NEW Молекулярная онкология. Молекулярная онкология. Высокодифференцированный рак щитовидной железы

В результате прогресса новых научных направлений молекулярной биологии, молекулярной генетики и генной инженерии сделан огромный шаг вперед, что позволяет сейчас задавать природе вопросы, которые ранее ставить было невозможно. Речь идет о понимании самых фундаментальных основ таких явлений, как клеточное деление и дифференцировка, а также причин механизма их нарушений.

В конкретном приложении к одной из самых злободневных и волнующих проблем, стоящих перед человечеством, — проблеме злокачественных опухолей — можно говорить о появлении новой науки — молекулярной онкологии. Ее поразительные успехи в сфере изучения молекулярных механизмов онкогенеза и молекулярных основ ракового фенотипа связаны с применением уникальных, присущих ей методов исследования.

Выходящая в свет и предлагаемая читателям книга «Молекулярная онкология» посвящена подведению первых итогов и изложению достижений указанной молодой науки. В ней четко прослеживается преемственность основных принципов и постулатов классической теоретической онкологии прежде всего в главных вопросах: полиэтиологичности возникновения опухолей и многостадийности этого процесса.

Однако решения даются уже на другом уровне организации живой материи — молекулярном. Данная книга — первая и единственная пока в нашей стране. Она написана авторами, непосредственно и активно работающими в данной области, что предопределило глубину осмысления приводимых конкретных фактов и конструктивность обобщений. Через всю книгу проходит мысль об универсальности молекулярных механизмов онкогенеза.

Эта идея естественно вытекает из проводимого авторами анализа новейших исследований основных видов канцерогенеза: химического, физического, биологического, основа которых, как убедительно показывают авторы, едина и может быть выражена в принципиально общих молекулярных терминах.

Каждому из этих видов онкогенеза посвящены отдельные главы. 1-я глава обращает читателя к истокам теоретической онкологии, к ее классическим исследованиям начала нынешнего столетия. 2-я и 3-я главы посвящены соответственно молекулярным механизмам химического и вирусного канцерогенеза.

Упомянутые первые три главы логически предшествуют заключительным — 4-й и 5-й главам — подлинной сердцевине книги.

Именно в этих главах в концентрированном виде представлены факты и идеи, символизирующие суть и дух современной теоретической онкологии — онкологии молекулярной. Ее достижения вселяют уверенность в конечной победе человеческого разума над тяжелым недугом.

«Молекулярная онкология»,
И.Ф. Сейц, П.Г. Князев

Критически мыслящему наблюдателю современная теоретическая онкология, возможно, представляется деревом цветущим, но не плодоносящим. Такое впечатление в какой-то мере оправдано и обусловлено явным дисбалансом огромных интеллектуальных усилий и материальных вложений, с одной стороны, и скромных практических выходов — с другой. Все еще остаются неясными как природа злокачественных новообразований, так и первичный побудительный импульс, инициирующий неотвратимую цепь…

С течением времени выявление канцерогенных свойств химических агентов стало лишь делом техники, и наметилось явное смещение акцентов исследований от рутинного их тестирования на канцерогенность к изучению механизма онкогенного действия. В этом деле, наряду со значительными успехами, выявились и немалые трудности. Успехи касались чисто химической стороны проблемы: была установлена необходимость активации исходных канцерогенов, изучены метаболизм, взаимодействие…

Каким образом вторжение осколков химических канцерогенов в ДНК результируется в неконтролируемый рост и трансформацию клеток? Теория химического канцерогенеза для того, чтобы сделать новый и решающий шаг вперед, нуждается в каком-то научном событии, аналогичном по значимости открытию обратной транскриптазы в онковирусологии. В теории химического канцерогенеза подобного события пока не произошло. Тем не менее можно ожидать, что…

Главным успехом онковирусологии наших дней следует считать открытие онкогенов — дискретных материальных генетических элементов в структуре ДНК клеток, ответственных за индукцию злокачественных опухолей у человека и животных. Это направление исследований является наиболее перспективным в современной теоретической онкологии. Онкогены обнаружены в геномной ДНК не только животных, но и человека, а вероятность их участия в индукции опухолей…

Еще И. М. Сеченов в 1860 г. в тезисах докторской диссертации писал, что при настоящем состоянии естественных наук единственно возможный принцип патологии есть молекулярный. Сейчас можно только удивляться этому провидению. Сегодня молекулярная онкология стоит у порога тайны рака. Именно ей принадлежат наиболее выдающиеся успехи в области теоретической онкологии последних лет. К ним можно отнести следующие…

Если молекулярная биология в наиболее лаконичной интерпретации может быть охарактеризована как наука, выражающая и объясняющая сложные общебиологические явления в терминах свойств и взаимодействия молекул, то молекулярная онкология, естественно, призвана раскрывать молекулярные механизмы процесса канцерогенеза и особенностей опухолей. В данной книге сделана попытка подытожить успехи этой молодой науки. Все величие прогресса в познании опухолей в наше…

Использование методов переноса генов и молекулярного клонирования позволило установить некоторые наиболее важные, центральные детерминанты ракового процесса. Эти детерминанты — онкогены и их продукты — онкобелки, действующие как на структуру, так и на функции клеток, влияющие на регуляторные механизмы биохимических реакций. Многие из этих функций онкогенов и онкобелков пока неизвестны, однако при современном уровне знаний их…

Онкобелок p21cras в процессе трансформации клеток, по-видимому, существенно влияет на биоэнергетику клетки и передачу регуляторного сигнала от клеточной мембраны в ядро . Несомненно также и то, что онкобелок p2jcras в своем многофункциональном действии в процессе малиг-низации клетки-мишени кооперирует с функциями других активированных протоонкогенов . Для некоторых стероидных гормонов, например глюкокортикоидов, установлен механизм передачи их информации от специфического…

В последние годы были разработаны и внедрены в практику методы молекулярного и генетического исследования злокачественных клеток. Данные исследования позволяют определить степень агрессивности опухоли и как следствие этого назначение наиболее подходящего лечения рака в Германии .

В некоторых случаях стоит ограничиться только хирургическим вмешательством и болезнь не вернется даже без применения химиотерапии и облучения. Также существует возможность анализа определенных рецепторов роста раковых клеток, блокируя которые специальными антителами можно предотвратить их дальнейшее размножение.

Кроме этого, в современной онкологии можно определить мутации (генетические повреждения) в энзимах клеток опухоли, которые отвечают за то, поддается данная опухоль или нет определенной химиотерапии.

Мы предлагаем Вам даже без приезда в Израиль или Германию переслать нам по почте блок с патологией вашей биопсии или операции. На базе лаборатории ‹‹Геномик›› мы проводим генетический и молекулярный анализ материала, после чего на основании характера опухоли ведущие онкологи Израиля и Германии предоставят Вам конкретные рекомендации в лечении рака для достижения наиболее эффективного результата с причинением наименьшего вреда организму.

‹‹OncotypeDX›› - это не экспериментальные исследования. Результаты данных тестов основаны на наблюдении за пациентами свыше 8 лет. Они широко применяются в крупнейших онкологических центрах мира и избавили сотни тысяч людей от использования неэффективной химиотерапии.

Какие тесты существуют и кому они подходят?

Oncotype DX при раке молочной железы (груди)

1.а) Oncotype DX ® breast

‹‹Oncotype DX ® breast›› - диагностический тест, который выполняется после хирургического лечения рака молочной железы. Подходит женщинам в менопаузе с инвазивным раком молочной железы, с эстроген - рецептор - позитивной (ER +) и HER 2 -отрицательной опухолью с непораженными лимфатическими узлами.

Тест ‹‹Oncotype DX breast›› предоставляет дополнительную информацию, с помощью которой врачи применяют решении о ходе дальнейшего лечения.

Это происходит за счет того, что по результатам исследования определяется степень агрессивности опухоли, шанс рецидива и необходимость использования химиотерапии.

Тест ‹‹Oncotype DX›› представляет необходимую информацию в дополнение к стандартным измерениям характеристики опухоли, таким как: размер опухоли, степень дифференцировки опухоли и состояния лимфатических узлов, которые традиционно используются врачами для оценки. В прошлом на основании этих параметров принималось решении о тактике дальнейшего лечения. С появлением теста на 21 ген- ‹‹Oncotype DX breast›› у врачей появился действенный инструмент, указывающий на степень эффективности химиотерапевтического или гормонального лечения.

