocyte hutokea.

Mmenyuko wa Hemagglutination (RHA)

Katika mazoezi ya maabara, athari mbili tofauti za hemagglutination hutumiwa.

Katika hali moja, mmenyuko wa hemagglutination ni serological. Katika mmenyuko huu, erythrocytes ni agglutinated wakati wa kuingiliana na antibodies sambamba (hemagglutinins). Mmenyuko hutumiwa sana kuamua aina ya damu.

Katika hali nyingine, mmenyuko wa hemagglutination sio serological.

Ndani yake, agglutination ya seli nyekundu za damu husababishwa na antibodies, lakini kwa vitu maalum (hemagglutinins) vinavyotengenezwa na virusi. Kwa mfano, virusi vya mafua huongeza erythrocytes ya kuku, virusi vya polio huongeza nyani. Mmenyuko huu hufanya iwezekanavyo kuhukumu uwepo wa virusi fulani katika nyenzo za mtihani.

Uhasibu kwa matokeo ya mmenyuko unafanywa na eneo la erythrocytes. Kwa matokeo mazuri, erythrocytes ziko kwa uhuru, zikiweka chini ya tube ya mtihani kwa namna ya "mwavuli inverted". Ikiwa matokeo ni hasi, erythrocytes hukaa chini ya tube ya mtihani na sediment compact ("kifungo").

Mmenyuko wa kuzuia hemagglutination (HITA)

Hii ni mmenyuko wa serological ambayo antibodies maalum ya antiviral, kuingiliana na virusi (antigen), kuipunguza na kuizuia uwezo wa agglutinate seli nyekundu za damu, i.e. kuzuia mmenyuko wa hemagglutination.

Upekee wa juu wa mmenyuko wa kuzuia agglutination hufanya iwezekanavyo kuamua aina na aina ya virusi au kuchunguza antibodies maalum katika seramu ya mtihani.

Mmenyuko wa Immunofluorescence (RIF)

Mmenyuko huo unatokana na ukweli kwamba sera ya kinga, ambayo fluorochromes huunganishwa na kemikali, wakati wa kuingiliana na antijeni zinazofanana, huunda tata maalum ya mwanga, inayoonekana kwenye darubini ya fluorescent. Seramu zilizotibiwa na fluorochromes huitwa luminescent.

Njia hiyo ni nyeti sana, rahisi, hauhitaji kutengwa kwa utamaduni safi, kwa sababu microorganisms hupatikana moja kwa moja kwenye nyenzo za mtihani. Matokeo yanaweza kupatikana dakika 30 baada ya kutumia serum ya luminescent kwa maandalizi.

Mmenyuko wa fluorescence ya kinga hutumiwa katika utambuzi wa kasi wa maambukizi mengi.

Katika mazoezi ya maabara, tofauti mbili za mmenyuko wa immunofluorescence hutumiwa: moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja.

Njia ya moja kwa moja ni wakati antijeni inasindika mara moja na serum ya fluorescent ya kinga.

Njia isiyo ya moja kwa moja ya fluorescence ya kinga inajumuisha ukweli kwamba dawa hiyo inatibiwa hapo awali na seramu ya uchunguzi wa kinga ya kawaida (isiyo ya fluorescent) maalum kwa antijeni inayotaka. Ikiwa maandalizi yana antigen maalum kwa serum hii ya uchunguzi, basi tata ya "antigen-antibody" huundwa, ambayo haiwezi kuonekana. Ikiwa maandalizi haya yatatibiwa zaidi na seramu ya luminescent iliyo na kingamwili maalum kwa globulini za serum katika tata ya "antijeni-antibody", kingamwili za luminescent zitatangazwa kwenye globulini za uchunguzi wa serum na, kwa sababu hiyo, mtaro unaowaka wa seli ya microbial unaweza kuonekana katika darubini ya luminescent.

Athari ya uhamasishaji (RI)

Uwezo wa seramu ya kinga ya kuzuia microorganisms motile inahusishwa na antibodies maalum ambayo hufanya mbele ya inayosaidia. Kingamwili zisizohamishika zimepatikana katika kaswende, kipindupindu na magonjwa mengine ya kuambukiza.

Huu ndio ulikuwa msingi wa maendeleo ya mtihani wa immobilization ya treponema, ambayo, kwa unyeti wake na maalum, ni bora kuliko vipimo vingine vya serological vinavyotumiwa katika uchunguzi wa maabara ya kaswende.

Jaribio la Kupunguza Udhibiti wa Virusi (RNV)

Katika seramu ya damu ya watu ambao wamechanjwa au wamekuwa na ugonjwa wa virusi, antibodies hupatikana ambayo inaweza kuondokana na mali ya kuambukiza ya virusi. Kingamwili hizi hugunduliwa kwa kuchanganya seramu na virusi vinavyofaa na kisha kudunga mchanganyiko huo katika wanyama wa maabara wanaoshambuliwa au kuambukiza tamaduni za seli. Kulingana na maisha ya wanyama au kutokuwepo kwa athari ya cytopathic ya virusi, uwezo wa neutralizing wa antibodies huhukumiwa.

Mwitikio huu hutumiwa sana katika virology kuamua aina au aina ya virusi na titer ya neutralizing antibodies.

Njia za kisasa za kugundua magonjwa ya kuambukiza ni pamoja na njia ya immunofluorescent ya kugundua antijeni na kingamwili, radioimmune, immunoassay ya enzyme, njia ya kuzuia kinga, kugundua antijeni na kingamwili kwa kutumia kingamwili za monoclonal, njia ya kugundua antijeni kwa kutumia mmenyuko wa mnyororo wa polymerase (PCR - utambuzi). na kadhalika.

Katika hali ya tope, inayoitwa precipitate. Inaundwa kwa kuchanganya antigens na antibodies kwa kiasi sawa; ziada ya mmoja wao hupunguza kiwango cha malezi ya tata ya kinga. Mmenyuko wa mvua huwekwa kwenye mirija ya majaribio (mmenyuko wa mvua ya pete), katika jeli, vyombo vya habari vya virutubisho, nk. Aina za mmenyuko wa mvua katika gel ya nusu-kioevu ya agar au agarose hutumiwa sana: Ouchterlony immunodiffusion, immunodiffusion radial, immunoelectrophoresis, nk. .
Mwitikio wa mvua ya pete. Mmenyuko unafanywa katika mirija nyembamba ya kunyunyizia: antijeni ya mumunyifu imewekwa kwenye seramu ya kinga. Kwa uwiano bora wa antijeni na antibodies, pete ya opaque ya precipitate huundwa kwenye mpaka wa ufumbuzi huu wawili (Mchoro 7.50). Ikiwa dondoo za tishu zilizochemshwa na kuchujwa hutumiwa kama antijeni katika mmenyuko, basi mmenyuko kama huo huitwa mmenyuko wa thermoprecipitation (Ascoli reaction, ambayo anthrax hapten hugunduliwa).

Mchele. 7.50.

Ouchterlony majibu ya immunodiffusion mara mbili.

Ili kuanzisha majibu, gel ya agar iliyoyeyuka hutiwa kwenye safu nyembamba kwenye sahani ya kioo, na baada ya kuimarisha, mashimo hukatwa ndani yake. Antigens na sera ya kinga huwekwa tofauti katika visima vya gel, ambayo huenea kwa kila mmoja. Katika hatua ya mkutano kwa uwiano sawa, huunda precipitate kwa namna ya bendi nyeupe (Mchoro 7.51). Katika mifumo ya multicomponent, mistari kadhaa ya precipitate inaonekana kati ya visima na antigens na antibodies; katika antijeni zinazofanana, mistari ya mteremko huungana; katika antijeni zisizofanana, zinaingiliana.

Mchele. 7.51

Seramu ya kinga na gel ya agar iliyoyeyuka hutiwa sawasawa kwenye glasi. Baada ya kuimarishwa katika gel, visima hufanywa ndani ambayo antijeni (Ag) huwekwa katika dilutions mbalimbali. Antijeni, ikisambaa ndani ya jeli, huunda maeneo ya mvua ya mwaka karibu na visima na kingamwili. Kipenyo cha pete ya mvua ni sawia na mkusanyiko wa antijeni (Mchoro 7.52). Mmenyuko hutumiwa kuamua katika immunoglobulins ya serum ya madarasa mbalimbali, vipengele vya mfumo wa kukamilisha, nk.

Mchele. 7.52.

Mchanganyiko wa electrophoresis na immunoprecipitation: mchanganyiko wa antijeni huletwa ndani ya visima vya gel na kutengwa katika gel na electrophoresis, kisha serum ya kinga huletwa kwenye groove ya gel sambamba na maeneo ya electrophoresis. Antibodies ya seramu ya kinga huenea ndani ya gel na kuunda mstari wa mvua kwenye tovuti ya "mkutano" na antijeni (Mchoro 7.53).

Mchele. 7.53.

Mmenyuko wa mtiririko (kulingana na Ramon) (kutoka lat. floccus- pamba flakes) - kuonekana kwa opalescence au molekuli flaky (immunoprecipitation) katika tube mtihani wakati wa sumu-antitoxin au anatoxin-antitoxin mmenyuko (Mchoro 7.54). Inatumika kuamua shughuli ya seramu ya antitoxic au toxoid.

Mchele. 7.54.

Matatizo ya wakala wa causative wa diphtheria - C. diphtheriae inaweza kuwa na toxigenic (kuzalisha exotoxin) na isiyo ya sumu. Uundaji wa exotoxin inategemea uwepo katika bakteria ya prophage inayobeba jeni ya sumu inayosimba uundaji wa exotoxin. Katika kesi ya ugonjwa, pekee zote zinajaribiwa kwa sumu - uzalishaji wa exotoxin ya diphtheria kwa kutumia mmenyuko wa mvua katika agar (Mchoro 7.55).

Mchele. 7.55

athari za immunodiagnostic. Miitikio na miitikio ya antijeni-antibody yenye viambajengo vilivyo na lebo. Tumia kwa ajili ya kutambua microorganisms na uchunguzi wa magonjwa ya kuambukiza.

Athari za kinga hutumiwa katika masomo ya uchunguzi na immunological kwa watu wagonjwa na wenye afya. Kwa kusudi hili, tumia njia za serological(kutoka lat. seramu - seramu na nembo - mafundisho), i.e., njia za kusoma kingamwili na antijeni kwa kutumia athari za antijeni-antibody zilizoamuliwa katika seramu ya damu na maji mengine, pamoja na tishu za mwili.

Kugundua antibodies dhidi ya antigens ya pathogen katika serum ya damu ya mgonjwa hufanya iwezekanavyo kutambua ugonjwa huo. Masomo ya serological pia hutumiwa kutambua antijeni za microbial, vitu mbalimbali vya biolojia, vikundi vya damu, antijeni za tishu na tumor, complexes za kinga, vipokezi vya seli, nk.

Wakati microbe imetengwa na mgonjwa, pathojeni hutambuliwa kwa kujifunza mali zake za antijeni kwa kutumia sera ya uchunguzi wa kinga, yaani, sera ya damu kutoka kwa wanyama walio na kingamwili maalum. Hii kinachojulikana kitambulisho cha serological microorganisms.

Katika microbiolojia na kinga, agglutination, mvua, athari za neutralization, athari zinazohusisha kukamilisha, kwa kutumia kingamwili na antijeni (radioimmunological, immunoassay ya enzyme, mbinu za immunofluorescence) hutumiwa sana. Majibu yaliyoorodheshwa hutofautiana katika athari iliyosajiliwa na mbinu ya kuweka, hata hivyo, yote ni ya msingi. vans juu ya mmenyuko wa mwingiliano wa antijeni na kingamwili na hutumiwa kugundua kingamwili na antijeni. Athari za kinga ni sifa ya unyeti wa juu na maalum.