На сегодняшний день результаты теста ‹‹Онкотайп›› являются наиважнейшими в принятии решения об использовании химиотерапии в лечении рака молочной железы, он кардинально меняет решение по сравнения с тем, которое применялось в прошлом без его использования. Так как виды опухоли у всех отличны, иногда происходит, что маленькая опухоль с непораженными лимфоузлами может быть очень агрессивна. Поэтому необходимо проведение интенсивной химиотерапии. С другой стороны в тех случаях, когда это не так, с помощью теста ‹‹Онкотайп›› Вы можете себя спасти от ненужной химиотерапии и побочных явлений, связанных с ней.

Ниже мы приводим истории нескольких пациенток, которым помог тест ‹‹Oncotype DX››.

Сьюзен, возраст 59 лет на обычной маммографии выявлен рак.

После операции по удалению опухоли и биопсии лимфоузлов Сьюзен прошла серию обследований, в том числе ПЭТ / КТ, чтобы оценить степень распространения рака. Она успокоилась, когда все эти тесты были отрицательными, но Сьюзен хотела быть уверена, что ее болезнь не вернется. Узнав от подруги о ‹‹Oncotype DX ®››, Сьюзен спросила у врача, подходит ли ей этот тест. Изначальные данные опухоли подходили для проведения теста, так как ее опухоль была эстроген - рецептор - позитивная и с отрицательными лимфоузлами. Врач Сьюзен был сильно удивлен, когда увидел результат ‹‹Oncotype DX››, он был - 31, что указывает на высокий риск рецидива рака, и химиотерапия является необходимым дополнительным лечением в этом случае. Основываясь на результате теста ‹‹Oncotype DX››, лечащий врач Сьюзен рекомендовал ей проведение нескольких курсов химиотерапии, которые она начала незамедлительно, чтобы избежать возможного рецидива заболевания. До проведения теста, врач Сьюзен был уверен, что химиотерапия не нужна, но узнав о высоком риске возврата болезни, изменил свое решение.

Коммерческий пилот авиакомпании с 27-летним опытом, 50-летняя Диана обнаружила небольшой комок в левой груди во время самостоятельной проверки.

Биопсия ткани подтвердила ее худшие опасения. Рак Дианы принял форму множественных мелких опухолей разбросанных в груди. Она была немедленно прооперирована - удалена вся грудь. Хотя сами опухоли были очень маленькие, врач Дианы не могла с уверенностью исключить необходимость химиотерапии на основе стандартных мер, таких, как размер опухоли и стадия. Диана беспокоилась о своем будущем здоровье и безопасности труда. "Потому что я маленькая, было высказано опасение, что я в меньшей степени способна выдержать серьезные побочные эффекты от химиотерапии", сказала Диана. "Кроме того, авиакомпания неусыпно следила за здоровьем своих пилотов, а диагноз рака может означать постоянное отстранение от полетов".

В поисках информации врач Дианы обратилась к Oncotype DX для геномного анализа ее болезни. Примерно через неделю Диана узнала, что ее результат был - 13, предполагая, что она имеет более низкий риск рецидива (возврата болезни). В ходе бесед с ее лечащим врачом она чувствовала себя уверенно, она могла избежать химиотерапии и ее побочных эффектов, не увеличивая вероятность повторения болезни, и она смогла продолжить свою карьеру и активный образ жизни. Кроме того, она смогла сохранить свои длинные волосы, которые растила с 23 лет. «Тринадцать - мое счастливое число в настоящее время", - заявила Диана.

Тест подходит женщинам в менопаузе с инвазивным раком молочной железы, с эстроген - рецептор - позитивной (ER +) и HER-2 -отрицательной опухолью, с непораженными лимфатическими узлами. Проводится на образце ткани удаленной опухоли вовремя операции.

1.б) Иммуногистохимический тест ER, PR, HER-2 рецепторов в клетках опухоли

Генетический анализ Fish-реакция на чувствительность к антителу ‹‹Трастузумаб›› (Герцептин).

Иммуногистохимическое исследование: проверка опухоли на специальные белки - рецепторы, находящиеся на поверхности клеток опухоли и являющиеся мишенью для лекарств.

Анализ эстроген, прогестерон, HER-2 рецепторов позволяет установить их чувствительность к гормональной терапии и к специфическому антителу (биологическое лекарство, не химия, новое поколение онкологических лекарств).

Анализ ДНК опухоли, проверяющий гены в клетках опухоли на чувствительность к антителу. Герцептин (Fish реакция) подходит в 20-25% случаев больных раком груди. Данное лекарство существенно увеличивает продолжительность жизни при метастатической болезни и предотвращает возврат болезни после операции.

Вышеописанные тесты подходят как для первично обнаруженной опухоли на любой стадии, так и для метастатической опухоли.

1.в) CYP2D6 тест

После проведения операции многим женщинам показано профилактическое лечение для предотвращения в дальнейшем рецидива. Если в тканях опухоли есть эстроген - рецепторы и прогестерон - рецепторы, то больным в менопаузе часто прописывают гормональную терапию, таблетки ‹‹Тамоксифен›› на 5 лет.

Недавние исследования обнаружили специфический энзим в клетках печени, активирующий лекарство ‹‹Тамоксифен›› в активное вещество ‹‹Ендоксифен››, уничтожающее раковые клетки.

Следовательно, эффективность препарата во многом определяется степенью активности печеночного фермента CYP2D6, а активность фермента определяется генами больного.

Данный генетический тест обнаруживает мутации генов, связанных с ферментом CYP2D6, и позволяет точно оценить степень активности фермента и степень эффективности препарата ‹‹Тамоксифен››.

Определение CYP2D6 генетического кода помогает в выборе правильного гормонального лечения и предоставляет возможность спрогнозировать эффективность использования ‹‹Тамоксифена›› индивидуально для каждого пациента.

Из медицинской литературы известно, что 7-10% населения Европы и США имеют неэффективно работающий энзим, в этих случаях ‹‹Тамоксифен›› является бездейственным лекарством.
Очень важно найти тех женщин, для которых лечение ‹‹Тамоксифеном›› не подходит из-за неэффективного метаболизма препарата, вызванного низкой активностью фермента CYP2D6. У этих больных повышается риск рецидива рака молочной железы в случае приема ‹‹Тамоксифена››, и им необходим прием других гормональных препаратов.

Тест предназначен для больных, которым предполагается назначение ‹‹Тамоксифена››, на ранней или метастатической стадии болезни. Анализ проводится с использованием слюны пациентки.

2. Oncotype DX ® colon при раке толстой кишки

2А. Oncotype DX ® colon - это диагностический тест, который выполняется после хирургического удаления рака толстой кишки. ‹‹Oncotype DX colon›› тест помогает мужчинам и женщинам, больным раком толстой кишки больше узнать о биологических особенностях опухоли и определить вероятность рецидива. В сочетании с другими частями информации, результаты испытаний ‹‹Oncotype DX colon›› могут помочь пациентам и их врачам принять персональное решение о том, использовать или не использовать химиотерапию в комплексном лечении рака толстой кишки.

Одна из основных проблем в лечении больных раком толстой кишки, заключается в определении степени риска повторения заболевания после операции и оценки необходимости назначения послеоперационной химиотерапии с целью уменьшения шанса рецидива.

Oncotype DX обеспечивает новый способ оценки риска рецидива при второй стадии рака толстой кишки (без поражения лимфатических узлов) и повышает способность принятия обоснованного решения индивидуально для каждого пациента.

Вам недавно поставили диагноз рака толстой кишки II стадии без поражения лимфатических узлов, вы прошли хирургическую резекцию. Вы и ваш врач, должны принять решение о химиотерапии?

Тест ‹‹Oncotype DX›› предоставляет необходимую, дополнительную информацию, на основе геномных особенностей опухоли, которую врачи используют при принятии решения о тактике лечения. Он также указывает на степень вероятности возникновения рецидива. Тест ‹‹Oncotype DX colon›› предоставляет информацию в дополнение к стандартным данным таким как: стадия опухоли и состояния лимфатических узлов, которые врачи и их пациенты, традиционно используют для оценки, степени вероятности повторения болезни. В 15% случаев опухоль толстой кишки - абсолютно неагрессивная и в этом случае химиотерапия приносит только вред организму, т.к. болезнь и так не вернется.