Kanuni na mipango ya athari kuu ya immunodiagnostic hutolewa hapa chini. Mbinu ya kina ya kuanzisha athari imetolewa. miongozo ya vitendo kwa immunodiagnostics.

Mmenyuko wa agglutination - RA(kutoka lat. aggluti- taifa- kuunganisha) - mmenyuko rahisi ambao antibodies hufunga antijeni za corpuscular (bakteria, erythrocytes au seli nyingine, chembe zisizo na antijeni zilizowekwa juu yao, pamoja na macromolecular aggregates). Inatokea mbele ya electrolytes, kwa mfano, wakati ufumbuzi wa kloridi ya sodiamu ya isotonic huongezwa.

Tofauti mbalimbali za mmenyuko wa agglutination hutumiwa: kupanuliwa, takriban, isiyo ya moja kwa moja, nk. Mmenyuko wa agglutination unaonyeshwa kwa kuundwa kwa flakes au sediment.

RA inatumika kwa:

uamuzi wa antibodies katika seramu ya damu ya wagonjwa, kwa mfano, na brucellosis (Wright, athari za Heddelson), homa ya typhoid na paratyphoid (majibu ya Vidal) na magonjwa mengine ya kuambukiza;

uamuzi wa pathojeni iliyotengwa na mgonjwa;

uamuzi wa vikundi vya damu kwa kutumia antibodies ya monoclonal dhidi ya allogenes ya erythrocyte.

Kuamua antibodies ya mgonjwa wekammenyuko wa kuongezeka kwa agglutination: ongeza kwa dilutions ya serum ya damu ya mgonjwa uchunguzi(kusimamishwa kwa microbes zilizouawa) na baada ya masaa kadhaa ya incubation saa 37 ° C, dilution ya juu ya serum (serum titer) inajulikana, ambayo agglutination ilitokea, yaani, mvua ya mvua.

Asili na kiwango cha agglutination hutegemea aina ya antijeni na antibodies. Mfano ni mwingiliano wa diagnosticums (O- na R-antijeni) na antibodies maalum. Mmenyuko wa agglutination na O-diagnosticum(bakteria kuuawa na joto, kubakiza thermostable O antijeni) hutokea kwa namna ya agglutination nzuri-grained. Mmenyuko wa agglutination na H-diagnosticum (bakteria waliouawa na formalin, wakibakiza bendera ya joto-labile H-antijeni) ni mbaya na huendelea kwa kasi zaidi.

Ikiwa ni muhimu kuamua pathogen iliyotengwa na mgonjwa, weka mwelekeo wa mmenyuko wa agglutination, kutumia antibodies ya uchunguzi (agglutinating serum), yaani, serotyping ya pathogen hufanyika. Mwitikio wa takriban unafanywa kwenye slaidi ya glasi. Kwa tone la seramu ya agglutinating ya uchunguzi katika dilution ya 1:10 au 1:20 kuongeza utamaduni safi wa pathojeni iliyotengwa na mgonjwa. Udhibiti umewekwa karibu: badala ya seramu, tone la suluhisho la kloridi ya sodiamu hutumiwa. Wakati sediment ya flocculent inaonekana katika tone na serum na microbes, huweka mmenyuko mkubwa wa agglutination katika zilizopo za mtihani na kuongezeka kwa dilutions ya serum agglutinating, ambayo matone 2-3 ya kusimamishwa kwa pathogen huongezwa. Agglutination inazingatiwa na kiasi cha sediment na kiwango cha ufafanuzi wa kioevu. Mmenyuko unachukuliwa kuwa mzuri ikiwa ujumuishaji unabainika katika dilution karibu na titer ya seramu ya utambuzi. Wakati huo huo, udhibiti unazingatiwa: seramu iliyopunguzwa na suluhisho la kloridi ya sodiamu ya isotonic inapaswa kuwa wazi, kusimamishwa kwa microbes katika suluhisho sawa kunapaswa kuwa na mawingu sawa, bila sediment.

Bakteria tofauti zinazohusiana zinaweza kuunganishwa na seramu ya uchunguzi ya agglutinating, na kufanya utambuzi wao kuwa mgumu. Kwa hiyo, kufurahia sera ya adsorbed agglutinating, ambayo kingamwili-mwili-mwili zimeondolewa kwa adsorption na bakteria zao zinazohusiana. Katika sera kama hiyo, antibodies maalum kwa bakteria hii hubaki. Maandalizi ya sera ya utambuzi wa monoreceptor agglutinating kwa njia hii ilipendekezwa na A. Castellani (1902).

Mwitikio wa hemagglutination isiyo ya moja kwa moja (passive). (RNHA, RPGA) inategemea utumiaji wa seli nyekundu za damu zilizo na antijeni au kingamwili zilizowekwa juu ya uso, mwingiliano ambao na antibodies zinazolingana au antijeni za seramu ya damu ya mpira husababisha erithrositi kushikamana na kuanguka chini ya damu. bomba la mtihani au seli katika fomu ya sediment scalloped (Mchoro 13.2). Kwa mmenyuko mbaya, erythrocytes hukaa kwa namna ya "kifungo". Kawaida, kingamwili hugunduliwa katika RNHA kwa kutumia uchunguzi wa erithrositi ya antijeni, ambayo ni erithrositi iliyo na adsorbed. kwenye hizo antijeni. Wakati mwingine tunatumia uchunguzi wa erithrositi ya kingamwili, ambayo kingamwili hutangazwa. Kwa mfano, sumu ya botulinamu inaweza kugunduliwa kwa kuongeza uchunguzi wa botulinum ya antibody ya erithrositi kwake (mtikio huu unaitwa reverse majibu ya hemagglutination isiyo ya moja kwa moja- RONGA). RNHA hutumiwa kutambua magonjwa ya kuambukiza, kuamua homoni ya gonadotropic katika mkojo wakati mimba imeanzishwa, kuchunguza hypersensitivity kwa madawa ya kulevya, homoni, na katika baadhi ya matukio mengine.