Ниже приведены ответы на наиболее часто задаваемые вопросы о тесте ‹‹Oncotype DX colon››

1. Что такое тест ‹‹Oncotype DX colon››?

‹‹Oncotype DX colon››- тестирует клетки рака толстой кишки, рассматривая в них активность 12 генов человека, для того чтобы оценить вероятность возвращения рака толстой кишки, у больных на ранней стадии рака толстой кишки с непораженными лимфатическими узлами.

2. Кому подходит тест ‹‹Oncotype DX colon››?

Мужчинам и женщинам с недавно диагностированной II стадией рака толстой кишки.

3. Как работает тест ‹‹Oncotype DX colon››?

ДНК, входящая в состав клетки, извлекается из образцов опухоли, а затем анализируются с целью определения степени активности каждого из 12 генов. Результаты анализа просчитываются с помощью математического уравнения, для преобразования значения в числовой результат.
Этот результат соответствует вероятности рецидива рака толстой кишки в течение 3 лет от первоначального диагноза среди лиц с ранней стадией (второй стадией) рака толстой кишки, которые прошли операцию по удалению первичной опухоли.

4. Сколько времени занимает тестирование?

Обычно это занимает от 10 до 14 календарных дней, со времени прихода патологии в лабораторию. Результаты исследования приходят в форме числа по шкале от 0 до 100, и означает степень вероятности возникновения рецидива.

‹‹Oncotype DX colon›› - это современное оружие врача, позволяющее оценить степень агрессивности рака толстой кишки, и помогает в назначении индивидуально подобранного лечения.

2Б. Проверка наличия мутации в К-RAS-Тест подходит больным раком толстой и прямой кишки с метастазами

Один из рецепторов, который характерен для опухолей толстой кишки, является эпителиальный рецептор факторов роста или эпидермального роста EGFR . Эти факторы роста со специфическим рецептором роста запускают цепь реакций, которые способствуют развитию и делению клетки опухоли. Изменения, мутации (генетические сбои кода, который определяет структуру рецептора), активация рецепторов EGFR ,могут привести к постоянному неконтролируемому делению клеток - это необходимые предпосылки для появления злокачественных опухолей. Определение EGFR рецептора (ген, который может привести к раковой трансформации) является целевым рецептором целенаправленного лечения опухолей толстого кишечника и прямой кишки.

Лекарственный препарат - антитело ‹‹Эрбитукс›› (Сетуксимаб) блокирует данные рецепторы и таким образом предотвращает дальнейшее деление и рост злокачественных клеток.

Что такое K-RAS?

Один из "актеров", участвующих в цепи событий. Действие происходит после активации белка семьи EGFR .Рецептор K-RAS- этот белок являющийся звеном в цепи сигналов деления в клетках, которая заканчивается в клеточном ядре.

Когда существует мутации в K-RAS-рецепторе, то даже при блокировании EGFR- рецептора антителом ‹‹Эрбитукс››, все равно будет происходить цепная реакция деления клеток, в обход звена EGFR-рецептора, другими словами антитело будет абсолютно неэффективным.

С другой стороны, если нет мутации в K-RAS, то биологическое лекарство ‹‹Эрбитукс›› дает статистически достоверное улучшение выживаемости пациентов с метастатической болезнью. В 55-60% случаев мутации не наблюдается, то есть, возможно, лечение антителом.

Комплексное лечение ‹‹Эрбитуксом›› в сочетании с химиотерапией позволяет уменьшить метастазы, а в дальнейшем в некоторых случаях, возможно, их хирургическое удаление, что может привести к полному выздоровлению.

Если 10 лет назад больные с четвертой метастатической стадией болезни толстого кишечника жили в среднем год, то сейчас они живут 3-5 лет, а в 20-30% случаев возможно полное выздоровление.

Таким образом, тест на наличие мутации в K-RAS помогает оценить степень эффективности лечения биологическими препаратами при метастатическом раке толстой кишки.

Тест подходит больным раком толстой и прямой кишки с метастазами.

Для проведения теста нужен блок с тканью опухоли биопсии или проба с удаленной опухоли.

3. Проверка ЕGFR мутации - немелкоклеточный рак легкого

На клетках опухоли немелкоклеточного рака легкого, находятся рецепторы роста, отвечающие за процесс деления клеток.

Специальные энзимы, передающие сигналы к делению клеток называются тирозин - киназа.
Ингибиторы Тирозин - Киназа - это направленная терапия препаратами, блокирующая сигналы, способствующие росту опухоли. Эти новые лекарства - маленькие молекулы ингибиторы тирозин - киназы и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (Erlotinib (Эрлотиниб), Gefitinib (Гефетиниб) были первоначально разработаны для использования в качестве терапии второй линии после неэффективности химиотерапии.

В этих условиях Erlotinib показал увеличение показателя выживаемости, причем величина результата была аналогична химиотерапии второй линии, но без тяжелых побочных действий. Так как это целевая терапия, то поражаются конкретные раковые клетки, не нанося ущерба нормальным клеткам, тем самым не наносится вред организму.

Клинические исследования показали корреляцию между наличием, активацией конкретных мутаций в ТЗ области EGFR рецептора и повышением активности лекарств маленьких молекул - Erlotinib и Gefitinib. Наличие мутации обнаружено у 15-17 % больных, и им вместо тяжелой химиотерапии с побочными действиями подходит антитело в таблетках. Антитело можно давать как первую линию лечения при метастатической болезни. Это лекарство может годами тормозить рост опухоли, так как блокирует рецептор ее роста.

Тест подходит больным с немелкоклеточным раком легкого с метастазами, как до начала любой химиотерапии, так и при прогрессировании болезни во время лечения. Проводится на блоке биопсии или на материале, полученном в ходе операции.

4. Новое обследование - Target Now (Целевая проверка)

Так же как существует разница между разными людьми, существует она и между различными злокачественными опухолями, даже если они того же происхождения, из того же органа.
Так, например, рак молочной железы может реагировать на лечение гормонами у одной женщины, а у другой женщины, не будет реакции на них. Сегодня с развитием медицины разработаны тесты, помогающие врачам подобрать лечение индивидуально для каждого пациента, тем самым, значительно повышая эффективность лечения и снижая риск возникновения нежелательных побочных явлений.

Что такое Target Now (Целевая проверка)?

Это исследование, проводимое на материале раковой ткани, удаленной во время операции или биопсии.

Исследование проверяет потенциальные цели в клетках опухоли для различных лекарств.
В соответствии с этими целями (наличие или отсутствие тех или иных рецепторов, мутации или их отсутствие) позволяют врачу подобрать то или иное лекарство убивающее конкретную опухоль.

Тест определяет в раковых клетках большое число молекул, которые могут быть использованы в качестве места действия или цели, химических препаратов и/ или различных биологических антител. Молекулярные изменения могут свидетельствовать об ожидаемой хорошей эффективности или неэффективности данного лечения.

Результаты данного исследования были обнародованы в 2009 году на ежегодной конференции Американской Ассоциации исследования рака. Тест проводился на 66 пациентах, страдающих метастатическим раком. По результатам теста Target Now (Целевая проверка) больным подобрали необходимое лечение, после того как стандартное лечение, применяемое при их заболевании, оказалось неэффективным.

В ходе исследования обнаружилось, что молекулярные мишени могут быть выявлены в 98% случаев.

Кроме того, было установлено, что скорректированное лечение по результатам ‹‹Target Now›› теста, у трети пациентов продлило срок до прогрессирования болезни на 30% по сравнению с прошлым лечением до Целевой проверки. Многим больным была продлена жизнь на много месяцев и даже лет. Необходимо подчеркнуть, что речь идет о больных, которым не помогли множество лекарственных препаратов, назначенных по общепринятой для их болезни схеме.

Из результатов Целевой проверки выяснилось, что для их конкретной опухоли часто подходят лекарства, обычно не подходящие для их вида рака в общей группе.

Это исследование указывает, что Target Now (Целевая проверка) тест может обнаружить лекарства лично соответствующие для данной опухоли, что трудно сегодня определить другим способом. Теперь целевой тест позволяет провести оптимальную корректировку отдельных лекарств до начала лечения рака.

Это исследование подходит пациентам с метастатической болезнью любого органа, которым проходимое ранее лечение не дало никакого эффекта.

Для проведения исследования необходимо наличие ткани от биопсии или после операции.

5. Mamma Print - тест для определения риска рецидива рака груди

MammaPrint - это диагностический тест для оценки вероятности рецидива , который может прогнозировать возможное возникновение повторного рака груди в течение 10 лет после лечения первичной опухоли.

MammaPrint - это единственный тест подобного рода, который получил разрешения комиссии FDA в феврале 2007 года.

Результаты этого теста позволяют выбрать методику после операционного лечения. При высоком риске возникновения рецидива показано проведение химиотерапии.

Согласно рекомендациям FDA, этот тест показано проводить пациенткам младше 61 года, без пораженных лимфоузлов, при размерах опухоли менее 5 см. МамаПринт эффективен и при горомонозависимом раке груди и при других видах злокачественных опухолей.

В основе этого теста лежит анализ 70 онкогенов, ассоциированных с раком молочной железы. Анализ этих генов позволяет с большой точностью предсказать, как поведет себя конкретная злокачественная опухоль в будущем, это позволит лечащему врачу с большой точностью подобрать необходимое лечение.
Тест проводится на тканях опухоли, взятых во время биопсии или после хирургического удаления.

МамаПринт является первым высоко индивидуализированным диагностическим тестом.
Сегодня этот метод является очень популярным, ради прохождения диагностики с его использованием в Израиль приезжают немало пациенток из стран СНГ.
Чтобы пройти этот тест, необходимо на несколько дней приехать в Израиль, пройти биопсию или хирургическую операцию, так как для теста нужны свежие образцы ткани. После этого можно уехать домой или ждать результатов диагностики в Израиле. На ожидание уйдет около 10 дней.

Лечение в Израиле с центром "Cancermed" - организация качественной медицинской помощи.

Одним из наиболее современных и высокотехнологичных методов диагностики рака являются генетические (молекулярные) тесты. Эти исследования позволяют не только определять наследственную предрасположенность к тем или иным онкологическим заболеваниям, но и оценивать целесообразность назначения химиотерапии и определить степень агрессивности рака.

В Первом медицинском центре Тель-Авива проводят наиболее эффективные и доказанные генетические исследования из более чем 900 существующих на данный момент. При этом предоставляется услуга дистанционного тестирования, когда пациенту нет необходимости лететь в Израиль. Достаточно отправить по почте образец материала (после пункции либо операции), соблюдая некоторые правила, и ожидать результатов исследования.

Oncotype DX

Это молекулярное исследование применяется при раке молочной железы. В зависимости от целей исследования, типа опухоли и индивидуальных особенностей пациентки различают несколько видов Oncotype DX.

Oncotype DX Breast

Тест используется для определения степени дифференциации опухолевых клеток рака груди (соответственно определяется вероятность рецидива). Применяется после проведения операции по удалению опухоли для выяснения целесообразности назначения химиотерапии. Исследование подходит для эстроген-позитивных опухолей (ER+), инвазивного рака груди без метастазирования в регионарные лимфатические узлы.

Стандартными признаками для выбора тактики лечения после операции являются:

До появления генетических тестов, эти три признака были единственным источником информации, на основании которого определялась тактика о дальнейшем назначении химиотерапии. Однако, далеко не всегда агрессивность раковых клеток и, соответственно, вероятность отдаленного рецидива коррелирует с размерами опухоли и наличием метастазов в лимфатических узлах.

Сегодня в мировой медицине генетический тест Oncotype DX является золотым стандартом и ведущим критерием для выбора тактики терапии при раке груди. Он позволяет как предупредить рецидив заболевания, так и избежать ненужного назначения химиотерапии и всех связанных с ней побочных эффектов.

Fish-тест на рецепторы к Герцептину

Является иммуногистохимическим исследованием, с помощью которого на раковых клетках обнаруживаются специфические рецепторы (HER-2, PR, ER), которые делают ее чувствительной к таргетным лекарственным препаратам. Таковым, в частности, является препарат Герцептин, относящийся к классу моноклональных антител. Он давно успешно применяется при лечении рака молочной железы в Израиле и показал хорошие результаты по продлению жизни и предотвращению рецидивов даже в запущенной стадии и наличии метастазов.

Примерно в 1 из 4 случаев рака молочной железы, опухоль оказывается чувствительной к терапии Герцептином и выяснить это позволяет молекулярный тест на специфические рецепторы. Преимуществом лечения биологическими препаратами по сравнению со стандартными методами (радио и химиотерапия) является отсутствие вредных побочных явлений.

Молекулярный тест гена CYP2D6

Применяется исключительно в случаях гормон-зависимых опухолей молочной железы. В таких раковых клетках присутствуют рецепторы к гормонам — эстрогену и прогестерону, что делает их чувствительными к воздействию гормональной терапии (особенно у женщин в период климакса).

Исследования показали, что применяемые гормон заместительные препараты превращаются в печени в активное действующее вещество благодаря особому ферменту CYP2D6, кодируемому одноименным геном. В среднем до 10% людей имеют мутацию этого гена, из-за которой полноценная трансформация гормонов невозможна.

Генетический тест дает возможность выявить эту мутацию и таким образом определить, будет ли эффективным лечение гормональными препаратами и оценить риск развития рецидива. В Первом медицинском центре Тель-Авива данное исследование проводится с материалом из слюны пациента.

Oncotype DX Colon

Молекулярное исследование, которое применяется при раке толстого кишечника для комплексного взвешивания риска развития рецидива и степени опухолевой прогрессии. Суть теста заключается в анализе сложным программным обеспечением 12 генов ДНК раковой клетки, которые отвечают за степень дифференциации, атипичности и генных аберраций. Результат анализа преобразуется в числовой вид и имеет значение от 0 до 100.

Исследование Oncotype DX Colon назначается пациентам с злокачественными опухолями толстой кишки 2й стадии после операции удаления первичной опухоли и при условии отсутствия метастазов в регионарных лимфатических узлах. Около 15% пациентов с раком толстого кишечника имеют не агрессивную форму опухоли, не склонную к рецидивированию. Тест позволяет оценить этот риск и избежать ненужного назначения химиотерапии.

Длительность генетического тестирования Oncotype DX Colon в Израиле составляет около двух недель, а материал берется непосредственно из первичной опухоли. Оценку делают по 100-бальной шкале, производится комплексное заключение и выбирается дальнейшая тактика лечения.

Тест K-RAS

Специфический генетический тест, который позволяет определить чувствительность рака толстой и к таргетной терапии препаратом Сетуксимаб. Препарат является моноклональным антителом, которое избирательно блокирует рецепторы EGFR опухолевых клеток. Агрессивность рака толстой и прямой кишки напрямую зависит от экспрессии специфических рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR).

K-RAS представляет собой белок, который участвует в каскаде реакций, контролирующих клеточное деление эпителия кишечника. Мутации в гене, кодирующем этот белок, приводят к тому, что лечение Сетуксимабом становится неэффективным. Приблизительно 60% людей не имеют этой мутации, поэтому в случае негативного результата теста можно назначать препарат.

Тест K-RAS является крайне важным диагностическим критерием в современной онкологии. Это связано с тем, что лечение Сетуксимабом продлевает жизнь на 2-5 лет или даже приводит к полному выздоровлению больных с запущенными формами новообразований толстой и прямой кишки. Еще 10 лет назад метастатический рак этих отделов ЖКТ считался неизлечимым и больные получали паллиативную терапию, с внедрением биологической терапии пациенты получили шанс на выздоровление.

Тест на EGFR мутацию

Этот генетический тест применяется при немелкоклеточном раке легких. Есть два фермента, которые контролируют размножение клеток — тирозин-киназа и эпидермальный фактор роста EGFR. Поэтому в современных методах таргетной терапии опухолей применяются два препарата, ингибирующих эти ферменты, Эрлотиниб и Гефетиниб.

По статистике от 15 до 20% пациентов имеют мутацию гена EGFR, поэтому им нужно назначать таргетное лечение в виде моноклональных антител вместо химиопрепаратов второй линии. Особо актуально это для 3 и 4 стадий немелкоклеточного рака легких с наличием метастазов. Эрлотиниб и Гефетиниб могут годами ингибировать рост раковых клеток и вызвать длительную ремиссию у пациента. К тому же, моноклональные антитела не имеют негативных побочных действий, как химиотерапия (цитотоксический эффект), так как не воздействует на здоровые клетки.