Mmenyuko wa coagglutination . Seli za pathojeni zimedhamiriwa kwa kutumia staphylococci, kabla ya kutibiwa na serum ya uchunguzi wa kinga. Protini iliyo na staphylococci LAKINI, kuwa na mshikamano kwa Fc -kipande cha immunoglobulins, antibodies zisizo za adsorb za antimicrobial, ambazo huingiliana na vituo vya kazi na microbes zinazofanana zilizotengwa na wagonjwa. Kama matokeo ya coagglutination, flakes hutengenezwa, yenye staphylococci, antibodies ya serum ya uchunguzi na microbe huamua.

Mmenyuko wa kizuizi cha hemagglutination (RTGA) inategemea blockade, ukandamizaji wa antijeni za virusi na antibodies ya serum ya kinga, kama matokeo ya ambayo virusi hupoteza uwezo wao wa agglutinate seli nyekundu za damu (Mchoro 13.3). RTHA hutumiwa kutambua magonjwa mengi ya virusi, mawakala wa causative ambayo (mafua, surua, rubela, encephalitis inayosababishwa na tick, nk) inaweza kuimarisha erythrocytes ya wanyama mbalimbali.

Mmenyuko wa agglutination kwa kuamua vikundi vya damu kutumika kuanzisha mfumo wa ABO (tazama sehemu ya 10.1.4.1) kwa kutumia agglutination ya erithrositi na antibodies ya serum ya kinga dhidi ya antijeni ya makundi ya damu A (II), B (III). Vidhibiti ni: seramu isiyo na kingamwili, yaani seramu AB (GU) vikundi vya damu; antijeni zilizomo katika erythrocytes ya vikundi A (II), B (III). Udhibiti hasi hauna antijeni, i.e. erythrocytes ya kikundi 0 (I) hutumiwa.

KATIKA athari za agglutination kuamua sababu ya Rh(tazama sehemu ya 10.1.4.1) tumia sera ya anti-Rh (angalau mfululizo mbili tofauti). Katika uwepo wa antijeni ya Rh kwenye membrane ya erythrocytes iliyojifunza, agglutination ya seli hizi hutokea. Erithrositi za kawaida za Rh-chanya na Rh-hasi za vikundi vyote vya damu hutumika kama udhibiti.

Mmenyuko wa agglutination kwa uamuzi wa antibodies ya anti-Rhesus (majibu ya Coombs isiyo ya moja kwa moja)kutumika kwa wagonjwa wenye hemolysis ya intravascular. Katika baadhi ya wagonjwa hawa, antibodies ya anti-Rhesus hupatikana, ambayo haijakamilika, monovalent. Wao huingiliana hasa na erythrocytes ya Rh-chanya, lakini si kusababisha agglutination yao. Uwepo wa antibodies vile haujakamilika imedhamiriwa katika mmenyuko wa Coombs usio wa moja kwa moja. Kwa kufanya hivyo, seramu ya antiglobulini (antibodies dhidi ya immunoglobulins ya binadamu) huongezwa kwenye mfumo wa antibodies ya kupambana na Rh + Rh-chanya erythrocytes, ambayo husababisha agglutination ya erythrocytes (Mchoro 13.4). Kutumia mmenyuko wa Coombs, hali ya kiitolojia inayohusishwa na lysis ya ndani ya mishipa ya erythrocytes ya asili ya kinga hugunduliwa, kwa mfano, ugonjwa wa hemolytic wa mtoto mchanga: erythrocytes ya fetusi ya Rh-chanya huchanganyika na antibodies zisizo kamili kwa sababu ya Rh inayozunguka katika damu, ambayo ilivuka. placenta kutoka kwa mama asiye na Rh.

Athari za kunyesha

mmenyuko wa mvua - RP (kutokamwisho. praeci-pito- precipitate,) ni malezi na mvua ya tata ya antijeni ya molekuli mumunyifu na kingamwili katika mfumo wa tope, inayoitwa. mvua. Inaundwa kwa kuchanganya antigens na antibodies kwa kiasi sawa; ziada ya mmoja wao hupunguza kiwango cha malezi ya tata ya kinga.

Athari za kunyesha huwekwa kwenye mirija ya majaribio (majibu ya mvua ya pete), katika jeli, vyombo vya habari vya virutubisho, n.k. Aina mbalimbali za mmenyuko wa mvua katika gel ya nusu-kioevu ya agar au agarose hutumiwa sana: immunodiffusion mara mbili kulingana na Ouchterlony. immunodiffusion ya radial, immunoelectrophoresis na nk.

Mwitikio wa mvua ya pete . Mmenyuko huo unafanywa katika mirija nyembamba yenye seramu ya kinga, ambayo antijeni ya mumunyifu imewekwa. Kwa uwiano bora wa antijeni na antibodies, pete ya opaque ya precipitate huundwa kwenye mpaka wa ufumbuzi huu wawili (Mchoro 13.5). Kuzidisha kwa antijeni hakuathiri matokeo ya mmenyuko wa mvua ya pete kutokana na uenezaji wa taratibu wa vitendanishi kwenye mpaka wa kioevu. Ikiwa dondoo za maji zilizochemshwa na kuchujwa za viungo au tishu zinatumika kama antijeni kwenye mmenyuko wa mvua ya pete, basi majibu kama hayo huitwa. mmenyuko wa thermoprecipitation-iii (majibu ya Ascoli, na kimeta/

Oukhteruni majibu ya immunodiffusion mara mbili . Ili kuanzisha majibu, gel ya agar iliyoyeyuka hutiwa kwenye safu nyembamba kwenye sahani ya kioo, na baada ya kuimarisha, mashimo ya 2-3 mm kwa ukubwa hukatwa ndani yake. Antijeni na sera za kinga huwekwa tofauti katika visima hivi, ambavyo vinaenea kwa kila mmoja. Katika hatua ya mkutano kwa uwiano sawa, huunda precipitate kwa namna ya bendi nyeupe. Katika mifumo ya vipengele vingi, mistari kadhaa ya precipitate inaonekana kati ya visima na antigens tofauti na antibodies ya serum; kwa antijeni zinazofanana, mistari ya mvua huunganisha; kwa wale wasiofanana, wanaingiliana (Mchoro 13.6).