Комплексное обследование Target Now

Каждая атипичная раковая клетка имеет свой уникальный набор рецепторов и экспрессию генов так же, как у каждого человека уникальны отпечатки пальцев. От их наличия или отсутствия зависит эффективность химиотерапии и лечения биологическими таргетными препаратами.

Современный этап развития лечения моноклональными антителами приобрел такой размах, что для максимально эффективного подбора препарата нужно провести массу молекулярных тестов. Методика Target Now позволяет объединить их все в одно исследование, которое в точности отразит генетический код атипичной клетки.

Впервые официальные результаты испытаний теста были представлены в 2009 году на конференции Американской Ассоциации исследований онкологических заболеваний. По ним у более 98% пациентов с запущенной формой рака (наличие метастазов) удалось получить полную картину молекулярных мишеней и подобрать соответствующую таргетную терапию. Более того, у 30-35% пациентов, вследствие модифицированной терапии по результатам Target Now, наблюдалось значительное улучшение качества жизни и увеличилась длительность жизни.

Тест показан к применению у пациентов, предыдущее лечение у которых оказалось не эффективным, либо с метастазами любой локализации. Для проведения исследования необходим материал из ткани опухоли (биопсия, либо после операции).

Mamma Print

Этот генетический тест предназначен для определения риска развития рецидива после рака молочной железы. По рекомендациям американской Food and drug administration (FDA) тест показан пациенткам с любой формой рака груди моложе 60 лет, без метастатического поражения лимфатических узлов и при условии, что опухоль имеет размер менее 5 сантиметров.

Суть исследования заключается в молекулярном анализе экспрессии 70 генов раковой клетки с последующей оценкой агрессивности опухоли и выведении итогового риска рецидива с помощью математической формулы. Результат позволяет выбрать тактику лечения и определить целесообразность назначения химиотерапии пациентам.

Отличие Mamma Print от аналогичных генетических тестов заключается в том, что исследование проводится на образце “свежей” ткани, поэтому при нем обязательно пребывание пациентки в Израиле для проведения пункции или операции. Результата ждать нужно около недели, но после процедуры можно ехать домой и получить ответ в письменном виде.

Заполнить заявку на лечение

Рак грудной железы (РГЖ) является одним из самых распространенных онкологических заболеваний в Украине. По данным Национального канцер-регистра Украины, стандартизованный показатель заболеваемости РГЖ в 2009 г. составляет 60,5 случая на 100 тыс. женского населения. Хотя заболеваемость злокачественными новообразованиями грудных желез постоянно повышается, смертность от них имеет тенденцию к снижению .

РГЖ - это неоднородная группа опухолей, отличающихся по морфологии, клиническому течению и чувствительности к лечению. Однако даже гистологически аналогичные опухоли имеют разную естественную историю, что обусловлено определенной ограниченностью морфологической классификации РГЖ. Исследование экспрессии генов клетками РГЖ и их корреляции с фенотипическими проявлениями позволили выделить ряд биологических подтипов РГЖ, которые определяют естественную историю, клинические, патологические и молекулярные свойства опухоли, а также являются ключевыми факторами, предрешающими прогноз течения и эффективность системной лекарственной терапии. Использование в повседневной клинической практике трудоемких и дорогостоящих методик генетического анализа невозможно. Изучение корреляции между экспрессией генов и иммуногистохимическими маркерами в опухоли позволило выделить ряд так называемых молекулярных субтипов РГЖ, определение которых возможно в рутинной клинической практике. На основе иммуногистохимического исследования экспрессии клетками карциномы грудной железы рецепторов к эстрогену и прогестерону (ER и PR), а также рецептора эпидермального фактора роста 2-го типа (Hеr2/neu, ErbB2), РГЖ можно классифицировать на 4 молекулярных подтипа, которые отличаются между собой по прогнозу течения и ответом на медикаментозную терапию . Молекулярные подтипы РГЖ, которые имеют принципиальное клиническое значение, приведены в табл. 1.

Таблица 1. Иммуногистохимический фенотип молекулярных подтипов РГЖ

Выделяют люминальный, HER2+ и трижды негативный (ТН) молекулярные подтипы РГЖ. К люминальным относятся опухоли, экспрессирующие рецепторы к ER и PR, и в зависимости от экспрессии Hеr2/neu их классифицируют на А (не экспрессируют Hеr2/neu) и Б (экспрессируют Hеr2/neu). HER2+ называются опухоли с гиперэкспрессией Hеr2/neu и отсутствием ER и РR. Опухоли, негативные по 3 выше названным признакам, относятся к ТН (базальноподобному) РГЖ. Установлено, что люминальные типы связаны с менее агрессивным течением и хорошим прогнозом по сравнению с HER2+ и ТН РГЖ . ТН подтип связан с высокой частотой мутации BRCA1 , агрессивным течением, отсутствием реакции на гормонотерапию и трастузумаб, низкой общей и безрецидивной выживаемостью .

Корреляция между иммуногистохимическими маркерами и чувствительностью опухоли к медикаментозному лечению хорошо изучена и лежит в основе клинических рекомендаций по адъювантному лечению РГЖ. Однако количество исследований, в которых бы оценивали взаимосвязь между молекулярными подтипами и клинико-биологическими характеристиками РГЖ, ограничено.

Целью данного популяционного исследования является изучение распространенности, клинико-морфологических особенностей, общей и безрецидивной выживаемости больных РГЖ в зависимости от молекулярного портрета.

Материалы и методы

Подбор пациентов

В исследование включено 350 больных РГЖ в возрасте от 23 до 76 лет (средний возраст - 53±1,7 года), которые находились на лечении в клинике кафедры онкологии Национального медицинского университета имени А.А. Богомольца на базе хирургического отделения Киевского городского клинического онкологического центра с 1 января 2005 г. по 31 декабря 2006 г.

У всех пациенток регистрировали возраст на момент установления диагноза, менструальную функцию, определяли размер, гистологический тип и степень дифференциации опухоли, а также наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах (РЛУ).

Размер опухоли оценивали после измерения ее максимального диаметра и классифицировали согласно Международной TNM-классификации (5-е издание, 1997 г.) как Т1 (<2 см), Т2 (2–5 см), Т3 (≥5 см). Отсутствие менструаций у больных в течение 1 года до момента установления диагноза расценивалось как менопауза. Гистологический тип и степень дифференциации опухоли определяли в соответствии с национальными стандартами диагностики и лечения злокачественных новообразований, основанных на рекомендациях ведущих международных организаций. Для оценки метастатического поражения РЛУ из послеоперационного материала макроскопически отбирали 10 подозреваемых на наличие метастазов лимфатических узлов, из которых готовили гистологические препараты для микроскопического изучения.

Молекулярные подтипы РГЖ устанавливали на основании результатов иммуногистохимического исследования экспрессии ER, РR и Hеr2/neu. Все опухоли разделили на 4 подтипа: люминальний А (Luminal A) - ER+ и/или PR+, Hеr2/neu-, люминальний Б (Luminal B) - ER+ и/или PR+, Hеr2/neu+, HER2+ (ER- и PR-, Hеr2/neu+), ТН (Triple negative) - ER- и PR-, Hеr2/neu-.

Все больные получили адъювантную системную и лучевую терапию согласно национальным стандартам лечения РГЖ. Однако при гиперэкспрессии Hеr2/neu ни одна из пациенток, включенных в данное исследование, в адъювантном режиме не получала трастузумаб.

Иммуногистохимическое исследование

С парафиновых блоков готовили срезы толщиной 4–5 микрон, которые помещали на стекла, предварительно обработанные поли-L-лизином. Затем материал исследовали по общепринятой стандартной методике с использованием следующих антител: ER - клон 1D5, PgR - клон 636, Hеr2/neu - клон СВ11.

Интерпретацию результатов иммуногистохимической реакции проводили с использованием качественной оценки ядерной реакции: отрицательная «-», слабо положительная «+», умеренно положительная «++», выражено положительная «+++» - и количественной системы оценки реакции в процентах окрашенных опухолевых клеток.

При определении экспрессии Hеr2/neu отмечали выраженность окраски цитоплазматической мембраны: реакция «-», «+» - отсутствие гиперэкспрессии, реакция «+++» - гиперэкспрессия Hеr2/neu. Наличие гиперэкспрессии Hеr2/neu в случаях реакции «++» оценивали с помощью метода гибридизации in situ с использованием флюоресцентной метки FISH (fluorescence in situ hybridization - флюоресцентная in situ гибридизация). Исследования проводили в патогистологической лаборатории Киевского городского клинического онкологического центра (заведующая лабораторией - доктор медицинских наук Л.М. Захарцева).

Статистический анализ

Статистическую достоверность различий между клинико-биологическими особенностями молекулярных типов РГЖ оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа (analysis of variance - ANOVA). Различия считали статистически достоверными при уровне значимости (р) <0,05.

Общую и безрецидивную выживаемость определяли с помощью метода Каплана - Мейера.

Все статистические расчеты проводили с помощью программы MS Exсel.

Результаты

В результате проведенного исследования всех больных на основе данных иммуногистохимического исследования экспрессии ER, РR и Hеr2/neu разделили на 4 группы: люминальний А - 152 (57,5%) пациентки, ТН - 49 (26,5%), люминальний Б - 28 (9%) и HER2+ - 15 (7%) женщин.

Клинико-биологические характеристики различных молекулярных типов РГЖ представлены в табл. 2.

Таблица 2. Клинико-биологические характеристики молекулярных подтипов РГЖ

Примечания: *дольково-протоковая карцинома; **слизистая, медуллярная, папиллярная карцинома.

Статистически значимой достоверности различий в стадии заболевания между исследуемыми группами не выявлено, что свидетельствует об однородном распределении больных в группах по данному критерию.

Частота выявления различных молекулярных подтипов РГЖ статистически достоверно зависит от следующих клинико-морфологических характеристик: возраста и менструальной функции на момент установления диагноза, гистологического типа и степени дифференциации опухоли. У больных в возрасте 40–49 лет достоверно чаще диагностируют HER2+ и ТН подтипы РГЖ (34,5 и 34% случаев соответственно). Почти у половины пациенток (48%) с ТН молекулярным типом диагноз установлен в пременопаузе. У больных, которые на момент диагностирования находились в менопаузе, чаще других встречается люминальний А (63%) и люминальный Б (68%) типы РГЖ.

Также статистически значимые различия между иммуногистохимическими подтипами наблюдали при различных гистологических типах и степени дифференциации опухоли. Дольковые карциномы чаще диагностировали при люминальном А (19%) и ТН (16%) типах. Протоковый РГЖ регистрировали в 84 и 92% случаев HER2+ и люминального Б молекулярных подтипах соответственно. Дольково-протоковую, слизистую, медуллярную и папиллярную карциному одинаково часто выявляют при люминальных и ТН типах РГЖ, однако в данном исследовании не зафиксировано ни одного случая вышеперечисленных гистологических вариантов при типе HER2+. В исследуемых группах высокодифференцированные (G1) опухоли определяют с одинаковой частотой. Умереннодифференцированные (G2) карциномы грудной железы характерны для люминального А (82%) и Б (86%), а также HER2+ (80%) типов. У 28% пациенток из группы ТН РГЖ выявлены низкодифференцированные (G3) опухоли.

Статистически достоверной взаимозависимости между иммуногистохимическим фенотипом РГЖ и размером первичной опухоли, а также статусом РЛУ не установлено, что наряду со стадией заболевания свидетельствует о равномерном распределении больных в исследуемых группах по этим показателям.

Результаты анализа 5-летней общей и безрецидивной выживаемости пациенток с различными молекулярными типами РГЖ представлены на рис. 1 и 2, а также в табл. 3 и 4 соответственно.

Рис. 1.

Рис. 2.

Таблица 3. Общая выживаемость пациенток в зависимости от молекулярного типа РГЖ

Таблица 4. Безрецидивная выживаемость пациенток в зависимости от молекулярного типа РГЖ

Общая выживаемость наиболее высокая у пациенток с люминальным А (74%) типом РГЖ, а наиболее низкая - при HER2+ и люминальном Б (58 и 57% соответственно).

5-летняя безрецидивная выживаемость хуже у больных люминальным Б и ТН РГЖ (42 и 45% соответственно) по сравнению с пациентками с люминальным А иммуногистохимическим подтипом.

Обсуждение

Результаты настоящего исследования подтверждают вариабельность РГЖ, которая заключается в наличии различных молекулярных типов данной нозологической формы. Разделение РГЖ на биологические подтипы, которые имеют собственную естественную историю, находит все большее применение в повседневной клинической практике, так как позволяют определить прогноз течения заболевания и являются ключевым фактором для выбора тактики системной медикаментозной терапии . Тем не менее классификация на молекулярные типы не заменяет, а скорее дополняет важные традиционные прогностические критерии, такие как возраст и состояние менструальной функции на момент установления диагноза, размер и степень дифференциации опухоли, наличие метастазов в РЛУ, а также выявление сопутствующей патологии.

Определение молекулярных типов РГЖ на основе имммуногистохимической оценки экспрессии ER, РR и Hеr2/neu является недорогим и достаточно информативным, но вместе с тем упрощенным методом диагностики. Благодаря внедрению новых маркеров молекулярная классификация претерпевает изменения, что позволяет повысить ее прогностическую достоверность. Так, например, при высокой митотической активности клеток (Кі-67 >14%) опухоли с люминальным А фенотипом, согласно рекомендациям Сент-Галленского конгресса по лечению РГЖ (2011 г.), отнесены к люминальному Б Her2/neu-негативному молекулярному подтипу. Необходимость выделения люминального Б Her2/neu-негативного типа РГЖ продиктована особенностями естественной истории этих опухолей, которая больше сходна с естественной историей люминальных Б, чем люминальных А опухолей. Поэтому пациенткам с ER+ и/или PR+, Her2/neu- РГЖ при высокой митотической активности опухоли, которая определяет плохой прогноз течения заболевания, перед назначением антигормональной терапии показано проведение адъювантной полихимиотерапии .

Полученные в данном популяционном исследовании результаты свидетельствуют о том, что частота выявления различных молекулярных типов РГЖ, определенных на основе имммуногистохимической оценки экспрессии ER, РR и Hеr2/neu, неодинакова. Чаще всего встречается люминальный А (57,5%) молекулярный подтип РГЖ, вторым по частоте является ТН (26,5%), потом люминальный Б (9%) и HER2+ (7%) типы.

Люминальный А иммуногистохимический тип РГЖ в большинстве случаев диагностируют у пациенток после 50 лет, которые находятся в менопаузе. Данный вариант РГЖ чаще других характеризуется дольчатым гистологическим типом и умеренной степенью дифференциации опухоли. 5-летняя общая и безрецидивная выживаемость больных с этим молекулярным типом РГЖ наиболее высокая и составляет 74 и 62% соответственно.

ТН РГЖ чаще выявляют у больных в возрасте от 40 до 60 лет независимо от состояния менструальной функции, для него характерен дольчатый гистологическим тип в 16% случаев, и в 28% данные опухоли являются низкодифференцированными. По сравнению с люминальным А типом у больных ТН РГЖ 5-летняя общая и безрецидивная выживаемость ниже и составляет 60 и 45% соответственно.

Люминальный Б молекулярный тип, как и люминальный А, чаще диагностируют у женщин после 50 лет, которые находятся в постменопаузе. Более чем в 80% случаев это умереннодифференцированная протоковая карцинома. У пациенток с люминальным Б РГЖ - наименьшая 5-летняя общая и безрецидивная выживаемость и составляет 58 и 42% соответственно.

HER2+ тип, как и ТН, чаще возникает у пациенток в возрасте от 40 до 60 лет независимо от статуса менструальной функции, практически всегда является умереннодифференцированной карциномой. 5-летняя общая и безрецидивная выживаемость одинаковая и составляет 57%.

Итак, наиболее благоприятным молекулярным подтипом РГЖ с точки зрения прогноза течения является люминальный А. Неблагоприятное клиническое течение люминального Б и HER2+ типов, возможно, связано с отсутствием терапии трастузумабом.

Список использованной литературы

1. Бюллетень Национального канцер-регистра № 12. «Рак в Україні, 2009–2010», Киев: 2011.

2. Perou C.M., Sorlie T., Eisen M.B. et al. (2000) Molecular portraits of human breast tumours. Nature, 406(6797): 747–752.

3. Sorlie T., Perou C.M., Tibshirani R. et al. (2001) Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 19(98): 10869–10874.

4. Sorlie T., Tibshirani R., Parker J. et al. (2003) Repeated observation of breast tumor subtypes in independent gene expression data sets. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 14(100): 8418–8423.