Mmenyuko wa immunodiffusion ya radial . Seramu ya kinga na gel ya agar iliyoyeyuka hutiwa sawasawa kwenye glasi. Baada ya kuimarishwa katika gel, visima hufanywa ndani ambayo antijeni huwekwa katika dilutions mbalimbali. Antijeni, inayoenea ndani ya gel, huunda maeneo ya mvua ya pete karibu na visima na kingamwili (Mchoro 13.7). Kipenyo cha pete ya mvua ni sawia na ukolezi wa antijeni. Mmenyuko hutumiwa kuamua viwango vya damu vya immunoglobulins ya madarasa mbalimbali, vipengele vya mfumo wa kukamilisha, nk.

Immunoelectrophoresis- mchanganyiko wa njia ya electrophoresis na immunoprecipitation: mchanganyiko wa antigens huletwa ndani ya visima vya gel na kutengwa katika gel kwa kutumia electrophoresis. Kisha, sambamba na maeneo ya electrophoresis, seramu ya kinga huletwa ndani ya groove, antibodies ambayo, inaenea ndani ya gel, huunda mahali pa mkutano na antijeni ya mstari wa mvua.

mmenyuko wa flocculation(kulingana na Ramon) (kutoka lat. floccus- pamba flakes) - kuonekana kwa opalescence au flocculent molekuli (immunoprecipitation) katika tube mtihani wakati wa sumu-antitoxin au anatoxin-antitoxin mmenyuko. Inatumika kuamua shughuli ya seramu ya antitoxic au toxoid.

Microscopy ya elektroni ya kinga- hadubini ya elektroni ya vijidudu, mara nyingi virusi, kutibiwa na antibodies zinazofaa. Virusi zinazotibiwa na seramu ya kinga huunda aggregates za kinga (microprecipitates). "Corolla" ya antibodies huundwa karibu na virions, tofauti na asidi phosphotungstic au maandalizi mengine ya elektroni-optically dense.

Miitikio inayohusisha kijalizo

Miitikio inayohusisha kijalizokwa msingi wa uanzishaji wa inayosaidia na tata ya antijeni-antibody (menyuko inayosaidia ya kurekebisha, hemolysis ya radial, nk).

Inayosaidia mmenyuko wa kurekebisha (RSK) iko katika ukweli kwamba, wakati sambamba na kila mmoja, antijeni na antibodies huunda tata ya kinga, ambayo, kupitia Fc -fragment ya antibodies hujiunga na inayosaidia (C), yaani, kukamilisha kumfunga hutokea kwa tata ya antigen-antibody. Ikiwa tata ya antigen-antibody haijaundwa, basi inayosaidia inabaki bure (Mchoro 13.8). RSK inafanywa kwa awamu mbili: awamu ya 1 - incubation ya mchanganyiko yenye vipengele vitatu vya antigen + antibody + inayosaidia; Awamu ya 2 (kiashiria) - ugunduzi wa nyongeza ya bure katika mchanganyiko kwa kuongeza mfumo wa hemolytic unaojumuisha erithrositi ya kondoo na seramu ya hemolytic iliyo na antibodies kwao. Katika awamu ya 1 ya mmenyuko, wakati wa kuundwa kwa tata ya antigen-antibody, kumfunga inayosaidia hutokea, na kisha katika awamu ya 2, hemolysis ya erythrocytes iliyohamasishwa na antibodies haitatokea; majibu ni chanya. Ikiwa antijeni na kingamwili hazilingani (hakuna antijeni au kingamwili katika sampuli ya jaribio), kijalizo kinabaki huru na katika awamu ya 2 kitajiunga na tata ya antibody ya erithrositi-antierythrocyte, na kusababisha hemolysis; majibu ni hasi.

RSK hutumiwa kugundua magonjwa mengi ya kuambukiza, haswa kaswende (majibu ya Wasserman).

Athari ya hemolysis ya radial (RRH ) kuwekwa kwenye visima vya gel ya agar iliyo na erythrocytes ya kondoo na inayosaidia. Baada ya kuongeza seramu ya hemolytic (antibodies dhidi ya erythrocytes ya kondoo) kwenye visima vya gel, eneo la hemolysis linaundwa karibu nao (kama matokeo ya uenezi wa radial wa antibodies). Kwa hivyo, inawezekana kuamua shughuli za serum inayosaidia na hemolytic, pamoja na antibodies katika seramu ya damu ya wagonjwa wenye mafua, rubela, encephalitis inayotokana na tick. Kwa kufanya hivyo, antigens sambamba ya virusi hupigwa kwenye erythrocytes, na seramu ya damu ya mgonjwa huongezwa kwenye visima vya gel iliyo na erythrocytes hizi. Kingamwili za antiviral huingiliana na antijeni za virusi zinazotangazwa kwenye erithrositi baada ya

Vipengele vinavyosaidia vinaunganishwa na tata hii, na kusababisha hemolysis.

Mmenyuko wa wambiso wa kinga (RIP ) inategemea uanzishaji wa mfumo unaosaidia na antijeni za corpuscular (bakteria, virusi) zinazotibiwa na serum ya kinga. Kama matokeo, kijenzi cha tatu kilichoamilishwa (C3b) huundwa, ambacho hushikamana na antijeni ya corpuscular kama sehemu ya tata ya kinga. Juu ya erythrocytes, platelets, macrophages kuna receptors kwa C3b, kutokana na ambayo, wakati seli hizi zinachanganywa na complexes za kinga zinazobeba C3b, mchanganyiko wao na agglutination hutokea.