5. Sotiriou C., Neo S.Y., McShane L.M. et al. (2003)Breast cancer classification and prognosis based on gene expression profiles from a population-based study. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 18(100): 10393–10398.

6. Carey L.A., Perou C.M., Livasy C.A. et al. (2006) Race, breast cancer subtypes, and survival in the Carolina Breast Cancer Study. JAMA, 21(295): 2492–2502.

7. Foulkes W.D., Stefansson I.M., Chappuis P.O. et al. (2003) Germline BRCA1 mutations and a basal epithelial phenotype in breast cancer. J. Natl. Cancer Inst., 19 (95): 1482–1485.

8. Liu H., Fan Q., Zhang Z. et al. (2008) Basal-HER2 phenotype shows poorer survival than basal-like phenotype in hormone receptor-negative invasive breast cancers. Hum. Pathol., 2 (39): 167–174.

9. Goldhirsch A., Wood W.C., Coates A.S. et al. (2011) Strategies for subtypes-dealing with the diversity of breast cancer: highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2011. Ann. Oncol., 8(22): 1736–1747.

Молекулярні типи раку грудної залози, визначені на основі імуногістохімічних маркерів: клініко-біологічні особливості та прогноз перебігу

І.Б. Щепотін¹, О.С. Зотов¹, Р.В. Любота¹, М.Ф. Анікусько², І.І. Любота²

¹Національний медичний університет імені О.О. Богомольця, Київ

2 Київський міський клінічний онкологічний центр

Резюме. Рак грудної залози - неоднорідна група пухлин, які відрізняються етіологією, морфологічною картиною, клінічним перебігом і чутливістю до проведеного лікування. Метою даного популяційного дослідження було вивчення поширеності, клініко-морфологічних особливостей, загальної та безрецидивної виживаності хворих на РГЖ залежно від молекулярного типу. Обстежено 350 пацієнток із РГЖ у віці від 23 до 76 років (середній вік - 53±1,7 року), які проходили лікування в клініці кафедри онкології Національного медичного університету імені О.О. Богомольця на базі хірургічного відділення Київського міського клінічного онкологічного центру в 2005–2006 рр. Виявлено ​статистично значущі відмінності між молекулярним типом РГЖ та клініко-морфологічними особливостями, а саме: вік і статус менструальної функції на момент встановлення діагнозу, гістологічний тип і ступінь диференціювання пухлини, а також загальна та безрецидивна виживаність хворих.

Ключові слова: рак грудної залози, молекулярні типи, прогноз перебігу, клініко-морфологічні особливості.

Molecular types of breast cancer, established on the basis of immunohistochemical markers: clinical and biological characteristics and prognosis

I.B. Schepotin¹, A.S. Zotov¹, R.V. Lіubota¹, N.F. Anikusko², I.I. Lіubota²

¹A.A. Bogomolets National Medical University, Kyiv

2 Kyiv municipal clinical oncological centre

Summary. Breast cancer (BC) is heterogeneous group of tumors that has different etiology, morphological pattern, clinical course and sensitivity to the treatment. The aim of this study was to investigate population prevalence, clinical and morphological features, general and disease-free survival of patients BC depending on the molecular type. The study involved 350 patients with BC aged 23 to 76 years (mean age 53±1,7 years.) They were treated in the clinic of the Department of Oncology A.A. Bogomolets National Medical University, based on the surgical department of the Kyiv City Clinical Cancer Center in 2005–2006 years. A statistically significant difference between type BC molecular and morphological features, namely age and status of menstrual function at the time of diagnosis, histological type and degree of tumor differentiation, as well as general and disease-free survival of patients.

Key words: breast cancer, molecular types, prognosis, clinical and morphological features.

В РНПЦ онкологии и медрадиологии им. Н. Н. Александрова сегодня выполняется 56 научных проектов, из них 23 связаны с молекулярно-генетическими исследованиями. Проводятся они в Республиканской молекулярно-генетической лаборатории канцерогенеза (онкоотделения генетики, клеточных и биочиповых технологий, вирусологии, иммунологии и протеоники).

Традиционные средства диагностики исчерпывают свой потенциал, - считает заместитель директора по научной работе РНПЦ, член-корреспондент НАН Беларуси, доктор мед. наук, профессор Сергей Красный. - Пришло время использовать такой резерв, как молекулярно-генетические исследования. Они дают возможность с высокой точностью тестировать опухоли для определения химиочувствительности, по генетическому портрету пациента устанавливать наследственный характер заболевания и целенаправленно действовать на опережение, назначая адресное лечение.

В 2016 году через РНПЦ прошло около 10 000 пациентов, примерно 7 000 из них были выполнены молекулярно-биологические исследования; масштабное профилирование опухоли для индивидуализации терапии было проведено примерно сотне человек. На основании молекулярно-биологических маркеров выполнялась диагностика опухолей ЦНС, мягких тканей и костей, лимфомы, велись исследования по оценке наследственных рисков развития злокачественных новообразований, мониторингу концентрации лексредств в жидкостях организма для индивидуальной коррекции дозы препарата, разрабатывались и внедрялись технологии клеточной терапии.

Для внедрения достижений молекулярной биологии в отечественную клинику уже получены первые международные сертификаты, приобретено современное оборудование для выполнения методик флуоресцентной in situ гибридизации, молекулярного секвенирования, полимеразной цепной реакции (ПЦР), иммуногистохимии, хромато-масс-спектрометрии, проточной цитометрии, иммуноферментного анализа.

Биолог Виктория Майорова проводит пробоподготовку образцов к проведению ПЦР-реакции.

Новые разработки

Метод оценки прогноза клинического течения рака мочевого пузыря посредством комплексного анализа клинико-морфологических параметров опухоли и молекулярно-генетического статуса гена FGFR3.

На основе этого анализа была создана модель молекулярных путей патогенеза рака мочевого пузыря. В зависимости от наличия определенной мутации патология может развиваться двумя путями: так называемый поверхностный рак, характеризующийся низкой злокачественностью и благоприятным прогнозом (мутации в генах FGFR3 и HRAS); более агрессивный мышечно-инвазивный рак, рано дающий метастазы и характеризующийся неблагоприятным прогнозом (мутации в генах TP53 и RUNX3).

С помощью этого метода была выделена группа пациентов с очень высоким риском прогрессирования заболевания, у которых выявлены мутации в генах TP53 и RUNX3. Это важно для прогноза течения заболевания и определения степени агрессивности лечения. Зная, что у пациента опухоль будет развиваться как поверхностная, после лечения в основном будет контролироваться мочевой пузырь.

Если же предполагается прогрессирование заболевания, то в отношении метастазирования будет отслеживаться состояние других внутренних органов. Кроме того, могут быть определены пациенты, которым надо немедленно выполнять радикальное удаление мочевого пузыря, иначе разовьются метастазы.

Неинвазивный комплексный метод молекулярно-генетической и лучевой диагностики рака предстательной железы.

Такое обследование должно проводиться, когда пациенту с высоким уровнем простат-специфического антигена (ПСА) в крови выполнена первичная биопсия, которая оказалась отрицательной. Обычно спустя полгода выполняется еще одна биопсия, следом еще одна (и так 10–15 раз), однако это агрессивное исследование, так что требовалось решение, позволяющее ограничиться только одним подобным вмешательством. Ученые нашли выход. Благодаря определению в моче экспрессии онкогена PCA3 и химерного гена TMPRSS2-ERG можно выделять пациентов, которым действительно необходимо выполнять биопсию (у остальных можно повременить).

Разработка и внедрение метода трансплантации тканеинженерных дыхательных путей с их поражением опухолевой или рубцовой этиологии.

Речь идет о категории пациентов, которые умирают в течение 2–5 месяцев. Был предложен метод децеллюляризации трупной трахеи, по сути, с приготовлением матрицы, затем заселением ее хондроцитами и после этого - эпителиоцитами. Кроме того, технология предусматривает реваскуляризацию трахеи с последующей трансплантацией пациентам. Все это делается с целью замещения дефекта трахеи после удаления опухоли либо рубца. В настоящее время проведены 3 операции. Все пациенты живут уже более полугода - это считается обнадеживающим результатом.

Врач лабораторной диагностики Стукалова Ирина Владимировна и старший фельдшер-лаборант Пищик Наталия Захаровна производят подготовку анализатора для выделения ДНК вируса папиломы человека.