Mmenyuko wa kutojali

Kingamwili za seramu ya kinga zinaweza kupunguza athari za uharibifu wa vijidudu au sumu zao kwenye seli nyeti na tishu, ambayo inahusishwa na kizuizi cha antijeni za microbial na antibodies, i.e. neutralization. Mmenyuko wa kutojali(RN) hufanywa kwa kuanzisha mchanganyiko wa antijeni-antibody kwa wanyama au katika vitu nyeti vya majaribio (utamaduni wa seli, viinitete). Kutokuwepo kwa athari ya uharibifu wa microorganisms au antijeni zao, sumu katika wanyama na vitu vya mtihani, wanasema juu ya athari ya neutralizing ya serum ya kinga na, kwa hiyo, maalum ya mwingiliano wa tata ya antigen-antibody (Mchoro 13.9).

Mmenyuko wa Immunofluorescence - RIF (Njia ya Koons)

Kuna aina tatu kuu za njia: moja kwa moja, isiyo ya moja kwa moja (Mchoro 13.10), na inayosaidia. Mmenyuko wa Koons ni njia ya uchunguzi wa haraka ya kugundua antijeni za vijidudu au kugundua kingamwili.

Njia ya moja kwa moja ya RIF inatokana na ukweli kwamba antijeni za tishu au vijidudu vilivyotibiwa kwa sera ya kinga na kingamwili zilizo na alama za fluorochrome zinaweza kuangaza katika miale ya UV ya darubini ya fluorescent.

Bakteria katika smear, kutibiwa na serum hiyo ya luminescent, huangaza kando ya pembeni ya seli kwa namna ya mpaka wa kijani.

Njia isiyo ya moja kwa moja ya RIF ni kutambua changamano cha antijeni-antibody kwa kutumia antiglobulini (kinza-antibody) seramu iliyo na alama za fluorochrome. Kwa kufanya hivyo, smears kutoka kwa kusimamishwa kwa microbes hutendewa na antibodies ya serum ya uchunguzi wa sungura ya antimicrobial. Kisha antibodies ambazo hazijafungwa na antijeni za microbial huoshwa, na antibodies iliyobaki kwenye microbes hugunduliwa kwa kutibu smear na antiglobulin (anti-sungura) serum iliyoandikwa na fluorochromes. Matokeo yake, microbe tata + antibodies ya sungura ya antimicrobial + antibodies ya kupambana na sungura iliyoandikwa na fluorochrome huundwa. Ugumu huu unazingatiwa kwenye darubini ya fluorescent, kama kwa njia ya moja kwa moja.

Njia ya ELISA, au uchambuzi (ELISA)

ELISA -kugundua antijeni kwa kutumia kingamwili zao zinazolingana zilizounganishwa na kimeng'enya chenye lebo (horseradish peroxidase, beta-galactosidase au phosphatase ya alkali). Baada ya antijeni kuunganishwa na sera ya kinga iliyoandikwa na enzyme, substrate/chromojeni huongezwa kwenye mchanganyiko. Substrate hupasuliwa na kimeng'enya, na rangi ya bidhaa ya mmenyuko hubadilika - ukubwa wa rangi ni sawia moja kwa moja na idadi ya molekuli za antijeni na antibody zilizofungwa.

Awamu imara ELISA - lahaja ya kawaida ya mtihani wa immunological, wakati moja ya vipengele vya majibu ya kinga (antijeni au antibodies) hupigwa kwenye carrier imara, kwa mfano, kwenye visima vya sahani za polystyrene.

Wakati wa kuamua kingamwili, seramu ya damu ya mgonjwa, seramu ya antiglobulini iliyoandikwa na enzyme, na substrate (chromogen) ya enzyme huongezwa kwa mtiririko kwenye visima vya sahani na antijeni ya adsorbed.

Kila wakati baada ya kuongezwa kwa sehemu inayofuata, reagents zisizofungwa huondolewa kwenye visima kwa kuosha kabisa. Kwa matokeo mazuri, rangi ya ufumbuzi wa chromogen hubadilika. Mtoa huduma wa awamu imara anaweza kuhamasishwa si tu na antijeni, bali pia na antibodies. Kisha, antijeni inayotaka huletwa ndani ya visima na antibodies ya adsorbed, seramu ya kinga dhidi ya antijeni iliyoandikwa na enzyme huongezwa, na kisha substrate ya enzyme huongezwa.

ELISA ya Ushindani . antijeni lengwa na antijeni yenye lebo ya kimeng'enya hushindana kwa kufunga kiasi kidogo cha kingamwili za seramu ya kinga. Kipimo kingine ni kingamwili unazotafuta

na kingamwili zilizo na lebo hushindana kwa antijeni.

Njia ya radioimmunological, au uchambuzi (RIA)

Njia nyeti sana kulingana na mmenyuko wa antijeni-kimwili kwa kutumia antijeni au kingamwili zilizo na alama ya radionuclide (125 J, 14 C, 3 H, 51 Cr, nk.). Baada ya mwingiliano wao, tata inayotokana ya kinga ya mionzi hutenganishwa na mionzi yake imedhamiriwa katika kihesabu kinachofaa (mionzi ya beta au gamma):

nguvu ya mionzi ni sawia moja kwa moja na idadi ya antijeni iliyofungwa na molekuli za kingamwili.

Katika toleo imara la awamu ya RIA moja ya vipengele vya mmenyuko (antigen au antibodies) hupigwa kwenye carrier imara, kwa mfano, katika visima vya microarrays ya polystyrene. Toleo jingine la njia ni RIA ya ushindani. antijeni lengwa na antijeni yenye lebo ya radionuclide hushindana kwa kufunga kiasi kidogo cha kingamwili za seramu ya kinga. Chaguo hili hutumiwa kuamua kiasi cha antijeni katika nyenzo za mtihani.

RIA hutumiwa kuchunguza antijeni za microbial, kuamua homoni, enzymes, vitu vya dawa na immunoglobulins, pamoja na vitu vingine vilivyomo katika nyenzo za mtihani katika viwango vidogo - 10 ~ | 0 -I0 ~ 12 g / l. Njia hiyo inatoa hatari fulani ya mazingira.

Kuzuia kinga mwilini

Kuzuia Kinga (IB)- njia nyeti sana kulingana na mchanganyiko wa electrophoresis na ELISA au RIA.

Antijeni imetengwa kwa kutumia polyacrylamide gel electrophoresis, basi inahamishwa (kufuta - kutoka kwa Kiingereza. baa, doa) kutoka kwa gel hadi kwenye karatasi iliyoamilishwa au membrane ya nitrocellulose na kutengenezwa na ELISA. Makampuni hutoa vipande kama hivyo na "blots"

antijeni. Seramu ya mgonjwa hutumiwa kwa vipande hivi. Kisha, baada ya incubation, mgonjwa huoshwa kutoka kwa antibodies zisizofungwa za mgonjwa na seramu dhidi ya immunoglobulins ya binadamu, iliyoandikwa na enzyme, hutumiwa. Kingamwili changamano cha antijeni + cha mgonjwa + kizuiamwili dhidi ya binadamu Ig kilichoundwa kwenye ukanda hugunduliwa kwa kuongeza substrate/kromojeni inayobadilisha rangi chini ya utendakazi wa kimeng'enya (Mchoro 13.12).

IB hutumiwa kama njia ya uchunguzi wa maambukizi ya VVU, nk.

Tofauti na mmenyuko wa agglutination, antijeni ya mmenyuko wa mvua ni misombo ya mumunyifu, ukubwa wa chembe ambazo hukaribia ukubwa wa molekuli. Hizi zinaweza kuwa protini, tata za protini na wanga na lipids, dondoo za bakteria, disates mbalimbali au filtrates ya tamaduni za mchuzi wa microbial. Kingamwili zinazohusika katika mmenyuko wa mvua huitwa precipitins. Mchanganyiko mzuri unaotokana wa antijeni-antibody hugunduliwa kwa njia fulani za kuweka majibu ya mvua.

Mwitikio wa mvua ya pete ulipendekezwa kwanza na Ascoli. Inatumika katika uchunguzi wa anthrax, pigo, tularemia, meningitis. Njia ni rahisi na inapatikana.

Seramu maalum ya kuzuia kinga hutiwa ndani ya mirija nyembamba ya kunyunyiza na antijeni imewekwa kwa uangalifu sana juu yake. Kama antijeni, kwa mfano, wakati wa kugundua kimeta, vipande vya ngozi, pamba, ngozi za mnyama aliyeanguka, nk huchukuliwa. Huchemshwa, kioevu huchujwa na kutumika kama antijeni. Kuonekana kwa pete kwenye mpaka wa vinywaji viwili - precipitate inaonyesha uwepo wa antijeni inayofanana.

Mmenyuko wa mvua wa gel ya agar, au njia ya uwekaji wa mvua, hurahisisha kusoma kwa undani muundo wa michanganyiko changamano ya antijeni mumunyifu katika maji. Ili kuanzisha majibu, gel (nusu-kioevu au agar nene) hutumiwa. Kila sehemu inayounda antijeni huenea kuelekea kingamwili inayolingana kwa kiwango tofauti. Kwa hiyo, complexes ya antijeni mbalimbali na antibodies sambamba ziko katika sehemu tofauti za gel, ambapo mistari ya mvua huundwa. Kila moja ya mistari inalingana na tata moja tu ya antijeni-antibody. Mmenyuko wa mvua kwa kawaida huwekwa kwenye joto la kawaida.

Njia ya immunoelectrophoresis imeenea katika miaka ya hivi karibuni katika utafiti wa muundo wa antigenic wa microbes. Mchanganyiko wa antijeni huwekwa kwenye kisima, kilicho katikati ya gel ya agar, iliyotiwa kwenye sahani. Kisha, mkondo wa umeme hupitishwa kupitia gel ya agar, kama matokeo ambayo antijeni mbalimbali zinajumuishwa katika hoja tata katika uwanja wa sasa wa umeme kulingana na uhamaji wao wa electrophoretic. Baada ya electrophoresis kukamilika, seramu maalum ya kinga huletwa ndani ya mfereji ulio kando ya sahani na kuwekwa kwenye chumba cha unyevu. Katika maeneo ambapo mchanganyiko wa antijeni-antibody huundwa, mistari ya mvua huonekana.

Mmenyuko wa mvua ni njia nyeti sana na hutumiwa katika uchunguzi wa antijeni mbalimbali za protini na polysaccharide katika mazoezi ya mahakama ili kubaini aina za damu, shahawa, madoa ya serum kwenye kitani na vitu mbalimbali. Mmenyuko huu pia unaweza kutumika kutambua uchafu mbalimbali katika maziwa, samaki na bidhaa za nyama, kuamua asili ya protini zilizojumuishwa katika rangi za mabwana wa zamani wa uchoraji.

Mwitikio wa mvua mmenyuko wa mvua

mmenyuko wa mwingiliano wa vitro antijeni Na kingamwili kusababisha uwingu wa kati inayoonekana kwa jicho uchi au kuundwa kwa precipitate tata ya kinga (precipitate). Inatumika kwa utambulisho wa antijeni na kingamwili, udhibiti wa usafi wa antijeni, uamuzi wa kiasi wa antijeni na kingamwili katika nyenzo za mtihani. Kwa mpangilio wa P. r. ufumbuzi wazi wa antijeni na sahihi seramu.