Совместно с Институтом генетики и цитологии НАН Беларуси запланирована тема «Протеомные и молекулярно-генетические исследования стволовых опухолевых клеток (СОК) колоректального рака для разработки новых методов направленной клеточной терапии» (программа Союзного государства «Стволовая клетка - 2»).

На модели, устойчивой к 5-фторурацилу клеточной линии колоректального рака, планируется изучить роль СОК в механизмах опухолевой прогрессии и подобрать возможные молекулярные мишени направленного воздействия на СОК методами клеточной терапии на основе вакцин с использованием дендритных клеток и/или дендритных клеток и лимфокин-активированных киллеров. Это будет новый этап в иммунотерапии злокачественных опухолей.

Биолог Игорь Северин в криобанке опухолевых клеточных линий.

Еще один проект - «Разработка технологии выявления риска онкологических заболеваний на основе молекулярно-генетических и эпигенетических маркеров» (программа Союзного государства «ДНК-идентификация»). Планируется разработать инновационную ДНК-технологию, позволяющую определить молекулярно-генетические и эпигенетические маркеры риска рецидивирования или прогрессирования заболевания у пациентов с колоректальным раком. По оценкам специалистов, новая технология позволит вовремя провести профилактическое лечение и предотвратить появление метастазов.

Перспективным направлением исследований становится изучение эпигенетических механизмов регуляции, т. е. процессов, которые не затрагивают структуру генов, однако изменяют их уровень активности. Одним из них является РНК-интерференция - механизм подавления экспрессии генов на этапе трансляции, когда РНК синтезируется, но не проявляет себя в белке. И если обнаруживается высокий уровень экспрессии какой-то микроРНК, можно предположить, что именно в этом органе имеется проблема.

Семейство генов микроРНК составляет немногим более 1 % от всего генома человека, но регулирует экспрессию почти трети всех генов. Ряд выполняемых научных проектов посвящен изучению микроРНК при различных опухолях. В отделении разрабатывается неинвазивный метод диагностики герминогенных опухолей яичка, основанный на определении в крови экспрессии панели микроРНК. Это же семейство молекул, кроме диагностики заболеваний, используется для прогнозирования течения онкозаболеваний и для выбора индивидуальной лекарственной терапии.

Задача исследования - определить маркеры неблагоприятного прогноза (можно выделить группу таких пациентов и подобрать дополнительное лечение). Также важно определить спектр микроРНК. Он будет свидетельствовать о чувствительности к определенным схемам химиотерапии (речь о РМЖ, для которого найдена панель маркеров).

Изучая молекулярные характеристики в ходе лечения, можно корректировать схему лечения при появлении дополнительных мутаций. Метод называется «жидкой» биопсией: по анализу крови можно следить за генетическими изменениями и гораздо раньше предполагать прогрессирование развития заболевания.

Препараты для терапии дорогостоящие и высокотоксичные, поэтому важно на ранних этапах определить резистентность к лексредству и найти замену.

Молекулярное профилирование предполагает определение генетических нарушений, характерных для каждой конкретной опухоли, поскольку известно, что одни и те же нозологические формы различаются по молекулярным характеристикам. Знать молекулярный портрет опухоли необходимо и для прогнозирования течения онкопроцесса и индивидуализации лечения. Персонализированный подход к назначению цитостатических препаратов и средств направленной терапии у онкопациентов с учетом молекулярных биомаркеров чувствительности и токсичности обеспечивает наиболее точный подбор лексредств.

В рамках молекулярного профилирования опухолей на основании масштабного анализа данных мировых публикаций разработаны многоплатформенные панели биомаркеров РМЖ, рака яичников, колоректального рака, немелкоклеточного рака легкого, меланомы, предназначенные для выбора системной противоопухолевой терапии.

Химик Колос Ольга Константина запускает синтез олигонуклеотидов.

Нужно ли расширять географию исследований?

Анна Портянко ,

заведующая Республиканской

молекулярно-генетической

лабораторией канцерогенеза,

доктор мед. наук:

На современном этапе из группы глиобластом выделили варианты, которые характеризуются разным прогнозом. С морфологической точки зрения легко перепутать глиобластому и анапластическую олигодендроглиому: при окраске гематоксилином-эозином они выглядят практически одинаково. Но благодаря генетическим тестам мы находим отличия. Более того, это рутинно выполняется в нашем патологоанатомическом отделении.

Подобным образом «размножились» и лимфомы. Например, благодаря молекулярно-генетическому тестированию было выделено несколько лимфом из лимфомы Ходжкина. Раньше на основании гематоксилин-эозиновой гистологии их классифицировали как лимфому Ходжкина, а когда появился молекулярно-генетический анализ по Т-клеточным рецептором, выяснилось, что это фолликулярная Т-клеточная лимфома.

Как это сказывается на лечении? Прежде всего, можно дать более точный прогноз. Если у человека глиобластома, то медиана выживаемости составляет 1 год, а если речь об анапластической олигодендроглиоме, то 10 лет.

Мы развиваем связи с зарубежными специалистами из лучших европейских научных центров. Вместе с коллегами из Германии пытаемся развить важные направления протеомики - анализ не одного белка, а протеома в целом. Создан весь цикл начиная от цитологического препарата, есть система лазерной микродиссекции на базе микроскопа, которая позволяет из большой опухоли выделить именно опухолевые клетки, сделать после этого масс-спектрометрию и определить спектр всех белков в этой опухоли.

Нужно ли расширять географию исследований? Думаю, для страны достаточно иметь один такой центр - Республиканскую молекулярно-генетическую лабораторию канцерогенеза, где можно оперативно выполнять все необходимые молекулярно-биологические исследования (в т. ч. с гистологическим материалом, полученным из областей).

У нас есть возможность проводить не только гистологическую диагностику, но и предварительную диагностику с помощью проточного цитофлуориметра. Буквально в течение часа после того, как у человека удалили лимфатические узлы, мы можем предварительно сказать, есть ли лимфома (и если да, то какая). Это большое подспорье для клиницистов.

Биолог Анастасия Пашкевич загружает образцы в генетический анализатор.

Чего опасалась Анджелина Джоли?

Мы изучаем генетические поломки, возникающие в процессе развития опухоли, - рассказывает заведующая онкологическим отделением генетики Республиканской молекулярно-генетической лаборатории канцерогенеза Елена Субоч. - Актуальное направление - оценка наследственных рисков развития онкозаболеваний. Наследственные формы опухолей составляют 1–2 % всех онкопатологий, и здесь должны применяться особые схемы лечения и оперативного вмешательства. Важная цель выявления семейных опухолевых синдромов - идентификация еще здоровых родственников пациента, у которых имеются патогенные мутации. В итоге можно разработать комплекс мероприятий, направленных на предотвращение неблагоприятного исхода онкопатологии.

На слуху пример: американская актриса Анджелина Джоли, имеющая мутацию в гене BRCA1, увеличивающую риск развития РМЖ, пошла на радикальную операцию, чтобы предотвратить возникновение злокачественной опухоли.

Ученые Республиканской молекулярно-генетической лаборатории канцерогенеза занимаются этой патологией.

По гранту Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований в 2015–2017 годах была выполнена работа «Система аллельной дискриминации мутационного статуса генов BRCA1 и BRCA2 при злокачественных новообразованиях молочной железы человека». Проведено популяционное исследование, и оказалось, что частота мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 составляет примерно 2,5 % среди женщин (частотный спектр мутаций отличается от того, что наблюдается у жителей соседних стран).

Для каждой популяции типичен свой спектр генетических нарушений. Зная характерные мутации, можно в первую очередь протестировать их, а потом уже искать другие варианты. Результатом выполнения научного проекта стала разработка системы аллельной дискриминации мутационного статуса генов BRCA1/BRCA2 с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Выделили 5 основных мутаций, которые встречаются у белорусских женщин.

Специалисты онкологического отделения генетики также тестируют большую панель маркеров, позволяющую оценить риск развития рака яичников, эндометрия, щитовидной железы, почки, колоректального рака, меланомы, полипозных синдромов.

На сегодня имеются новые международные классификации опухолей головного мозга и лимфом, требующие обязательного проведения молекулярно-генетических исследований. Поэтому в отделениях генетики и клеточных технологий разрабатывается алгоритм диагностики таких заболеваний с использованием биомаркеров.