(Chanzo: "Microbiology: glossary of terms", Firsov N.N., M: Bustard, 2006)

mmenyuko wa tube ya mtihani wa mwingiliano wa At na Ag katika awamu ya kioevu au katika gel, kingo husababisha kuundwa kwa precipitates ya kinga inayoonekana kwa jicho uchi (turbidity). Hutumika kutambua Ag na Ab, kudhibiti usafi wa Ag, maudhui ya kiasi ya Ab na Ag. Kwa taarifa P. r. ufumbuzi wa wazi wa Ag, antiserum, ufumbuzi wa salini au gel (1.5 - 2% agar na agarose katika buffer ya acetate ya veronal, pH 6.8, nguvu ya ionic - 0.1) inahitajika. Njia zinazotumika sana ni: 1) mmenyuko wa mvua ya pete. 0.2 ml ya s-ki inayonyesha yenye kiwango cha juu hutiwa ndani ya mirija ya majaribio ya mvua (zilizopo) na takriban kiasi sawa cha suluhisho la Ag (zima au diluted) huwekwa kwa uangalifu juu yake. Katika hali nzuri, baada ya dakika chache, pete nyeupe ya simu huunda kwenye interface ya reagents. Vidhibiti vya lazima Ag, s-ki, dhahiri chanya, ni hasi, n.k. Hutumika kutambua Ag katika dondoo kutoka kwa nyenzo mbalimbali, ikijumuisha. kuambukiza; 2) Ouchterlony mara mbili radial immunodiffusion. Katika safu ya sare ya 1% ya gel ya agar kuhusu 1.5 mm nene, mashimo hupigwa kwa umbali wa 4-10 mm na kujazwa na ufumbuzi wa antiserum na Ag. Matokeo huzingatiwa baada ya siku (hadi siku 6-7) ya incubation saa 4 °, 20 ° na 37 ° C kwenye maandalizi ya mvua au kavu na yenye rangi kulingana na idadi na eneo la mistari ya mvua. Katika mifumo ya sehemu moja, mstari mmoja unaonekana kati ya visima na Ag na Ab, katika mifumo ya multicomponent, mistari kadhaa inaonekana, na Ag inayofanana, mistari huunganisha, na zisizo sawa, zinaingiliana. Kutumika kwa uchambuzi wa ubora, uamuzi wa usafi wa maandalizi, utambulisho wa Ab na Ag; 3) immunodiffusion rahisi ya mstari kulingana na Uden. Zinatumika kwa madhumuni sawa na mara mbili. Gel iliyo na antiserum hutiwa ndani ya zilizopo za mtihani au zilizopo. Suluhisho la Ag hutiwa kwenye gel katika zilizopo za mtihani, na zilizopo zimewekwa kwenye kioo na suluhisho la Ag. Matokeo yanazingatiwa baada ya kuweka mfumo kwa +4 ° C kwa masaa 48 kwa uwepo wa mvua na mbele, to-ry kupita Ag. Kwa mujibu wa formula, kiasi cha Ag kinapatikana; nne) Mancini rahisi radial immunodiffusion. Gel iliyo na s-coy ya monospecific hutiwa kwenye uso wa kioo katika safu sawa. Baada ya kuimarisha katika gel, mashimo hupigwa na ufumbuzi wa utafiti hutiwa ndani yao. Ag. Mfumo huhifadhiwa kwa masaa 40 kwa +4 ° au 20 ° C. Katika hali nzuri, mvua hutengenezwa karibu na shimo, eneo ambalo linaonyesha kiasi cha Ag. Vile vile kuweka udhibiti na mfululizo wa dilutions ya kiwango Ag. Kipenyo cha eneo la mvua hupimwa, eneo linahesabiwa, na kiasi cha Ag katika 1 ml ya substrate hupatikana kutoka kwa curve ya calibration.

(Chanzo: Glossary of Microbiology Terms)

Tazama "majibu ya mvua" ni nini katika kamusi zingine:

mmenyuko wa mvua- - [Kamusi ya Kiingereza-Kirusi ya maneno ya msingi juu ya chanjo na chanjo. Shirika la Afya Duniani, 2009] Mada ya chanjo, chanjo EN athari ya usimbishaji ... Kitabu cha Mtafsiri wa Kiufundi

- (RW au EMF Express Diagnosis of Syphilis) ni njia iliyopitwa na wakati ya kugundua kaswende. Sasa imebadilishwa na hatua ndogo ya mvua (mtihani wa anticardiolipin, MP, RPR Rapid Plasma Reagin). Imepewa jina la daktari wa chanjo wa Ujerumani Augustus ... ... Wikipedia

mmenyuko wa mvua- mtihani wa mvua wa rus wa mtihani wa precipitin, mtihani wa mvua kutokana na athari (f) deu precipitation (f) deu Präzipitintest (m), Präzipitations Reaktion (f) spa majibu (f) de precipitación, reacción (f) de precipitinas, prueba (f) de…… Usalama na afya kazini. Tafsiri kwa Kiingereza, Kifaransa, Kijerumani, Kihispania

Mbinu ya kugundua na kutambua kingamwili au antijeni mumunyifu kulingana na hali ya kunyesha... Kamusi Kubwa ya Matibabu

Kunyesha (Kilatini praecipitatio rapid fall) Katika kemia na biokemi, kisawe cha neno mvua Katika elimu ya kinga, mmenyuko wa immunological wa mvua kutoka kwa mmumunyo wa changamano isiyoyeyuka ya antijeni-antibody inayotokana na kiwanja ... ... Wikipedia

Njia ya kugundua viwango vya chini vya antibodies, haptens monovalent au antijeni za polyvalent, kulingana na kizuizi katika uwepo wao wa athari za mvua, mkusanyiko au urekebishaji unaosaidia kwa sababu ya kuzuia maalum ... ... Kamusi Kubwa ya Matibabu

Marekebisho ya mmenyuko wa mvua, ambayo uundaji wa mvua kwa namna ya pete hurekodiwa kwenye mpaka kati ya ufumbuzi wa antijeni na antibody ... Kamusi Kubwa ya Matibabu

Mtihani wa uwepo wa syphilis, ambayo uamuzi wa antibodies tabia ya ugonjwa huu katika damu ya somo hufanywa kwa kutumia majibu ya mvua. Jaribio hili halifikiki vizuri kuliko zingine.